ROTEIRO DA AULA PRTICA DE TITULAO DE AMINOCIDOS

Bem vindo ao laboratrio de Bioqumica!

Esta nossa primeira aula prtica do curso de Bioqumica I, e nela voc ter o primeiro
contato com um laboratrio. Este roteiro contm as instrues necessrias para a realia!o da
atividade. "eia atentamente todas as in#ormaes e tire suas d$vidas com o tutor.
%b&etivo'
(onstru!o e identi#ica!o da curva de titula!o de trs aminocidos' um cido, um bsico e
outro neutro )cido asprtico, ar*inina e *licina+.
,aterial necessrio-'
. bec/er
. barra ma*ntica de a*ita!o
placa de a*ita!o
p0metro
. pipeta de . m"
ponteiras para pipeta de . m"
12 m" da solu!o de aminocido .2 m,
solu!o de 3idr4ido de sdio )5a%0+ 2,61 ,
papel milimetrado )um por aluno+
- Para realizar uma das curvas de titulao
7rocedimento'
8 turma ser dividida em trs *rupos, e cada um deles #icar responsvel por titular uma das
solues de aminocido. Ateno! Esta soluo no estar !ent"#a!a$ e #a%e ao seu &ru'o
!ent"#(la a 'artr !a #ur)a !e ttulao o%t!a. "embre9se de que a sua solu!o pode
conter um dos se*uintes aminocidos' cido asprtico, ar*inina ou *licina.
*+ (oloque 12 m" da solu!o de aminocidos no bec/er. (oloque a barra ma*ntica dentro
desta solu!o. (oloque o bec/er sobre a placa de a*ita!o e comece a a*itar a solu!o
lentamente.
,+ (alibre o p0metro e, em se*uida, mea o p0 da solu!o de aminocidos. 8note como
valor inicial da titula!o. (uidado para que a barra ma*ntica n!o esbarre no eletrodo, ele
muito #r*il.
-+ 8dicione o volume da solu!o de 5a%0 2,61 , indicado na tabela ., e anote os valores
de p0 encontrados aps cada adi!o.
.+ 8o #inal de todas as adies, construa um *r#ico relacionando o volume de 5a%0
adicionado )ei4o de 4+ ao p0 medido )ei4o de :+. 8 curva de titula!o obtida pelo seu
*rupo ser comparada ;quelas obtidas pelos demais *rupos. <esta #orma, certi#ique9se de
que todas elas #oram #eitas com a mesma escala.
/ 'oss0)el 'er#e%er !"erena entre as tr1s #ur)as !e ttulao2 3uas so elas2
Ta%ela *4 8note os valores encontrados nesta tabela!!!
A!o 5olu6e 6L !e
NaO7 89$,: M;
'7
8soluo A;
'7
8soluo <;
'7
8soluo C;
2 9
. 2,=
6 2,=
> 2,=
= 2,6
1 2,6
? 2,6
@ 2,6
A 2,6
B 2,6
.2 2,6
.. 2,6
.6 2,6
.> 2,6
.= 2,6
.1 2,6
.? 2,6
.@ 2,6
.A 2,6
.B 2,6
62 2,6
6. 2,6
66 2,6
6> 2,6
6= 2,6
61 2,6
6? 2,6
6@ 2,6
6A 2,6
6B 2,6
>2 2,6
>. 2,6
>6 2,6
>> 2,6
>= 2,6
>1 2,6
>? 2,6
>@ 2,6
>A 2,6
>B 2,=
=2 2,=
3uest=es 'ara a 're'arao !o relat>ro4
*+ Caa o *r#ico da curva de titula!o das trs solues de aminocidos )individual+, os pDs
e4perimentais, as #ai4as de tamponamento e4perimentais, o ponto isoeltrico e4perimental,
e as car*as totais em cada #ai4a de tamponamento.
,+ Etiliando seu con3ecimento da teoria de titulaes de aminocidos, identi#ique cada um
dos aminocidos a partir das curvas obtidas. E4plique.
-+ 7esquise as curvas de titula!o tericas dos aminocidos utiliados na prtica, e compare9
as com os *r#icos obtidos e4perimentalmente.
%bs.' Essas questes dever!o ser contempladas no relatrio da aula prtica, o qual valer .,2
pontos da 87..
8 se*uir, estamos #ornecendo valores obtidos em uma curva 3ipottica da titula!o da alanina,
para que voc possa treinar a constru!o do *r#ico.
A!o 5olu6e 86L; !e NaO7 '7
. 2,6 .,1222
6 2,1 .,1=22
> 2,1 .,1@22
= 2,1 .,?622
1 2,1 .,??22
? 2,1 .,@222
@ 2,1 .,@122
A 2,1 .,A222
B 2,1 .,A?22
.2 2,1 .,B.22
.. 2,1 6,2222
.6 2,1 6,2B22
.> 2,6 6,.>22
.= 2,6 6,.A22
.1 2,6 6,6622
.? 2,6 6,6@22
.@ 2,6 6,>>22
.A 2,6 6,=>22
.B 2,6 6,1222
62 2,6 6,?.22
6. 2,6 6,@=22
66 2,6 6,B>22
6> 2,6 >,6>22
6= 2,6 =,=@22
61 2,6 B,2222
6? 2,6 B,@>22
6@ 2,6 .2,6A22
6A 2,6 .2,@.22
6B 2,6 .2,B@22
>2 2,6 ..,.=22
>. 2,6 ..,6?22
>6 2,6 ..,>122
>> 2,6 ..,=>22
>= 2,6 ..,1222
>1 2,6 ..,1122
>? 2,6 ..,?222
>@ 2,6 ..,?122
>A 2,6 ..,?A22
>B 2,6 ..,@622