Mara Leticia Cruz Blas 1 Laboratorio de Micologa

PRCTICA No. 1
EXAMEN EN FRESCO:
CARACTERIZACIN DE DIFERENTES ESTRUCTURAS DE HONGOS

Objetivo general:

Que el alumno realice mediante soluciones aclarantes la identificacin de
las estructuras que se presentan en los diferentes tipos de hongos, para
as describir sus caractersticas morfolgicas.

Fundamento.

Examen directo en microscopio

Es el mtodo ms sencillo para saber que un hongo es el causante de la
infeccin a estudiar. Este se realiza colocando el material, como escamas, uas
y pelos en un portaobjetos al cual se agrega una gota de KOH (hidrxido de
potasio) al 10 20%; esta sustancia sirve para disolver el material de fondo y
as poder observar mejor los elementos fngicos, en algunos laboratorios se
aade DMSO (dimetilsulfxido) en una proporcin de 60/4 lo cual facilita la
absorcin del KOH.

Sobre la muestra se coloca un cubreobjetos y se observa con el microscopio de
luz a un aumento de 10x 20x para localizar las estructuras del hongo y luego
estudiamos el campo sospechoso a un aumento de 40x. La luz se debe disminuir
y el condensador se pone en una posicin baja para poder apreciar mejor los
elementos fngicos los cuales no tienen color; utilizando el negro de clorazol
podemos evitar este problema ya que nos da mejor contraste.

Generalidades. Los hongos ests
formados por clulas eucariotas. El
DNA est organizado en cromosomas
que se hallan envueltos por la
membrana nuclear. El citoplasma, con
orgnulos membranosos y abundantes
ribosomas, est limitado por una
membrana citoplasmticas rica en
ergosterol. Recubriendo la membrana
se encuentra una pared celular rgida
de estructura polisacrida compleja,
compuesta mayoritariamente por
quitina, mananos y glucanos, que
protege de la lisis osmtica y regula el
paso de molculas.

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Los hongos pueden ser unicelulares o pluricelulares. Los primeros estn
formados por clulas aisladas redondas u ovaladas, denominadas levaduras.
Los pluricelulares estn constituidos por clulas alargadas que crecen por
extensin de sus extremos,
tabicndose de un modo
ms o menos completo,
formando largos filamentos
denominados hifas que con
frecuencia se ramifican.
Estos hongos, denominados
mohos, al crecer forman
matas de filamentos
entrelazados.

La hifa es un tubo de
longitud variable formado
por una pared celular rgida,
en el que fluye protoplasma. El dimetro vara de 1 a 30 m termina en una
punta, misma que constituye la zona de extensin y representa la regin de
crecimiento.

Otros hongos filamentosos son macroscpicos, forman estructuras con un
elevado nivel de complejidad y organizacin de sus hifas y presentan una
morfologa caracterstica; constituyen las denominadas setas.

Algunos hongos microscpicos pueden causar diversas enfermedades
denominadas micosis; sin embargo, son escasas las especies adaptadas
estrictamente al hombre y la mayora de las que producen enfermedad tienen
su reservorio natural en el medio ambiente.

En general las clulas fngicas se observan bien por microscopa
convencional, aunque pueden requerir tinciones especiales para facilitar su
visualizacin. Crecen fcilmente en los medios de cultivo convencionales dando
lugar a colonias visibles macroscpicamente, con morfologa bien diferenciada
segn estn formadas por levaduras u hongos filamentosos.


Caractersticas generales de los Hongos
Todos son hetertrofos (quimioorganotrficos) por lo que tienen que
alimentarse de materia orgnica preformada que utilizan como fuente de
energa y de carbono.

Son eucariotas, es decir, presentan un ncleo diferenciado con
membrana bien organizada.

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Tiene una pared celular formada por quitina; esta pared es rgida, por lo
que no pueden fagocitar alimentos sino que absorben nutrientes simples
y solubles que obtienen al desintegrar polmeros mediante enzimas
extracelulares llamadas despolimerasas.

La estructura fngica consta de un complejo llamado talo o micelio, que
a su vez est constituido por mltiples filamentos o hifas (hyphomycetes
o mohos) o, menos a menudo, por estructuras unicelulares o levaduras
(blastomycetes); estas ltimas se reproducen por gemacin
(Saccharomyces cerevisiae) y muy rara vez por fisin binaria
(Schizosaccharomyces pombe), tambin son una excepcin los
Chytriomycetes, formados por clulas redondas grandes con rizoides, y
los mohos mucilaginosos, que carecen de pared celular y pueden
alimentarse por fagocitosis.


