Javiera Muoz S.

Siguiendo una Protena Fuera de la

Clula
La llegada de la microscopa electrnica permiti a los investigadores ver la
clula y sus estructuras en un nivel de detalle sin precedente. George Palade
utiliz esta herramienta no solo para ver los finos detalles de la clula, sino
que tambin para analizar el proceso de secrecin. Combinando la
microscopa electrnica con experimentos de pulso y caza, Palade descubri
el camino que siguen las protenas para dejar la clula.
Trasfondo
Adems de sintetizar las protenas para realizar funciones celulares, muchas
clulas tambin deben producir y secretar protenas adicionales que realizan
sus deberes fuera de la clula. El mecanismo de secrecin de la protena
fascin a muchos bilogos celulares, incluyendo a Palade. En la investigacin
temprana sobre secrecin, las clulas fueron interrumpidas y varios
organelos fueron separados por centrifugacin. Estos estudios del
fraccionamiento de la clula haban demostrado que las protenas secretadas
estn presentes en vesculas ligadas a la membrana asociadas al retculo
endoplasmtico (ER), donde se sintetizan, y con la membrana plasmtica,
donde son lanzados eventualmente de la clula. Desafortunadamente, los
resultados de estos estudios eran difciles de interpretar debido a las
dificultades en la obtencin limpia de separaciones entre los diferentes
organelos de la clula. Para hacer ms claro el camino, Palade se volvi a una
tcnica desarrollada recientemente, la autoradiografa de alta resolucin,
que le permiti seguir protenas marcadas radioactivamente como se
movieron dentro de la clula. Su trabajo llev al seminal encontrando que las
protenas secretadas viajan dentro de vesculas del ER al complejo de Golgi, y
luego a la membrana plasmtica.

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El experimento
Palade quiso identificar cul de las estructuras celulares y organelos
participan en la secrecin de protena. Para estudiar un proceso tan
complejo, l eligi cuidadosamente un sistema modelo apropiado para sus
estudios, la clula exocrina pancretica, la cual es responsable de producir y
secretar grandes cantidades de enzimas digestivas.
Palade primero examin el camino de la secrecin de protena in vivo
inyectando conejillos de india con la [3H] leucina, la cual fue incorporada en
protenas nuevamente hechas, marcndolas radioactivamente. En los puntos
de tiempo de 4 minutos a 15 horas, los animales fueron sacrificados, y el
tejido pancretico fue fijado. Sometiendo a los especmenes a la
autoradiografa y vindolos en un microscopio electrnico, Palade podra
rastrear donde estaban las protenas marcadas en clulas a varios tiempos.
La sorpresa vino en los puntos de tiempo intermedios. Ms que viajar
directamente desde el ER a la membrana plasmtica, las protenas marcadas
radioactivamente apareceran detenidas en el complejo de Golgi en la mitad
de su viaje. Adems, nunca hubo un punto donde las protenas radioactivas
no fueran confinadas a vesculas.
La observacin de que el complejo de Golgi estuvo implicado en la secrecin
de protenas era asombrosa e intrigante. Para abordar a fondo el papel de
este organelo en la secrecin de protenas, Palade se volvi a experimentos
in vitro de pulso y caza, los cuales permitieron un monitoreo ms preciso de
las protenas marcadas. En esta tcnica de marcado, las clulas son expuestas
a un precursor radioactivo, en este caso la [3H] leucina, por un corto periodo
de tiempo es conocida como el pulso. El precursor radioactivo entonces se
sustituye por su forma no marcada por un periodo subsecuente de captura.
Las protenas sintetizadas durante el periodo de pulso sern marcadas y
detectadas por autoradiografa, mientras que esas sintetizadas durante el
periodo de captura, siendo no marcadas, no sern detectadas. Palade
comenz cortando el pncreas del conejillo de indias en rebanadas gruesas,
las cuales luego fueron incubadas por 3 minutos en medios que contenas
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[3H] leucina. Al final del pulso, l agreg exceso de leucina sin marcar. Las
rebanadas de tejido eran entonces fijadas por autoradiografa o usadas para
el fraccionamiento de la clula. Para asegurar que sus resultados eran una
reflexin exacta de la secrecin de protena in vivo, Palade caracteriz
meticulosamente el sistema. Una vez convencido de que su sistema in vitro
precisamente imitaba la secrecin de protena in vivo, procedi al
experimento crtico. Marc las rebanadas de tejido con la [3H] leucina por 3
minutos, luego capt la marcada por 7, 17, 37, 57 y 117 minutos con leucina
no marcada. La radioactividad, otra vez confinada en vesculas, comenz en
el ER, luego viaj en vesculas al complejo de Golgi, y permaneci en las
vesculas como pasaron por el Golgi y en la membrana plasmtica (ver Figura
17.1). Como las vesculas viajaron ms lejos a lo largo del camino, ellas se
volvieron ms densas con la protena radioactiva. Desde su notable serie de
autoradiogramas en diferentes tiempos de captura, Palade concluy que las
protenas secretadas viajan en vesculas desde el ER al Golgi y en la
membrana plasmtica, y que a travs de este proceso permanecen en
vesculas y no se mezclan con el resto de la clula.
Discusin
Los experimentos de Palade dieron a los bilogos la primera irada clara de las
protenas que viajaban a travs del camino secretor. Sus estudios en las
clulas pancreticas exocrinas rindieron dos observaciones seminales.
Primero, que las protenas secretadas pasan a travs del complejo de Golgi
en su salida de la clula. Esta fue la primera funcin asignada al complejo de
Golgi. En segundo lugar, las protenas secretadas nunca se mezcla con otras
protenas celulares; son segregadas en vesculas a travs del camino. Estos
resultados fueron afirmados en dos importantes aspectos del diseo
experimental. El uso cuidadoso de Palade en la microscopa y autoradiografa
permiti que l observara los detalles finos del camino. De igual importancia
fue la eleccin de un tipo de clula dedicada a la secrecin, la clula exocrina
pancretica, como un sistema modelo. En un tipo de clula diferente, las
cantidades significativas de protenas no secretadas pudieron tambin haber
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sido producidas durante el pulso, llevando posiblemente a resultados
ambiguos.
El trabajo de Palade fij la etapa para estudios ms detallados. Una vez el
camino secretor fue claramente descrito, los campos del anlisis fueron
abiertos a la investigacin, en la sntesis y movimiento de las protenas
secretadas y de la membrana. Por este innovador trabajo, a Palade se le
concedi el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina en 1974.