1

Universidad Nacional
Pedro Ruiz Gallo

Facultad de Ingeniera Qumica
E Industrias Alimentarias


TEMA:
Fermentacin Microbiana

INTEGRANTES:

Carrasco Calle Jos Jamir.
Huamn lizana Diana del Milagro.
Patazca Samillan Roger
Saucedo Guevara Juleisy.
Tullume Chafloque Jose Carlos

PROFESOR:
Jorge Gstelo Arbail


LAMBAYEQUE PER

2014





2
INDICE
INTRODUCCION....3
OBJETIVOS.....4
RESUMEN Y JUSTIFICACON.....5
INTRODUCCION A LA FERMENTACIN MICROBIANA......6
FUNDAMENTO TEORICO....7
LA FERMENTACIN DE MICROORGANISMOS Y LA BIOTECNOLOGIA..8
CULTIVO DE CLULAS Y TEJIDOS ..11
BIOLOGA DE LA CLULA EN CULTIVO ..12
METODOLOGA DEL CULTIVO ..13
Tcnica Asptica
Cmaras De Flujo Laminar
I. Sustrato
II. Fase gaseosa
III. Medios de cultivo y suplementos
IV. Propiedades fsicas
USO DE ENZIMAS Y FERMENTACIN MICROBIANA16
Industrias lcteas
Panadera
Cervecera
Fabricacin de zumos
Fabricacin de glucosa y fructosa a partir del maz
Otras aplicaciones
APLICACIONES:18
TIPOS DE FERMENTACION21
LA GLUCLISIS COMO EJEMPLO DE FERMENTACIN..25
TECNOLOGIA FERMENTACION27
FERMENTACIONES LLEVADAS A CABO POR DIVERSOS
MICROORGANISMO.28
FERMENTACIN ALCOHOLICA30
BENEFICIOS...35
ANEXOS......36
CONCLUSIONES....40
BIBLIOGRAFIA...40





3
INTRODUCCION
El objetivo de la biotecnologa es obtener productos metablicos tiles a partir de
materiales biolgicos. La biotecnologa comprende dos fases distintas: la fermentacin y
la recuperacin de los productos. Para el cultivo de microorganismos en condiciones
ptimas, as como para la produccin, por parte de los microorganismos, de los metabolitos
o los enzimas deseados, deben ser desarrollados procedimientos de fermentacin como son
el desarrollo de cepas mediante manipulacin gentica y/o la regulacin del metabolismo
mediante la optimizacin del medio de cultivo as como el control adecuado de los factores
fsico-qumicos que afectan al rendimiento de las fermentaciones industriales (02, T, pH,
etc.). La recuperacin del producto o "procesamiento posterior" (del ingls downstream
processing) conlleva la extraccin y purificacin de los productos biolgicos. La
recuperacin en los procesos bioqumicos difiere de la recuperacin qumica,
principalmente, en que los materiales biolgicos son frecuentemente mucho ms lbiles.
Por lo tanto, la produccin de productos metablicos tiles a partir de microorganismos
conlleva una ntima relacin entre la Ciencia y la Tecnologa. Por un lado se deben
desarrollar los microorganismos de inters industrial y por otro se debe asegurar que estos
microorganismos puedan crecer en gran cantidad bajo aquellas condiciones que originen el
mejor rendimiento posible del producto.

A simple vista uno puede pensar que aquellas condiciones que se han encontrado ser las
ms efectivas a pequea escala deberan ser igual de efectivas a larga escala y que para
conseguir este objetivo nicamente es necesario usar un recipiente mayor con el
correspondiente incremento de volumen del medio. Nada ms lejos de la realidad. Por
ejemplo, se puede conseguir un buen crecimiento de un microorganismo aerobio en un
matraz de 200 ml mediante agitacin en un incubado usando un rotor de 300 w. Si nosotros
simplemente ampliamos este sistema, un nico fermentador de 10.000 litros requerira un
agitador con un motor de 15 megavatios. Dicho motor debera ser tan grande como una
casa y el calor generado durante la agitacin hervira a los microorganismos.

En lneas generales, un proceso tpico de fermentacin comienza con la formulacin y
esterilizacin del medio de cultivo as como la esterilizacin del equipamiento. Las clulas
se crecen primero en un cultivo de mantenimiento (5 a 10 ml), posteriormente en un matraz
(200 a 1.000 ml) y de ah en un pre fermentador (10 a 100 l) para finalmente inocular el
fermentador de produccin (1.000 a 100.000 L). Una vez que la fermentacin se ha
completado, las clulas se separan del cultivo lquido. Si el producto es intracelular, se
rompen las clulas, se eliminan los restos celulares y se recupera el producto del fluido libre
de restos celulares. Si el producto es extracelular, se purifica a partir del sobrenadante libre
de clulas. Hasta ahora hemos visto el desarrollo de las cepas as como el diseo de los
medios de cultivo. A continuacin vamos a desarrollar los aspectos tecnolgicos de las
fermentaciones.


4
OBJETIVOS:
Comprender el proceso de la fermentacin y todos los aspectos relacionados con l.
Diferenciar la respiracin de la fermentacin.
Explicar el mecanismo de la fermentacin.
Analizar qu factores afectan el proceso de fermentacin en cuanto a su rendimiento
y duracin.
Determinar si una especie bacteriana es capaz de fermentar distintos azcares.






















5
RESUMEN
La fermentacin microbiana, consiste como el nombre la dice, en la utilizacin de
diferentes tipos de microorganismo para un fin determinado, as mismo tiene un sin nmero
de usos y aplicaciones en la industria hoy da. Mediante la fermentacin microbiana se ha
logrado la elaboracin de diferentes productos como lo son: alimentos, vitaminas, bebidas
alcohlicas, productos farmacuticos, qumicos, combustibles, enzimas, biomasa, protenas,
entre otros.


JUSTIFICACION
La fermentacin es un proceso que llevan a cabo las clulas cuando no hay oxgeno. La
glucosa se empieza a "transformar" en la glucolisis y se produce el cido pirvico, si hay
oxgeno, se lleva a cabo la respiracin celular, donde los trasportadores de electrones
(energa) llevan 2 iones de hidrgeno (NADH), entonces para liberarse de esas partculas y
ser utilizados nuevamente la depositan con el oxgeno formando agua (desecho de la
respiracin celular) y transformndose en NAD+, y el cido pirvico se descompone
obteniendo 34 a 36 molculas de ATP.
En la fermentacin, se hace la glucolisis y los NAD+ toman iones de Hidrgeno (NADH).
Al no haber oxigeno el cido pirvico pasa por un proceso donde se producen otros
compuestos en el cual los NADH puedan depositar sus iones y ser utilizados de nuevo en la
glucolisis. Al final de la fermentacin se liberan los NAD+, pero no se libera H2O y CO2,
como en la respiracin celular, se libera Etanol y CO2 (en el caso de las levaduras). Y cido
lctico (en el caso de las clulas animales) por eso cuando hacemos ejercicios hay clulas
de nuestro cuerpo que no obtiene suficiente oxigeno como para realizar la respiracin
celular y producen cido Lctico haciendo fermentacin, cuando se acumula ese acido se
forman los calambres, que luego ese cido lctico se descompone en el hgado.









6
INTRODUCCION A LA FERMENTACIN MICROBIANA
La fermentacin microbiana es el uso de microorganismos para generar un producto de
consumo humano o utilidad veterinaria, ya sea alterado genticamente o no. Entre los
productos generados se encuentran: bebidas alcohlicas, enzimas, comidas y aditivos de
comida, vitaminas, vacunas, antibiticos, etc.
Anteriormente las bacterias haban sido utilizadas para la produccin de vino y antibiticos,
cosa que no se ha dejado de hacer. La utilizacin de la biotecnologa en la fermentacin
microbiana empez en el 1973 con el gen del African clawedtoad que fue insertado en el
laboratorio en la bacteria de Escerichia coli; este fue el primer experimento de ingeniera
gentica y con esto comenz la era de la tecnologa de DNA recombinante. El primer
medicamento generado mediante la utilizacin de estas dos tcnicas (fermentacin
microbiana y DNA recombinante) fue una forma de insulina.
La fermentacin microbiana es el mtodo ms aplicado en la biotecnologa. La ventaja de
la fermentacin microbiana es que al utilizar bacterias y levaduras estas crecen rpidamente
en un medio a bajo costo, ofrecen una alta expresin de los niveles de la protena que
deseamos obtener, de las cuales ellos a veces secretan en el medio y esto hace ms fcil la
purificacin. Tambin estos microorganismos pueden resistir fuertes tratamientos
comparados con las clulas animales. Sin embargo, existen ciertas limitaciones en la
utilizacin de bacterias y hongos para procesos industriales ya que no llevan a cabo
procesos post-translacionales como lo es la glicosilacion (bacterias) y muchas veces estos
organismos liberan proteasas junto con la protena de inters, tambin puede haber
presencia de endotoxinas en el caso de las bacterias y muchas veces las bacterias forman
cuerpos de inclusin lo que dificulta la tarea de recolectar el producto.
Entre los principales microorganismos utilizados se encuentran: E. coli y B. subtilis.E.
coli es el organismo ms comn como fuente de produccin de protena recombinante ya
que se conoce su mapa gentico. B. subtilis ha sido utilizado principalmente por su gran
tendencia de secretar protenas en su ambiente. La fermentacin de bacterias y hongos
ofrecen la opcin ms econmica y algunos criterios la convierten en la respuesta ms
obvia.








