Sei sulla pagina 1di 45

5

1. INTRODUO

Na busca por frmacos eficientes no combate a cepas resistentes de
microorganismos patognicos, ou ainda patologias que surgem com as novas realidades
de integraes logsticas entre os seres humanos e biomas diferentes,
o profissional farmacutico tem na cincia da Farmacognosia o arcabouo
imprescindvel para o desenvolvimento e inovao desses recursos teraputicos.
No comeo do sculo, GUIBOURT, ilustre professor da antiga Escola de
Farmcia da Universidade de Paris, publicou uma obra muito apreciada no seu tempo,
com ttulo: <<Histria Natural das Drogas Simples>>, e que serviu para designar uma
disciplina do curso de Farmcia. (COSTA, 2002)
Na mesma poca empregou-se o termos Farmacognosia, rapidamente
generalizado, derivado de Pharmacon, com o significado de planta medicinal, Gnosis,
conhecimento, [...]. (COSTA, 2002)


Etimologicamente, Farmacognosia e a cincia que tem por
objetivo o conhecimento dos frmacos , limitados aos provenientes,
como dissemos, dos dois reinos vivos da Natureza e em particular aos
de origem vegetal. Quer dizer, pretende realizar o seu estudo nos
diversos aspectos, da origem, cultura, colheita, preparao e
conservao, identificao pelos seus caracteres macroscpicos e
microscpicos, composio qumica, pesquisa de falsificaes,
atividade farmacolgica relacionada com os mtodos de aferio, usos
diversos, por vezes, tambm sob alguns outros aspectos, o histrico, o
econmico, etc.; ainda, na separao dos seus constituintes ativos,
isolamento de secrees ou grupos de princpios imediatos e
estabelecimento das relaes bioqumicas (corpos gordos, leos
essenciais, resinas, etc.). Mas, entre todos, interessa-Ihe,
particularmente, os problemas relacionados com a identificaco e a
anlise. (COSTA, 2002)


A reunio de vrios ramos de cincias dentre eles Botnica, Qumica e
Farmacologia, faz com que a Farmacologia se utilize da multiciplidade destes
6

conhecimentos para o persecuo de seus objetivos sejam eles bioprospeco,
investigao, isolamento de metablitos de interesse farmacolgicos.


A Farmacognosia trata igualmente de extrair das drogas
extensa gama de substncias, principalmente leos fixos e essenciais,
ceras e gorduras, alcaloides e glicosdeos, gomas e mucilagens, resinas
e princpios amargos. Tambm trata de analisa-las, mediante mtodos
clssicos, como exame microscpico e reaes histoqumicas,
mtodos modernos, entre os quais a refratometria, a polarimetria, a
espectrofotometria, a cromatografia, a ressonncia nuclear magntica,
a cristalografia mediante raios-X. A seguir, identifica os princpios
ativos e os avalia, por processo qumico ou biolgico.
(KOROLKOVAS, 1996)


No obstante, foi s com a descoberta de alcaloides, entre 1803
e 1820, que o estudo das drogas recebeu grande impulso, passando os
farmacocinticos pioneiros no progresso da qumica teraputica a
preocupar-se com as plantas e as drogas brutas e mais com os seus
constituintes. Concomitantemente, a adoo de mtodos cada vez mais
racionais de seleo de medicamentos biolgicos fez revestir-se de
novo aspecto uma antiga cincia, oriunda da Histria Natural mas
sendo cronologicamente sua antecessora e destina especificamente ao
estudo dos medicamentos de origem natural. Seyder, em 1815, na sua
tese de doutoramento Anacleta Pharmacogntica, batizou-se com o
nome Farmacognosia (do grego, farmacon droga, veneno ou
medicamento, e gnosis conhecimento) que, literalmente traduzido,
significa a cincia das drogas ou dos conhecimentos.
(KOROLKOVAS, 1996)







7

2. JUSTIFICATIVA

Dada a extenso territorial e a variedade dos biomas brasileiros e os escassos
trabalhos cientficos de anlise fitoqumica das espcies presentes nessas florestas,
espera-se contribuir com os resultados para a elucidao do estudo qumico das espcies
Eschweilera ovalifolia (DC) Nied e Protium hebetatum DC Daly.

3. OBJETIVO

Prospeo fitoqumica preliminar nas espcies Eschweilera ovalifolia (DC) Nied
Folhas e Protium hebetatum DC Daly Galhos.

4. REFERNCIAL TERICO

4.1 ASPECTOS BOTNICOS E QUMICOS DAS ESPCIES.

Eschweilera ovalifolia (DC) Nied

As Lecythidaceae (famlia da castanha-do-Par) so rvores
tropicais de plancie que atingiram sua maior diversidade em espcies
nos neotrpicos. No Novo Mundo, a famlia est mais diversificada
em habitats de terra.[...] As espcies de Lecythidaceae com flores
actinomrficas so mais numerosas no noroeste da Amrica do Sul,
enquanto que as espcies com flores zigomrfas predominam da
Amaznia central at as Guianas. As matas costeiras do Equador e da
Colmbia at o Panam abrigam sete espcies de Lecythidaceae
ameaadas de extino e nove das 15 espcies de Lecythidaceae que
ocorrem nas matas do leste do Brasil extra-amaznico so endmicas
firme. [...]. (MORI, 1990)


Embora as Lecythidaceae sejam encontradas principalmente em
matas de terra firme de plancie, algumas espcies tornaram-se
8

especializadas a diferentes habitats. Por exemplo, 14 espcies de
Eschweilera e trs de Gustavia esto adaptadas a matas acima de 1000
metros. A maioria destas espcies encontram-se nos Andes e no oeste
da Amrica do Sul. Do mesmo modo, algumas espcies tm se
adaptado a habitats mais secos de savanas. Por exemplo, Eschweilera
nana (Berg) Miers uma espcie comum, amplamente distribuda no
cerrado do Brasil central, e Lecythis brancoensis (R. Knuth) Mori e L.
schomburgkii Berg so encontradas em savanas do Territrio de
Roraima [...]. Finalmente, algumas espcies de Lecythidaceae esto
adaptadas a habitats periodicamente alagados por rios de gua branca
(por ex., Eschweilera ovalifolia (A.P. DC.) Niedenzu), gua preta
(Asteranthos brasiliensis Desfontaines), ou ambas (Eschweilera
tenuifolia (Berg) Miers) [...]. (MORI, 1990)


Possui nomes populares de castanharana, matamat, conforme TSOU a
Eschweilera ovalifolia, gnero da famlia cresce em rea de floresta inundada (vrzea),
ao longo do Rio Amazonas, oeste da foz do Rio Negro (Mori e Prance apud Tsou,
2001), com frutos deiscentes, possui sementes grandes, de 3 a 3,5 cm, (2001)



FIGURA 1 Flor da E. ovalifolia. Fonte: www.kew.org.

A escassez de trabalhos sobre esta espcie resulta em rarssimas
publicaes sobre anlise fitoqumica e lana-se mo de estudo comparativo da anlise
em outras espcies da mesma famlia.


9

Alguns constituintes com atividade farmacolgica tm sido
isolados de espcies desta famlia e, por isso, devem-se desenvolver
estudos fitoqumicos e farmacolgicos de espcies de Lecythidaceae.
Os trabalhos relacionados com estudo qumico de espcies desta
famlia conduziram a identificao de triterpenos pentacclicos,
saponinas, cido elgico e alcaloides do tipo indolo[2,1-
b]quinazolnicos. (Pant; Bergmlan apud CARVALHO, et al, 1998)

Costa e Carvalho afirmam que ao isolarem terpenos na espcie Eschweilera
longipes Miers, conduziu a identificao de um novo terpeno 3, 24-diidroxifriedelano,
do cido 1, 2, 3, 19-tetraidroxiursa-12-en-28-ico conhecido como cido 1-
hidroxieucfico alm da saponina 3O-Dglucopiranosilsitosterol e que as estruturas
foram estabelecidas com anlise de dados espectrais de IV, massas e RMN incluindo
experimentos 2D das substncias naturais e derivado acetilado do triterpeno novo.
(2003)

Protium hebetatum (DC) Nied


Burseraceae uma famlia das angiospermas, plantas com
flores, da diviso Magnoliophyta, pertencente ordem Sapindales,
classe dicotiledneas e subclasse Rosidea. constituda de 18 gneros
e aproximadamente 700 espcies, distribudos em quatro tribos:
Bursereae com duas subtribos a Burserinae (2 gneros) e a
Boswelliinae (5 gneros); a Canarieae (8 gneros) e a Protieae
(3gneros) (WEEKS apud MARQUES, 2009). O gnero Protium
(tribo Protieae) o principal representante da famlia com
aproximadamente 150 espcies, difundidas nas regies dos trpicos
nos continentes Americano, Europeu, Africano e Indo-asitico, sendo
a America do Sul a regio de maior concentrao. O Estado do Acre,
Brasil, apresenta alta densidade destas espcies, principalmente no
Vale do Alto Juru, onde so conhecidas por Breu-branco. A resina,
constituda principalmente de triterpenos (BANDEIRA, apud
MARQUES, 2009) e leo essencial, utilizada na medicina popular
como antiinflamatrio, expectorante e cicatrizante, alm de seu uso na
calafetagem de pequenos barcos de madeira.[...] (MARQUES, 2009)


10

Vrias famlias botnicas so conhecidas na literatura por
apresentar um alto potencial de leos essenciais e, entre estas, cita-se a
famlia Burseraceae, distribuda em aproximadamente 21 gneros e
cerca de 800 espcies arbreas ou arbustivas (CUATRECASAS, apud
CARVALHO, 2009). As espcies desta famlia caracterizam-se pela
presena de secrees resiniferas, de odor aromtico que exsudam de
quase todos os rgos da planta e so de importncia valiosa para a
ecnomia e etnobotnica da regio onde ocorrem. (CORREIA, apud
CARVALHO, 2009). O gnero Protium um dos mais abundantes,
com aproximadamente 33 espcies, algumas endmicas na regio
Amaznica. [...] (RIBEIRO, apud CARVALHO, 2009).

