Universidad Autónoma de Chiapas

Facultad de Ciencias Químicas

Campus IV

LABORATORIO DE GENETICA APLICADA

PRACTICA NO. 6

“CORRIMIENTO ELECTROFORÉTICO DE DNA”

TAPACHULA CHIAPAS A 15 DE OCTUBRE DEL 2009

 INTRODUCCION
La electroforesis constituye parte importante del procedimiento rutinario del análisis de
los ácidos nucleicos y proteínas. La electroforesis nos ayuda a observar los ácidos
nucleicos y proteínas al final del procedimiento.
El principio básico de la electroforesis consiste en la migración de las moléculas a
través de un gel, La agarosa que es un polisacárido, cuyas disoluciones (típicamente
de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 grados C
y formar un gel, semisólido al enfriarse. Este gel esta constituido por una matriz o
trama tridimensional de fibras poliméricas embebida en gran cantidad de medio
líquido, que retarda el paso de las moléculas, se usa usualmente para separar
moléculas grandes de alrededor 20.000 nucleótidos, en el cual, por acción de un
campo eléctrico, serán separadas de acuerdo a su tamaño o peso molecular. Para
controlar el avance de la separación de las moléculas en la matriz y establecer un
patrón de fragmentos, las moléculas deberán ser teñidas con diferentes colorantes.
Estos pasos facilitan la visualización de las moléculas a manera de simples bandas las
cuales serán posteriormente analizadas e interpretadas.
En biología molecular, la mayoría de los estudios básicos y aplicados requieren el uso
de la electroforesis; sin embargo, este procedimiento presenta variaciones de acuerdo
al tipo de estudio que se piensa ejecutar. En la electroforesis de tipo vertical, se
analizan tanto moléculas de ADN como proteínas, mientras que en la electroforesis
horizontal generalmente se trabaja con ADN o ARN.

DNA procarionte

Se llama procariota a las células sin núcleo celular diferenciado, es decir, cuyo ADN se
encuentra disperso en el citoplasma. Las células que sí tienen un núcleo, es decir con
el ADN encerrado tras una cubierta membranosa se llaman eucariotas y constituyen
las formas de vida más conocidas y complejas, las que forman el imperio o dominio
Eukarya.

En la imagen se ve el esquema de una célula procariota. En el centro, Nucleoide

(ADN). Nucleoide (que significa Similar al núcleo y también se conoce como Región
nuclear o Cuerpo nuclear) es la región que contiene el ADN en el citoplasma de las
células procariotas. Esta región es de forma irregular.
En las células procariotas, el ADN es una única molécula larga, generalmente circular
y de doble filamento, compactado y plegado, que se encuentra ubicada en un sector
de la célula que se conoce con el nombre de Nucleoide, que no implica la presencia de
membrana nuclear. Es desnudo o no Histónico no esta combinado con Histonas
(proteínas nucleares) pues no hay Carioteca en células procariotas. Posee una
replicación específica llamada Bidireccional o replicación Tetha. Dentro del Nucleoide
pueden existir varias copias de la molécula de ADN.

Este sistema para guardar la información genética contrasta con el sistema existente
en células eucariotas, donde el ADN se guarda dentro de un orgánulo con membrana
propia llamado núcleo. La evidencia experimental sugiere que el Nucleoide está
compuesto fundamentalmente por ADN (60%), con pequeñas proporciones de ARN y
proteínas. Estos dos últimos componentes actúan como ARN mensajero y como
proteínas reguladoras del genoma.

El cromosoma procariótico está ligado a la membrana plasmática, no contiene

histonas, y no se encuentra rodeado por una membrana nuclear. El cromosoma
bacteriano, que contiene todas las informaciones necesarias para el funcionamiento y
estructuración celular.