Estructuras de los Hongos

Somticas

Las hifas pueden presentar septos
y entonces el micelio est tabicado.
Septos primarios son los formados
cuando hay divisin nuclear y
adventicios los otros. Si los tabiques
estn ausentes se habla de micelio
continuo. Los mohos son
micromicetos filamentosos. Cuando
el hongo es una clula aislada se dice
unicelular o levadura. Los cortos
filamentos compuestos por las
clulas que brotan de una levadura
constituyen el pseudomicelio.

Plectnquima es un conjunto de
hifas entrelazadas que se asemejan a un
tejido. Se dice prosnquima si las hifas pueden ser reconocidas y
pseudoparnquima cuando han perdido su individualidad. Esclerocio es
un plectnquima generalmente macroscpico que puede permanecer en vida
latente.
Estructuras somticas
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Rizomorfa es un cordn grueso donde el conjunto de las hifas fusionadas ha
tomado el aspecto de raz. Rizoides son las hifas de succin, como raicillas, que
penetran en el substrato. Haustorio es la hifa de succin del hongo parsito
dentro de la clula del hospedador. Apresorios son unas hifas achatadas que
se adhieren al substrato o al hospedador como sostn, especialmente en el
comienzo de la infeccin.
Reproductoras

Anamorfo es el hongo con
multiplicacin asexuada y
teleomorfo es el mismo con
reproduccin sexuada. Se les
asigna distinto gnero y
especie. Holomorfo indica el
ciclo de vida total. Esporas
son los
elementos de
perpetuacin de la especie.
De acuerdo a la morfologa
reciben distinto nombre:
alantospora con forma de
banana, aleuriospora con base plana,
dictiospora con septos longitudinales y
transversales, didimospora con un tabique, equinulada como un erizo,
escolescospora como un gusano, estaurospora como una estrella, feospora de
color obscuro, fragmospora con tabiques transversales, fusiforme como un huso,
helicospora como una espiral, hialospora de color claro y translcido,
planospora mvil, verrucosa con verrugas, zoospora con flagelos.
Las balistosporas son proyectadas violentamente una vez maduras. Las
hipnosporas son aquellas capaces de permanecer con vida latente por largo
tiempo.
Las esporas pueden ser de origen asexuado (mitosporas) o sexuado
(meiosporas), y por su ubicacin relativa internas o externas. Las mitosporas se
originan en las estructuras anamrficas y las meiosporas en las teleomrficas.