Marques determinou em amostras de leos essenciais extrados de duas sub-
espcies de Protium heptaphyllum um total de 39 constituintes foi identificado nas
amostras, com uma predominncia de monoterpenos. [...] (2009)
Em artigo recente, Galdino et al, realizou anlise de ao antibacteriana em
estudo fitoqumico em galhos e folhas da espcie P. hebetatum, foram detectados os
seguintes metablitos: cumarinas, triterpenos, esteroides, heterosdeos antocinicos,
heterosdeos cianogenticos, heterosdeos saponinicos, flavonoides, fenis, cidos
orgnicos, cidos volteis, gomas, taninos, mucilagens e taninos condensados. (2013)

4.2 DEFINIES, BIOSSNTESE E OCORRNCIA DOS METABLITOS
SEUNDRIOS.

HETEROSDEOS CARDIOATIVOS

DEFINIO

Alguns esteroides presentes na natureza so caracterizados pela sua alta
especificidade e poderosa ao que exercem no msculo cardaco. Esses esteroides
ocorrem como glicosdeos esteroidais e devido a sua ao sobre o msculo cardaco, so
denominados de glicosdeos cardioativos ou cardacos. Embora os termos glicosdeo
digitlico e glicosdeo cardioativo sejam, em geral, utilizados como sinnimos,
glicosdeo cardioativo um termo muito mais abrangente; o termo glicosdeo digitlico
deve ser reservado para os agentes derivados das expecies do gnero Digitalis
(popularmente conhecidas como digital ou dedaleira). Essas substncias constituem um
11

grupo qumico perfeitamente individualizado e de grande homogeneidade estrutural e
farmacologica. Sculos antes da era crist, vrios povos j conheciam extratos de
diversas plantas contendo glicosdeos cardioativos utilizando-os como diurtico, tnico
cardaco e emtico. Em 1785, Withering publicou o livro An account of the Foxglove
and its Medical Uses, no qual indicava o emprego da digital em estados edematosos.
Em, 1799, Ferriar, pioneiramente, atrivuiu a ao cardiotnica as substncias digitlicas.
No incio do sculo, como resultado do esforo do trabalho de vrios pesquisadores, foi
possvel a elucidao estrutural e o esclarecimento do perfil farmacolgico dos
glicosdeos digitlicos, mas apenas nos ltimos 70 anos que se definiu claramente o
seu emprego, a despeito de seu baixo ndice teraputico, como a classe de
medicamentos de eleio para o tratamento da insuficincia cardaca congestiva, com a
digoxina FIGURAndo entre os frmacos mais prescritos na terapia cardiovascular em
todo o mundo. Na frica e sia so, ainda, base de venenos de flechas para a guerra e a
caa, geralmente associados a drogas irritantes, que favorecem a difuso tecidual de
seus princpios txicos. Para detalhes sobre a histria do uso dessas drogas.
(GAIGNAULT e BIDET, 1988).

BIOSSNTESE

O precursor da genina esteroidal o esqualeno. Admite-se geralmente que os
cardenoldeos sejam resultantes da condesao de um derivado da srie do pregnano
(20-cetopregnano) funcionalizado (5-pregnan-3,14,21-triol-20-ona) e uma unidade
dicarbonada (acetato) ou tricarbonada (propionato). (SIMES, 2007).

OCORRNCIA
No reino vegetal, os glicosdeos cardioativos so restritos s Angiospermas,
indicando que existem algumas caractersticas especiais no metabolismo esteroidal de
plantas com flores. A distribuio desses compostos restrita e espordica, isto ,
ocorrem em algumas dezenas de gneros, distribudos desigualmente em uma dezena de
famlias. A maopria dos gneros concentram-se nas famlias. A maioria dos gneros
concentram-se nas famlias Scrophulariaceae (Digitalis), Asclepiadaceae (Asclepias),
Apocynaceae (Acokanthera, Adenium, Apocynum, Nerium, Strophanthus, Thevetia),
Liliaceae (Asphodelaceae), Ranunculaceae (Helleborus e Adonis) e ainda em
Brassicaceae, Celastraceae, Fabaceae, Moraceae e Tiliaceae (HEGNAUER, 1970).
Todos os rgos dessas plantas podem conter heterosdeos cardioativos sendo
que, salvo raras excees, as porcentagens so inferiores a 1%. Essas substncias
podem, excepcionalmente, ser encontradas no reino animal, como em algumas espcies
de anfbios (Buffos spp.) e lepidpteros, geralmente, atuando como venenos ou toxinas
12

que servem como proteo contra predadores. Porm, nos lepidpteros (lagartas), so
provenientes de plantas da famlia Asclepiadaceae, fonte de alimentao desses animais.
Alguns besouros (Chrysolina spp.) sintetizam esteroides cardioativos a partir de
fitosterois (BRUNETON, 1993)

CUMARINAS, CROMONAS E XANTONAS

DEFINIO

As cumarinas so amplamente distribudas nos vegetais, mas tambm podem ser
encontradas em fungos e bactrias. Estruturalmente so lactonas do cido o-hidroxi-
cinmico, sendo o representante mais simples da cumarina. Cerca de 1.300 cumarinas j
foram isoladas de fontes naturais. Suas propriedades farmacolgicas, bioqumicas, e
aplicaes teraputicas dependem de seus padres de substituio (EVANS, 1996).
Cromonas representam um pequeno grupo de substancias naturais, cujas
estruturas so ismeros de cumarinas. As furanocromonas de frutos de Ammi visnaga
planta encontrada nos pases mediterrneos, so as mais conhecidas do ponto de vista
medicinal, sendo a quelina o seu principal representante, pelas suas aes vaso
dilatadoras e broncodilatadoras (REYNOLDS, 1993).
As xantonas so metablitos secundrios derivados da dibenzogamapirona. Seu
nome proveniente do grego XANTHOX, que significa amarelo, decorrente da sua
colorao caracterstica. As xantonas de plantas superiores so formadas pela
combinao das vias do Chiquimato e do acetato. (CARPENTER, et.al. 1969)

BIOSSNTESE

As cumarinas so derivadas do metabolismo da Fenialanina, sendo um dos seus
primeiros precursores, o cido p-hidroxicinmico, que hidroxilado na posio C-2. O
derivado o-hidroxilado, sofre isomerizao fotocatalizada da ligao dupla. O ismero Z
lactoniza expontaneamente, produzindo a Umbeliferona. A prenilao do anel
benznico nas posies 6 e 8 derivado 7-hidroxicumarina o passo inicial da biognese
das furano-e piranocumarinas. A ciclizao dos derivados 6 e 8-isoprenilcumarina
ocorre por ataque nucleo-flico do grupo hidroxila em C-7 ao epxido formado pela
oxidao da ligao dupla do resduo isopentelina. Dependendo da orientao do ataque
eletroflico, o produto ser o hidroxi-isopropil-di-hidrofuranocumarina, ou ser o
hidroxi-dimetil-di-hidropiranocumarina. A maioria das cumarinas so derivadas
13

biogeneticamente da via do cido chiquimico, mas o nmero significativo delas, parece
derivar de uma via mista, cido chiquimico e acetato (STRACK, 1997).
A biognese de cumarinas pode ser induzida em resposta a um estresse bitico e
abitico, por uma deficincia nutricional, por mensageiros qumicos como os hormnios
vegetais e por outros metabolitos externos. As cumarinas escopoletina e aiapina, por
exemplo, encontradas no girassol (Helianthus annuus L.), acumulampse nos tecidos da
planta aps ter sofrido leso mecnica, ataque por insetos ou inoculao com fungos.
Tem sido mostrado que variedades de girassol com altos nveis dessas cumarinas so
resistentes ao ataque de insetos (CAMREN-GUTIERREZ et.al., 1995).
As agliconas xantnicas e seus O-glicosdeos correspondentes possuem um
intermedirio biossinttico do tipo benzofennico, que formado por uma unidade C6-
C1, obtida pela eliminao de dois carbonos de um precursor C6-C3, formado, por sua
vez, por trs unidades de acetato, que sero posteriormente ciclizadas, formando o anel
xantonico (Peres e Nagem, 1997). J as xantonas C-glicosiladas so formadas por uma
via biossinttica prxima da via de formao dos flavonoides C-glicosiladas so
formadas pela incorporao de uma unidade C6-C3 com duas unidades de acetato
(FRANZ e GRUEN, 1983).
A benzofenona assim formada em seguida C-glicosilada. O anel xantonico
finalmente formado pela ciclizao oxidativa do intermedirio benzofennico (FUJITA
e INOUE, 1980).

