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Germinacin in vitro de semillas de dos especies de biznagas mexicanas

INTRODUCCIN
Mxico es un pas con gran diversidad biolgica; es hogar de ms de 200 000 especies
diferentes, con cerca 26 000 especies de plantas por lo que ocupa el cuarto lugar en biodiversidad
vegetal del mundo (CONABIO, 2009). Gran parte de esta biodiversidad se debe a los diferentes
sistemas climticos presentes en el territorio mexicano, siendo predominantes los climas ridos y
semi-ridos, cuya extensin ocupa ms del 60% del rea total (Hernndez, 2006).
Las cactceas forman parte de la flora caracterstica de las regiones ridas. Originarias del continente
americano, comprenden cerca de 1400 especies en el mundo, de las cuales 669 habitan en Mxico y
518 son endmicas.
Las biznagas son un tipo de cactceas pertenecientes a la subfamilia Cactoideae, de las cuales
algunas de las ms conocidas e importantes de Mxico son el Echinocactus platyacanths,
Echinocactus grusonii, Ferocactus pilosus y Ferocactus histrix (Hernndez, 2006).
Echinocactus grusonii y Ferocactus pilosus son especies endmicas de Mxico y tienen un gran valor
tanto biolgico como comercial, suelen ser utilizadas como plantas ornamentales o en la gastronoma
regional. Actualmente se ven amenazadas por diversas razones, principalmente por la destruccin de
sus hbitats y la extraccin ilegal para su comercializacin, provocando la disminucin de las
poblaciones naturales y poniendo as en riesgo la supervivencia de estas especies. Si no se toman
medidas urgentes para preservar, propagar y aprovechar sustentablemente stas y muchas otras
cactceas mexicanas, se corre el riesgo de que se extingan y con ellas se perder gran parte de la
biodiversidad de nuestro pas.
Por ello, se han desarrollado tecnologas de propagacin como el Cultivo de Tejidos Vegetales que
permite propagar una gran cantidad de plantas a partir de cualquier fragmento vegetal bajo
condiciones aspticas y controladas en corto tiempo y en espacios reducidos.
En el presente trabajo se explorarn las condiciones para la germinacin in vitro de Echinocactus
grusonii y Ferocactus pilosus con la aplicacin de tratamientos pregerminativos con la intencin de
optimizar el proceso. Contar con un sistema eficiente de germinacin de Echinocactus grusonii y
Ferocactus pilosus ser la base para establecer un sistema eficiente de propagacin que permita la
conservacin y futuro aprovechamiento sustentable de estas y otras especies de cactceas
mexicanas.

JUSTIFICACIN
Las biznagas, pertenecientes a la familia de las cactceas y parte importante de la diversidad
biolgica del pas, especialmente los Echinocactus y los Ferocactus se encuentran en peligro de
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desaparecer debido a la destruccin de sus hbitats, la infertilidad de los suelos, provocada por
diversas actividades humanas (como la ganadera y la agricultura), el saqueo ilegal de plantas y
semillas para su comercializacin como plantas de ornato en el mercado nacional y extranjero, el
cambio climtico y muchas causas ms. En consecuencia, es necesario desarrollar estrategias para
proteger y preservar estas especies tanto in situ protegiendo sus hbitats naturales como ex situ con
su cultivo en jardines botnicos o instituciones. La reproduccin de las especies mediante mtodos
de propagacin efectivos y rpidos juega un papel importante para la bsqueda de su conservacin.
En este proyecto se pretende generar conocimiento sobre la germinacin in vitro Echinocactus
grusonii y Ferocactus pilosus con la aplicacin de tratamientos pregerminativos: escarificacin con
cido e hidratacin, partiendo del papel desempeado por la testa de las semillas en el desarrollo de
estas, con intencin de optimizar las condiciones para la germiacin in vitro de stas especies y as
favorecer su propagacin, conservacin y aprovechamiento sustentable. Al probar ambos mtodos
pregerminativos en dos especies diferentes, es posible verificar la efectividad de alguno de los
mtodos utilizados y generalizar su aplicacin. Si bien es un proyecto realizado en condiciones
limitadas, se espera que sus resultados sirvan como precursor a uno de mayor magnitud.