7
FUNDAMENTO TEORICO
ORIGEN
El concepto de fermentacin fue inicialmente planteado desde la qumica, pero cuando
apareci Pasteur cambiaron las cosas. Resulta que por esa poca se tena la idea que no era
necesario utilizar los conceptos vitalistas (es decir los conceptos relacionados con los seres
vivos) para explicar los fenmenos naturales, sino que todos podan ser explicados por las
leyes fsicas y qumicas. Para el caso de la fermentacin se deca que eran reacciones
qumicas aceleradas en forma misteriosa y desconocida por agentes qumicos llamados
fermentos y es entonces entro a participar de la polmica de Luis Pasteur y empez
analizando el problema de acidificacin del vino en las vincolas de un estudiante y l como
buen microbilogo observo en el microscopio que pasaba y se dio cuenta que en algunos
casos no haban levaduras sino otros organismos en forma de bastoncillos el consejo fue
prctico: deshacerse de todas las barricas con bastoncillos y dejar solo las que tenan
levaduras esto fue el comienzo de su inters por el proceso de fermentacin y a partir de
este proceso poder plantear su hiptesis de que la fermentacin era el producto de la accin
microbiana y entonces escogi la fermentacin lctica (la que nos permite obtener yogurt y
todo lo dems) para exponer su teora: Los qumicos, en ese momento decan que las
levaduras no eran la causa de la fermentacin, sino productos de ella: menos agregados
esfricos de protenas y adems decan que si las levaduras eran la causa de la
fermentacin como deca Pasteur porque no aparecan en la fermentacin lctica? y ah es
donde Pasteur con su grandeza deca: Sencillo porque cada fermentacin es causada por un
organismo diferente en la fermentacin lctica participan organismos en forma de
bastoncillos y no se producen protenas porque lo que hay es azcar (lactosa) y obviamente
esto fue sustentado en experimentos detallados y soportados cientficamente que no
pudieron ser refutados por nuestro amigos los qumicos recordemos que gracias a los
trabajos de Pasteur se desmont la teora de la Generacin espontnea que vena
manejndose desde la antigedad adems de introducir conceptos como la pasteurizacin y
la higiene intrahospitalaria
LA FERMENTACION MICROBIANA
La fermentacin microbiana tiene un sinnmero de usos y aplicaciones en la industria hoy
da. Mediante la fermentacin microbiana se ha logrado la elaboracin de diferentes
productos como lo son: alimentos, vitaminas, bebidas alcohlicas, productos farmacuticos,
qumicos, combustibles, enzimas, biomasa, protenas, entre otros.
Los productos antes mencionados se generan por medio de diferentes tipos de
fermentacin. La fermentacin lctica (queso, yogurt), fermentacin alcohlica (vino,
cerveza, alcohol, cigarrillos, chocolate, pan y otros) y la fermentacin actica (vinagre).



8
LA FERMENTACIN DE MICROORGANISMOS Y LA BIOTECNOLOGIA
Sabemos que la biotecnologa consiste simplemente en la utilizacin de microorganismos
as como de clulas vegetales y animales para producir materiales tales como alimentos,
medicamentos y productos qumicos tiles a la humanidad.
En el momento que los primeros hombres se dieron cuenta de que podan cultivar sus
propias plantas y criar a sus propios animales, ellos aprendieron a usar la biotecnologa. El
descubrimiento de que el jugo de fruta fermentado se convierte en vino, o que
la leche puede convertirse en queso o yogurt, o que la cerveza puede ser hecha
fermentando soluciones de malta y lpulo fue el comienzo del estudio de la biotecnologa.
En la antigedad el hombre descubri, casi por casualidad, cmo utilizar
los procesos biolgicos que ocurren permanentemente con las clulas vivas. Aunque no
entendan los procesos, podan observar los resultados.
Los cientficos actualmente comprenden qu son muchos de estos procesos biolgicos y
cmo ocurren, lo que les ha permitido desarrollar nuevas tcnicas a fin de modificar o
copiar algunos de dichos procesos naturales para poder as lograr una variedad mucho ms
amplia de productos. Algunos, como el queso, son los mismos que se obtenan utilizando la
biotecnologa tradicional, pero los nuevos mtodos son ms rpidos, menos costosos y ms
confiables. Otros, como algunos de los nuevos productos farmacuticos, ni siquiera se
podran hacer por medio de los mtodos ms antiguos.
Cuando se habla de biotecnologa algunos piensan en el mejoramiento del ganado, otros
suean con ilimitados recursos teraputicos para los humanos. Y hay quienes piensan en la
posibilidad de cultivos ms nutritivos y con una resistencia natural a las pestes que
alimenten a una poblacin en crecimiento. Todo esto es posible. Las promesas de la
biotecnologa agrcola residen en aumentar la productividad y reducir costos, generar
innovaciones y mejoras en los alimentos y conducir a prcticas agrcolas ms "ecolgicas";
contribuir, en suma, a la agricultura sustentable, que utiliza los recursos
con respeto al medio ambiente y sin hipotecar a las generaciones futuras. Las plantas que
hoy cultivamos son, en muchos casos, radicalmente distintas de sus antepasados silvestres,
ya que el hombre ha modificado y seleccionado sus propiedades a la largo de ms de diez
mil aos en funcin de sus necesidades. Las variedades que utiliza el agricultor en la
actualidad han sido generadas, en su mayor parte, por ingenieros agrnomos, en centros
pblicos o privados dedicados a la produccin de nuevas variedades por los mtodos
convencionales. Esta tecnologa se basa en la repeticin de varios procesos de hibridacin
y seleccin de las plantas. La hibridacin de dos variedades o especies de plantas combina
miles de genes en un proceso al azar, y son necesarias repeticiones sucesivas de seleccin e
hibridacin para obtener una nueva variedad que incorpore todas las caractersticas (genes)
deseadas y que evite, en la medida de lo posible, la incorporacin de los genes no deseados.


9
Este proceso de generacin de nuevas variedades ha sido muy til y ha dado lugar a la
generacin de nuevas variedades que se cultivan hoy en da. Ahora y en un futuro cercano,
los alimentos derivados de la biotecnologa proveen mejoras de calidad que, adems,
incluyen mejor sabor y son ms sanos. Las particularidades agronmicas que le fueron
insertadas crean valor. El hecho ms notable es que las plantas incrementan la produccin y
reducen la necesidad de otros agregados como pesticidas y herbicidas qumicos. La soja,
el maz y el algodn son algunos de nuestros actuales productos enmarcados en
los programas de biotecnologa que, adems de generar mayores rendimientos, implican
menores costos de inversin gracias al control de pestes y malezas. A nivel bsico la
biotecnologa se puede definir como una tcnica que utiliza clulas vivas, cultivo
de tejidos o molculas derivadas de un organismo como las enzimas para obtener o
modificar un producto, mejorar una planta o animal o desarrollar un microorganismo para
utilizarlo con un propsito especfico.

Segn esta definicin, la fabricacin, entre otros, de pan y cerveza que se basa en
el empleo de clulas de levadura es un proceso biotecnolgico.
La diferencia aportada por la biotecnologa moderna es que actualmente el hombre no slo
sabe cmo usar las clulas u organismos que le ofrece la naturaleza, sino que ha aprendido
a modificarlos y manipularlos en funcin de sus necesidades. La biotecnologa tal como la
conocemos actualmente empez en los aos 50 con el descubrimiento por James Watson y
Francis Crick de la estructura de la molcula de ADN* (cido desoxirribonucleico) que es
donde se almacena la informacin gentica (la herencia) en todos los seres vivos.
En contra de lo que pueda parecer, la Biotecnologa no es un campo nuevo de actividad
empresarial, su desarrollo puede remontarse a varios miles de aos atrs cuando
el hombre aprendi a producir pan y otros productos como el queso, la cerveza y el vino.
El hombre lleva varios miles de aos modificando los vegetales que utiliza como alimento.
Por ejemplo, las repollitos de Bruselas, la coliflor y el brcoli son variedades artificiales de
la misma planta (aunque no lo parezcan). Lo mismo se puede decir de las decenas de
variedades de manzanas, maz, papas, trigo, entre otros. Los antecedentes salvajes de
muchas de estas plantas, cuando existen, son tan poco parecidas que no seran reconocidos
como tales por alguien que no fuera experto.
En cuanto a la "mezcla de especies", el triticale, un hbrido de trigo y centeno, lleva
dcadas prosperando en terrenos de mala calidad (tiles para centeno, pero no para trigo),
pero con algunas buenas propiedades del trigo, lo que lo hace mucho ms valioso
para alimentacin humana.
Sin embargo, la ingeniera gentica permite ahora llevar a cabo, en pocos aos y de forma
controlada, lo que antes poda costar dcadas o siglos, o conseguir efectos que slo estaban