OCORRNCIA

As cumarinas encontram-se distribudas predominantemente em angiospermas,
sendo as estruturas mais simples e mais encontradas. Furanocumarinas e
piranocumarinas lineares e angulares, lignocumarinas, cumarinas dimricas e trimricas
so encontradas somente em certas famlias, notadamente as mais primitivas. As
famlias mais citadas na literatura pelo contedo em cumarinas so: Apiaceae,
Rutaceae, Asteraceae, Fabaceae, Oleaceae, Moraceae e Thymeleaceae.
Especificamente, com relao as furanocumarinas, estas j foram isoladas e
identificadas nas seguintes famlias: Amaranthaceae, Asteraceae, Cyperaceae,
Dipsacaceae, Goodeniaceae, Guttiferae, Leguminosae, Moraceae, Pittosporaceae,
Rosaceae, Rutaceae, Samydaceae, Solanaceae e Apiaceae (EVANS, 1996).
As agliconas cantonicas se distribuem no reino vegetal de forma significativa,
principalmente nas plantas das famlias Guttiferae e Gentianaceae. So encontradas
ainda nas famlias Moraceae e Polygalaceae, ou ainda, em nmero reduzido, nas
famlias Leguminosae, Loganiaceae, Lythraceae e Rhamnaceae. Seus derivados O-
glicosilados se encontram unicamente nas famlias Gentinaceae e Polygalaceae. No
entanto, seus derivados C-glicosilados apresentam ampla distribuio, podendo ser
14

encontrados no somente em angiospermas, como tambm em fungos e liquens. Essa
distribuio seletiva transforma as xantonas em marcadores sistemticos, apresentando,
assim, uma grande importncia taxonmica (ROCHA, 1995).
A famlia Guttiferae se destaca e apresenta um nmero de xantonas comparveis
com o da famlia Gentinaceae. Mais da metade das agliconas isoladas e Guttiferae so
substitudas por isoprenoides ou geranoides, que podem estar ciclizados ou no. Esse
tipo de substituio no encontrado na famlia Gentianaceae. A famlia Moraceae
contm xantonas mais prximas daquelas encontradas na famlia Gentianaceae. Plantas
da famlia Polygalaceae apresentam xantonas simples, substitudas por grupos
hidroxilas ou metoxilas, como as da famlia Gentianaceae e tambm xantonas
substitudas por grupos dioximetilnicos e mesmo dmeros. As outras famlias
raramente apresentam xantonas e, por isso, no apresentam um grande interesse
taxonmico. As xantonas C-glicosiladas, contrariamente s demais, so amplamente
distribudas e so encontradas em angiospermas monocotiledneas e dicotiledneas e
at mesmo em pteridfitas. (RICHARDSON, 1983).

TANINOS

DEFINIO

Historicamente, a importancia das plantas ricas em taninos est ligada as suas
propriedades de transformas a pele animal em couro. Atualmente, o curtimento de peles
tambm industrialmente conseguido com compostos minerais, entretanto, por vrios
milnios esse processo requeria exclusivamente o uso de plantas tanferas. Durante o
curtimento so formadas ligaes entre as fibras de colgeno na pele animal, a qual
adquire resistncia ao calor, gua e abrasivos. Esta capacidade dos taninos em
combinar-se com macromolculas explica a capacidade deles precipitarem celulose,
pectinas e protenas. Essas propriedades so a base da definio clssica dos taninos:
substncias fenlicas solveis em gua com massa molecular entre 500 e cerca de 3000
Dalton, as quais apresentam a habilidade de formar complexos insolveis em gua com
alcaloides, gelatina e outras protenas. (SIMES, 2007).
Estes compostos so particularmente importantes componentes gustativos, sendo
responsveis pela adstrigencia de muitos frutos e produtos vegetais. A complexao
entre taninos e protenas a base para suas propriedades como fatores de controle de
insetos, fungos e bactrias tanto quanto para suas atividades farmacolgicas. (SIMES,
2007).
Tradicionalmente os taninos so classificados segundo sua estrutura qumica em
dois grupos: taninos hidrolisveis e taninos condensados. Os taninos hidrolisveis so
15

caracterizados por um poliol central, geralmente -D-glicose, cujas funes hidroxilas
so esterificadas com o cido glico. O composto -1,2,3,4,6-pentagaloil-D-glicose
representa o padro mximo de substituio alcanado, sendo considerado o precursor
imediato para ambas as classes de taninos hidrolisveis (Galotaninos e elagitaninos)
(SIMES, 2007).
Os galotaninos resultam da unio entre unidades de cido glico via ligaes
denominadas meta-depsdicas. O grau de substituio total de 10 a 12 resduos de cido
glico por molcula de glicose pode ser alcanado, como relatadopara galotaninos em
Rhus semialata Murray (China), em Quercus infectoria Oliv. ou a poligaloiglicose em
Paeonia sp. (SIMES, 2007).

BIOSSNTESE

Taninos Hidrolisveis


Biognese do cido glico

geralmente aceito que os cidos benzoicos so derivados dos
correspondentes cidos cinmicos, com o mesmo padro de substituio do anel
aromtico, por remoo de uma unidade de acetato de cadeia lateral acrlica. O
mecanismo exato dessa reao, entretanto, ainda questionvel. Tem formado
pela seguinte sequencia (rota a): L-fenilalanina > cido cafico > cido 3,4,5-tri-
hidrxi-cinmico > cido glico. Uma objeo importante para tal proposio
o fato do precursor sugerido, cido tri-hidroxi-cinmico, nunca ter sido
encontrado na natureza e considerado, assim, ocasionalmente, como um cido
ausente. Numa variao dessa via (rota b), a etapa de degradao da cadeia
lateral foi simulada numa etapa posterior, resultando na sequencia: L-
fenilalanina > cido cafico > cido protocatquico > cido glico. Como
resultado de experimentos como o fungo Phycomyces e vrias plantas (ex. dos
gneros Geranium, Rhus), outros autores concluram, de forma muito diferente,
atravs de uma terceira rota (c), para a qual foi postulada a aromatizao direta
do cido 3-des-hidrochiqumico. (SIMES, 2007).

Biognese de galotaninos e elagitaninos

As rotas biossintticas que levam a formao de galotaninos e
elagitaninos possivelmente envolvem transformaes oxidativas do precursor -
16

1,2,3,4,5-pentagaloil-D-glicose. Esse precursor, por sua vez, formado via
intermedirio -glicocalina (-1-O-galoila-D-glicose), que produzido pela
reao do cido glico com UDP-glicose. A -glicocalina o principal doador de
grupos do cido glico na biognese de galoil-steres e de galotaninos.
(SIMES, 2007).
As trs rotas biogenticas, comeando pelo precursor pentagaloil-glicose,
foram propostas por Beart et.al (1985). A rota 1 conduz a formao de
galotaninos pela adio de grupos galoila que se interconectam atravs de
ligaes meta-depsdicas.
A rota 2 leva a formao de elagitaninos com a glicose na conformao
de cadeira mais estvel. Duas molculas de cido glico vizinhas condensam-se
por acoplamento exidativo produzindo o grupo deidro-hexa-hidroxi-difenoila
como em telimagrandina II. Atravs da condensao de mais dois grupos galoila
produzido outro elagitanino, a casuarictina. Esses compostos podem se ligar a
outros monmeros gerando dmeros, trmeros e oligmeros. Alm disso, esses
compostos podem sofrer hidrlise enzimtica na ligao ster na posio C-1,
produzindo compostos com a hidroxila livre no carbono anomrico, por exemplo
telimagrandina I e pedunculagina. (SIMES, 2007).
Os elagitaninos C-glicosdicos, como a casuarina, so possivelmente
biossintetisados a partir da pedunculagina. O mecanismo ainda desconhecido,
mas OKUDA et.al. (1989) isolaram o composto aldedico, liquidambina, que
considerado o intermedirio na biognese de elagitaninos de cadeia aberta. Esses
elagitaninos tambm se condensam, formando oligmeros. Entretanto, a ligao
entre os monmeros via C-C ao invs de C-O como nos outros tipos.
A rota biogentica 3 leva a formao dos elagitaninos, empregando
glicose na conformao de cadeia com os substituintes em posio axial, como,
por exemplo, na geranina. Os grupos HHDP so formados pelo acoplamento
oxidativo entre grupos cido glico nas posies C-3 para C-6, C-1 para C-6 ou
C-2 para C-4. Essa classe de compostos caracterizada pela presena do grupo
ster deidroexaidroxidifenoila e seus derivados. Tais compostos tambm sofrem
condensao atravs de ligaes intermoleculares C-O, gerando assim,
oligmeros. (SIMES, 2007).

Taninos Condensados

Di-hidroflavonois so substratos diretos para a abundante classe de flavonis
e para a formao de flavan-3,4-diis, que so conhecidos como
leucoantocianidinas. Atravs da reduo de di-hidroflavonois na posio 4,
catalizada pela di-hidroflavonol-4-redutase, formam-se primeiramente os flavan-
17

2,3-trans-3,4-cis-diis (ex. leucopelargonidina), os quais so intermedirios na
formao de catequinas, prantocianidinas e antocianidinas. Catequinas (ex.
afzelequina) so sintetizadas a partir da leucoantocianidinas para,
posteriormente, sofrerem reduo na posio C-4. Essa reduo catalizada pela
flavan-3,4-cis-diol-redutase. Proantocianidina (ex. propelargonidina B-3)
provavelmente originada a partir de leucoantocianidinas e catequinas por uma
reao de condensao. (SIMES, 2007).

OCORRNCIA

Taninos condensados e hidrolisveis se distribuem no reino vegetal seguindo
padres significativamente diferentes. Enquanto as proantocianidinas ocorrem
amplamente em Gymnospermae e Angiospermae, os taninos hidrolisveis esto quase
restritos s Choripetalae das dicotiledneas e no foram encontrados nas Simpetalae.
(SIMES, 2007).
Os taninos condensados em geral esto amplamente distribudos em plantas
lenhosas. J os taninos hidrolisveis ocorrem em dicotiledneas herbceas e lenhosas,
porm dentro de limites taxonmicos bem definidos. Os elagitaninos tm sido utilizados
como marcadores taxonmicos devido a sua distribuio no complexo HDR,
Hamamelidae, DIleniidae e Rosidae. Sua distribuio dentro das famlias do complexo
HDR foi revista pelo grupo de OKUDA (1993).

