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Este documento describe los procedimientos para observar las divisiones celulares de mitosis y meiosis en plantas y animales. Se explican los objetivos de identificar las fases de la mitosis en raíces de cebolla y las fases de la meiosis en anteras de flores de ajillo. Se proveen instrucciones detalladas para preparar láminas que muestren estas divisiones celulares y analizar las fases observadas bajo el microscopio.
Este documento describe los procedimientos para observar las divisiones celulares de mitosis y meiosis en plantas y animales. Se explican los objetivos de identificar las fases de la mitosis en raíces de cebolla y las fases de la meiosis en anteras de flores de ajillo. Se proveen instrucciones detalladas para preparar láminas que muestren estas divisiones celulares y analizar las fases observadas bajo el microscopio.
Este documento describe los procedimientos para observar las divisiones celulares de mitosis y meiosis en plantas y animales. Se explican los objetivos de identificar las fases de la mitosis en raíces de cebolla y las fases de la meiosis en anteras de flores de ajillo. Se proveen instrucciones detalladas para preparar láminas que muestren estas divisiones celulares y analizar las fases observadas bajo el microscopio.
Prohibida la reproduccin parcial o total de este manual
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA
1 Prctica #6 DIVISIN CELULAR: MITOSIS Y MEIOSIS I. Objetivos * Reconocer las reas de crecimiento de una raz (meristemo radical). * Preparar lminas de mitosis con meristemos de cebollas. * Reconocer las fases de la mitosis vegetal. * Reconocer las fases de la mitosis animal observando lminas fijas. * Ubicar las estructuras florales en una planta de Tulbaghia violacea, Liliaceae (Ajillo). * Preparar lminas de meiosis con las estructuras reproductivas masculinas de la flor de ajillo. * Reconocer las fases de la meiosis vegetal. * Observar distintas fases en lminas fijas de meiosis. * Distinguir entre las fases de la meiosis y mitosis II. Introduccin El ciclo celular es una secuencia regular y repetitiva de crecimiento y divisin celular, que se inicia con la formacin de una clula, producto de la divisin de otra precedente y prosigue con el momento en que ella misma se divide para originar dos clulas hijas. La duracin de este ciclo es variable y depende del tipo celular, del organismo y de factores externos como la temperatura, factores decrecimiento, nutrientes y toxinas. El ciclo celular se puede dividir en cinco fases: G1, S, G2, mitosis y citocinesis cada uno de los cuales se subdivide en varias fases o etapas. (Figura 1). Las tres primeras fases se agrupan en lo que se denomina interfase durante la cual la clula se prepara para realizar la divisin celular formada por las dos ltimas. Mitosis (M), es generalmente el perodo ms corto del ciclo, que ocupa aproximadamente entre el 5 a 10 % del tiempo total de ciclo. La etapa G0 es una salida del ciclo celular Durante la interfase (perodo entre dos mitosis consecutivas),los cromosomas no son observables y las clulas llevan a cabo una serie de actividades (sntesis y movimiento de materiales celulares como enzimas y otro tipo de protenas); adems, el material gentico de la clula se duplica en este periodo: a) Perodo G1. Comienza la sntesis de ARN, ADN y protenas. b) Perodo S donde ocurre la duplicacin del ADN. c) Perodo G2, fase post-sinttica que va desde el final de S hasta el comienzo de la mitosis. Mitosis es la divisin nuclear asociada con la divisin de las clulas somticas. Cada mitosis est asociada con una nica divisin celular que produce dos clulas hijas gentica y cromosmicamente idnticas (diploides) entre si e idnticas a su propia clula madre. Slo en algunos casos, como en alternancia de generaciones en clulas de plantas, la mitosis puede producir clulas haploides. Durante la mitosis se M: Mitosis G2: Crecimiento S: Duplicacin del ADN G1 G0
Prohibida la reproduccin parcial o total de este manual UNIVERSIDAD DE COSTA RICA 2 distribuyen los cromosomas de forma que cada clula hija reciba una dotacin completa de ADN. Ello depende de la existencia de cromosomas duplicados y condensados compuestos por dos cromtidas unidas por un centrmero y de la existencia de un huso mittico compuesto por microtbulos polares, astrales y cinetocricos. Estos ltimos se unirn a los cromosomas por los cinetocoros. La ganancia neta de la mitosis es que se hace una copia de cada cromosoma presente en el ncleo y esta estructura doble luego se rompe para dar origen a dos cromosomas hijos, cada uno destinado a diferentes ncleos hijos. III. Procedimiento Durante la sesin de laboratorio seguir la metodologa para observar los eventos que se desarrollan durante la mitosis (experimento 1) o meiosis (experimento 2). Para lograr ste objetivo, los miembros pares o impares de cada uno de los subgrupos de laboratorio definidos en la primera sesin de laboratorio, realizarn y analizarn uno de los procedimientos experimentales, de acuerdo a las indicaciones del instructor. Al finalizar los experimentos, todos los miembros de cada subgrupo se renen para hacer una discusin de los resultados obtenidos y completar el reporte. Cada subgrupo debe estar preparado para presentar y discutir sus resultados. Experimento 1.