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J Bras Patol Med Lab v. 46 n. 5 p. 407-413 outubro 2010

Efeito do ch verde (Camelia sinensis) em ratos com
obesidade induzida por dieta hipercalrica
Antiobesity effects of green tea (Camelia sinensis) in high caloric diet-induced obese rats
Marta Vera-Cruz
1
; Elaine Nunes
2
; Lvia Mendona
3
; rika Chaves
4
; Maria Luiza de Lima Aguilar Fernandes
5
Introduo: A obesidade fator de risco para vrias doenas. Estudos tm demonstrado que os polifenis
do ch verde auxiliam na perda de peso e interferem nos mecanismos de diversas doenas. A insulina,
agindo por meio de seu receptor (IR), desencadeia uma srie de respostas. A via IR/Shc ligada ao
crescimento celular e mitognese. Objetivos: Estudar o efeito do ch verde no peso corporal e no
teste de tolerncia glicose (GTT). No fgado, estudar a fosforilao do IR, a presena e a expresso de
IR e Shc e suas alteraes morfolgicas. Material e mtodos: Ratos Wistar, jovens e tratados com dieta
hipercalrica ou dieta prpria para ratos, foram submetidos a tratamento com ch verde. Para retirada
do fgado, aps anestesia, foi infundida insulina ou soluo salina. Para avaliar o grau de fosforilao
do IR, o fragmento foi homogeneizado e submetido a tcnicas de imunoprecipitao e imunoblotting.
Para anlise morfolgica, foi utilizada a tcnica de colorao por hematoxilina e eosina e para localizar a
presena de IR e Shc, tcnica de imuno-histoqumica. Resultados e concluso: Observamos diminuio
do peso corporal e da esteatose no fgado e melhora no GTT. Houve aumento da fosforilao do IR no
fgado dos animais obesos tratados com relao aos obesos no submetidos a tratamento. Vericaram-se
leses que poderiam ser associadas ao tratamento, como necrose focal. A anlise imuno-histoqumica
demonstrou presena de IR e Shc em todos os grupos estudados e sugeriu alteraes na expresso de
IR e Shc nos grupos obesos e obesos tratados.
resumo unitermos
Obesidade
Ch verde
Sinalizao da insulina
Receptor da insulina
Shc
Imuno-histoqumica
abstract
Introduction: Obesity is a risk factor for several diseases. Studies have shown that polyphenols in green tea aid
in weight loss and inuence the mechanisms of several diseases. Insulin, acting through its receptor (IR), triggers
a series of responses. IR/Shc pathway is linked to cell growth and mitogenesis. Objectives: To investigate the
effect of green tea on body weight and on glucose tolerance test (GTT). To study IR phosphorylation, IR/Shc
presence and expression and their morphological changes in the liver. Material and methods: Young Wistar
rats were fed with high-calorie diet or proper rat food diet and subsequently were treated with green tea. After
anesthesia, insulin or saline solution was infused to remove the liver. A liver fragment was homogenized and
underwent immunoprecipitation and immunoblotting in order to assess IR phosphorylation levels. Hematoxylin
and eosin staining was applied for morphological analysis and immunohistochemistry was carried out to
locate the presence of IR and Shc. Results and conclusion: It was observed a reduction in body weight and
in liver steatosis as well as an improvement in GTT. There was also an increase in IR phosphorylation in
treated animals in comparison with non-treated ones. Lesions such as focal necrosis were observed and may
be associated with the treatment. The immunohistochemical analysis demonstrated the presence of IR and
Shc in all groups and suggested changes in IR and Shc expression in both treated and non-treated groups.
key words
Obesity
Green tea
Insulin signaling
Insulin receptor
Shc
Immunohystochemistry
1. Mestra em Cincias Mdicas pela Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ).
2. Graduada em Nutrio pela UERJ.
3. Graduanda em Nutrio pela UERJ.
4. Mestra em Cincias Morfolgicas pela UERJ; professora de Anatomia Patolgica da Universidade Gama Filho (UGF) e de Patologia da Universidade Estcio de S (UNESA).
5. Doutora em Clnica Mdica pela Universidade de Campinas (UNICAMP); professora adjunta da disciplina de Patologia Geral da Faculdade de Cincias Mdicas (FCM) da UERJ.