FLAVONOIDES

DEFINIO

Os flavonoides, biossintetizados a partir da via dos fenilpropanoides, constituem
uma importante classe de polifenois, presentes em relativa abundncia entre os
metablitos secundrios dos vegetais. Uma substncia fenlica ou polifenlica
aquela que possui um ou mais ncleos aromticos contendo suvstituintes hidroxilados
e/ou seus derivados funcionais (steres, teres, glicosdeos e outros). Entretanto, uma
deifinio levando em conta somente a estrutura qumica no apropriada, uma vez que
existem compostos contendo hidroxilas fenlicas, que fazem parte de outras classes de
metablitos. Dessa forma, mais conveniente empregar-se uma definio que leva em
conta tambm a origem biogentica (SIMES, 2007).
18

Os nomes triviais dos flavonoides empregados, possuem na grande maioria dos
casos, relao com a planta na qual foram identificados pela primeira vez. Por exemplo:
tricinafoi isolada de Triticum sp., robinetina de Robinia sp., vitexina de Vitex sp., e
quercetina de Quercus sp. A grande diversidade de nomes triviais destas substncias
pode causar uma certa confuso para os indivduos ainda no familiarizados com este
tipo de nomenclatura. (SIMES, 2007)
Os flavonoides representam um dos grupos fenlicos mais importantes e
diversificados entre os produtos de origem natural. Essa classe de compostos
amplamente distribuda no reino vegetal. Quase ausente em algas, alguns representantes
foram identificados em brifitas, existindo somente um relato de ocorrncia em fungos.
Em pteridfitas tambm foram encontrados, mas sua variabilidade estrutural pequena.
Todavia, esto presentes em abundncia em angiospermas, apresentando nesse grupo
enorme diversidade estrutural. (SIMES, 2007).

Devido a grande variedade de flavonoides existentes na natureza, eles foram
divididos em subclasses de acordo com suas caractersticas qumicas e biossintticas.

Flavonas, flavonis e seus O-Heterosdeos.

Esses compostos fazem parte de um grande grupo de flavonoides de origens
biossintticas muito prximas. Como os flavonis so flavonas substitudas na posio
C-3 por uma hidroxila, essas duas classes so em geral classificadas juntas. Isto
justificado uma vez que suas anlises, sntese e reaes qumicas possuem uma base
terica comum. (SIMES, 2007)
Antiocianos

Antociano um termo empregado originalmente para descrever os pigmentos
azuis de Centaurea cyanus L. um dos mais importantes grupos de pigmentos de
plantas solveis em gua, ao lado de betanas (tambm hidrossolveis) e dos carotenos
(geralmente hidrofbicos). (SIMES, 2007)

Chalconas

O termo chalcona utilizado para caracterizar uma famlia de compostos
possuindo como ncleo fundamental o 1,3-diarilpropano, modificado pela presena de
19

uma ligao olefnica, de um grupamento cetona e/ou de um grupo hidroxila. (SIMES,
2007)

Auronas

O termo aurona foi proposto por Bate-Smith e Geissman em razo da cor de
ouro apresentada por esses compostos e da semelhana estrutural com as flavonas, As
auronas so derivadas de 1-benzilidenocumararona. A presena de uma ligao
olefnica introduz, nessas estruturas, a isomeria geomtrica. A maior parte das auronas
de origem natural apresentam a configurao Z-olefina, sendo chamadas de Z-auronas.
Dessa forma, aquelas que possuem a configurao E-olefina, so chamadas E-auronas.
(SIMES, 2007).

Flavanas, Leucoantocianidinas e Proantocianidinas

Esses compostos fazem parte de uma classe de flavonoides, junto com os
biflavonoides e mais recentemente os isoflavonoides, nos quais possvel encontrar
estruturas oligomerizadas. Uma vez que os flavonoides da classe das proantocianidinas
tambm fazem parte de uma das classes de taninos. (SIMES, 2007).

4.3 TCNICAS DE IDENTIFICAO E ISOLAMENTO
O Protium hebetatum pode ter seus constituintes identificados e isolados atravs
de ressonncia magntica nuclear (RMN), MS, IV e por comparao com dados
espectrais obtidos na literatura e com amostras autnticas. Os metablitos isolados
foram: os terpenides, e -amirina, os esterides campesterol, estigmasterol e
sitosterol e a cumarina escopoletina.
Aps a preparao do extrato de Protium, uma parte em ter e outra em lcool
etlico, obtm-se dois extratos, que so submetidos a marcha analtica qualitativas
usuais para avaliao de seus constituintes principais. O extrato etrico deve ser
submetido a anlise em uma coluna de slica gel, utilizando como fase mvel hexano,
benzeno e acetato de etila. Aps evaporao do solvente, resultam, respectivamente, as
fraes: EE-1, EE-2 e EE-3.De modo similar, o extrato alcolico foi submetido a
anlise em uma coluna de slica gel, usando como eluentes: hexano, hexano/benzeno
(1:1), benzeno, benzeno/ acetato de etila (1:1), acetato de etila e metanol. Apos
evaporao dos solventes, resultaram respectivamente as fraes: EA-1 ; EA-2 ; EA-3;
EA-4; EA-5e EA-6 (Costa et al. 2011).
20

As fraes etricas e alcolicas foram analisadas e apresentaram semelhana em
sua composio. Aps a anlise desses resultados, foi possvel identificar uma mistura
de dois triterpenos: -amirina e -amirina (MAHATO apud COSTA et al. 2011), de
trs esterides: campesterol, estigmasterol e -sitosterol (Costa et al. 2008) e uma
cumarina: escopoletina (Arisawa et al. 1983). As estruturas das substancias isoladas
foram elucidadas por mtodos espectroscpicos (CG-EM,CCD, RMN 1H e 13C),
identificadas por comparaes na literatura e amostras autnticas.

Na Eschweilera ovalifolia, o fracionamento cromatogrfico levou ao
isolamento e identificao de catorze terpenides. A identificao das substncias foi
feita atravs da anlise dos espectros de IV, RMN 1H e RMN 13C. A feio dos
espectros de RMN 1H permitiu identificar trs classes distintas de triterpenos
policclicos, esterides e cromanis.

4.4 POTENCIAL FARMACOLGICO
Protium um gnero que se destaca na Burceraceae, endmica na regio
Amaznica, possui importante papel no comrcio com destaque para a produo de
leos essenciais, utilizado como matria nas mais diversas reas da indstria:
perfumaria, alimentcia e farmacutica. (ANDRADE e HIGUCHI; MARQUES et al.
apud COSTA et al. 2011).
Entre os metablitos secundrios presentes no Protium hebetatum, as cumarinas
possuem diversas atividades farmacolgicas entre as mais conhecidas esto:
antiinflamatria, espasmoltica, broncodilatadora e atua tambm contra o
desenvolvimento de tumores. A escopoletina, uma cumarina com atividade
farmacolgica confirmada, atua na regulao da presso arterial e possui atividade
bactericida contra vrias espcies incluindo Escherichia coli . (ARISAWA apud
COSTA, 2001).
As e -amirina presentes no Protium hebetatum DC Daly galhos, possuem
atividade inflamatria confirmada. (Bandeira et al. 2007).

A Eschweilera ovalifolia (DC) nied folhas, conhecida pela produo de
fitoantioxidantes, com ao antioxidante possuindo desta forma potencial cosmocutico
anti-envelhecimento.



21


5. PRTICA 1 PREPARAO DAS SOLUES PARA USO NA
PROSPECO FITOQUMICA PRELIMINAR

5.1 OBJETIVO

Preparar solues e reagentes necessrios para a investigao de esteroides,
triterpenos, saponinas, glicosdeos cardioativos, taninos, cumarinas e em amostras
vegetais

5.2 MATERIAIS

5.2.1 Vidrarias e acessrios

Bales volumtricos de 25 mL;
Bastes de vidro;
Beckers de 50 mL e 100 mL e 1000 mL;
Esptulas;
Etiquetas para rotulagem;
Frascos de vidro ou plstico com capacidade para 50 mL ou mais;
Funil simples;
Pipetas graduadas de 1, 5 e 10 mL;
Manta aquecedora;
Papel de filtro analtico;
Provetas de 25 mL.

5.2.2 Reagentes

Acetato de chumbo;
cido 3,5-dinitrobenzico;
cido actico glacial;
cido clordrico p.a.;
22

cido pcrico;
cido sulfrico p.a.;
Anidrido actico p.a.;
Acetato de chumbo;
Carbonato de sdio;
Clorofrmio p.a.;
Cloreto frrico;
Etanol p.a.;
ter etlico p.a.;
Hidrxido de potssio.