MARCO TERICO
Las regiones ridas y semiridas de nuestro pas se definen como comunidades biolgicas cuyos
organismos, en su mayora, estn adaptados a una aridez crnica, determinada por sequas
peridicas y extremas (Hernndez, 2006).
Las Cactceas, flora tpica de estas regiones, son plantas xerfilas, leosas y suculentas, lo cual les
permite almacenar gran cantidad de agua en sus tejidos. La fotosntesis se lleva a cabo en sus tallos,
gruesos y dotados del parnquima cloroflico, cuyas formas suelen ser cilndricas, periculares,
esfricas y candelabriformes, con hojas reducidas a vestigios microscpicos o escamitas para evitar
la evotranspiracin, el percolo est transformado en una estructura llamada podario y las yemas de
crecimiento se han transformado en areolas donde se desarrollan las flores, frutos, espinas, lana,
cerdas y pelos. Sus flores son actinomorfas y hermafroditas, con numerosos estambres y un ovario
nfero (Oviedo, M., 2003 y Soto, C., 2013). Su poca de floracin es en primavera, principalmente de
abril a junio (Reyes J. 2011) y se divide en tres subfamilias: Pereskioideae, Opuntideae y Cactoidea
(Bravo-Hollis, 1978).
Las Cactoidea, son de tamao muy variable; suelen tener una flor en cada areola ya sean diurnas o
nocturnas; sus frutos son bayas ms o menos grandes; sus semillas generalmente son pequeas;
presentan una testa negra o morena y con cotiledones generalmente pequeos. Es una subfamilia
realmente numerosa en cuanto a gneros y se caracteriza porque sus especies son notablemente
endmicas en Mxico. A sta pertenece el grupo de las biznagas, donde se encuentran los gneros
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Echinocactus y Ferocactus.
El E. grusonii (Fig. 1) (clasificado por Hildmann), perteneciente al gnero Echinocactus dentro de la
familia Cactoidea, mejor conocido como Asiento de suegra, Barril de oro, Bola de oro o Biznaga
dorada (Jimnez, C., 2011), es una planta endmica de Mxico que slo habita de manera natural en
las paredes del Can del Infiernillo, divisin territorial entre los estados de Quertaro e Hidalgo
(actualmente cubierto por las presas de Zimapn). Posee una excepcional belleza y aunque existen
ejemplares en los jardines botnicos de diversas partes del mundo, sus poblaciones naturales casi
han desaparecido por completo (Jimnez, C., 2011), pues es muy apreciada como planta ornamental,
y tiende a ser extrada con fines comerciales. Es una especie con tallos grandes y globosos de color
verde claro; espinas de color amarillo oro al igual que sus flores (que no se abren ampliamente); sus
escamas poseen abundante lana; un fruto oblongo, y semillas de testa brillante, y de color castao
(Bravo Y Snchez mejorado, 1991). Su poca de floracin es de junio a agosto, presenta un lento
desarrollo y largo ciclo de vida.
Se ubica dentro de la NOM-059-SEMARNAT-2010 como especie en
Peligro de Extincin (P), en el libro rojo de la IUCN como ENDANGERED
y en el apndice II de CITES.
El Ferocactus pilosus (Fig. 2) (clasificado por Wendermann en 1933),
perteneciente al gnero Ferocactus de la familia Cactaceae, tambin
conocida como barril de lima es otra biznaga que se considera
importante desde el punto de vista econmico y biodiverso. Su uso es
principalmente alimenticio, utilizando sus flores como un aperitivo muy
extico.
Se caracteriza por su forma cilndrica y
alargada, pudiendo medir hasta 1.3
metros (Vzquez, 2013); posee areolas en forma de valo que
pueden tener hasta cinco espinas cada una; presenta un nmero
reducido de espinas radiales delgadas y blanquecinas; las espinas
centrales, son curvadas, de color rojizo o amarillas; sus semillas
tienden a ser cafs y de testa dura; las flores pueden ser de color
rojizo o amarillo, de 2.5 cm de largo y 1.5 cm de ancho.