Anamrficas
Artrosporas o artroconidios son esporas desarrolladas en una hifa terminal
que al madurar se separan. En algunos hongos se forman artrosporas
Tipos de esporas
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separadas por una zona libre de citoplasma (disyuntor ) cuya pared se rompe
liberando las entosporas o clamido-artrosporas.
Clamidospora o clamidoconidio es una hipnospora o clula de resistencia,
terminal o interh ifal, con pared gruesa y substancias de reserva. Blastosporas
o blastoconidios son las esporas que se originan de una parte de una clula
somtica, una hifa, un conidiforo u otra espora, y se desarrollan antes de la
formacin del septo que lo separa de la clula de origen.
Conidios o conidiosporas son
las esporas asexuadas externas.
Si estn implantadas
directamente sobre la hifa se
llaman ssiles. La parte del
micelio que origina y sostiene a
las esporas se denomina
esporforo y si se trata de
conidios se dice conidiforo.
Filide es la clula conidigena
que desde un extremo origina por
brotacin y sin aumentar su
longitud, los fialoconidios o
fialosporas. La pared de la filide
suele extenderse en el pice
formando un collarn.
Anlide es una clula
conidigena con el pice ancho y cicatrices en anillo, que se alarga con la
formacin de cada espora. Los conidiforos pueden ser simples o ramificados y
a veces estn agrupados en un conidioma. En Penicillium cada nivel de
ramificaciones recibe
distinto nombre, se
llama mtulas a las
que sostienen a las
filides productoras de
esporas. En Aspergillus
las filides o las
mtulas estn
implantadas sobre una
vescula o dilatacin del
esporforo.
Los conidios nacen de
los conidiforos
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aisladamente o quedan reunidos, ya sea en una cabezuela mucosa o en
cadenas. stas se forman por sucesin baspeta cuando todas las esporas
surgen de la clula conidigena o basfuga si es por brotacin de la espora
anterior. A veces despus que se forma un conidio, el conidiforo se alarga
lateralmente y origina el segundo conidio. El proceso contina y las esporas
quedan en zig-zag (proliferacin simpodial). En algunos hongos surgen,
simultneamente o no, varios conidios en diferentes puntos de la misma
clula conidigena (brotacin mltiple).
Teleomrficas
Gametas son las clulas
diferenciadas que se fusionan
y gametangios las estructura s
que las producen. Homotlicos
son los hongos que forman los
gametangios de distinta
polaridad en el mismo micelio.
Cuando cada micelio da slo
gametangios de la misma polaridad, es necesario enfrentar dos micelios
distintos del mismo hongo heterotlico para originar las esporas
sexuadas. En muchos macromicetos se produce la somatogamia o fusin de
clulas no diferenciadas que originan un micelio dicaritico, a veces con una
conexin hifal a manera de puente (fbula) entre cada clula.
Las oosporas son hipnosporas sexuadas originadas por heterogamia. La
estructura femenina u oogonio produce unos elementos grandes inmviles u
oosferas que en algunos hongos se fusionan con los anterozoides (zoosporas)
producidos en la estructura masculina o anteridio, y en otros se ponen en
contacto con el anteridio por medio de los tubos de fertilizacin.
Las zigosporas son hipnosporas sexuados formados por isogamia. La hifa
emite un mameln en el que se diferencian dos partes: suspensor y gametangio.
Los gametangios se fusionan originando la zigospora que suele estar rodeada
por hifas protectoras nacidas de los suspensores.
Ascosporas son las esporas sexuadas internas que se originan en un nmero
limitado (generalmente 4 u 8) dentro de una clula llamada asco. En las
levaduras se fusionan los citoplasmas de dos clulas de polaridad distinta e
inmediatamente o mucho despus de la cariogamia ocurre la meiosis
formndose las ascosporas dentro del asco libre.
En los hongos filamentosos se producen gametangios (anteridio y ascogonio),
en general morfolgicamente distinto, y los ncleos pasan a travs del poro
formado en el punto de contacto o de un tubo receptivo llamado tricogino. En
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algunas especies heterotlicas los espermacios, microconidios incapaces de
germinar, cumplen la funcin de gametas masculinas. Despus de la
fecundacin nacen hifas ascgenas binucleadas cuyas clulas terminales, en
forma de cayado, se convierten en ascos.


Basidiosporas son las esporas sexuadas
externas que se originan en el basidio.
Este es una clula hifal binucleada que
sufre cambios morfolgicos y se llama
probasidio al estado o parte de la misma
donde se produce la cariogamia. Se
denomina metabasidio a la parte o estado
en el cual ocurre la meiosis y forma 4 (a
veces 2) tubos pequeos o esterigmas en
cada uno de los cuales se forma una
basidiospora.

Hay dos tipos de metabasidios. El holobasidio es cilndrico o con aspecto de
clava y en algunos hongos tiene forma de tenedor. Los fragmobasidios estn
divididos generalmente en 4 clulas por septos transversales o longitudinales.
En muchos hongos las hifas se agregan para formar un basidioma macroscpico
y en aqullos con el himenio expuesto, las basidiosporas estn sobre unas
laminillas radiales o
tubos o espinas
ubicados generalmente
en el envs.
Algunos basidiomas
son como una
sombrilla extendida
(pleo) sostenida por
un pie que a veces
tiene un anillo o resto
de una membrana que
una al pleo con el pie.
Otras veces hay en la
base una volva o resto de un velo que envolva a todo el basidioma joven.
Hay hongos cuyos basidiomas se asemejan a un abanico, en otros son
cilndricos, esfricos o coralinos.
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Metabolismo de los Hongos

Los hongos tienen escasas necesidades nutricionales por lo que pueden
crecer fcilmente. El lugar ms frecuente es el suelo, a temperaturas entre 10 y
50 C dependiendo de la especie, aunque algunos pueden crecer
indistintamente a bajas o altas temperaturas. Por otra parte, su pH vara entre
4,5 y 8 y se ven favorecidos por cierto grado de humedad.