5.3 MTODOS

Inicialmente calculou-se as quantidades de reagentes necessrios para 50
mL de soluo para cada um deles:
Acetato de chumbo a 10 % (p/v) em gua isenta de anidrido carbnico

100g ---------33g(CH3COO)2Pb
X g --------5g
X= 15,15g

cido 3,5-dinitrobenzico a 1% em etanol (Reagente de Kedde)

100g ---------99g C6H3(NO2)2COOH
X g --------5g
X= 0,0505g

cido clordrico 0,1 N. d HCl= 1,18g/mL

1= m1________=>
36,36x0,05
m1= 0,1823g
1,18= 0,1823g =>
23

V
=>V= 0,154 mL

100mL ---------37 mL HCl
X mL --------0,154 mL
X= 0,416 mL


cido clordrico 2 N;

2= m1________=>
36,36x0,05
m1=3,646g
1,18= 3,646g =>
V
=>V= 3,089 mL

100mL ---------37 mL HCl
X mL --------3,089 mL
X= 8,34 mL

cido clordrico 3N

3= m1________=>
36,36x0,05
m1=5,469g
1,18= 5,469g =>
V
=>V= 4,634 mL

100mL ---------37 mL HCl
X mL --------4,634 mL
X= 12,524 mL

24

cido pcrico a 1 % em etanol a 50 % (Reagente de Bajlet);

Teor d H2O = 15%

100g ---------87,5g C2H2(NO2)3OH
X g --------0,5g
X= 0,571g

cido pcrico a 10 % (p/v)


100g ---------87,5g C2H2(NO2)3OH
X g --------5g
X= 5,71g


Carbonato de sdio 10 % (guardar em recipiente plstico)

100g ---------99g
X g --------5g
X= 5,050g


100g ---------99g C6H3(NO2)2COOH
X g --------5g
X= 0,0505g

Hidrxido de potssio N alcolico (guardar em recipiente plstico)

1 = m1________=>
56,11x0,05
m1=2,8g
1,18= 5,469g =>
25

V
=>V= 4,634 mL

100mL ---------85,5 mL KOH
X mL -------- 2,8 mL
X= 3,27 g


Hidrxido de sdio 2N (guardar em recipiente plstico)
X= 4,04 g

Mistura ter-clorofrmio 3+1 (manter em frasco bem fechado, ao abrigo
do calor).
ter 99,8%: 50 mL/4= 12,5 mL; 12,5x3= 37,5+0,025= 38,25mL;
Clorofrmio: 12,5+0,025= 12,525Ml


Aps os clculos realizou-se os seguintes procedimentos:
cido Clordrico 0,1N: Utilizando-se da pipeta graduada mediu-se 0,4162ml de
HCl e colou-se num bquer, sendo ento transferido para um balo de 50ml contendo
um pouco de gua. Em seguida, adicionou-se gua destilada para completar o volume
de 50ml. A soluo foi homogeneizada e transferida para um frasco de vidro.
cido Clordrico 2,0N: Utilizando-se da pipeta graduada mediu-se 8,348ml de
HCl num bquer, sendo ento transferido para um balo de 50ml contendo um pouco de
gua. Em seguida, adicionou-se gua destilada para completar o volume de 50ml. A
soluo foi homogeneizada e transferida para um frasco de vidro.
cido Clordrico 3,0N: Utilizando-se da pipeta graduada mediu-se 12,524ml de
HCl num bquer, sendo ento transferido para um balo de 50ml contendo um pouco de
gua. Em seguida, adicionou-se gua destilada para completar o menisco no volume de
50ml. A soluo foi homogeneizada e transferida para um frasco de vidro.
cido Pcrico a 10%: Adicionou-se 5,71g de cido pcrico em um bquer e
pesou-se, que ento foi transferido para um balo de 50ml. Depois, adicionou-se gua
destilada at completar o menisco no volume de 50 ml. A soluo foi homogeneizada e
transferida para um frasco de vidro.
26

cido Pcrico a 1 % em etanol a 50% (Reagente de Bajlet): Adicionou-se 0,57g
de cido pcrico em um bquer e pesou-se. Em seguida,utilizando pipeta mediu-se
26,28ml de etanol em bquer. O cido pcrico foi ento misturado com o etanol, e a
soluo foi transferida para um balo de 50ml. Em seguida adicionou-se gua destilada
at completar o menisco de volume de 50ml. A soluo foi homogeneizada e transferida
para um frasco de vidro.
Hidrxido de sdio 2 N: Adicionou-se NaOH em um bquer e pesou-se 4,04g
de, sendo ento transferido para um balo de 50ml. Em seguida adicionou-se gua
destilada para completar o menisco no volume de 50 ml. A soluo foi homogeneizada
e transferida para um frasco de plstico.
Hidrxido de potssio N: Adicionou-se KOH num bquer, pesou-se 3,29g sendo
ento transferido para um balo de 50ml. Depois, adicionou-se etanol para completar o
menisco no volume de 50 ml. A soluo foi homogeneizada e transferida para um frasco
de plstico.
Acetato de chumbo a 10 % em gua isenta de anidrido carbnico: Adicionou-se
(CH3COO)2Pb em um bquer, pesou-se 15,15g do mesmo. Em seguida, aqueceu-se
cerca de 60ml de gua destilada at a fervura. Transferiu-se ento, o (CH3COO)2Pb
para um balo de 50ml, onde adicionou-se a gua fervida at completar o menisco no
volume de 50ml. A soluo foi homogeneizada e transferida para um frasco de vidro.
Carbonato de sdio 10 %: Adicionou-se Na2CO3 em um bquer, pesou-se
5,05g, sendo ento transferido para um balo de 50ml. Depois, adicionou-se gua
destilada at completar o menisco no volume de 50 ml. A soluo foi homogeneizada e
transferida para um frasco de plstico.
cido 3,5-dinitrobenzico a 1% em etanol (Reagente de Kedde): Adicionou-se
de C6H3(NO2)2COOH num bquer, pesou-se 0,0505g, sendo ento transferido para um
balo de 50ml. Depois, adicionou-se etanol at completar o menisco no volume de 50
ml. A soluo foi homogeneizada e transferida para um frasco de vidro.


6. AULA PRTICA 2 - PROSPECO DE METABLITOS NO
FENLICOS E NO NITROGENADOS

6.1 OBJETIVO
27


Detectar a presena de triterpenos, esteroides, glicosdeos, glicosdeos
cardioativos e saponinas nas amostras vegetais analisados.


6.2 MATERIAIS

6.2.1 Vidrarias e utenslios

Banho-maria;
Bastes de vidro;
Bqueres de 100mL;
Cpsula de porcelana;
Centrfuga;
Esptulas;
Funil de separao;
Funil de haste longa;
Mantas aquecedoras;
Papel de filtro;
Pipetas graduadas de 1 a 10mL;
Provetas de 10mL;
Suporte de tubo de ensaio;
Suporte universal com garra;
Tubos de ensaio.

6.2.2 Solventes

Acetato de chumbo a 10%*;
cido actico glacial;
cido clordrico p.a.;
cido fosfrico p.a.;
cido sulfrico p.a.;
28

Clorofrmio;
Etanol a 50%;
Hidrxido de potssio N em etanol*;
Reativo de Bajlet*;
Reativo de Kedde*;
Reativo de Libermann-Buchard*;
Reativo de xantidrol;
Soluo de cloreto frrico*;
Sulfato de sdio anidro;
Xantidrol 10% em metanol.
*Foram preparados na aula prtica 1


6.3 MTODOS

Extrao

Foi pesado exatamente 2,000g das amostras de Eschweilera ovalifolia e Protium
hebetatum em uma balana analtica utilizando um bquer de 100mL. Aps a pesagem
foram adicionados 20mL de etanol a 50% e 10 ml da soluo de acetato de chumbo a
10%, por 2 minutos para cada amostra respectivamente.
Para a preparao de lcool 50% foram realizados os seguintes clculos:

C1 = concentrao do lcool a ser diludo
V1 = volume do lcool a ser diludo
Cf = concentrao final
Vf = volume final.

C1.V1= Cf.Vf
95 . V1= 50. 100
V1= 52,63 mL de lcool etlico

29

O valor de 52,63mL de lcool etlico foi transferido para um balo volumtrico
de 100mL que foi completado com gua destilada at o volume final de 100mL.

Aps a amostra ferver por 2 minutos e arrefecer em temperatura ambiente, foi
realizado uma filtragem com papel de filtro e funil de haste longa para um bquer de
100mL. O material filtrado foi transferido para um funil de separao e depois foi
levado para a capela de fluxo laminar junto com o suporte universal (com garra) e o
clorofrmio. Foram extradas trs pores de 15 mL de clorofrmio, reunindo as fases
orgnica em um bquer no qual foi adicionado sulfato de sdio. Depois foram
distribudos alquotas de 5mL pipetadas em 6 tubos de ensaio e colocadas dentro de um
bquer contendo gua e colocados em manta aquecedora para evapor-las secura.
Depois de submetido secura os tubos foram realizadas as reaes que se seguem.
Os procedimentos citados acima so comum as duas espcies analisadas

Identificao de ncleo lipdico

Reao de Libermann-Burchad (identificao de esterides e triterpenos)

No tubo de nmero 1 de cada espcie respectivamente foi pipetado 1mL do
reativo de Libermann-Burchad ao resduo orgnico e deixou-se os tubos em repouso no
suporte de tubo de ensaio para observar o aparecimento de cores.

Reao de Salkowski

No tubo de nmero 2 de cada espcie respectivamente foi pipetado 1mL de
cido sulfrico concentrado ao resduo orgnico, o procedimento foi realizado na capela
de fluxo laminar, e deixou-se os tubos em repouso no suporte de tubo de ensaio para
observar o aparecimento de cores.

Identificao da y-lactona

Reao de Kedde

30

No tubo de nmero 3 de cada espcie respectivamente foi pipetado 2mL de
reativo de Kedde e 2 gotas de hidrxido de potssio em etanol ao resduo orgnico,
deixou-se em repouso por 5 minutos para anlise de desenvolvimento de cor.