Primeira submisso em 11/12/09
ltima submisso em 08/07/10
Aceito para publicao em 17/07/10
Publicado em 20/10/10
ARTIGO ORIGINAL
ORIGINAL PAPER
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VERA-CRUZ, M. et al. Efeito do ch verde (Camelia sinensis) em ratos com obesidade induzida por dieta hipercalrica J Bras Patol Med Lab v. 46 n. 5 p. 407-413 outubro 2010
Introduo
A obesidade considerada atualmente um problema de
sade pblica e est relacionada com vrias doenas, como
diabetes mellitus tipo 2 (DM2), sndrome metablica (SM),
esteatose heptica, cnceres, entre outras
(2)
.
O ch verde tem sido muito utilizado pela divulgao
de seus efeitos, pelo baixo custo e pela fcil acessibilidade.
Em nosso meio, tem sido utilizado principalmente por
pessoas obesas, com sobrepeso e magras com a nalidade
de emagrecimento ou manuteno do peso.
O ch verde e seus componentes tm demonstrado
signicantes propriedades antidiabticas, antioxidantes,
anticarcinognicas, entre outras, em estudos em humanos,
animais e in vitro. Seus principais componentes qumicos
teraputicos so as catequinas, sendo a galato-3-epigaloca-
tequina (EGCG) a mais abundante e importante do ponto
de vista farmacolgico
(2, 8)
.
Sabemos que a obesidade desencadeia processos de
resistncia insulina. A insulina, alm de atuar na homeos-
tasia da glicose, regula a sntese e o estoque da gordura
e a sntese proteica, agindo tambm em processos no
metablicos, como o crescimento e a diferenciao celular.
De forma simplicada, podemos dizer que a insuli-
na, ao se ligar a seu receptor especco, o receptor de
insulina (IR), faz com que este sofra autofosforilao em
tirosina, tornando-se capaz de fosforilar e acionar duas
importantes vias: a metablica, por meio dos substratos do
receptor da insulina (IRSs), e a de crescimento ou prolifera-
tiva, pela fosforilao da protena semelhante ao colgeno
com homologia Src (Shc), permitindo que as diversas aes
da insulina possam ser exercidas
(1)
. A protena Shc tambm
tem sido descrita na carcinognese e em outros processos
que envolvem espcies reativas de oxignio
(3)
.
O fgado exerce papel central no metabolismo de glicose
e lipdios, e a resistncia insulina no fgado grande-
mente responsvel pelo desenvolvimento da hiperglicemia
do jejum e da doena gordurosa no alcolica do fgado
(DGNAF), alteraes muito comuns na obesidade.
Efeitos adversos pelo uso do ch verde e seus compo-
nentes, como a hepatotoxicidade, tm sido relatados em
seres humanos
(5)
.
No sentido de contribuir para o entendimento das aes
e dos mecanismos moleculares do ch verde, importante
estudar seus efeitos no peso corporal e no teste de tole-
rncia glicose; no fgado, suas alteraes morfolgicas, a
fosforilao do IR e a expresso do IR e da Shc.
Material e mtodos
Ratos da linhagem Wistar-Hannover, machos, aps
desmame, fornecidos pelo Laboratrio de Cirurgia Experi-
mental da Universidade do Estado do Rio de Janeiro (UERJ),
foram divididos de forma aleatria em dois grupos de acor-
do com a dieta a que foram submetidos. O denominado
grupo obeso foi constitudo por animais que receberam
dieta com alta densidade energtica (ADE) para induzir
obesidade e o denominado grupo controle, por animais que
receberam dieta prpria para ratos (Purina). Os experimen-
tos seguiram as normas estabelecidas no Colgio Brasileiro
de Experimentao Animal e aprovadas pelo Comit de
tica Animal do Centro Biomdico da UERJ.
Aps seis meses, caracterizou-se o processo de obesida-
de e todos os animais foram subdivididos aleatoriamente
em grupos tratados e no tratados. Os grupos submetidos
a tratamento receberam 2 ml de ch preparado com 1 g
de folhas de ch verde seco (Midori Ltda.) em 75 ml de
gua deionizada, fervida a 90C durante as duas semanas
nais do experimento, por gavagem, para garantir a total
ingesto do ch.
Todos os grupos receberam gua ad libitum durante
todo o perodo do estudo.
Teste de tolerncia glicose (GTT)
No dia do experimento, os animais foram submetidos a
jejum de seis a oito horas, anestesiados com tiopental sdico
e utilizados aps perda de reexo corneano ou pedioso. A
soluo de glicose utilizada foi de 25% (calcula-se oito vezes
o peso do animal para dose ideal). Aps a infuso da glicose,
as glicemias foram mensuradas nos tempos de 0, 15, 30, 60
e 120 minutos.