Debido a su hbitat natural tan reducido (algunas zonas desrticas de Zacatecas y San Luis Potos
en Mxico) se considera una especie amenazada. En la NOM-059-SEMARNAT-2010 se considera
una especie bajo Proteccin especial (Pr), en el libro rojo de la UICN como LEAST CONCERN y en
el apndice II de CITES.

Fig 1. Ejemplar de
Echinocactus
grusonii en el Jardn
Botnico del IB.
Fig. 2 Ejemlar de F. pilosus.
CARLOS VELAZCO.
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Ante el riesgo de extincin que supone el endemismo y la escasa poblacin de stas y otras
especies de cactceas, en los ltimos aos se han puesto en marcha estrategias para la
propagacin, conservacin y aprovechamiento sustentable de las mismas.
El Cultivo de Tejidos Vegetales (CTV) ha demostrado ser una alternativa para la propagacin y
conservacin de una gran variedad de especies, incluidas las cactceas. Es una herramienta
biotecnolgica que hace posible propagar una gran cantidad de plantas a partir de pequeas
fracciones de tejidos (explantes) que pueden provenir de hojas, races, tallos, ptalos, polen, entre
otros, con medios nutritivos bajo condiciones aspticas y controladas de luz, temperatura, pH y ms,
para obtener as plantas clonadas en poco tiempo, libres de patgenos y en espacios reducidos
(Gonzlez, 2012).
La germinacin in vitro juega un papel importante en la propagacin por cultivo de tejidos, pues es de
donde se obtendrn los individuos que sern fuente de explantes para estudios posteriores. Consiste
en hacer germinar las semillas de las especies a tratar en un medio nutritivo, siendo el ms utilizado
el medio Murashige y Skoog, (Smith, R., 2011).
Para favorecer este proceso de germinacin, se aplican tratamientos pregerminativos, dado que en
las semillas de algunas especies, existen bloqueos naturales de la germinacin producto del
contacto con su hbitat natural y la interaccin con otros organismos, como la presencia de una testa
dura que impide la entrada de agua; es necesario eliminar estos bloqueos para que la semilla pueda
germinar.
Los tratamientos pregerminativos ms utilizados son:
Hidratacin: Tratamiento de tipo fsico que consiste en sumergir las semillas en agua estril
por 24 horas con el fin de ablandecer la testa de stas. Segn un estudio del tratamiento de
hidratacin y deshidratacin en semillas (Snchez J. A et al. 2001) stas muestran un patrn
de tres fases: desde que comienza a captar humedad hasta que el agua entra en contacto con
el embrin.
Escarificacin con cido: La escarificacin con cido es un mtodo pregerminativo de tipo
qumico. Consiste en sumergir las semillas en cido clorhdrico (HCl) o en cido sulfrico
(H
2
SO
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) con una concentracin alta (HCl 98%). El tiempo que las semillas deben estar
sumergidas puede variar dependiendo de la especie, en el caso de las cactceas pueden ser
hasta10 minutos. (Orozco A. F. et al. 2010).
El CTV se ha practicado en otros pases con xito obteniendo grandes beneficios ecolgicos y
sociales; ya que puede aplicarse para varios fines como son la propagacin de plantas alimenticias,
medicinales, ornamentales, forestales as como una medida de conservacin para plantas en peligro
de extincin.

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OBJETIVO
Lograr la germinacin in vitro de dos especies de biznagas mexicanas: Echinocactus grusonii
y Ferocactus pilosus.
Comparar la efectividad de los tratamientos pregerminativos de escarificacin e hidratacin
aplicados a las semillas de ambas especies con intencin de optimizar la germinacin de sus
semillas.

MATERIALES Y METODOS
A partir de frutos maduros de ambas especies se obtuvieron: 172 semillas de Ferocactus pilosus y
160 semillas de Echinocactus grusonii.
Las semillas de ambas especies se dividieron en tres lotes, uno de ellos se tom como grupo control
y a los otros dos se les aplicaron tratamientos pregerminativos diferentes.