10
en los sueos de los agricultores, pero que eran imposibles con las viejas tcnicas de cruce
y seleccin.
La ingeniera gentica se utiliz inicialmente (por su alto coste) para producir sustancias de
usos farmacutico, como la insulina, modificando genticamente microorganismos. Con los
posteriores desarrollos, se obtuvieron tambin enzimas para uso industrial, como la
quimosina recombinante, utilizada, al igual que la obtenida de estmagos de terneros
jvenes (su fuente original, el "cuajo"), para elaborar el queso. Posteriormente se han
obtenido vegetales (y animales) modificados genticamente para mejorar sus propiedades.
Los productos de la biotecnologa estn alrededor nuestro. El yogurt, la cerveza, el vino y el
queso de nuestra heladera son productos de la biotecnologa. Los pickles, el pan, y el
vinagre de nuestra cocina tambin lo son. Cientos de aos atrs, la gente fue descubriendo,
casi por accidente, cmo hacer uso de los procesos biolgicos que ocurren dentro de las
clulas vivientes. Sin entender los procesos, podan ver los resultados. Descubrieron, por
ejemplo, que ciertos microorganismos, como las bacterias y los hongos podan producir
vinagre, cerveza o vino cuando crecan en grandes tinas. Estos procesos fueron
llamados fermentacin. A travs de prueba y error, aprendieron el control de estos procesos
y a producir grandes cantidades de un amplio rango de productos.
Los cientficos actualmente comprenden muchos de estos procesos biolgicos y cmo estos
ocurren. Esto les ha permitido desarrollar nuevas tcnicas para alterar o copiar algunos de
estos procesos naturales y por lo tanto lograr una amplia variedad de productos. Algunos,
como el queso, son los mismos productos hechos utilizando la biotecnologa tradicional,
pero con los nuevos mtodos son ms rpidos, econmicos y ms confiables. Otros, como
algunos de los nuevos productos farmacuticos no pueden ser fabricados con los mtodos
antiguos.
Muchas definiciones de biotecnologa han sido discutidas a lo largo de estos aos. Algunas
de las que se han mantenido a travs de los aos son:"Biotecnologa significa la aplicacin
de principios cientficos y de ingeniera para el proceso de materiales a travs de agentes
biolgicos para obtener bienes y servicios. Estos principios cubren una amplia variedad de
disciplinas pero se basa principalmente en microbiologa, bioqumica, gentica e ingeniera
gentica". OECD 1982, "Biotecnologa, Perspectivas y Tendencias
Internacionales"."Biotecnologa significa la aplicacin de la ciencia y de la ingeniera con
el uso directo o indirecto de organismos vivos o partes o productos de organismos vivos en
su forma natural o modificada".






11
Cultivo de clulas y tejidos
El cultivo de tejidos fue desarrollado a principios de siglo XX como un mtodo de estudio
del comportamiento de las clulas animales, libres de las variaciones sistmicas, y
mantenidas en condiciones controladas. Primariamente se limitaba al estudio de las clulas
capaces de migrar fuera del tejido cultivado. Con el desarrollo posterior de las tcnicas de
disgregado celular y de seleccin de distintos tipos celulares especficos fue posible obtener
cultivos de clulas aisladas y cultivos enriquecidos en determinado tipo celular.
Se denominaron a partir de ese momento de forma diferente a los distintos tipos de cultivos.
El cultivo rgano-tpico implica que se cultiva un trozo de rgano manteniendo su
conformacin espacial caracterstica y sus diversos tipos celulares. El cultivo histo-tpico
por otro lado, se caracteriza por la re asociacin de clulas de alguna forma para asemejar a
la estructura del tejido original.
El cultivo de clulas es el nombre que se utiliza para describir el cultivo de clulas
disociadas y mantenidas directamente sobre la superficie del recipiente de cultivo.
sta es un una poderosa herramienta para el estudio de ciertos procesos celulares tales
como: replicacin y transcripcin del
ADN, sntesis proteica, metabolismo energtico, nutricin, infecciones virales,
transformacin maligna, accin de drogas, toxicidad, secrecin de productos
especializados, desarrollo embrionario, etc. Adems debe mencionarse la posibilidad del
cultivo de tejidos con fines de reintroduccin reparativa en diferentes patologas como por
ejemplo el Parkinson.
Como ventajas de esta metodologa podran citarse:
Control del medio ambiente celular: permite mantener a las clulas bajo condiciones
similares a las fisiolgicas de forma estable, y modificar a su vez nicamente
las variables de inters.
Caracterizacin y homogeneidad de la muestra: las muestras de tejidos son
invariablemente heterogneas, sin embargo generalmente luego de uno o dos pasajes,
las lneas celulares asumen una constitucin uniforme al ser mezcladas al azar y al
actuar las fuerzas selectivas en favor de los tipos celulares que se dividen ms
rpidamente en esas condiciones. Se generan as rplicas casi idnticas disponibles
para protocolos de anlisis clnicos o de investigacin.
Economa y practicidad: los cultivos pueden ser expuestos a una concentracin menor
y conocida de cierta sustancia, existiendo un acceso directo a las clulas. Asimismo, en
un solo experimento pueden realizarse una gran cantidad de duplicados y tratamientos
distintos, sin tener que recurrir primariamente a grupos de animales.




12
Como desventajas podran citarse:
Experiencia requerida: las tcnicas de cultivo deben ser llevadas a cabo en condiciones
de asepsia estrictas, ya que las clulas animales crecen mucho menos rpido que los
contaminantes biolgicos. Adems, las clulas de los metazoos no son capaces de vivir
de forma aislada fuera del animal, con lo cual se requiere un ambiente de cultivo muy
complejo, que simule el plasma sanguneo o el fluido intersticial.
In vitro no es in vivo: muchas de las diferencias entre el comportamiento de clulas en
cultivo e in vivo se generan debido a la disociacin de las clulas de
su geometra tisular tridimensional, y a su propagacin en un sustrato que no solo es
bidimensional sino que carece de muchos de los elementos de la matriz extracelular
organizada del animal. Las interacciones clula-clula, las caractersticas del tejido se
pierden, cambian las proporciones relativas de tipos celulares, y el estadio y regulacin
del ciclo celular. Asimismo, el ambiente del cultivo carece tambin de muchos
componentes sistmicos, involucrados en la homeostasis y en los diversos ciclos del
animal.
Es posible encontrar muchas ms diferencias in vivo-in vitro, lo cual ha llevado a ver al
cultivo de clulas con ojos escpticos, sin embargo resulta innegable que
muchas funciones especializadas son expresadas in vitro, de tal forma que si se
comprenden las limitaciones del modelo puede transformarse en una herramienta
poderosa.

Biologa de la clula en cultivo
Luego del primer sub-cultivo o pasaje, el cultivo primario se denomina lnea celular, y
podr ser propagado y sub-cultivado varias veces. Con cada sub-cultivo sucesivo, las
clulas con una lenta velocidad de divisin o con menor resistencia a las manipulaciones o
tratamientos de disgregado se perdern, y el cultivo ser cada vez ms homogneo y
estable.
Las lneas celulares pueden ser propagadas de forma inalterada por un nmero limitado de
generaciones, luego de lo cual mueren o dan origen a lneas celulares continuas. La
alteracin en cultivo dando origen a una lnea celular continua se denomina comnmente
transformacin in vitro, y puede ocurrir espontneamente o en forma inducida con agentes
qumicos o virus. Sin embargo, la inmensa mayora de las clulas normales no dan origen a
lneas celulares continuas. Un ejemplo clsico de historia de vida de un cultivo lo
constituyen los fibroblastos humanos, que se mantienen euploidias durante su vida en
cultivo, hasta la denominada crisis del cultivo (unas 50 generaciones despus), deteniendo
sus divisiones y comenzando un perodo de senescencia final.




13

Metodologa del cultivo: tcnica asptica y cmaras de flujo laminar
Tcnica asptica.
A pesar de la utilizacin de antibiticos en los medios de cultivo, la contaminacin por
microorganismos contina siendo uno de los mayores problemas del cultivo de clulas.
Las bacterias, los mico plasmas, las levaduras y las esporas de los hongos, pueden ser
introducidas va el operador, la atmsfera, la superficie de trabajo, las soluciones, etc.
Una correcta y rigurosa tcnica asptica por parte del operador, conjuntamente con la
utilizacin de soluciones y materiales probadamente estriles son imprescindibles para
el mantenimiento de los cultivos libres de contaminantes biolgicos.
Cmaras de flujo laminar
La cmara de flujo laminar es un dispositivo que permite al operador trabajar en
condiciones aspticas en un rea bajo un flujo laminar de aire estril. Existen tres tipos
de cmaras de flujo laminar. Las cmaras tipo I son utilizadas para la preparacin de
soluciones y el trabajo con microorganismos o cultivos de clulas animales no
humanas o de primates. Las cmaras de flujo horizontales y algn tipo de verticales
son de esta clase. Claramente la cmara que ofrece menor seguridad al operador es la
de flujo horizontal, si bien es tambin la que posee el flujo de aire ms estable y la
mejor proteccin frente a las infecciones de los cultivos. Las cmaras de flujo laminar
tipo II y III son de flujo vertical, e incorporan diversas protecciones para el operador y
el medio. Las de tipo III son de mxima seguridad, en estas el operador no posee
contacto directo con los materiales de trabajo (solo a travs de guantes sellados
hermticamente contra la pared delantera de la cmara), todo el aire que sale de la zona
de trabajo es re filtrado, y todo el material utilizado es auto clavado antes de entrar y de
salir de la cmara. Este tipo de cmaras son utilizadas para el trabajo con agentes
infecciosos humanos.
Ambiente de cultivo: sustratos, fase gaseosa, medios de cultivo y propiedades fsicas
La influencia del ambiente de cultivo sobre las clulas es ejercida por cuatro vas
principales: (I) naturaleza del sustrato o fase sobre o dentro de la que crecen las clulas, (II)
constitucin fisicoqumica y fisiolgica del medio de cultivo, (III) constitucin de la fase
gaseosa, y (IV) propiedades fsicas como la temperatura de incubacin.
I. Sustrato.
La mayora de las clulas que han sido crecidas en cultivo, han sido cultivadas en
mono capa sobre sustratos artificiales, y el crecimiento en suspensin slo ha sido
posible para ciertos tipos celulares como las clulas hematopoyticas y otros pocos
tipos. Es sabido ya que la mayora de las clulas necesitan adherirse y extenderse
sobre el sustrato para poder dividirse, con lo cual una correcta adherencia al sustrato
resulta fundamental. Actualmente, las placas de cultivo de polietileno descartables
proveen al investigador de una superficie de cultivo simple y reproducible para el
cultivo, combinado con buenas propiedades pticas.