Mecanismo de reproduccin

Se pueden reproducir por tres mecanismos:

1. Reproduccin sexuada.
2. Reproduccin asexuada.
3. Reproduccin parasexuada.



Reproduccin
Para conservar su capacidad de
adaptacin, los hongos deben
reproducirse fcilmente. Las hifas
se desarrollan a partir de una
espora por emisin de un tubo
germinativo; la forma ms simple
ocurre por crecimiento apical de las
hifas; no hay crecimiento intercalar,
pero las clulas no terminales
pueden emitir ramificaciones. La
reproduccin se realiza por medio
de esporas y puede ser sexuada
(teleomorfa) o asexuada (anamorfa).
Los hongos que presentan ambas
formas se llaman holomorfos.
Reproduccin sexuada
La reproduccin sexuada o perfecta se produce por la unin de dos ncleos,
mientras que la asexuada o imperfecta (hongos mitospricos), se da a partir de
Esquema del crecimiento apical
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un micelio areo o reproductor, sin fusin de los ncleos. Las esporas o
elementos celulares que sirven para la dispersin se denominan propgulos.
Consta de una serie de fenmenos como: produccin de rganos sexuados y
gametos; fusin de protoplasma de stos (plasmogamia) y fusin nuclear
(cariogamia); meiosis en hongos haploides; aparicin de factores genticos, as
como desarrollo de cuerpos fructferos y esporas sexuadas.
En ocasiones, la plasmogamia se acompaa de formacin de hifas protectoras
alrededor del huevo y evoluciona de manera diferente segn se trate de hongos
inferiores o superiores. En los superiores (ascomicetos o basidiomicetos), la
fusin nuclear da lugar a clulas binucleadas o dicariones, y en los inferiores
(zigomicetos) se observan heterocariones, es decir, ncleos distintos desde el
punto de vista gentico.

Algunos hongos no septados producen
esporas sexuales llamadas oosporas, que
son el resultado de la fusin de un
anteridio pequeo y de un oogonio mucho
ms grande. Las oosporas se forman
dentro del oogonio y pueden formarse una
o ms esporas en cada uno, dependiendo
del nmero de clulas que contena ste.






.
Otros hongos no septados producen zigosporas al unirse las porciones
apicales de nos hifas, frecuentemente indistinguibles y que pueden proceder del
mismo o de diferentes micelios. En este tipo de esporas, la meiosis ocurre
durante la germinacin de la espora y la hifa que emerge produce un
esporangio. Las esporas haploides que salen del esporangio dan origen al
micelio.









Oospora
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Existen hongos septados que producen esporas llamadas ascosporas por la
unin de dos ncleos compatibles del mismo micelio o de micelios diferentes. La
caracterstica de estas esporas es que se forman dentro de un saco llamado
asca. En muchos de los hongos se producen ascosporas. Varias ascas se
encuentran dentro de una estructura llamada ascocarpo, las cuales varan
mucho en tamao y en forma, entre los diferentes gneros.



Ciertos hongos septados desarrollan, despus de
la unin de dos ncleos compatibles, una
estructura en forma de mazo llamada basidia, en
cuyo extremo se forman, usualmente cuatro
esporas sexuales llamadas basidiosporas. En
muchas especies, las basidias se encuentran en
una estructura altamente organizada llamada
basidiocarpo. Los hongos de sombrillita o setas
son los basidiocarpos ms conocidos.





.










Reproduccin asexuada

En este tipo de reproduccin no existe fusin de ncleos, sino que hay un
crecimiento del micelio. Los hongos que poseen este tipo de reproduccin se
denominan hongos imperfectos.
Existen varios tipos de reproduccin asexuada:

Esquema de formacin de zigosporas
Ascosporas y ascos. Xylaria
(40x)
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a) Fragmentacin: las hifas fragmentadas dan lugar a una nueva
colonia.

b) Gemacin: ocurra por la formacin en la clula madre de una yema a
partir de la cual se origina la clula hija.

c) Esporulacin: se forman esporas que germinan posteriormente:

- Si se desarrollan directamente de la clula vegetativa se
denominan talosporas.
Existen tres tipos de talosporas:
Artrosporas: aparecen por segmentacin de las hifas.
Blastosporas: se forman por gemacin, sin separacin entre
ellas, originando las pseudohifas o pseudomicelios.
Clamidosporas: son esporas grandes rodeadas de una pared
gruesa. Son tambin formas de resistencia.