- Mitosis 1. Examine una lmina preparada de un corte longitudinal de la raz de cebolla (Allium cepa) usando un objetivo de bajo poder, o un esquema rotulado donde se muestren las partes de la raz. Complete el diagrama incluido en el reporte. 2. Localice e identifique cada una de las regiones de crecimiento Encuentre la regin con la punta ms redondeada e identifique la cpsula (caliptra). Inmediatamente superior a sta regin se encuentra el meristemo radical. 3. Una vez que se haya familiarizado con la organizacin estructural de la raz, proceda a hacer una preparacin de meristemo radical de cebolla 4. Su instructor le va a entregar un par de races ya tratada con el fijador Carnoy (mezcla etanol: cido actico glacial en proporciones de 3:1). 5. Lave la preparacin 1-3 veces con etanol al 70% (frio) para eliminar residuos de cido actico (la presencia de cido actico reduce la habilidad del colorante de marcar cromosomas). 6. Lave 3 veces el meristemo (agregue 3 gotas de dH 2 O, squelas con papel de filtro). 7. Sobre un portaobjetos, coloque las races y haga un corte hasta que tenga slo 2 mm de la punta (maristemo radicular) y descarte el resto. 8. Coloque las races en un beaker pequeo y aada 2 ml de HCl 18%. Coloque el beaker con el cido y las races en bao Mara por 6-7 minutos. 9. Transfiera las races a un portaobjetos. Enjuague la preparacin utilizando agua destilada y un gotero. Seque las races utilizando papel absorbente sin tocarlas. Enjuague 3 veces ms la muestra. 10. Macere la preparacin utilizando alfileres, la muestra debe estar suave y romperse con facilidad.
Prohibida la reproduccin parcial o total de este manual UNIVERSIDAD DE COSTA RICA 3 11. Coloree el tejido con azul de toluidina al 0,5% por 2 minutos. Coloque un cubreobjetos y remueva el exceso de colorante utilizando papel absorbente. Nota: invierta la preparacin sobre un papel de filtro y apriete el cubreobjetos contra el portaobjetos para eliminar el exceso de tincin sobre el meristemo (no permita que el cubreobjetos se corra). 12. Observe las clulas al microscopio y trate de identificar las fases de la mitosis presente en las clulas. Anlisis: Estudie al microscopio las fases de la mitosis. Haga una serie de figuras o diagramas de cada una de las fases del ciclo celular de Allium que observa. Rotule las estructuras relevantes de cada fase que le permitan diferenciarla de las otras fases. Organice sus figuras siguiendo un orden cronolgico. Observe la lmina fija de mitosis animal y localice clulas que se encuentren en distintas fases de la mitosis. Compare con sus resultados.
Experimento 2.- Meiosis La reproduccin asexual es la formacin de nuevas clulas u organismos, a partir de una clula madre. La reproduccin sexual comprende la fusin de dos clulas haploides para formar un organismo diploide. Las clulas especializadas que se unen durante la reproduccin sexual se denominan gametos. El proceso para generar estas clulas sexuales es la meiosis, en esta divisin celular el nmero cromosmico se reduce a la mitad; para ello, la clula, pasa por dos divisiones sucesivas en la cual los cromosomas slo se duplican una vez. Si este proceso se presenta en clulas diploides se obtienen cuatro clulas haploides. Se usarn flores de ajillo (Tulbaghia violacea, Liliaceae), previamente fijados en solucin Carnoy 3:1 (cido actico: etanol). 1. Su instructor le va a entregar un brote de la flor de ajillo ya tratada con el fijador. 2. Coloque las flores de ajillo sobre una caja de petri, agregue agua y separe con un alfiler las partes florales. Haga un esquema rotulados de las partes que componen una flor, en particular, identifique las anteras y seprelas. Elimine el resto de la flor. 3. Coloque en un portaobjetos las anteras, lave 3 veces la muestra. 4. Agregue una gota de carmn actico ms una gota de agua, macere las anteras con un agitador de vidrio. 5. Ponga un cubreobjetos y presione con papel filtro para eliminar los excedentes de la tincin y poder obtener una buena distribucin de las clulas. (No permita que el cubreobjetos se corra). 6. Estudie al microscopio las fases de la meiosis que observa 7. Haga diagramas rotulados de sus observaciones. 8. Observe una lmina preparada de meiosis en clulas animal (gametognesis).
PARA LA PRXIMA PRCTICA: Construya la genealoga de su familia inmediata (4 generaciones), basndose en algunas de las caractersticas fenotpicas descritas en el cuadro de la pgina 52(prctica#7). Utilice la simbologa especificada en la pag. 59. Para cada miembro de la genealoga determine sus caractersticas fenotpicas, frecuencias absolutas y relativas Infiera el genotipo de cada uno de los individuos de la genealoga e indique si las caractersticas son dominantes o recesivas.