Control: E. grusonii: 60 semillas y F. pilosus: 56 semillas
Escarificacin: cido clorhdrico concentrado (HCI) durante un minuto. E. grusonii: 48
semillas y F. pilosus: 56 semillas.
Hidratacin: H
2
O durante 24h. E. grusonii: 52 semillas y F. pilosus: 60 semillas.
Posteriormente las semillas de los tres grupos fueron sometidas al siguiente tratamiento de
desinfeccin: solucin jabonosa por 10 minutos, etanol al 70% por 1minuto, solucin de hipoclorito de
sodio penta-hidratado (NaClO*5H
2
O) al 20% por 30 minutos; todo esto en agitacin constante. Bajo
condiciones aspticas en una campana de flujo laminar se realizaron 3 enjuagues con H
2
O destilada
estril.
Las semillas fueron sembradas en medio de cultivo MS 50% inorgnicos, 100% orgnicos, 30g/l de
sacarosa y 9g/l de Bacto-Agar. En condiciones aspticas se sembraron 4 semillas por frasco.
Los cultivos se mantuvieron cerca de una ventana para que recibieran luz de sol ya que en la ENP 6
no se cuenta con una sala de incubacin con temperatura y fotoperiodo controlados.
Una vez concluido el proceso de siembra in vitro, se hizo un registro semanal del desarrollo de los
cultivos: contaminacin, germinacin y crecimiento de las plntulas.

RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTADOS
Es importante mencionar que en el lapso de las 15 semanas, algunos medios de cultivo se
contaminaron con bacterias u hongos, provocando la prdida de semillas. A continuacin se muestra
una tabla con las fechas y el nmero de medios (semillas) perdidos de cada tratamiento y especie.
Como se puede observar, en el caso de Ferocactus pilosus, se perdi una cantidad importante de
semillas, esto pudo deberse a contaminantes propios de la semillas que provenan de campo o a la
mala manipulacin durante la siembra. Para el Echinocactus grusonii, la diferencia cuantitativa entre
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los lotes no es tan grande, debido a la poca perdida de semillas.
En la especie E. Grusonii; se contamin el 5.35% de semillas del grupo control, 36% del grupo de
escarificacin y el 7.14% del de hidratacin.
Los porcentajes obtenidos de semillas perdidas por medios contaminados fueron de: 6.66% en grupo
control, 16.66% en escarificacin y 7.69% en hidratacin.
El porcentaje de semillas germinadas por cada lote fue calculado sin tomar en cuenta las semillas
contaminadas.
Para F. pilosus (Grfica 1), las semillas del grupo control comenzaron la germinacin a partir de la
tercera semana, el nmero de semillas germinadas creci continuamente hasta llegar a la semana
nmero ocho (Figura 3), donde se present un estancamiento en la cantidad de semillas germinadas,
volviendo a incrementar su nmero en la semana 13. Para la semana 15, el grupo control present un
41.5% de semillas germinadas; sus plntulas presentan un tamao pequeo, de 4mm
aproximadamente; se puede observar la aparicin de espinas, pelos y una raz bastante desarrollada,
de ms de 5mm. (Figura 4)
Las semillas del tratamiento pregerminativo de escarificacin comenzaron su germinacin a partir de
la segunda semana, y presentaron constante aumento durante dos semanas. A partir de la cuarta no
se present un incremento en el nmero de semillas germinadas cuyo porcentaje final a la semana
15 fue del 11.1%(Figura 3). Sus plntulas alcanzaron el mayor tamao, llegando a medir cerca de
7mm., presentaron un desarrollo de pelos, espinas y una raz de 3mm aproximadamente. (Figura 4)
Las semillas del tratamiento pregerminativo de hidratacin comenzaron su germinacin, al igual que
las semillas del grupo control, a partir de la tercera semana. A diferencia de stas, presentaron un
porcentaje notablemente bajo de germinacin con el 5.66% de semillas germinadas a partir de la
cuarta semana. En la semana 15 sus plntulas alcanzaron un tamao promedio de 5mm de alto y
2mm de ancho, con una raz de 2mm.; tambin presentaron espinas, pelos y un color rosa en algunas
partes del tallo. (Figura 5)





Fig. 3. Plntula de F. pilosus, a las 8 semanas. A) Control, B) escarificacin
C) hidratacin.