14
Otro sustrato muy utilizado, aunque con fines especficos, son las bolitas de
polietileno, sephadex, o poliacrilamida, para la propagacin de clulas anclaje-
dependientes en suspensin, amplificando as enormemente la superficie real de
cultivo de un recipiente, como por ejemplo en el caso de los bio-reactores.
Las superficies son muy a menudo pre tratadas con por ejemplo medio de cultivo ya
utilizado para el cultivo de otras clulas, o sembrando clulas que luego se remueven
dejando sus secreciones adheridas, proveyendo de esta forma alguna de los
constituyentes normales de la matriz extracelular del animal entero. Tambin se
agregan directamente a las placas, previo al contacto con las clulas, diversas
macromolculas de este tipo tales como laminina, fibronectina, colgeno, etc. En
muchos casos in vitro, el contacto de la clula con estas macromolculas es
fundamental para un correcto crecimiento y expresin de sus caractersticas
especializadas.
Tambin se utiliza una mono-capa de clulas como acondicionadora del ambiente y
como sustrato vivo para el cultivo de otro tipo celular. Este mtodo no solo mejora o
en algunos casos posibilita el crecimiento y diferenciacin de ciertos tipos celulares
en cultivo, sino que tambin contribuye a emular las condiciones originales de ciertos
tejidos.
Se han diseado otros muchos sistemas de cultivo para requerimientos especiales de
determinado tipo celular, o condicin experimental, tal es el caso de un tipo de
recipiente que posee micro-capilares permeables, sobre los cuales se cultivan las
clulas, y por dentro de los cuales se hace circular medio de cultivo.
II. Fase gaseosa.
Los constituyentes ms importantes de esta fase para el cultivo de clulas son el O2 y
el CO2. Los cultivos varan en sus requerimientos de oxgeno, tal es el caso de los
cultivos celulares y los cultivos rgano-tpicos. Mientras que tensiones de O2
atmosfricas o menores son preferibles para la mayora de los cultivos de clulas,
algunos cultivos rgano-tpicos requieren hasta un 95% de O2 debido a su escasa
difusin.
El CO2 tiene un papel complejo, y es difcil entender cmo ejerce su efecto debido a
sus implicancias sobre la concentracin de O2 disuelto, el pH y la concentracin de
HCO3- del medio de cultivo. La tensin atmosfrica de CO2 y la temperatura del
ambiente del cultivo regulan directamente la concentracin de CO2 disuelto en el
medio de cultivo. Se regular as de forma indirecta el pH del medio de cultivo, ya
que al cultivo se le adiciona tambin cierta cantidad de HCO3-, con lo cual se
establecer un equilibrio que sirve como tampn:

H20 + CO2 (H2CO3 (H+ + HCO3- + Na+ (NaCO3 + H+
Se ajustan las concentraciones de HCO3- y CO2 para fijar el equilibrio a pH 7,4.



15
III. Medios de cultivo y suplementos.
Con el fin de emular las condiciones in vivo se desarrollaron medios de cultivo
basales tales como el de Eagle, y medios ms complejos como el 199. Sin embargo
estos medios requieren de la suplementacin con suero segn los tipos celulares. Para
condiciones en las cuales es deseable eliminar el suero, se desarrollaron medios de
cultivo definidos (de composicin conocida) que permiten el correcto crecimiento de
un determinado tipo celular in vitro. Cada tipo celular tendr sus propios
requerimientos lo cual hace necesario un cuidadoso anlisis de las caractersticas del
medio de cultivo que se elige para cada tipo celular.
La base de todo medio de cultivo es una solucin salina balanceada, a la cual se le
van adicionando diferentes componentes para generar un tampn, aminocidos
esenciales, vitaminas, trazas de minerales, y otros metabolitos como piruvato,
nucletidos, lpidos, etc. Como ya hemos comentado, en la mayora de los casos se
adiciona adems distintas proporciones de suero, cuyo componente mayoritario son
las protenas tales como transportadores de minerales, hormonas o lpidos (albmina,
globulinas, transferrina, etc.). Otros de sus componentes importantes son metabolitos
diversos, nutrientes especficos, factores de crecimiento poli peptdicos (PDGF, FGF,
NGF, etc.), y hormonas (insulina, hidrocortisona, etc.).
IV. Propiedades fsicas.
La mayora de las lneas celulares crecen a pH 7,4. Con el fin de fijar el pH del medio
de cultivo en este valor, se utiliza un tampn bicarbonato como ya se ha descrito. Este
tampn si bien no tiene una alta capacidad, es muy aconsejable debido a su baja
toxicidad y a que es el principal sistema de tampn in vivo. Otro factor importante es
la osmolaridad, que si bien en el plasma humano es aproximadamente 290 mOsm/kg,
en la prctica, en cultivo pueden utilizarse osmolaridades de entre 260 y 320
mOsm/kg para la mayora de las lneas celulares. La temperatura de incubacin de los
cultivos se ajusta a la temperatura promedio del animal del cual proviene el cultivo,
para mamferos debe ser de 37C, mientras que para otros cultivos de origen diferente
como en el caso de insectos o anfibios ser distinta. Finalmente, la viscosidad es
otra propiedad importante del medio de cultivo, que se encuentra principalmente
determinada por los constituyentes del suero.










16
Uso de enzimas y fermentacin microbiana
Uso de Enzimas:
La utilizacin emprica de preparaciones enzimticas en la elaboracin de alimentos es muy
antigua. El cuajo, por ejemplo, se utiliza en la elaboracin de quesos desde la prehistoria,
mientras que las civilizaciones precolombinas ya utilizaban el zumo de la papaya. Sin
embargo, hasta 1897 no qued totalmente demostrado que los efectos asociados a ciertos
materiales biolgicos, como el cuajo o las levaduras pudieran individualizarse en una
estructura qumica definida, llamada enzima, aislable en principio del organismo vivo
global. Desde hace unas dcadas se dispone de enzimas relativamente puros y con una gran
variedad de actividades susceptibles de utilizarse en la elaboracin de alimentos. Los
progresos que estn realizando actualmente la ingeniera gentica y la biotecnologa
permiten augurar un desarrollo cada vez mayor del uso de los enzimas, al disponer de un
suministro continuo de materiales con la actividad deseada a precios razonables. Los
enzimas son piezas esenciales en el funcionamiento de todos los organismos vivos,
actuando como catalizadores de las reacciones de sntesis y degradacin que tienen lugar en
ellos. La utilizacin de enzimas en los alimentos presenta una serie de ventajas, adems de
las de ndole econmica o tecnolgica. La gran especificidad de accin que tienen los
enzimas hace que no se produzcan reacciones laterales imprevistas. As mismo se puede
trabajar en condiciones moderadas, especialmente de temperatura, lo que evita alteraciones
de los componentes ms lbiles del alimento. Desde el punto de vista de la salud, puede
considerarse que las acciones enzimticas son, en ltimo extremo, naturales. Adems los
enzimas pueden inactivarse fcilmente cuando se considere que ya han realizado su misin,
quedando entonces asimilados al resto de las protenas presentes en el alimento. Para
garantizar la seguridad de su uso deben tenerse en cuenta no obstante algunas
consideraciones: en aquellos enzimas que sean producidos por microorganismos, estos no
deben ser patgenos ni sintetizar a la vez toxinas, antibiticos, etc. Los microorganismos
ideales son aquellos que tienen ya una larga tradicin de uso en los alimentos (levaduras de
la industria cervecera, fermentos lcticos, etc.). Adems, tanto los materiales de partida
como el procesado y conservacin del producto final deben ser acordes con las prcticas
habituales de la industria alimentaria por lo que respecta a pureza, ausencia de
contaminantes, higiene, etc. Los enzimas utilizados dependen de la industria y del tipo de
accin que se desee obtener, siendo ste un campo en franca expansin. A continuacin se
mencionan solamente algunos ejemplos.

Industrias lcteas:
Como se ha indicado, el cuajo del estmago de los rumiantes es un producto clsico en
la elaboracin de quesos, y su empleo est ya citado en la Ilada y en la Odisea. Sin
embargo, el cuajo se obtuvo como preparacin enzimtica relativamente pura solo en
1879. Est formado por la mezcla de dos enzimas digestivos (quimosina y pepsina) y
se obtiene del cuajar de las terneras jvenes. Estos enzimas rompen la casena de


17
la leche y producen su coagulacin. Desde los aos sesenta se utilizan tambin otros
enzimas con una accin semejante obtenidos a partir de microorganismos o de
vegetales Actualmente empieza a ser importante tambin la lactasa, un enzima que
rompe la lactosa, que es el azcar de la leche. Muchas personas no pueden digerir este
azcar, por lo que la leche les causa trastornos intestinales. Ya se comercializa leche a
la que se le ha aadido el enzima para eliminar la lactosa.