Reao de Bajlet

No tubo de nmero 4 de cada espcie respectivamente foi pipetado 2mL do
reativo de Bajlet e 2 gotas de hidrxido de potssio em etanol ao resduo orgnico.
Deixou-se os tubos em repouso no suporte de tubo de ensaio para observar o
aparecimento de cor.

Identificao das desoxioses

Reao de Keller-Kiliani

Foi preparado o reativo da seguinte forma: pipetou-se 6mL da soluo de cido
actico glacial e foi pipetado 0,2mL da soluo de cloreto frrico, os dois volumes
foram colocados em um bquer.
No tubo de nmero 5 de cada espcie com resduo orgnico foi pipetado 3mL do
reativo. Depois o contedo dos tubos de nmero 5 das espcies analisadas foram
transferidos cuidadosamente, sem agitar, cada um para outro tubo de ensaio contendo
3mL de cido sulfrico previamente pipetado. Deixou-se em repouso para observar o
aparecimento de cor.

Reao de Pesez

Nos tubos de nmero 5 contendo resduo orgnico de cada espcie
respectivamente, foram pipetados 5mL de xantidrol 10% em metanol, depois pipetou-se
10mL de cido actico glacial e 1mL de cido clordrico tambm foi pipetado para cada
tubo.
Os dois tubos de nmero 5 foram colocados para aquecer em banho-maria por
10 minutos, para isso utilizou-se uma manta aquecedora e um bquer com gua no qual
foram colocados os tubos.
31

Aps os 10 minutos os tubos foram retirados para arrefecer em temperatura
ambiente. Ficaram em repouso no suporte de tubo de ensaio para anlise do
aparecimento de cor.

Prospeco de saponinas

Teste geral de saponinas

Para a preparao de extrato aquoso a 2%,pesou-se 2,000g exatamente de cada
espcie analisada em uma balana analtica utilizando um bquer previamente tarado.
Adicionou-se 100 mL de gua destilada em cada bquer utilizando a proveta e foi
colocado em manta aquecedora para decoco.
Clculo para preparao do extrato aquoso a 2%:

100mL de soluo aquosa ------- 100%
X ------------------ 2%
X= 2g de substrato

Aps a decoco, deixou-se arrefecer em temperatura ambiente os extratos
aquosos e foi filtrado em papel de filtro colocado em funil de haste longa sustentado por
suporte universal com garra.
Finalizada a filtragem, pipetou-se 5mL de cada amostra para seu respectivo tubo
de ensaio, os quais foram agitados vigorosamente por 15 segundos. Passado o perodo
de agitao de cada amostra, foi analisada a persistncia da espuma em um perodo de
15 minutos. Aps esse perodo de observao foi acrescentado gotas de cido clordrico
2N sobre a espuma das duas amostras analisadas .

Teste de espuma

Identificou-se 10 tubos de ensaio de tamanho igual para cada extrato e foram
transferidas alquotas da seguinte forma:

32

TUBO I II III IIV V VI VII VIII IX X
Extrato (mL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
gua destilada
(mL)
9 8 7 6 5 4 3 2 1 -


Cada alquota foi transferida para seu respectivo tubo de ensaio contendo as
propores especificadas acima com a utilizao de pipetas de 10mL. Cada tubo foi
agitado vigorosamente por 15 segundos e depois ficou em repouso por 15 minutos.

6.4 RESULTADOS E DISCUSSES

Reao de Libermann- Burchad

A reao de Libermann-Burchad (anidrido actitico- cido sulfrico
concentrado) utilizada na deteco de esterides e triterpenos. Os esterides
desenvolvem colorao mutvel com o tempo e os triterpenos desenvolvem colorao
estvel. (HASHIMOTO apud SIMES et al. 2004, p.238).
No Protium hebetatum DC Daly galhos, no ocorreu a formao de colorao
vermelha, rosa ou prpura que indicam a formao de ncleo triterpnico. Houve o
aparecimento de cor verde, que indica a presena de ncleo esteroidal. Como se pode
ver na imagem abaixo:




33


FIGURA 1. Resultado da reao de Libermann-Burchard para o Protium hebetatum.

Na Eschweilwera ovalifolia (DC) Nied folhas, o resultado foi positivo para a
presena de ncleo esteroidal com a formao da cor verde, foi negativo para a presena
de ncleo triterpnico que indicado pela formao da cor vermelha, rosa, prpura ou
violeta.
Apesar de ser uma reao considerada inespecfica por ocorrer atravs de
estruturas comuns a vrias substncias, utilizada pelo seu baixo custo e rpida
execuo. (Simes et al., 2004).

Reao de Salkowski

Reao amplamente empregada na deteco de esterides insaturados.(Simes et
al., 2004). O aparecimento de colorao vermelha se deve a presena de colesterol.
No Protium hebetatum DC Daly galhos, o resultado foi positivo com o
desenvolvimento da cor vermelha, indicando a presena de esterides como pode ser
observado na imagem abaixo:


34


FIGURA 2. Resultado da reao de Salkowski para o Protium hebetatum.

Na Eschweilwera ovalifolia (DC) Nied folhas, houve desenvolvimento de
colorao vermelha indicando a presena de esterides.


Reao de Kedde

Reao utilizada para identificar a presena de cardenlideos, devido a
existncia da y-lactona ,-insaturada. utilizado o cido 3,5-dinitrobenzico
resultando em colorao vermelho-violcea estvel. Essa reao positiva para
presena de heterosdeos e de geninas de anel y-lactnico. (Simes et al., 2004).
Na Eschweilwera ovalifolia (DC) Nied folhas, no houve aparecimento de cor
indicativa da presena de y-lactona, vermelho violeta estvel.
No Protium hebetatum DC Daly galhos, o resultado encontrado foi negativo sem
a formao de colorao indicativa de geninas de anel y-lactnico. Como pode ser
observado na imagem a seguir.
35


FIGURA 3. Resultado da reao de Kedde para o Protium hebetatum

Reao de Baljet

Reao utilizada na caracterizao de geninas do tipo cardenoldeo, possui com
resultado a formao de colorao laranja estvel. (Simes et al. 2004).
Na Eschweilwera ovalifolia (DC) Nied folhas, no houve aparecimento da
colorao laranja estvel caracterstica quando h presena de geninas.
No Protium hebetatum DC Daly galhos, no houve formao de colorao
caracterstica.

FIGURA 4. Resultado da reao de Baljet para o Protium hebetatum.

36

Reao de Keller-Kiliani

considerada como um ensaio particular dos desxi-acares e dos heterosdeos
facilmente hidrolisveis que os contm. (Simes et al. 2004).
Esta reao somente positiva se o desoxiacar estiver na extremidade
glicdica. Se houver glicose ou outro acar, a reao ser negativa, mesmo havendo
desoxiacares na molcula. (Robbers et al. 1997).
Na Eschweilwera ovalifolia (DC) Nied folhas, houve formao de colorao
vermelho-acastanhado na zona de contato, porm no houve aparecimento de colorao
azul-esverdeada na camada actica.
No Protium hebetatum DC Daly galhos, houve resultados positivos para a
formao de colorao vermelho-acastanhada na zona de contato e azul-esverdeada na
camada actica como pode ser observado na figura a seguir.


FIGURA 5. Resultado da reao de Keller-Kiliani para o Protium hebetatum.

Reao de Pesez

conhecida como reao do xantidrol. O resduo clorofrmico obtido na
extrao levado securae dissolvido em cido actico concentrado. A essa soluo
adicionado reativo de xantidrol. Com o aquecimento, h o desenvolvimento de
colorao vermelha caracterstica da presena desses acares. (BRITISH
PHARMACOPEIA apud SIMES et al. 2004).
Na Eschweilwera ovalifolia (DC) Nied folhas, no ocorreu reao pois no havia
desoxioses presentes mas outras espcies de acares, dessa forma no desenvolveu
colorao caracterstica da ocorrncia de reao.
No Protium hebetatum DC Daly galhos, houve aparecimento de colorao
vermelha em toda a amostra, ficando evidente a presena de desoxioses na amostra
analisada como pode ser observado na figura abaixo.
37




FIGURA 6. Resultado da reao de Pesez para o Protium hebetatum.


Teste geral para saponinas

O teste geral para saponinas realizado para verificar se aps a adio de cido
ainda haver presena de espuma persistente. Saponinas so glicosdeos de esterides
ou terpenos policclicos. Esse tipo de estrutura que possui uma parte lipoflica e outra
hidroflica (acar), determina propriedades da reduo da tenso superficial da gua,
caracterstica de suas aes detergente e emulsificante. (Simes et al. 2004).


FIGURA 7. nicio do teste geral para saponinas; Protium hebetatum presente na esquerda e Eschweilwera
ovalifolia presente a direita.

38


FIGURA 8. Amostras aps a adio de cido e 15 minutos de repouso, Protium hebetatum presente na
esquerda e Eschweilwera ovalifolia presente a direita.

Pode-se observar a presena de espuma persistente na amostra de Protium
hebetatum que prosseguir para a anlise do ndice de espuma.

ndice de espuma

O ndice de espuma a determinao da maior diluio em que 1g de droga
capaz de formar 1 cm de espuma em determinadas condies. Atravs desse ndice
pode-se estimar a quantidade de saponinas que se tem na droga. (Sociedade Brasileira
de Farmacognosia- SBF).


FIGURA 9. Resultado do teste de ndice de espuma.