A
B
C
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En el caso de las semillas de Echinocactus grusonii (Grfica 2), las semillas del grupo control
comenzaron a germinar a partir de la segunda semana (Figura 6), presentando un estancamiento en
el nmero de semillas germinadas entre las semanas tres y ocho. En la novena semana, hubo un
incremento de semillas germinadas presentando un 9.72% germinado del total. Sus plntulas
presentaron un tamao mayor a las del Ferocactus, con casi 10mm de largo y 5 de ancho. Casi no
desarrollaron estructuras ni races. (Figura 5)
Las semillas del tratamiento pregerminativo de escarificacin empezaron la germinacin entre la pri-
mera y la segunda semana, cuyo nmero se mantuvo constante entre las semanas dos y tres. Entre
las semanas 3-4 y 6-9, las semillas escarificadas, mostraron un notable aumento en el porcentaje de
germinacin alcanzando un porcentaje mximo de germinacin del 20% en la novena semana. Las
plntulas presentaron un tamao de 3.5mm de ancho por 5mm de largo aproximadamente, un color
rosado y no desarrollaron estructuras, presentaron races pequeas. (Figura 6)
Las semillas del tratamiento pregerminativo de hidratacin germinaron a partir de la sptima semana
aumentando constantemente su porcentaje de germinacin hasta la novena semana alcanzando un
4.16% de semillas germinadas. En esta semana las plntulas apenas alcanzaron un tamao de 2mm
de ancho por 2mm de largo, no desarrollaron races ni estructuras. (Figura 6)
Fig3. Ejemplar de Ferocactus pilosus del
grupo control
Fig 4. Plntulas de F. pilosus en los diferentes tratamientos. A) Control, B)
Escarificacin y C) Hdratacin
Grfica 1. Germinacin de Ferocactus pilosus C B A
A C
B
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CONCLUSIONES
En Ferocactus pilosus, el mayor porcentaje de germinacin se obtuvo en el grupo control con un
41.5% seguido del tratamiento de escarificacin con el 2.85 %, por ltimo, el tratamiento de
hidratacin con el 2.14%. En relacin al tiempo que tardaron en germinar, el tratamiento de
escarificacin fue el ms eficiente al iniciar su germinacin en la tercera semana, mientras que los
grupos control e hidratacin comenzaron su germinacin a partir de la cuarta semana.
Fig 6. Plntulas de E. grusonii a las 15 semanas de iniciados los cultivos. A) Control, B)
Escarificacin y C) Hidratacin del grupo control
Fig. 5. Plntulas de E. grusonii a las 12 semanas A) Control B) Hidratacin C)
Escarificacin
Grfica 2. Germinacin de Echinocactus grusonii.
A
B
C
C
A B
A B C
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En Echinocactus grusonii, el mayor porcentaje de germinacin se obtuvo en el tratamiento de
escarificacin con 25%, seguido del control con el 8.92% y por ltimo el tratamiento de hidratacin
con 4.16%. Las semillas en el tratamiento de escarificacin fueron las primeras en germinar en la
segunda semana, seguidas por las del control en la tercera; las de hidratacin iniciaron su
germinacin hasta la octava semana.
En ambas especies el tratamiento de escarificacin present el menor tiempo de germinacin y los
individuos de mayor tamao.
Los porcentajes de germinacin obtenidos en el presente estudio fueron bajos y esto puede deberse
a diversos factores; uno de los posibles factores que pudieron influir en este resultado es el periodo
de germinacin natural de las especies, que toma lugar durante la primavera y dado que no contamos
con una cmara de incubacin con luz y temperatura controladas es posible las condiciones de
ambientales de la temporada otoo-invierno no hayan resultado favorables para la germinacin de
estas especies.