Panadera:
En panadera se utiliza la lipoxidasa, simultneamente como blanqueante de la harina y
para mejorar su comportamiento en el amasado. La forma en la que se aade es
usualmente como harina de soja o de otras leguminosas, que la contienen en
abundancia. Para facilitar la accin de la levadura, se aade amilasa, normalmente en
forma de harina de malta, aunque en algunos pases se utilizan enzimas procedentes de
mohos ya que la adicin de malta altera algo el color del pan. La utilizacin de agentes
qumicos para el blanqueado de la harina est prohibida en Espaa. A veces se utilizan
tambin proteasas para romper la estructura del gluten y mejorar la plasticidad de la
masa. Este tratamiento es importante en la fabricacin de bizcochos.
Cervecera:
A principios de este siglo (1911) se patent la utilizacin de la papana para fragmentar
las protenas presentes en la cerveza y evitar que sta se enturbie durante
el almacenamiento o la refrigeracin, y este mtodo todava se sigue utilizando. Este
enzima se obtiene de la papaya. Un enzima semejante, la bromelana, se obtiene de la
pia tropical. Un proceso fundamental de la fabricacin de la cerveza, la rotura del
almidn para formar azcares sencillos que luego sern fermentados por las levaduras,
lo realizan las amilasas presentes en la malta, que pueden aadirse procedentes
de fuentes externas, aunque lo usual es lo contrario, que la actividad propia de la malta
permita transformar an ms almidn del que contiene. Cuando esto es as,
las industrias cerveceras aaden almidn de patata o de arroz para aprovechar al
mximo la actividad enzimtica.

Fabricacin de zumos:
A veces la pulpa de las frutas hace que los zumos sean turbios y demasiado viscosos,
producindose tambin ocasionalmente problemas en la extraccin y en su eventual
concentracin. Esto es debido a la presencia de pectinas, que pueden destruirse por la
accin de enzimas presentes en el propio zumo o bien por enzimas aadidas obtenidas
de fuentes externas. Esta destruccin requiere la actuacin de varios enzimas distintos,
uno de los cuales produce metanol, que es txico, aunque la cantidad producida no
llegue a ser preocupante para la salud.




18
Fabricacin de glucosa y fructosa a partir del maz:
Una industria en franca expansin es la obtencin de jarabes de glucosa o fructosa a
partir de almidn de maz. Estos jarabes se utilizan en la elaboracin de bebidas
refrescantes, conservas de frutas, repostera, etc. en lugar del azcar de caa o de
remolacha. La forma antigua de obtener estos jarabes, por hidrlisis del almidn con
un cido, ha sido prcticamente desplazada en los ltimos 15 aos por la hidrlisis
enzimtica, que permite obtener un jarabe de glucosa de mucha mayor calidad y a
un costo muy competitivo. De hecho, la CE ha limitado severamente la produccin de
estos jarabes para evitar el hundimiento de la industria azucarera clsica. Los enzimas
utilizados son las alfa-amilasas y las amiloglucosidasas. La glucosa formada puede
transformarse luego en fructosa, otro azcar ms dulce, utilizando el enzima glucosa-
isomerasa, usualmente inmovilizado en un soporte slido.

Otras aplicaciones:
Los enzimas se utilizan en la industria alimentaria de muchas otras formas, en
aplicaciones menos importantes que las citadas anteriormente. Por ejemplo, en la
fabricacin de productos derivados de huevos, las trazas de glucosa presentes, que
podran oscurecerlos, se eliminan con la accin combinada de dos enzimas, la glucosa-
oxidasa y la catalasa. Por otra parte, la papana y bromelana, enzimas que rompen las
protenas, se pueden utilizar, fundamentalmente durante el cocinado domstico, para
ablandar la carne. Algunas enzimas, como la lactoperoxidasa, podran utilizarse en la
conservacin de productos lcteos.

APLICACIONES
La fermentacin microbiana tiene un sin nmero de usos y aplicaciones en la industria hoy
da. Mediante la fermentacin microbiana se ha logrado la elaboracin de diferentes
productos como lo son: alimentos, vitaminas, bebidas alcohlicas, productos farmacuticos,
qumicos, combustibles, enzimas, biomasa, protenas, entre otros.
Los productos antes mencionados se generan por medio de diferentes tipos de
fermentacin. La fermentacin lctica (queso, yogurt), fermentacin alcohlica (vino,
cerveza, alcohol, cigarrillos, chocolate, pan y otros) y la fermentacin actica (vinagre).
Un ejemplo de esta tecnologa es la produccin industrial de eritromicina, antibitico
producido por el actinomiceto gran positivo Saccharopolyspora erythraea bajo
fermentacin aerbica utilizando aceite de soya como fuente principal de carbono y cido
propionico como precursor. La produccin de eritromicina es actualmente llevada a cabo en
la planta de Abbott en P.R.
La fermentacin microbiana tambin es un medio de produccin de vitaminas. Entre
el grupo de vitaminas generadas por este medio podemos encontrar las siguientes: cido
ascrbico, riboflavinas, beta-caroteno, vitamina B12, cido flico y la pro vitamina A. Las
de mayor importancia a nivel industrial son: riboflavina, beta-caroteno y vitamina B12.


19
En sus comienzos la vitamina B12 fue obtenida como un subproducto de los
estreptomicetos en la produccin de estreptomicina. En la actualidad la produccin de esta
vitamina es llevada a cabo por varias bacterias entre estas: Propionibacterium
fredenreichii, Propionibacterium shermani y Pseudomonas denitrificans
La fermentacin de riboflavina puede llevarse a cabo mediante bacterias, hongos o
levaduras. Entre los organismos utilizados: Emerothecium ashbyii y Ashbya gossypii.
Los rendimientos ms altos en la produccin del Beta-caroteno se han obtenido mediante la
fermentacin del hongo Blakeslea trispora donde se emplean ambas formas sexuales (+ y -
). Estas dos formas sexuales no tienen que estar en igual concentracin ya que la encargada
verdaderamente de la formacin de beta-caroteno es la cepa negativa.
Con respecto a las bebidas alcohlicas en la elaboracin de vinos tambin hace uso de esta
tcnica. El proceso mediante el cual es producido vino es el siguiente:

La elaboracin del vino puede tener como materia prima cualquier fruta o vegetal con
alto contenido de azcares pero se asocia a los vinos de calidad con uvas.
La fermentacin de estas uvas es llevada a cabo por levaduras silvestres (presentes de
forma natural en las uvas) o por lo general Saccharomy cescerevisiae.
Luego de fermentado estas levaduras son separadas del vino por sedimentacin.
El vino se aeja.

Como han podido apreciar la tcnica de fermentacin microbiana es una de gran utilidad en
la elaboracin de muchos de los productos de nuestro diario vivir.
DISEO Y FUNCIONAMIENTO DEL FERMENTADOR
El estudio detallado del diseo de un fermentador, como la tecnologa de los procesos
fermentativos es una amalgama de tcnicas biolgicas e ingeniera qumica, se hace
necesario proporcionar un breve resumen de los tipos de fermentadores disponibles y de sus
principales caractersticas. 13 puntos considerados como los criterios ms importantes para
el diseo de un fermentador:
1.- El tanque debe disearse para que funcione aspticamente durante numerosos das, as
como para las operaciones de ms larga duracin.
2.- Se debe proporcionar un sistema adecuado de aireacin y agitacin para cubrir las
necesidades metablicas de los microorganismos.
3.- El consumo de energa debe ser tan bajo como sea posible.
4.- Debe tener un sistema para el control del pH.
5.- El fermentador debe tener un sistema para la toma de muestras.
6.- Debe existir un sistema para el control de la temperatura.


20
7.- Las prdidas por evaporacin no deben ser excesivas.
8.- El diseo del tanque debe ser tal que las operaciones laborales durante el
funcionamiento, recoleccin, limpieza y mantenimiento sean mnimas.
9.- El tanque debe ser verstil para la aplicacin de diversas modalidades de procesos.
10.- Las superficies internas del tanque deben ser lisas, utilizando, donde sea posible,
soldaduras.
11.- La geometra del fermentador debe ser similar a otros tanques ms pequeos o
mayores de la planta o a los de la planta piloto para poder reproducir procesos a diferentes
escalas.
12.- deben emplearse los materiales ms baratos que proporcionen resultados satisfactorios.

13.- Debe existir un servicio adecuado de repuestos para el fermentador.
El mantenimiento de un ambiente asptico y unas condiciones aerbicas son,
probablemente, los dos puntos de mayor relevancia que hay que considerar. Los
fermentadores ms ampliamente utilizados a nivel industrial estn provistos de mecanismos
de agitacin, dispersin y aireacin as como de sistemas para el control de la temperatura,
pH y formacin de espuma.













21
TIPOS DE FERMENTACIN
A) FERMENTACION LACTICA.

En este tipo de fermentacin el microorganismo oxida el nutrimento hasta
convertirlo en un compuesto llamado cido lctico y ATP.
Este proceso lo realizan muchas bacterias (llamadas bacterias lcticas), hongos,
algunos protozoos y muchos tejidos animales; en efecto, la fermentacin lctica
tambin se verifica en el tejido muscular cuando, a causa de una intensa actividad
motora, no se produce una aportacin adecuada de oxgeno que permita el
desarrollo de la respiracin aerbica. Cuando el cido lctico se acumula en las
clulas musculares produce sntomas asociados con la fatiga muscular. Algunas
clulas, como los glbulos rojos, carecen de mitocondrias de manera que se ven
obligadas a obtener energa por medio de la fermentacin lctica.

B) FERMENTACION ALCOHOLICA

Es un proceso biolgico de fermentacin en plena ausencia de aire (oxgeno - o2),
originado por la actividad de algunos microorganismos que procesan los hidratos de
carbono (por regla general azcares: como pueden ser por ejemplo la glucosa, la
fructosa, la sacarosa, el almidn, etc.) para obtener como productos finales: un
alcohol en forma de etanol (cuya frmula qumica es: ch3-ch2-oh), dixido de
carbono (co2) en forma de gas y unas molculas de atp que consumen los propios
microorganismos en su metabolismo celular energtico anaerbico.