39


TUBO I II III IV V VI VII VIII IX XX
Altura da
espuma (cm)
0,7 1,5 2 2 1,5 1,5 2 2 3 3


Clculo do ndice de espuma ou ndice afrosimtrico

0,1g da droga--------- 100mL
x---------------- 1mL
x=0,001g da droga contida no tubo

0,001 g da droga-------10mL de volume final
1g -------------- x
X= 10000
ndice de espuma= 10000

Observao: Fz-se necessrio aproximaes de 0,7 p 1 cm com o resultado do
tubo I e pde-se calcular o ndice de espuma, no foi possvel repetir o experimento pois
havia acabado o extrato aquoso e o tempo de aula.



7. PRTICA 3 - PROSPECO DE METABLITOS FENLICOS
E NITROGENADOS.

7.1 OBJETIVO

Detectar a presena de metablicos fenlicos e nitrogenados em amostras de
Eschwilera sp e Protium hebetatum como taninos, flavonoides, cumarinas, heterosdeos
antraquinnicos e heterosdeos cianogenticos.

7.2 MATERIAIS

40

Para determinado procedimento, foi necessrio organizar vidrarias, acessrios e
reagentes necessrios para o trabalho de deteco das substncias de interesse.
Separamos alguns acessrios e vidrarias utilizadas na deteco das drogas:

7.2.1 Vidrarias e acessrios
Banho-maria;
Bastes de vidro;
Beckers;
Esptulas;
Lmpada ultravioleta de 365 nm (UV 365);
Manta aquecedora;
Papel de filtro;
Lmpada de lcool;
Fitas medidoras de pH;
Pipetas graduadas;
Pipetas de Pasteur;
Placa de Petri;
Provetas de 50 mL;
Tubos de ensaio e estante.

7.2.2 Reagentes:
cido clordrico 2N;
cido pcrico a 1%;
cido Sulfrico P.A.;
Benzeno P.A.;
Carbonato de sdio a 10%;
Etanol a 70%;
Hidrxido de amnio P.A.;
Hidrxido de potssio N em etanol;
Hidrxido de sdio 2N;
Magnsio granulado;
41

Soluo de cloreto frrico
7.3 MTODOS

7.3.1 Prospeco de heterosdeos cianogenticos. (COSTA, 1982)

Pesou-se 10,0 g de amostra vegetal e transferir para um erlenmeyer de 250 mL com
tampa esmerilhada (ou erlenmeyer com rolha);
Adicionou-se 50,0 mL de gua destilada e 1 mL de cido sulfrico concentrado;
Prendeu-se uma fita de papel de picrato de sdio, previamente preparado, tampa
do erlenmeyer, evitou-se seu contato com o lquido;
Deixou-se em banho-maria a uma temperatura de 60 C por duas horas;
Observou-se aparecimento de cor no papel.

7.3.2 Prospeco de heterosdeos antraquinnicos. (COSTA, 1982)

Ferveu-se 2g de amostra vegetal em 10 mL de hidrxido de sdio a 2N;
Filtrou-se para um tubo de ensaio e deixar aferrecer;
Acrescentou-se cido clordrico a 2N at aparecimento de cor amarela;
Acrescentou-se igual volume de benzeno e agitar;
Transferiu-se alguns mililitros da fase benznica a outro tubo de ensaio;
Acrescentou-se d 2-3 ml de hidrxido de amnia e observou-se o aparecimento de
cor;

7.3.3 Prospeco de cumarinas e flavonoides. (COSTA, 1982)

Extrao
Preparou-se um extrato hidroetanlico com 2,5g de amostra vegetal 50 mL de
etanol a 70% por decoco por 10 minutos, filtrou-se e deixou-se aferrecer;
42

Transferiu-se para um balo volumtrico de 50mL e completar o volume com etanol
a 70% (diluir mais se necessrio);
Distribuiu-se alquotas de 3ml em sete tubos identificados: seis para os testes que se
seguem e o outro tubo para branco.

7.3.4 Identificao de cumarinas (COSTA, 1982).

Despejou-se, separadamente, duas gotas do extrato recm-preparado sobre um
pedao de papel de filtro comum (mancha teste e mancha controle);
Sobre uma delas (mancha-teste), gotejou-se soluo de hidrxido de potssio N em
etanol;
Sob UV 365, observou-se o aparecimento de fluorescncia amarelo-esverdeada na
mancha-teste.

7.3.5 Identificao de taninos. (COSTA, 1982)

Adicionar da soluo de cloreto frrico ao tubo 1, agitando bem;
Observar a formao de precipitados.

7.3.6 Identificao de antocianinas, antocianidinas, flavonas, flavonis,
xantonas, chalconas, auronas e flavononois. (COSTA, 1982)

Ajustou-se o pH dos tubos 2,3 e 4 a 3,5 e 11 por meio das adies de cido
sulfrico, hidrxido de sdio 2N e hidrxido de potssio 2N, respectivamente;
Observou-se e interpretou-se o aparecimento de cores.

7.3.7 Teste para leucoantocianinas, catequinas e flavanonas. (COSTA, 1982)

Ajustou-se o pH dos tubos 5 e 6 a 1 e 11 por meio da adio de cido clordrico 2N
e hidrxido de sdio 2N, respectivamente.
43

Aqueceu-se os tubos por 2-3 minutos em uma lmpada de lcool;
Observou-se e interpretar o aparecimento de cores.

7.4 RESULTADOS E DISCUSSO

Heterosdeos cianogenticos

A presena de heterosdeos cianogenticos evidenciar-se-iam se caso aps o
mtodo de deteco por cromatografia, mostra-se uma colocao vermelho-acastanhada,
onde pudemos observar a presena de um rastro de tal cor porm em pouca quantidade,
isso deixaria claro a presena em menor quantidade de tais substncias nas amostras de
Protium hebetatum, e Eschwilera ovalifolia.










Heterosdeos antraquinnicos

Os heterosdeos antraquinnicos no se mostraram satisfatrios nas amostras de
Protium hebetatum e Eschwilera sp, onde podemos observar a formao de um
precipitado branco volumoso e denso, mostrando-nos assim, segundo o protocolo de
extrao utilizado (COSTA, 1982) o resultado negativo para ambas amostras.
FIGURA 1: Amostras de Protium hebetatum e E. ovalifolia subetidos a testes de
cromatografia para deteco de heterosdeos cianogenticos
44





Cumarinas


Ambas as amostras Protium hebetatum e Eschwilera ovalifolia apresentaram
resultados positivos para tais frmacos, porm, conforme a FIGURA 3. Protium
hebetatum apresentou-se em menor quantidade.












Tanitos

Foi identificado a presena de Tanitos nos extratos de Protium hebetatum e
Eschwilera sp, onde os mesmos na reao de identificao de tanitos com Cloreto
Frrico desenvolveu um precipitado, proporcionando o aparecimento de uma colorao
verde escura. [FIGURA 4.]

FIGURA 2: Amostras de Protium
hebetatum (a.) e Eschwilera ovalifolia (b.),
na deteco de heterosdeos
antraquinnicos.
FIGURA 3. Amostras submetidas a deteco de um ncleo cumarina, e visualizao por
fluorescncia. Amostra 1: Protium hebetatum padro; Amostra 2: Protium hebetatum com
KOH; Amostra 3: Eschwilera ovalifolia padro; Amostra 4: Eschwilera ovalifolia com
KOH.
1 2 3 4
a. b.
45

Antocianidinas, Flavonas, Flavonis, Xantonas, Chalconas, Auronas e Flavononois

Os testes ainda nas mesmas amostras mostraram resultado negativo na deteco
de antocianinas, antocianidinas, chalconas e auronas, em ambas amostras, onde para
teste foi colocado em um tubo de ensaio 3 ml de cada amostra e ajustado pH do tudo 2
para 3, por meio da adio de gotculas de cido sulfrico. Ambas as espcies, Protium
hebetatum e Eschwilera sp no apresentaram deteco das mesmas substncias
mencionadas, pois apresentaram uma colorao diferente daquela tomara por base no
protocolo tomado por base (COSTA, 1982). [FIGURA 4 e 5.].

Nos tubos 3 de cada espcie, tambm no houve o desenvolvimento da
colorao lils que caracteriza a identificaes de antocianinas e antocianidinas, onde
aps serem ajustados seus pHs para 5, com a adio de gotculas de hidrxido de sdio
2N, evidenciou um resultado negativo na identificao dos mesmos. [FIGURA 4 e 6.].

No tubo 4, onde a partir do ajuste de seu pH para um carter mais alcalino (pH
11), pela adio de gotculas de Hidrxido de Potssio 2N, poderia ser notada o
aparecimento Antocianidinas, Flavonas, Flavonis, Xantonas, Chalconas, Auronas e
Flavononois, caso a espcie analisada apresentasse as substncias. Foi encontrada a
colorao Vermelho-prpura em Protium hebetatum [FIGURA 7], que segundo o
protocolo tomado por base (COSTA, 1982) significa a presena de chalconas e auronas
na espcie, e na Eschwilera sp, no foi notado uma cor relativamente significativa, onde
pudemos classificar entre vermelho e laranja, denominando a presena de flavononas na
espcie. [FIGURA 4.]

Leucoantocianinas, Catequinas e Flavanonas.