Tambin es posible que los tratamientos pregerminativos utilizados no hayan sido los ms adecuados
y podran probarse otros como la escarificacin mecnica, la estratificacin e incluso la aplicacin de
reguladores de crecimiento vegetal como las giberelinas para tratar de aumentar los porcentajes de
germinacin.
La germinacin in vitro, es una alternativa que debe ser tomada a consideracin por las ventajas que
ofrece, poco espacio, menores tiempos, para la propagacin de estas y otras especies de cactceas
en riesgo de desaparecer.

REFERENCIAS
- Bautista, V. (2007). Efecto de la hidratacin-deshidratacin en la germinacin de semillas de cinco
especies de cactceas del valle de Tehuacn-Cuicatln (Tesis Profesional, p.4). Facultad de ciencias:
UNAM.
- Bhojwani, S. y Dantu, P. (2013).Plant tissue culture: an introductory text (p.17-27). India: Biblioteca
digital.
- Bravo-Hollis, H. (1978).Las cactceas de Mxico.Mxico: UNAM
- CONABIO. (2009). Biodiversidad Mexicana, cactos y biznagas, Recuperado el 26 de enero de 2014,
de http://www.biodiversidad.gob.mx/especies/gran_familia/plantas/magnoliayMarg/cactaceas.html
-ENCYCLOPEDYA OF LIFE, Ferocactuspilosus. Recuperado el 24 de enero de 2014 de
http://eol.org/pages/5183767/overview
-Gonzales, O. (2011). El cultivo de tejidos vegetales; alternativa de oportunidades para el desarrollo
de Mxico (p.5). Mxico: Instituto de Biologa, UNAM.
- Hernndez, H. (2006).La vida en los desiertos Mexicanos (pp. 13-14, 117, 131-137). Mxico:
10

Secretara de educacin Pblica
- Huntington. (2006, Marzo).Ferocactus pilosus. Recuperado el 25 de enero de 2014, de
http://www.huntington.org/botanicaldiv/isi2006/isi/2006-04.html
- Jimnez, C. (2011, Enero 1).Las cactceas mexicanas y los riesgos que enfrentan. Revista digital
universitaria, 12(1), p. 10
- Lpez, A. (2009). Origen y desarrollo de los brotes regenerados in vitro de Mammillaria coahuilensis
(BOED.) Moran (cactaceae), especie amenazada del estado de Coahuila. Tesis Profesional. UNAM,
Mxico.
- Orozco, A. F., Franco N., & Taborda L. A. (2010). Evaluacin de tres mtodos de escarificacin en
semillas de algarrobo. Tesis Profesional. Universidad Del Quindo, Quindo, Colombia.
- Oviedo, M. (2003). Mantenimiento y propagacin de cactceas y crasulceas para su conservacin
en el jardn botnico IBUNAM (Tesis Profesional, p. 4). Facultad de ciencias biolgicas y de la salud:
UAM
- Reyes, J. (2011) Conservacin y restauracin de Cactceas y otras plantas suculentas Mexicanas
(p.26). Mxico: Secretara de Educacin Pblica
- Roca, W. (1993). Cultivo de tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones (p.2). Mxico: SIAT
- Snchez, J. A., Orta R., & Muoz B. C. (2001) Tratamientos pregerminativos de hidratacin
deshidratacin de las semillas y sus efectos en plantas de inters agrcola. Agronoma Costarricense,
001, 67-91
- Smith, R. (2011).Plant tissue culture: techniques and experiments (p.32).Amsterdam: Libro digital.
- Soto, C. (2013).Evaluacin de la regeneracin in vitro de brotes de Echinocactus Grusonii
(Cactaceae) utilizando medio lquido (Tesis Profesional, p. 6). Facultad de ciencias: UNAM
- Valencia, D. (2010).La epidermis del gnero Ferocactus Britton& Rose (Cacteae-Cactaceae): su
valor en la sistemtica (Tesis profesional, p. 2-9). Facultad de Ciencias: UNAM Mtodos
pregerminativos.
-Velasco C. (2009). Viznaga (sic) roja (Ferocactus pilosus), HBITAT. Recuperado el 28 de febrero de
2014 de http://eol.org/data_objects/24970128.