La fermentacin alcohlica tiene como finalidad biolgica proporcionar energa
anaerbica a los microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de oxgeno
para ello disocian las molculas de glucosa y obtienen la energa necesaria para
sobrevivir, produciendo el alcohol y co2 como desechos consecuencia de la
fermentacin. Las levaduras y bacterias causantes de este fenmeno son
microorganismos muy habituales en las frutas y cereales y contribuyen en gran
medida al sabor de los productos fermentados. Una de las principales caractersticas
de estos microorganismos es que viven en ambientes completamente carentes de
oxgeno (o2), mxime durante la reaccin qumica, por esta razn se dice que la
fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico.

C) FERMENTACIN ACETICA

Es un tipo de fermentacin aerbica usada por las bacterias del genero acetobacter.
Estas bacterias usan compuestos de alcohol para romper sus enlaces y obtener
energa (atp) el producto de desecho es el cido actico.

La formacin de cido actico (ch3cooh) resulta de la oxidacin de un alcohol por
la bacteria del vinagre en presencia del oxgeno del aire. Estas bacterias, a
diferencia de las levaduras productoras de alcohol, requieren un suministro
generoso de oxgeno para su crecimiento y actividad. el cambio que ocurre es


22
descrito generalmente por la ecuacin:
c
2
h
5
oh + o
2
acetobacter aceti ch
3
cooh + h
2
o


D) FERMENTACIN BUTRICA

Es la conversin de los glcidos en cido butrico por accin de bacterias
clostridium butyricum en ausencia de o2. Se produce a partir de la lactosa con
formacin de cido butrico y co2. Es caracterstica de las bacterias del gnero
clostridium y se caracteriza por tener olores ptridos y desagradables.


















FIGURA 1
FIGURA 4
FIGURA 3
FIGURA 2


23
FACTORES FISICO-QUIMICOS QUE AFECTAN AL RENDIMIENTO DE LAS
FERMENTACIONES INDUSTRIALES
1.- Oxgeno
2.- Temperatura
3.- pH
AGITACION Y MEZCLADO
La agitacin es la operacin que crea o que acelera el contacto entre dos o varias fases.
Una fermentacin microbiana puede ser considerada como un sistema de tres fases, que
implica reacciones lquido-slido, gas-slido y gas-lquido.
1.- La fase lquida contiene sales disueltas, sustratos y metabolitos. Puede existir, en
algunos casos, una segunda fase lquida si existe un sustrato inmiscible en agua como por
ejemplo los alcanos.

2.- La fase slida consiste en clulas individuales, bolitas de micelio, sustratos insolubles o
productos del metabolismo que precipitan.
3.- La fase gaseosa proporciona un reservorio para el suministro de oxgeno, para la
eliminacin del CO
2
o para el ajuste del pH con amonio gaseoso.

Una adecuada agitacin de un cultivo microbiano es esencial para la fermentacin ya que
produce los siguientes efectos en las tres fases:
1.- Dispersin del aire en la solucin de nutrientes.
2.- Homogeneizacin, para igualar la temperatura, pH y concentracin de nutrientes, en el
fermentador.

3.- Suspensin de los microorganismos y de los nutrientes slidos.
4.- Dispersin de los lquidos inmiscibles.
Bajo estas premisas se podra concluir que cuanto mayor sea la agitacin, mejor ser el
crecimiento. Sin embargo, la agitacin excesiva puede romper las clulas grandes e
incrementar la temperatura lo que ocasiona un descenso en la viabilidad celular. Por lo
tanto, se debe conseguir un balance entre la necesidad del mezclado y la necesidad de evitar
el dao celular.
Los diferentes tipos de agitacin que se utilizan en las fermentaciones se incluyen dentro de
las siguientes clases:


24
1.- Agitadores rotativos, los cuales tienen un sistema interno mecnico de agitacin.

2.- Columnas de burbujas, la agitacin se realiza mediante la introduccin de aire a
sobrepresin.

3.- Sistema aero-elevado (airlift), que pueden tener un circuito interno o externo. La mezcla
y circulacin de los fluidos son el resultado de las corrientes de aire introducido, las cuales
causan diferencias en la densidad dentro de las diferentes partes del fermentador.

De estos tres tipos el ms utilizado es el primero ya que es ms flexible en las condiciones
de operacin, es ms fcil de conseguir comercialmente, provee una eficiente transferencia
de gases a las clulas y es el tipo con el que se tiene ms experiencia.


































25
LA GLUCLISIS COMO EJEMPLO DE FERMENTACIN

Una fermentacin es una reaccin de oxidacin-reduccin interna equilibrada en la que
algunos tomos de la fuente de energa se reducen mientras que otros se oxidan, y la
energa se genera por fosforilacin a nivel de sustrato. Una ruta muy usada para la
fermentacin de la glucosa es la gluclisis o va de Embden- Meyerhof(Figura 4.1) que se
puede dividir en tres etapas. La etapa I incluye reacciones preparatorias que no implican ni
oxidacin ni reduccin y que no liberan energa pero conducen a la formacin a partir de la
glucosa de dos molculas del intermediario gliceraldehido-3-fosfato. En la etapa II ocurre
un proceso redox, la energa se conserva en forma de ATP y se forman dos molculas de
piruvato. En la etapa III tiene lugar una segunda reaccin redox y se originan los productos
de fermentacin por ejemplo etanol y CO
2
, cido lctico, cido propinico, etc.
Etapa I
La glucosa es fosforilada por el ATP originando glucosa-6-fosfato que es convertida a su
forma isomrica, fructuosa-6-fosfato y que a su vez mediante una segunda fosforilacin se
convierte en fructosa 1,6 difosfato, intermediario clave de la gluclisis. La enzima aldolasa
cataliza la ruptura de la fructosa 1,6 difosfato en dos molculas de tres tomos de carbono,
gliceraldehido -3-fosfato y su ismero dihidroxiacetona fosfato que posteriormente se
interconvierte en gliceraldehido-3-fosfato.
Etapa II
El gliceraldehido-3-fosfato es convertido en cido 1,3 difosfoglicrico, Una enzima
(gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa). Cuya coenzima es NAD acepta dos tomos de
hidrgeno y se convierte en NADH
2
. Esta reaccin ocurre dos veces, una por cada molcula
de gliceraldehido-3-fosfato. Simultneamente, cada molcula de gliceraldehido -3-fosfato
es fosforilada por adicin de una molcula de fosfato inorgnico, formndose 1,3
difosfoglicrico. Esta reaccin en la que el fosfato inorgnico se convierte en orgnico,
prepara el escenario para la conservacin de la energa por fosforilacin a nivel de sustrato.
La sntesis de ATP tiene lugar cuando cada molcula de cido 1,3- difosfoglicrico se
convierte en cido 3- fosfoglicricoquedespus se isomeriza en cido 2-fosfoglicerato .Este
a su vez se enoliza a fosfoenolpiruvato donde se da una segunda fosforilacin a nivel de
sustrato para finalmente originar piruvato. En la etapa II se consumen dos molculas de
ATP y se generan cuatro molculas de ATP. Por tanto, la ganancia neta del organismo es de
dos molculas de ATP por cada mol de glucosa fermentada.
Etapa III
La oxidacin continuada del gliceraldehido-3-fosfato slo puede proseguir si est presente
una molcula de NAD para aceptar electrones liberados. En la fermentacin, el NADH
producido por oxidacin del gliceraldehido-3-fosfato se oxida nuevamente a travs de
reacciones que suponen la reduccin del piruvato a una extensa variedad de productos de
fermentacin. En el caso de las levaduras, el piruvato se reduce a etanol y C0
2
, en las


26
bacterias lcticas, el piruvato se reduce a lactato y dependiendo del organismo se generan
una gran variedad de cidos orgnicos y alcoholes.
Figura N 5: LA GLUCLISIS COMO EJEMPLO DE FERMENTACIN






















































Fuente: (Gmez G.J. y C. Nieto., 2002).



27
TECNOLOGIA FERMENTACION
Los microbilogos definen la fermentacin como un proceso donde se utilizan
microorganismos para hacer un producto. En Bioprocess Internacional estn ms
interesados en la tecnologa recombinante que se utiliza para hacer enzimas y otra clase de
productos. En la industria el mtodo ms utilizado para fermentar es el batch a pesar de sus
limitaciones.

En una fermentacin batch se aade una solucin rica en nutrientes, se inoculan los
microorganismos y no se le aade nada ms excepto oxgeno (muchos microorganismos
utilizados en procesos biotecnolgicos son aerobios) y un antiespuma. Las condiciones en
este tipo de fermentador varan por la acumulacin de productos de desecho y la
multiplicacin de los microorganismos.

Luego de la inoculacin los microorganismos pasan por cuatro fases, una fase lag que es la
etapa donde las bacterias se estan adaptando, las bacterias estan sintetizando lo que
necesitan. En esta fase el medio tiene que ser el mismo. La fase log o tropofase es la fase de
crecimiento exponencial, las bacterias llevan a cabo fisin binaria (una clula produce dos,
dos producen cuatro.. 2n, n: # de generaciones que han ocurrido). En esta fase hay ms
clulas reproducindose que en cualquier otra etapa. En la fase estacionaria se comienzan a
terminar los nutrientes y se acumulan desechos, eso hace que el crecimiento disminuya o se
detenga. Por ltimo en la fase de muerte los nutrientes y la energa se han terminado y los
microorganismos mueren.

El modo de fermentacin fed-batch es uno en donde se le aaden nutrientes en pequeas
cantidades a los microorganismos en el proceso de crecimiento. La fermentacin de modo
continuo es un sistema abierto en donde se le aaden nutrientes a los microorganismos y se
retiran desperdicios.