Extrao do fgado: imunoprecipitao e
immunoblotting
Para retirada do fgado, os animais foram submetidos
a jejum e anestesiados da maneira j descrita. Foi realizada
laparotomia mediana e injetada em bolo, na veia porta,
soluo salina (grupo negativo) ou 500 g/kg de insulina
regular, diluda em 120 g/ml em igual volume de salina
(grupo positivo). Aps 60 segundos, tempo de melhor
ao da insulina no fgado
(7)
, fragmentos do rgo foram
retirados e imediatamente homogeneizados em tampo
especco para os procedimentos de imunoprecipitao.
O material insolvel foi removido por centrifugao a
4C. A concentrao de protena do sobrenadante foi
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determinada e todas as amostras contendo igual quantida-
de de protena total foram incubadas com 10 l de anti-IR
a 4C, sendo realizada a seguir incubao com protena
A-Sepharose 6MB. Os pellets foram lavados com tampo
a 4C e ressuspensos em tampo de Laemmli, fervidos e,
em seguida, carregados no gel de poliacrilamida. Aps o
trmino da separao, as protenas foram transferidas para
uma membrana de nitrocelulose (GE cat. 806204-26), blo-
tadas com anticorpos antifosfotirosina e, ento, reveladas
por quimiluminescncia.
Apresentao dos dados e anlise estatstica
As bandas especcas presentes nos blots foram quanti-
cadas por densitometria. Os dados foram analisados por
teste t de Student para dados no pareados com signicn-
cia de 5% (p < 0,05) e resultados expressos com a mdia
+/- erro padro de uma variao percentual entre os grupos
analisados. Para anlise dos efeitos dos testes de tolerncia
glicose e peso corporal utilizou-se a anlise de varincia
(ANOVA) para dados multivariveis com signicncia de
5% (p < 0,05).
Processamento histolgico e imuno-
histoqumico
Fragmentos de fgado xados em formol neutro includos
em parana foram cortados e corados com hematoxilina-eosi-
na para microscopia tica e incubados com anticorpos anti-IR
e anti-Shc (Santa Cruz, EUA) para anlise imuno-histoqumica.
A recuperao antignica foi feita em tampo citrato (pH 6)
em panela a vapor (Clocking Chamber Pro-Biocare Medical).
O controle negativo constituiu da omisso do anticorpo pri-
mrio. No controle positivo foi utilizado tecido pancretico
para observao das ilhotas de Langerhans.
O exame e a documentao do material foram feitos
em microscpio Leitz Dialux. A severidade das alteraes
hepticas, tais como necrose e esteatose, observada pela mi-
croscopia tica, foi graduada nos termos da seguinte escala
arbitrria: nihil (ausncia de alteraes do tipo esteatose e
ou necrose celular), + ou leve (no caso de presena esparsa
de esteatose e/ou necrose), ++ ou moderada (quando as
leses descritas mostram tendncia conuncia) e +++
ou acentuada (quando as leses so difusas).
Para a leitura das lminas, foi considerado padro de
normalidade para o fgado: bom estado de conservao,
ausncia de inltrado inamatrio, homogeneidade de
aspecto, identicao dos lbulos hepticos e espao porta
ntegro, veias hepticas bem denidas, cordes sinusoidais
presentes e ntegros. Os hepatcitos considerados dentro
dos limites da normalidade foram aqueles com um ncleo
central e nuclolo evidente, citoplasma com reas baslas
e acidlas e ausncia de vacuolizao.
As clulas hepticas foram incubadas com anti-IR e anti-
Shc e avaliadas de acordo com escala arbitrria e objetiva
de 40. Foi considerada marcao citoplasmtica, sendo
excludos aqueles com outro tipo de reatividade: nihil (au-
sncia de positividade), + ou leve (clulas esparsas), ++ ou
moderada (acima de uma por campo) e +++ ou positividade
acentuada (quando conuente).
Resultados
Efeito da dieta de alta densidade energtica
(ADE)
Inicialmente, submeteu-se um grupo de 16 animais no
primeiro dia de desmame ADE durante seis meses. Todos os
animais submetidos ADE apresentaram ganho corporal sig-
nicativamente superior ao grupo submetido dieta padro
p < 0,01 (Figura 1).