- Otras esporas se originan de estructuras especializadas, como es el
caso de:

Esporangiosporas: se forman dentro de estructuras saculares
que se encuentran en los extremos de las hifas no tabicadas.
Conidias: se originan a partir de hifas y por un mecanismo de
gemacin, separndose posteriormente ellas.
Aleurispora: similares a las anteriores pero se separan por
ruptura del septo.

Reproduccin parasexual

Es una forma de reproduccin muy rara, que consiste en la unin de una o
varias hifas pero sin existir una fusin nuclear, dando unas estructuras con
ncleos haploides.

Identificacin de los hongos.
La identificacin de los hongos se basa en tres caractersticas:
1. En el aspecto macroscpico de las colonias y su observacin microscpica,
que permite confirmar si se trata de hongos levaduriformes o
filamentosos.
2. Las caractersticas bioqumicas, tiles para la identificacin de
lavaduras.
3. La morfologa microscpica, que permite identificar los hongos
filamentosos

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Material.

Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Asa de platino o micromel.
Porta asa.
Equipo.

Mechero bunsen.
Microscopio.

Reactivos.

KOH (del 10 al 30%).
NaOH (del 10 al 30%).



Funcin: Con la utilizacin de la solucin aclarante las protenas, grasas y
muchos polisacridos del sustrato son solubilizados (hidrolizados) y los tejidos
aparecen ptimamente claros. Las paredes celulares de la mayor parte de los
hongos permanecen intactas a causa de la resistencia a los lcalis de los
glucanos.
Muestra biolgica.
Cualquier alimento u objeto que tenga hongos.
Tortilla, tomate, pan, meln, limn, papaya.

Tcnica.

1) Flamear y enfriar el asa.
2) Poner una gota de solucin aclarante sobre un portaobjetos.
3) Tomar una asada de la muestra biolgica y depositarla sobre la gota de
solucin aclarante.
4) Cubrir la preparacin con un cubreobjetos.
5) Flamear el asa.
6) Observar al microscopio la preparacin en seco dbil y seco fuerte.
7) Anotar las observaciones macroscpicas y microscpicas.
8) De la misma forma montar las preparaciones necesarias y obtener as
muchas observaciones de las distintas muestras.

Observaciones generales y resultados








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Muestra analizada: limn.
Color de la colonia: blanca.
Aspecto: lechosa.
Consistencia: blanda.
Estructura observada: conidio, levaduras y
talos.
Visto a: 40x.




Conclusiones

Aprendimos a llevar a cabo el examen en fresco a muestras de varias
frutas que estaban ya infectadas por hongos.

Con esta prctica se lograron observar cmo eran las muestra infectadas
por hongos tanto de forma macroscpica y tambin microscpicamente
debido a las soluciones aclarantes utilizadas para dicha observacin, y
as pudimos describirlas claramente.

La identificacin de estructuras fue muy variada por el nmero de
muestras analizadas en esta prctica, algunas no se lograron observar
bien, debido a que ciertas muestras no tenan suficiente moho.

Bibliografa

Muestra analizada: pan.
Color de la colonia: gris.
Aspecto: lechosa.
Consistencia: blanda.
Estructura observada: levaduras.
Visto a: 40x.

Muestra analizada: meln.
Color de la colonia: blanca.
Aspecto: lechosa.
Consistencia: blanda.
Estructura observada: pequeos
talos y levaduras.
Visto a: 40x.

Mara Leticia Cruz Blas 14 Laboratorio de Micologa

Garca, Vera. Introduccin a la Microbiologa. Espaa (2005). Editorial
EUNED. Pp. 93-95.

Hidalgo Togores, Jos. Tratado de Etnologa. Mxico (2002). Editorial Mundi-
Prensa, S. A. Pp. 489.


Silva Garca, Ma. Del Carmen; Garca Bermejo, Ma. Jos; Caballero Oliver,
Antonio y Fernndez de la Fuente, Nicols. Tcnico especialista en
laboratorio de atencin primaria. Espaa (2006). Editorial MAD. Pp. 248-
250.

http://www.unsa.edu.ar/matbib/micragri/micagricap4.pdf

http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/dl/free/6071505101/895610/Arenas_MicologiaMedica_4a_
capitulo_muestra.pdf