En un turbidostato se controla la biomasa por medio de la medicin de turbidez.
En el proceso se pueden aadir vitaminas, minerales, aminocidos, cidos grasos y
dependiendo del tipo de bacteria, factores de crecimiento. Tambin se le aade un
antiburbujas para controlar el exceso de burbujas, se mezcla y se agita para que entre O2,
salga CO2 y se mezclen bien los nutrientes. Para un mejor rendimiento esto se hace a una
temperatura constante.
Las reacciones qumicas y mecnicas (agitacin) que ocurren dentro de un fermentador
aaden calor al sistema y si este calor aadido no es contrarrestado las clulas pueden morir
o dejar de producir, por lo tanto es necesario un sistema de enfriamiento y este debe ser
controlado.
Las guas de la WHO Worldhealthorganization y las reglamentaciones de FDA velan que el
producto sea uno seguro. Los procesos de fermentacin deben estar controlados por


28
dispositivos computacionales y no computacionales para llevar a prueba la presencia de
cidos nucleicos, controlar el pH, niveles de oxgeno, etc.
Se requieren contenedores para mantener los organismos genticamente creados guardados.
Estos se guardan congelados para evitar que estos se reproduzcan o congelados en seco
(liofilizacin). El proceso de congelar y descongelar puede matar las clulas por lo que se
utilizan crioprotectores como el glicerol.

De este banco de microorganismos congelados se hace un cultivo en platos de agar.
La fermentacin pasa por tres fases. Laboratorio (se utilizan platos petri, erlenmeyers, se
utilizan tcnicas de laboratorio sencillas; escala piloto (se llevan las condiciones ptimas a
una escala de 5-200 L); escala industrial, condiciones ptimas se llevan a una escala
industrial.
Fermentaciones llevadas a cabo por diversos microorganismos

a. Fermentacin de azcares
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi = 2 etanol + 2 CO
2
+ 2 ATP
Saccharomyces cerevisiae
Fermentacin homolctica
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi = 2 cido lctico + 2 ATP
Lactococcus, Streptococcus, Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus
Fermentacin heterolctica
Glucosa + 1 ADP + 1 Pi = cido lctico + 1 ATP + etanol + CO
2
Leuconostoc mesenteroides
Glucosa +2 ADP + 2Pi = cido lctico + 2 ATP + acetato + CO
2

Lactobacillus brevis
2 Glucosa +5 ADP + 5 Pi = 2 cido lctico + 3 acetato + 5 ATP Bifidobacteriumsp.

b. Fermentacin propinica
- Va de Propionibacterium y Veillonella sp.
3 lactato = 2 Propionato + acetato + CO
2
+ H
2
O
Glucosa = Oxalacetato + propionil-CoA
- Va de Clostridium propionicum y Megasphaera elsdnenii
Lactato = Propionato + acetato + CO
2

Glucosa = Propionato + acetato + CO
2

c. Fermentacin butrica
- Produccin de Acido butrico
4 Glucosa = 2 acetato + 3 butirato+ 8 H
2

Clostridium butyricum
- Produccin de cido caproico


29
Etanol + Acetato + CO
2
= Butirato + caproico + H
2

Clostridium kluyveri
- Produccin de butanol (acetona-butanol-etanol)
Glucosa = Butirato + acetato + butanol + acetona + acetona + etanol + CO
2
+ H
2
Clostridium acetobutylicum
Glucosa = Butirato + acetato + butanol + 2 propanol + CO
2
+ H
2

Clostridium butylicum

d. Fermentacin cido frmica
- Fermentacin acido mixta
Glucosa = Lactato, formiato, etanol, acetato, succinato (sin formiato liasa)
Glucosa = Lactato, CO
2
, H
2
, etanol, acetato, succinato (con formiato liasa)
- Fermentacin 2, 3 butilengliclica o 2,3 butanodilica (con gas y sin gas)
Glucosa = 2,3 Butanodiol, etanol, lactato, acetato, H
2
, CO
2
, acetona, formiato


e. Fermentacin actica
- Formacin de acetato por fermentacin cida homoactica de azcares Glucosa = 3
Acetatos (Quimioorgantrofos)
- Formacin de acetato por reduccin del CO
2
a acetato (Respiracin anaerobia:
Quimiolittrofos)
12 CO
2
+ 4 H
2
= Acetato + 2 H
2
O
Acetobacterium woodii y Clostridium aceticum pueden crecer quimiorganotrficamente
o quimiolitotrficamente efectuando una fermentacin homoactica de azcares o
mediante reduccin del CO
2
a acetato con el H
2
como donador de electrones.

f. Fermentacin de aminocidos
Formacin de Acetato, propionato, butirato, lactato, glicina, alcohol, CO
2
, H
2
, NH
3.

g. Fermentacin de cidos
Formacin de caproato, butirato, acetato, succinato, propionato, CO
2
, H
2.

h.Fermentacin de purinas y pirimidinas
Formacin de acetato, lactato, formiato, CO
2
, H
2
, NH
3.








30
FERMENTACIN ALCOHLICA

Es la transformacin cuantitativa de la glucosa en etanol y CO2. Se la encuentra en
levaduras, otros hongos y algunas bacterias. Proceso de fermentacin llevado a cabo por
Saccharomyces. El piruvato se reduce para formar etanol y CO2:
La fermentacin alcohlica es la base de las siguientes aplicaciones en la alimentacin
humana, pan, cerveza, vino y otras bebidas fermentadas. Aparte la levadura,
solamente se ha encontrado en Zymomonasmobilis, aunque este microorganismo sigue
una ruta metablica completamente distinta.
La fermentacin alcohlica (denominada tambin como fermentacin del etanol o
incluso fermentacin etlica) es un proceso biolgico de fermentacin en plena
ausencia de aire (oxgeno - O2), originado por la actividad de algunos microorganismos que
procesan los hidratos de carbono (por regla general azcares: como pueden ser por ejemplo
la glucosa, la fructosa, la sacarosa, el almidn, etc.) para obtener como productos finales:
un alcohol en forma de etanol (cuya frmula qumica es: CH3-CH2- OH), dixido de
carbono (CO2) en forma de gas y unas molculas de ATP que consumen los propios
microorganismos en su metabolismo celular energtico anaerbico. El etanol resultante se
emplea en la elaboracin de algunas bebidas alcohlicas, tales como el vino, la cerveza,
la sidra, el cava, etc. Aunque en la actualidad se empieza a sintetizar tambin etanol
mediante la fermentacin a nivel industrial a gran escala para ser empleado como
biocombustible.
Sobre la Fermentacin Alcohlica, Mesas, J. M. y M. T. Alegre (1999) estudiaron los
principales microorganismos implicados en la elaboracin del vino y de las posibles
alteraciones del mismo. Muestran los principales grupos de microorganismos y los
mecanismos bioqumicos por los que se llevan a cabo las distintas alteraciones.

Proceso Bioqumico de la Fermentacin Alcohlica
La fermentacin alcohlica tiene como finalidad biolgica proporcionar energa
anaerbica a los microorganismos unicelulares (levaduras) en ausencia de oxgeno para
ello disocian las molculas de glucosa y obtienen la energa necesaria para sobrevivir,
produciendo el alcohol y CO2 como desechos como consecuencia de la fermentacin. Las
levaduras y bacterias causantes de este fenmeno son microorganismos muy habituales en
las frutas y cereales y contribuyen en gran medida al sabor de los productos fermentados.
Una de las principales caractersticas de estos microorganismos es que viven en ambientes
completamente carentes de oxgeno (O2), mxime durante la reaccin qumica, por esta
razn se dice que la fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico.
En las Figuras N 2.3 y 2.4 se presentan las distintas etapas comprendidas en la
fermentacin alcohlica de la glucosa por la levadura. Desde la glucosa hasta la
sntesis de piruvato, se trata de una va metablica idntica a la gluclisis muscular,
denominada va de las triosas o de Embden-Meyerhof.


31

Las etapas fundamentales de la misma son:
1. Formacin de hexosas fosfato.
2. Formacin de triosas fosfato.
3. Oxidacin del gliceraldehdo-3P
4. Formacin del piruvato.
5. Descarboxilacin del piruvato.
6. Reduccin del acetaldehdo.
Figura N 6 Reacciones comprendidas en la fermentacin alcohlica de la
levadura
Fuente: (Pares I.F. y A. Jurez, 1997)


32






En ms detalle durante la fermentacin etlica en el interior de las levaduras, la va de la
gluclisis es idntica a la producida en el eritrocito (con la excepcin del piruvato que se
convierte finalmente en etanol). En primer lugar el piruvato se descarboxila mediante
la accin de la piruvatodescarboxilasa para dar como producto final acetaldehdo liberando
por ello dixido de carbono (CO2) a partir de iones del hidrgeno (H+) y electrones
del NADH. Tras esta operacin el NADH sintetizado en la reaccin bioqumica catalizada
por el GADHP se vuelve a oxidar por el alcohol deshidrogenasa, regenerando NAD+ para
la continuacin de la gluclisis y sintetizando al mismo tiempo etanol.
Se debe considerar que el etanol va aumentando de concentracin durante el proceso de
fermentacin y debido a que es un compuesto txico, cuando su concentracin alcanza
aproximadamente un 12% de volumen las levaduras tienden a morir. Esta es una de las
razones fundamentales por las que las bebidas alcohlicas (no destiladas) no alcanzan
valores superiores a los 20% de concentracin de etanol.
Figura N 7. Conversin del Piruvato a Etanol








Fuente:(GmezG.J.yC.Nieto., 2002).