Efeito do ch verde no peso corporal
Foi observada diferena signicativa de perda de peso
corporal nos animais controles tratados com ch verde em
relao ao grupo de animais controles que no receberam
o mesmo tratamento p < 0,01 (Figura 2).
Figura 1 Efeito da ADE no peso corporal
ADE: dieta de alta densidade energtica.
600
500
400
300
200
100
0
G
r
a
v
e
Dieta padro Dieta ADE
* *p < 0,01
Incio dieta padro
Aps seis meses dieta
padro
Incio dieta de alta
densidade energtica
Aps seis meses dieta de
alta densidade energtica
Figura 2 Efeito do tratamento com ch verde no peso corporal de animais controles
*
*p < 0,01
Incio controle sem
tratamento
Final controle sem
tratamento
Incio controle tratado
Fim controle tratado
380
360
340
320
300
280
260
240
220
200
G
r
a
v
e
410
Tambm foi notada diferena signicativa de perda de
peso corporal nos animais obesos tratados com ch verde
em relao ao grupo de animais obesos que no receberam
o mesmo tratamento p < 0,01 (Figura 3).
Efeito do ch verde no GTT
Ao analisarmos as glicemias aps infuso da glicose nos
tempos determinados, observamos que os animais obesos
tratados apresentaram diminuio signicativa da glicemia
em relao aos grupos controles e obesos sem tratamento
nos tempos de 60 e 120 minutos p < 0,001. Os animais
do grupo controle submetidos a tratamento apresentaram
glicemias signicativamente inferiores no tempo de 120
minutos em relao aos controles e aos obesos sem trata-
mento p < 0,05. O grupo de animais obesos sem tratamento
manteve glicemias signicativamente mais elevadas em
relao a todos os grupos p < 0,001 (Figura 4).
Efeito do ch verde na expresso e na
fosforilao em tirosina do IR no fgado
Foram realizados trs experimentos utilizando tcnicas
de imunoprecitao e immunoblotting em extratos de fga-
do. Cada experimento utilizou um animal de cada um dos
quatro grupos propostos, em um total de 12 animais. No
foi detectada alterao signicativa no nvel de expresso
proteica do receptor de insulina em todos os grupos estu-
dados, como determinado aps stripping das membranas de
nitrocelulose dos imunoprecipitados de anti-IR e posterior
immunoblotting com anticorpo anti-IR.
Houve aumento signicativo no grau de fosforilao
em tirosina do IR no fgado dos animais obesos tratados
com ch verde em relao ao grupo de animais obesos no
submetido ao tratamento p < 0,05 (Figura 5).
Anlise morfolgica
Animais controles: dentro dos limites da normali-
dade (Figura 6A);
controles tratados: hiperplasia e hipertroa de
clulas de Kupffer com pigmentos de hemosside-
rina. Microvacolos citoplasmticos, congesto
sinusoidal, discreta irregularidade estrutural de
localizao centrolobular, dilatao sinusoidal,
vacuolizao centrolobular, necrose hepatocitria
focal (++) (Figura 6B);
animais obesos: esteatose macro e microvesicular
(++ e +++) periportal e centrolobular, edema,
vacuolizao citoplasmtica e nuclear, inltrado
inflamatrio (+), hipertrofia e hiperplasia das
clulas de Kupffer, balonizao de hepatcitos
(Figura 6C);
animais obesos tratados: esteatose centrolobular
micro e macrovesicular (+ e ++), em menor escala
quando comparados com os animais obesos que
no tomaram ch. Vacuolizao citoplasmtica,
degenerao tipo glicognica, balonizao de he-
patcitos, hiperplasia e hipertroa das clulas de
Kupffer, pigmentos de hemossiderina, congesto e
VERA-CRUZ, M. et al. Efeito do ch verde (Camelia sinensis) em ratos com obesidade induzida por dieta hipercalrica J Bras Patol Med Lab v. 46 n. 5 p. 407-413 outubro 2010
Figura 3 Efeito do tratamento com ch verde no peso corporal dos animais obesos
*
*p < 0,01
Incio obesos sem
tratamento
Final obesos sem
tratamento
Incio obesos tratado
Final obesos aps
tratamento
580
560
540
520
500
480
460
440
420
400
G
r
a
v
e
Sem tratamento Tratados
Figura 4 GTT. As glicemias do sangue venoso foram aferidas nos tempos determi-
nados e analisadas estatisticamente por ANOVA de comparaes mltiplas
GTT: teste de tolerncia glicose; ANOVA: anlise de varincia.