Continuando ainda os testes de deteco, as substncias prestes a serem
identificadas seriam as Leucoantocianinas, Catequinas e Flavanonas, onde para
favorecer a deteco, foi ajustado seu pH no tubo 5 para pH 1, e no tubo 6 para pH 11,
com adio de gotculas de cido clordrico 2N e Hidrxido de Sdio 2N,
respectivamente.
Em Eschwilera sp no tubo 5 predominou uma cor amarelada, dando-se a
entender que poderia ocorrer a presena de catequinas, porm em pouca quantidade, e
no tubo 6 tambm houve a predominncia da mesma cor, onde no seria satisfatrio
para deteco de tais substncias. [FIGURA 4.]
Em Protium hebetatum, no tubo 5 evidenciou-se uma cor vermelha,
caracterizando a planta em ter leucoantocianidinas em sua espcie [FIGURA 8], e no
tubo 6 uma colorao entre vermelho e laranja ocorreu, portanto reagindo e
caracterizando a presena de flavononas. [FIGURA 9]
46





















FIGURA 4. Amostras de Eschwilera sp na identificao de determinadas
substncias como tanitos, tubo 1, nos tubos de ensaio de 2, 3 e 4 para
identificao de antocianinas, antocianidinas, flavonas, flavonois, xantonas,
chalconas, auronas e flavononois, respectivamente, e tubos 5 e 6 para
deteco de leucoantocianinas, catequinas e flavanonas.

FIGURA 5. Amostras de Protium Hebetatum na
deteco de antocianinas, antocianidinas, chalconas e
auronas, comparado a um tubo como controle negativo
FIGURA 6. Amostras de Protium hebetatum na
deteco de antocianinas e antocianidinas, comparando a
um tubo como controle negativo.
FIGURA 7. Amostras de Protium hebetatum na deteco de
Antocianidinas, Flavonas, Flavonis, Xantonas, Chalconas, Auronas e
Flavononois, comparando a um tubo como controle negativo.
FIGURA 8. Amostras de Protium Hebetatum na deteco
de Leucoantocianinas, Catequinas e Flavanonas,
comparando a um tubo como controle negativo.
FIGURA 9. Amostras de Protium Hebetatum na deteco
de Leucoantocianinas, Catequinas e Flavanonas,
comparando a um tubo como controle negativo.

47


8. CONCLUSO

Concluiu-se que as folhas de Eschweilera ovalifolia continham os metablitos:
ncleos esteroidais, esteroides, leucoantocianidinas, em baixas concentraes:
saponinas, heterosdeos cinogenticos e catequinas, em altas concentraes: cumarinas,
taninos, flavonas.
As amostras de Protium hebetatum apresentaram os metablitos: ncleos
esteroidais, chalconas, auronas, leucoantocianidinas, taninos, flavonas, esteroides
insaturados, colesterol, desoxiaucares, em baixas concentraes: heterosdeos
cinogenticos, cumarinas, e em altas concentraes: saponinas.

9. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BANDEIRA, Paulo N. et al. OBTENO DE DERIVADOS DA MISTURA
TRITERPENODICA - E -AMIRINA. Revista brasileira de farmacognosia.
Vol.17. 2007.
BEART, J.E.; LILLEY, T.H.; HASLAM, E. PLANT POLYPHENOLS
SECONDARY METABOLISM AND CHEMICAL DEFENCE: SOME
OBSERVATIONS. Phytochemistry, v.24, p.33-38,1985.
BRUNETON, J. ELEMENTOS DE FITOQUIMICA Y DE
FARMACOGNOSIA. Madrid: Acrbia, 1993.
CARMEN-GUTIERREZ, M.; PARRAY, A.; TENA, M.; JORRIN,J.;
EDWARDS, R. ABIOTIC ELICITATION OF COUMARIN PHYTOALEXINS IN
SUNFLOWER. Phytochemistry, v.8, 1995
CARPENTER, I.; LOCKSLEY, H.; SCHEIMANN, F. XANTHONES IN
HIGHTER PLANTS: BIOGENETIC PROPOSALS AND A
CHEMOTAXONOMIC SURVEY. Phytochemistry, v.8, 1969.
CARVALHO, Loretta Ennes de. et al. CONSTITUINTES VOLTEIS DOS
GALHOS DE PROTIUM POLYBOTRYUM E P .ROBUSTUM (BURSERACEAE).
32a Reunio Anual da Sociedade Brasileira de Qumica. 2009
CARVALHO, Mario Geraldo de. et al. TRITERPENOS ISOLADOS DE
ESCHWEILERA LONGIPES MI ERS (LECYTHIDACEAE). QUMICA NOVA,
21(6) (1998).
48

COSTA Patrcia M. da; CARVALHO, Mario Geraldo de. NOVO
TRITERPENO ISOLADA DA Eschweilera longipes (Lecythidaceae). Anais da
Academia Brasileira de Cincias, 75(1): 21-25, 2003.
COSTA, Alosio Fernandes. 1982; FARMACOGNOSIA EXPERIMENTAL.
Vol III, 2ed. Fundao Calouste Gulbenkian.
COSTA, Alosio Fernandes. FARMACOGNOSIA. Fundao Calouste
Gulbenkian. 2ed, vol I,. 2002..
COSTA, Tlio de Orleans G. ALMEIDA, Richardson Alves de. Et al.
CONSTITUINTES QUMICOS DO CAULE DE PROTIUM HEBETATUM. Acta
Amaznica, 2011.
EVANS, W.C. TREASE AND EVANS PHARMACOLOGNOSY. 14.ed.
London: WB saunders, 1996.
FIORATTI, Alexandre Bronharo. et al. AVALIAO DA ATIVIDADE
ANTIOXIDANTE DE ESCHWEILERA SP. E DESENVOLVIMENTO DE
COSMECUTICOS CONTENDO EXTRATOS NATURAIS. I Congresso de
Farmcia de Maring, 2006.

FRANZ, G.; GRUEN, M. CHEMISTRY, OCCOURENCE AND
BIOSYNTHESIS OF C-GLYCOSYL COMPOUNDS IN PLANTS. Planta medica,
v.47, 1983
FUJITA, G.; INOUE, T. BIOSYNTHESIS OF MANGIFERIN IN
ANEMARRGENA ASPHODELOIDES BINGE. I. The Origin of the xanthone
nucleus. Chem. Pharm. Bull., v.28, 1980
GAIGNAULT, J.C.; BIDET, D.HTROSIDES CARDIOTONIQUES. 35
sicles dhistorie. Fitoterapia, v.59, n.4,p.259-215, 1988.
GALDINO CONRADO, G.. et al. AO DE EXTRATOS ORGNICOS DE
Protium hebetatum D. C. DALY CONTRA MICRO-ORGANISMOS DE
INTERESSE MDICO. 53 Congresso Brasileiro de Quimica, ISBN: 978-85-85905-
06-4. 2013.
HEGNAUER, R. CARDENOLIDES AND BUFADIENOLIDES,
OCCURRENCE AND TAXONOMIC SIGNIFICANCE. Planta Medica, v.19, n.11,
1970.
KOROLKOVAS, Andrejus. A RIQUEZA POTENCIAL DE NOSSA
FLORA. REVISTA BRASILEIRA DE FARMACOGNOSIA. So Paulo, v. 5, No 1,
jan.-jun. 1996.
49

MARQUES, Delcio D.. et al. COMPOSIO QUMICA E ATIVIDADE
ANTIOXIDANTE DO LEO ESSENCIAL DE DUAS SUBSP. ESPCIES DO
GNERO PROTIUM. 32a Reunio Anual da Sociedade Brasileira de Qumica. 2009.
MARQUES, Delcio D.. et al. TRITERPENOS ISOLADOS DA RESINA DA
ESPCIE PROTIUM HEBETATUM DALY (BURSERACEAE). 32a Reunio
Anual da Sociedade Brasileira de Qumica. 2009.
MORI, Scott. DIVERSIFICAO E CONSERVAO DAS
LECYTHIDACEAE NEOTROPICAIS. Acta bot. bras. 4(1): 1990.
OKUDA, T.; YOSHIDA, T.; HATANO, T. NEW METHODS OF
ANALYZING TANNINS. Journal of Natural Products, v. 52, p.1-131, 1989.
REYNOLDS, J.E.F. (ed) MARTINDALE. THE EXTRA FARMACOPEIA.
30. ed., London: Pharmaceutical, 1993.
RICHARDSON, P.D. THE TAXONOMIC SIGNIFICANCE OF C-
GLUCOSILXANTHONES IN FLOWERING PLANTS. Biochem. Syst. Ecol., v.11,
1983.
ROBBERS, James E.; SPEEDIE, Marilyn K.; TYLER, Varro E.
FARMACOGNOSIA E BIOTECNOLOGIA. Ed. Premier, 1997.
ROCHA, L. INVESTIGATION PHYTOCHIMIQUE DE HYPERICUM
BRASILIENSE (GUTTIFERAE). LAUSANNE: Escola de Farmcia, Universidade
de Lausanne, Sua, 1995. Tese de Doutorado.
SIMES, C. M. O. (Org.). FARMACOGNOSIA: DA PLANTA AO
MEDICAMENTO. 5. ed. Porto Alegre: Editora da UFRGS, 2004.
SIMES, C.M.O.; SCHENKEL, E.P.; GOSMANN. G.; MELLO, J.C.P.;
MENTZ, L.A.; PETROVICK, P.R. FARMAGOGNOSIA, DA PLANTA AO
MEDICAMENTO. 5ed. Edio ampliada, 2007.
STRACK, D. PHENOLIC METABOLISM, IN: DEY, P.M.; HARBONE,
J.B. (ed.). Plant biochemistry, London: Academic, Cap 10, 1997.
TSOU, Chih-Hua e MORI Scott A. SEED COAT ANATOMY AND ITS
RELATIONSHIP TO SEED DISPERSAL IN SUBFAMILY LECYTHIDOIDEAE
OF THE LECYTHIDACEAE (THE BRAZIL NUT FAMILY). Botanical Bulletin
of Academia Sinica, Vol. 43, 2001.