Asimilacin Oxidativa y Fermentativa de la Glucosa

Las levaduras, tanto cuando metabolizan oxidativamente como fermentativamente la
glucosa, pueden asimilar una parte de la misma, acumulndola en la biomasa celular en
forma de glucgeno, grasa, etc. La asimilacin de la glucosa puede tener lugar tambin en
sistemas no proliferantes, donde se excluye la utilizacin de una parte del sustrato para la
biosntesis.
En un sistema no proliferante de clulas de levadura, puede obtenerse una
fermentacin activa de la glucosa con concentraciones de 5 al 10% a 30C y pH 3-4. En
soluciones ms diluidas de azcar es tambin fcil obtener un rpido consumo aerobio. La


33
fermentacin alcohlica y el proceso respiratorio permiten esperar, respectivamente, una
produccin de 44,8 ml de CO2 o un consumo de 134,4 ml de O2 por milimol de glucosa
utilizada.

En los sistemas no proliferantes, siempre y cuando el sustrato se encuentre en exceso, las
levaduras dan lugar a una asimilacin oxidativa o fermentativa de una fraccin de la
glucosa que se incorpora del medio. Se ha demostrado citolgica y qumicamente que esta
glucosa se transforma en una sustancia muy parecida al glucgeno del msculo.
La formacin de glucgeno tiene lugar a partir de la Glucosa-1-P

C
6
H
12
O
6
+ ATP G-6-P + ADP
Hexoquinasa
G-6-P G-1-P
Fosfohexosaisomerasa
G-1-P + UTP UDP-Glucosa + PPi
UTP-glucosa fosforilasa
La UDP-glucosa se polimeriza formndose un -1,4-glucano con la UDP-
glucanosintasa. Posteriormente se ramifica rompindose enlaces 1,4 y unindose de nuevo
por enlaces 1,6, por efecto de una amilo-1,6-glucosidasa.
Algunas levaduras acumulan tambin grasa como consecuencia de la asimilacin de la
glucosa. La grasa de las levaduras est constituida por una mezcla de lpidos.

Fermentacin Endgena
Las reservas formadas por asimilacin de la glucosa pueden utilizarse en ausencia de
sustrato exterior. La produccin de CO2 por una suspensin de clulas lavadas a pH 3-4
despus de diferentes tiempos de incubacin en glucosa al 10% depende de la
intensidad de la fermentacin aumenta con el tiempo de incubacin y, en
consecuencia, en funcin de la cantidad de reserva acumulada.

En condiciones basales se consumen por fermentacin endgena 60 mg de
glucgeno/h por cada 1000 g de peso seco. Despus de 1 h de incubacin en glucosa al
10%, se pasa a 200 mg/h por cada 100 g. Esta diferente velocidad de fermentacin de
glucgeno basal (previamente acumulado) y del de nueva sntesis ha hecho pensar que
quizs se trate de dos tipos de glucgeno diferentes. De hecho, hay evidencias que indican
que las levaduras pueden sintetizar dos tipos diferentes de molculas de glucgeno.



34
El carcter endgeno de la fermentacin puede ponerse de manifiesto mediante el uso de
inhibidores. El nitrato de uranilo a concentracin de 4x10-5 M no penetra en la clula,
pero inhibe en un 80% la utilizacin de la glucosa exterior. No obstante, no afecta en
absoluto a la fermentacin endgena. En cambio, el fluoruro sdico, que a una
concentracin 10-2 M penetra en la clula impidiendo la formacin de piruvato, inhibe
un 80% tanto la utilizacin de la glucosa exterior como la fermentacin endgena. El
DNP (dinitrofenol) a una concentracin 3x10-4 M, como la azida sdica o la aureomicina,
inhiben tanto la asimilacin oxidativa de la glucosa como la fermentativa.

El sistema no proliferante, ya est en una fase metablica oxidativa o fermentativa, no se
halla ni mucho menos restringido a la oxidacin de la glucosa hasta CO2 o a su
fermentacin hasta etanol y CO2, sino que pueden existir de forma alternativa o
concomitante a estos procesos otras actividades metablicas que provocan la
aparicin en el medio externo de diferentes tipos de metabolitos o incluso la
acumulacin intracelular de reservas.

Figura N 8: Fermentacin Endgena






Fuente:(GmezG.J.yC.Nieto., 2002).









35
BENEFICIOS
El beneficio industrial primario de la fermentacin es la conversin del mosto en vino,
cebada en cerveza y carbohidratos en dixido de carbono para hacer pan. Otros usos de la
fermentacin son la produccin de suplementos de vitamina B12, etc.
De acuerdo con Steinkraus (1995), la fermentacin de los alimentos sirve a 5 propsitos
generales:
Enriquecimiento de la dieta a travs del desarrollo de una diversidad de sabores,
aromas y texturas en los substratos de los alimentos.
Preservacin de cantidades substanciales de alimentos a travs de cido lctico,
etanol, cido actico y fermentaciones alcalinas.
Enriquecimiento de substratos alimenticios con protena, aminocidos, cidos
grasos esenciales y vitaminas.
Detoxificacin durante el proceso de fermentacin alimenticia.
Disminucin de los tiempos de cocinado y de los requerimientos de combustible.
La fermentacin tiene algunos usos exclusivos para los alimentos. Puede producir
nutrientes importantes o eliminar antinutrientes. Los alimentos pueden preservarse por
fermentacin, la fermentacin hace uso de energa de los alimentos y puede crear
condiciones inadecuadas para organismos indeseables. Por ejemplo, avinagrando el cido
producido por la bacteria dominante, inhibe el crecimiento de todos los otros
microorganismos.
De acuerdo al tipo de fermentacin, algunos productos (ej. alcohol fusel) pueden ser
dainos para la salud. En alquimia, la fermentacin es a menudo lo mismo que
putrefaccin, significando permitir el pudrimiento o la descomposicin natural de la
sustancia.









36
ANEXOS






































Dihidroxiacetona fosfato
2 fosfoglicerato - P


37
FIGURA 4.1 Gluclisis como ejemplo de la fermentacin.
CULTIVO DE CLULAS


Si se quiere obtener un cultivo o lnea celular de clulas madre embrionarias como el
ejemplo de la imagen, el proceso comienza aislando, con tcnicas de microciruga, la masa
celular interna del embrin. Esta masa de clulas se coloca sobre un soporte
de vidrio o plstico donde existe un lquido rico en los nutrientes que necesitan las clulas
para multiplicarse y crecer. Conforme las clulas van dividindose y aumenta su nmero, se
va repitiendo el proceso. As al final se obtiene una lnea celular de clulas embrionarias.
Este cultivo seguir dividindose siempre que se mantenga bajo control el ambiente y se
aporten los nutrientes necesarios para crecer.







38
USO DE ENZIMAS
Composicin de los sustratos especficos en los ingredientes alimenticios.


Adaptado de varias fuentes. MS = Materia seca. El uso de enzimas es una prctica comn
en las dietas avcolas elaboradas a base de trigo y cebada en todo el mundo; sin embargo,
los fabricantes de enzimas han encontrado muchas dificultades para
desarrollar productos eficaces y costeables para las dietas preparadas con maz y pasta de
soya, o bien con sorgo y pasta de soya.

















39
USO DE LA FERMENTACIN MICROBIANA


Los productos ya ilustrados se generan por medio de diferentes tipos de fermentacin. La
fermentacin lctica (queso, yogurt), fermentacin alcohlica (vino, cerveza, alcohol,
cigarrillos, chocolate, pan y otros) y la fermentacin actica (vinagre).
Un ejemplo de esta tecnologa es la produccin industrial de eritromicina, antibitico
producido por el actinomiceto Gram positivo Saccharopolyspora erythraea bajo
fermentacin aerbica utilizando aceite de soya como fuente principal de carbono y
acidopropionico como precursor. La produccin de eritromicina es actualmente llevada a
cabo en la planta de Abbott en P.R.
La fermentacin microbiana tambin es un medio de produccin de vitaminas. Entre
el grupo de vitaminas generadas por este medio podemos encontrar las siguientes: cido
ascrbico, riboflavinas, beta-caroteno, vitamina B12, cido flico y la pro vitamina A. Las
de mayor importancia a nivel industrial son: riboflavina, beta-caroteno y vitamina B12.









40
CONCLUSIONES
1. Aprendimos que es la fermentacin microbiana y en que consiste.
2. Reconocimos los diferentes procesos que se realzan en una fermentacin
microbiana.
3. Dimos a conocer algunas aplicaciones y usos de la fermentacin microbiana en la
industria.
4. Explicamos cmo se emplea este tipo de fermentacin en la biotecnologa.
5. Reconocimos los diferentes ambientes de cultivo en donde se puede desarrollar la
fermentacin microbiana.


BIBLIOGRAFIA
http://microindustrialfermentacion.espacioblog.com/post/2006/02/01/introduccion-
fermentacion-microbiana
http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Inv
estigacion/Octubre_2011/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAPITULO%20
N%BA%2002.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3n
http://microindustrialfermentacion.espacioblog.com/
http://microindustrialfermentacion.espacioblog.com/post/2006/02/01/introduccion-
fermentacion-microbiana
http://microindustrialfermentacion.espacioblog.com/
http://fermentacionevelialosmejores.blogspot.com/p/el-proceso-de-la-
fermentacion.html
TERESA AUDESIRKGERALD AUDESIRKBRUCE E. BYERS , biologa la vida
en la tierra, editorial Pearson Educacin de Mxico, 2008
PRESCOTT, L. M., HARLEY, J. P., Y KLEIN, D. A. Microbiologa. 4 edicin.
McGraw-Hill Interamericana, 1999.
M. T. MADIGAN, J. M. MARTINKO, J. PARKER. Biologa de los
Microorganismos, 10 edicin, Pearson Prentice Hall, Madrid (Espaa), 2004.