300
250
200
150
100
50
m
g
/
d
l
0 15 min 60 min 120 min
Controle 101 154 138 103
Controle tratado 88 141 122 61
Obeso 109 193 190 130
Obeso tratado 115 258 69 65
Figura 5 Efeito do tratamento com ch verde no grau de fosforilao do IR em
fgado de ratos obesos
IR: receptor de insulina.
Fgado
*
*p < 0,05
Obeso sem insulina
Obeso com insulina
Obeso tratado sem insulina
Obeso tratado com insulina
180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
U
n
i
d
a
d
e
s

a
r
b
i
t
r

r
i
a
s
O- O+ OT- OT+
IP: Anti-IR
IB: Anti-PY
411
Figura 6 Achados histopatolgicos do fgado de ratos Wistar. (A) Controle: hepat-
citos normais em relao microscopia tica (HE, 20 [7.1]); (B) controle tratado:
destrabeculao, necrose hepatocitria focal (HE, 40 [7.1]), (C) obeso: esteatose
macro e microvacuolar (HE, 40 [5.1]); (D) obeso tratado: congesto acentuada,
dilatao sinusoidal (HE, 40 [4.1])
HE: hematoxilina e eosina.
A
C
B
D
Figura 7 Positividade da reao anti-IR em fgado de ratos Wistar. (A) Controle:
acentuada positividade (anti-IR, 20 [5.1]); (B) controle tratado: moderada positivi-
dade, hipertroa e hiperplasia de clulas de Kupffer (anti-IR, 20 [4.1]); (C) obeso:
leve positividade em citoplasma (anti-IR, 40 [4.1]); (D) obeso tratado: positividade
leve, necrose focal (anti-IR, 40 [5.1])
IR: receptor de insulina.
C D
A B
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dilatao sinusoidal centrolobular, destrabeculao,
inltrado inamatrio discreto, por vezes mode-
rado, em uma ocasio, inltrado portal e necrose
hepatocelular focal (++ a +++). Esse conjunto de
leses caracteriza uma hepatite reacional por pro-
vvel toxicidade (Figura 6D).
Receptor da insulina
Controles: positividade acentuada nos animais
controles em relao aos outros grupos incubados
com o IR (+++) (Figura 7A);
controles tratados: positividade moderada, padro
citoplasmtico (++) (Figura 7B);
obesos: positividade leve (+). Nveis bem inferiores
aos encontrados nos ratos controles e controles
tratados com ch verde (Figura 7C);
obesos tratados: positividade citoplasmtica mo-
derada em grupos de clulas, maior vacuolizao
intracitoplasmtica (++) (Figura 7D).
Protena Shc
Controles: positividade leve, centrolobular (+)
(Figura 8A);
controles tratados: positividade leve, sem grandes
variaes, padro citoplasmtico (+) (Figura 8B);
obesos: observou-se marcao ou positividade em
nvel considerado acentuado, principalmente nas
clulas com depsitos de gordura (esteatose) e de
inltrado inamatrio. A expresso foi mais elevada
Figura 8 Positividade da reao anti-Shc em fgado de ratos Wistar. (A) controle:
positividade moderada (anti-Shc, 40 aproximadamente 5.1); (B) controle tratado:
positividade leve, necrose hepatocitria focal (anti-Shc, 40 aproximadamente 5.1); (C)
obeso: acentuada positividade (anti-Shc, 40 aproximadamente 5.1); (D) obeso tratado:
positividade acentuada, discreto inltrado portal (anti-Shc, 40 aproximadamente 7.1)
Shc: protena semelhante ao colgeno com homologia Src.
A
C
B
D
em relao aos modelos controles e controles tratados
(+++) (Figura 8C);
obesos tratados: positividade citoplasmtica fez-
se moderada, em certos grupos de clulas, maior
vacuolizao e maior concentrao do anticorpo
(++) (Figura 8D).
Discusso
Neste trabalho avaliamos os efeitos do ch verde no
peso corporal e no GTT. No fgado, estudamos as alteraes
morfolgicas, a fosforilao do IR e a expresso do IR e da
Shc por anlise imuno-histoqumica.
412
Nossos resultados evidenciaram uma perda do peso
corporal signicativa nos animais obesos e controles trata-
dos com ch verde.