Las bacterias pueden contener además del cromosoma, moléculas de DNA doble
pequeñas y circulares, denominadas plásmidos. Esas moléculas son elementos
genéticos extracromosómicos, no esenciales para la supervivencia bacteriana, y
poseen mecanismos de replicación independientes del DNA cromosómico. La ventaja
de poseer un plásmido es que puede contener genes de resistencia a los antibióticos,
tolerancia a los metales tóxicos, síntesis de enzimas, etc.
 RESULTADOS
• Se utilizo un marcador de peso molecular de 500 pb

• Se utilizo muestras de DNA de sangre periférica

• Se preparo agarosa al 0.8% con TE 1x

• Se utilizo un buffer de carga ya preparado por el catedrático

• Ya que corrieron las muestras se llevaron a luz UV y este fue el

resultado

C A R R I L E S

500pb
Marcador
De
Peso
Molecular

Carril 8: en este carril fue donde depositamos nuestra muestra y si hubo

corrimiento del DNA

DISCUSION
 • El marcador de peso molecular estuvo constituido por 1 µL del
marcador y 1 µL del buffer de carga, su rango era de 500 Pb

• Las muestras de DNA de sangre periférica estaban constituidas por 2

µL muestra y 1 µL de buffer de carga

• El buffer de carga estaba constituido por: naranja g, azul de

bromofenol, xilencianol y glicerol. este buffer nos indica donde va
nuestra muestra mientras corre en la cámara electroforética.

• El volumen que se preparo para el gel de agarosa fue de 50 ml

suficiente para toda la práctica y todas las muestras de los equipos.
La concentración de la agarosa fue de 0.8% así es que el peso fue de
0.4 gramos, que se peso en la balanza grantataria.

Cálculos:

Preparar 50 ml de agarosa al 0.8% (0.8g/100 ml) Hay que determinar

cuanta agarosa se necesita para preparar 50 ml
(50 ml)(0.8 g/100 ml) = (X g)
Se despeja la ecuación para la X
El resultado es 0.4 g

• Ya que se mezcló la agarosa con el TE 1x en un matraz erlenmeyer

este se llevo al microondas para su calentamiento, el tiempo fue de 1
minuto para su correcta polimerización.

• Se preparo los moldes con sus respectivos pocitos para el

decantamiento del gel de agarosa sobre ellos y se espero su
solidificación para después llevarlo a la cámara electroforética
• Se introdujeron los geles en la cámara electroforética y se
sumergieron a un volumen aproximado de 5 mm sobre ellos con TE
1x

• En cada pocito se agrego 3 µL de la muestra con mucho cuidado para

que no se regara o se saliera fuera de ella.

Esta plástico de color

negro se utiliza como
Recurso para poder ver
en que pocito se
. Colocaran las muestras
y los M. de PM.

• Ya que se terminaron de agregar todas las muestras en sus

respectivos pocitos, se procedió a cerrar la cámara electroforética
cuidando de que los electrodos fueran bien colocadas, ya que
recordemos que el DNA tiene carga eléctrica negativa y correrá hacia
el ánodo.

CATODO
ANODO

• Ya que se cerró correctamente la cámara se procede a prender el

equipo, seleccionar el voltaje deseado que en nuestro caso fue de 80
voltios y después se aumento a 120 voltios. Esto es muy importante
 pues recordemos que esta técnica es mediante una carga eléctrica
controlada

• Después de que corrió la muestra hasta donde queremos (se ve

gracias al buffer de carga), apagamos el equipo y procedemos a
destapar la cámara electroforética. Sacamos los geles y los
colocamos en el revelador, en este caso bromuro de etidio y dejamos
los geles aproximadamente 5 minutos. Precaución: El bromuro de
etidio es
Un carcinógeno y debe manejarse con cuidado. Hay que evitar
que se derrame la
disolución o tener contacto directo con esta

• Po último examinamos el gel bajo la lámpara de luz ultravioleta para

determinar la posición de las bandas en el gel.

CONCLUSION
• Aprendimos a preparar el gel de agarosa y a saber que si el PM del
DNA a analizar es bajo la concentración de la agarosa será mayor y si
el PM del DNA a analizar es alto la concentración de agarosa es
menor y que esta va de 05 a 2%.

• Aprendimos a preparar la cámara electroforética y como colocar los

electrodos pues ya que la molécula de DNA tiene carga negativa

• Pudimos aplicar de nuevo la practica de las micropipetas