No GTT, encontramos uma diminuio signicativa
da glicemia nos tempos de 60 e 120 minutos nos grupos
tratados com ch verde e glicemias signicativamente
e persistentemente mais elevadas no grupo obeso sem
tratamento.
Chamou ateno microscopia uma diversidade de
leses hepticas em todos os grupos analisados, exceto
dos animais controles no submetidos a tratamento, que
apresentaram fgado sem alteraes.
Nos animais obesos observou-se esteatose macro e
micro vesicular associadas a um processo inamatrio leve.
Foi vericada uma diminuio dessas alteraes nos animais
obesos tratados, o que conrmou a diminuio da gordura,
j que esses modelos perderam peso corporal.
A variabilidade gentica um fator crtico que inuencia
a susceptibilidade da leso induzida por droga. Tal leso
ocorre em trs possibilidades: a) toxicidade direta hepato-
citria ou em clulas epiteliais biliares, levando a necrose,
apoptose ou perda da funo celular; b) pela converso
de uma toxina xenobitica para uma toxina ativa; c) por
mecanismos imunes, usualmente por droga ou metablito
agindo como um hapteno, convertendo a protena celular
em um imungeno. O signicado da esteatose depende
da causa e da gravidade.
Os animais que receberam tratamento com ch verde
apresentaram leses no fgado, o que nos surpreendeu, j
que o uso do ch ocasionou melhoria no sinal insulnico e
diminuio da gordura corporal. Essas leses se caracteriza-
ram por congesto, inltrado inamatrio focal, hipertroa
e hiperplasia de clulas de Kupffer com pigmentos de he-
mossiderina. As leses descritas podem estar relacionadas
com um processo de citotoxicidade ocasionado pelo ch
verde, como acima mencionado, provavelmente sendo o
resultado de uma agresso multifatorial. Os pigmentos de
hemossiderina esto relacionados com o ferro presente nas
hemcias, caracterizando a digesto pelos macrfagos no
processo de depurao sinusoidal proveniente da congesto.
A necrose hepatocelular focal tambm foi encontrada nos
animais que tomaram o ch.
Distines entre apoptose, necrose e autofagia implicam
em diferenas no modo de morte e em alteraes morfolgicas,
bioqumicas e moleculares. A morte celular programada um
conceito importante e geneticamente controlada. A apoptose
e a autofagia so os dois tipos fundamentais de morte celular
programada. Alm disso, achados recentes evidenciam que a
necrose, em certos casos, pode ser iniciada ou modulada pelos
mecanismos de controle programado
(4)
.
Os camundongos alimentados com dieta de ADE e
tratados com a EGCG apresentaram uma diminuio da
esteatose heptica e dos nveis sricos de amino alanina
transferase. O estudo demonstrou tambm uma dimi-
nuio da resistncia insulina quando a esteatose foi
suprimida
(2)
.
Com relao fosforilao do IR, encontramos um au-
mento no grau de fosforilao em tirosina do IR no fgado de
ratos obesos tratados com ch verde comparado ao grupo
de animais obesos no submetidos ao tratamento. Sabemos
da importncia do fgado na sinalizao da insulina e esses
efeitos no grau de fosforilao podem ter implicaes na
melhora da resistncia insulina.
Estudos em camundongos knockout para o IR no fgado
(LIRKO) demonstraram um aumento da glicemia e acentua-
da hiperinsulinemia nesses animais. Esses achados podem
ser explicados pelo impedimento da captao e degradao
da insulina pelo fgado, que mediada pelo seu receptor. A
anlise histolgica do fgado desses animais revelou ainda
um aumento do acmulo de lipdios acompanhado de uma
diminuio de 50% nos nveis de albumina srica, sugerindo
um decrscimo na funo heptica
(1)
.
Na anlise imuno-histoqumica dos fgados incubados
com anti-IR, houve positividade em todos os modelos estu-
dados, caracterizando a presena do receptor de insulina.
Os animais controle e controle tratado sinalizaram uma
variao do anti-IR muito discreta entre si, na qual o controle
apresentou uma distribuio levemente maior do IR com
relao ao controle tratado. Nos animais obesos tratados
comparados aos obesos sem tratamento, foi sinalizado um
leve aumento do mesmo em sua distribuio.
Nosso trabalho tambm analisou a protena Shc A no
que diz respeito presena e expresso nos modelos
aqui propostos.
A protena Shc A expressa em trs isoformas com massas
moleculares distintas: 46, 52 e 66 Kd. A isoforma p66Shc faria
parte de um complexo sistema regulador endgeno mitocon-
drial na produo de radicais livres, bem como de apoptose
programada
(3, 6)
.
De acordo com a anlise imuno-histoqumica, a pre-
sena da protena Shc foi detectada em todos os modelos
estudados, sugerindo uma expresso maior nos animais
obesos, com distribuio acentuada difusa e intracito-
plasmtica e, nos obesos tratados com uma distribuio
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tambm difusa e citoplasmtica, em menor intensidade.
Os animais controles e controles tratados apresentaram
distribuio muito discreta da protena.
Observamos tambm na imuno-histoqumica uma
exacerbada reatividade da Shc A nos animais tratados que
apresentavam leses do tipo necrose, esteatose, congesto,
hipertroa e hiperplasia Kupfferiana, com distribuio acen-
tuada nos animais obesos e moderada nos obesos tratados,
como relatado anteriormente.
A necrose foi um dos achados histopatolgicos nos
animais tratados com ch verde. A p66Shc parece induzir
apoptose
(6)
. Essas leses nos direcionam para uma possvel
ligao do ch com toxicidade e morte celular, j que a
EGCG tambm estimula o processo de apoptose
(8)
.
O anticorpo utilizado foi o Shc A, especco para as suas
trs isoformas ao mesmo tempo, e, portanto, no podemos
armar qual das trs isoformas foi a predominante nos
nossos resultados.
Concluindo, neste trabalho observamos que os animais
tratados com o ch verde apresentaram diminuio do peso
corporal e melhora do GTT.
Observou-se tambm, no fgado, um aumento da
fosforilao do IR e a anlise imuno-histoqumica sugeriu
alteraes na expresso de IR e Shc dos animais obesos tra-
tados com relao aos obesos no submetidos a tratamento.
Apesar de no se ter esperado no presente estudo uma
relao direta entre ch verde e efeitos adversos no fgado,
observou-se leses que poderiam ser associadas ao trata-
mento, tais como necrose focal.
Agradecimentos
Agradecemos professora Albanita Vianna de Oliveira
pela leitura e pela anlise das lminas deste trabalho e ao
apoio nanceiro da Fundao Carlos Chagas de Amparo
Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) .
Referncias
1. BIDDINGER, S. B.; KAHN, C. R. From mice to men: insights
into the insulin resistance syndromes. Ann Rev Physiol,
v. 68, p. 123-58, 2005.
2. BOSE, M. et al. The major green tea polyphenol,
-epigallocatechin-3-gallate, inhibits obesity, metabolic
syndrome, and fatty liver disease in high-fat-fed mice.
J Nutr, v. 138, p. 1677-83, 2008.
3. COSENTINO, F. et al. Final common molecular pathways of
aging and cardiovascular disease: role of the p66Shc
protein. Arterioscler Thromb Vasc, v. 28, p. 622-8,
2008.
4. HOTCHKISS, R. S. et al. Cell death. N Engl J Med, v. 361,
n. 16, p. 1570-83, 2009.
5. MAZZANTI, G. et al. Hepatotoxicity from green tea: a review
of the literature and two unpublished cases. Eur J Clin
Pharmacol, v. 65, p. 331-41, 2006.
6. MIGLIACCIO, E. et al. Apoptosis and aging: role of p66Shc

redox protein. Antioxid Redox Signal, v. 8, n. 4,
p. 600-8, 2006.
7. SAAD, M. J. A. et al. Regulation of insulin receptor
substrate-1 in liver and muscle of animal models
of insulin resistance. J Clin Invest, v. 90, p.1839-49,
1992.
8. YANG, C. S. et al. Cancer prevention by tea: animal studies,
molecular mechanisms and human relevance. Nat Rev
Cancer, v. 9, n. 6, p. 429-39, 2009.
VERA-CRUZ, M. et al. Efeito do ch verde (Camelia sinensis) em ratos com obesidade induzida por dieta hipercalrica J Bras Patol Med Lab v. 46 n. 5 p. 407-413 outubro 2010
Endereo para correspondncia
Maria Luiza de Lima Aguilar Fernandes
Av. Prof. Manoel de Abreu, 444 Vila Isabel
CEP: 20550-170 Rio de Janeiro-RJ
e-mail: marialuiza.fernandes@gmail.com