Regresin lineal en

qumica analtica



Alejandro C. Olivieri



Departamento de Qumica Analtica, Facultad de Ciencias
Bioqumicas y Farmacuticas, Universidad Nacional de Rosario,
Suipacha 531, Rosario (S2002LRK), Argentina.
E-mail: aolivier@fbioyf.unr.edu.ar

2

Tabla de Contenidos

CLASE 1 3
REGRESIN LINEAL 3
Material suministrado con la clase 1 3
Parte 1: calibracin univariada 3
Determinacin del extremo superior del rango
lineal 4
Preparacin de patrones 4
Medicin de la respuesta de los patrones 5
Estimacin de los parmetros de la regresin 5
Prediccin en muestras incgnita 6
Cifras de mrito del mtodo 7
Sensibilidad de calibracin 7
Sensibilidad analtica 7
Lmite de deteccin 8
Lmite de cuantificacin 9
Rango dinmico 9
Rango lineal 9
Programas de computacin 12
EJERCICIO RESUELTO 12
RESPUESTA DETALLADA 14
EJERCICIOS PROPUESTOS 18
CLASE 2 20
REGRESIN LINEAL 20
Material suministrado con la clase 2 20
Parte 2: exactitud y comparacin de mtodos
analticos 20
Exactitud de un mtodo analtico 21
Regin de confianza en el caso homoscedstico 22
Regresin ponderada 24
Regin de confianza en el caso heteroscedstico
25
Comparacin de mtodos analticos 26
Programas de computacin 27
EJERCICIO RESUELTO 27
RESPUESTA DETALLADA 27
EJERCICIOS PROPUESTOS 32
RESOLUCIONES A LOS
EJERCICIOS PROPUESTOS 34
RESPUESTAS A LOS EJERCICIOS
PROPUESTOS EN LA CLASE 1 34
RESPUESTA A LOS EJERCICIOS
PROPUESTOS EN LA CLASE 2 35
REFERENCIAS 38
3
La estadstica es un mtodo sistemtico para llegar
a la conclusin incorrecta con un 95% de confianza.

Clase 1

Regresin lineal


"Camino recto", fotografa, tomada de
www34.brinkster.com.
Material suministrado con la clase 1
Para esta clase se proveen los siguientes archivos:
Archivos de texto (*.TXT) conteniendo datos tpicos.
Rutinas (*.M) para el entorno de programacin MATLAB.
COMO OPERAR CON MATLAB.PDF, documento de Adobe que explica el empleo
del entorno MATLAB.
Programas ejecutables en QB (*.EXE).
COMO OPERAR CON QB.PDF, documento de Adobe que explica el uso de los
programas en QB.
Parte 1: calibracin univariada
En este captulo estudiaremos una de las ms populares aplicaciones de la regresin lineal
en qumica analtica: la recta de calibracin univariada. La teora se expone en este
4
documento, pero se recomienda consultar paralelamente el ejemplo concreto que se analiza en
la seccin Ejercicio Resuelto.
El anlisis mediante recta de calibracin puede hacerse cuando slo el analito de inters
presenta seal analtica o respuesta (absorbancia, fluorescencia, potencial elctrico, corriente,
etc.), o cuando la seal del blanco es constante.
Las etapas que deben seguirse en un anlisis mediante recta de calibracin son:
Determinacin del extremo superior del rango lineal
Preparacin de patrones
Medicin de la respuesta de los patrones
Estimacin de los parmetros de la regresin
Clculo de las cifras de mrito del mtodo
Prediccin en muestras incgnita
Las expresiones matemticas que se presentarn a continuacin y su empleo en el anlisis
univariado estn tomadas, en general, del trabajo de referencia clsico de Danzer y Currie,
preparado para la Unin Internacional de Qumica Pura y Aplicada (IUPAC).
1
De la amplia
literatura que existe en este campo, recomendamos tambin los libros de Gardiner
2
y Miller y
Miller.
3

Determinacin del extremo superior del rango lineal
Esta etapa es fundamental, ya que la regresin lineal est basada en la suposicin de que
los datos de respuesta analtica estn linealmente relacionados con la concentracin del
analito. Si se sospecha que existen desvos de la linealidad, se recomienda realizar un anlisis
exploratorio previo cuyo objeto es extender el rango de aplicabilidad de la tcnica analtica a
la mxima concentracin posible. En dicho anlisis, se incluyen patrones de concentracin
conocida del analito desde cero hasta valores que se desven visiblemente de la linealidad.
Una prueba estadstica apropiada permitir luego decidir hasta qu concentracin se cumple la
relacin lineal respuesta-concentracin. Sin embargo, dado que los parmetros a emplear en
esta prueba se obtienen del anlisis matemtico-estadstico de la regresin, diferiremos el
clculo detallado para ms adelante.
Preparacin de patrones
Una vez estimado el extremo superior del rango lineal de la tcnica, deben prepararse
patrones de concentracin conocida dentro de dicho rango, e incluyendo el valor cero de
concentracin del analito (blanco). Usualmente, se preparan varios patrones (como mnimo
cinco) con concentraciones igualmente espaciadas entre cero y el extremo superior del rango
lineal, y cada patrn se analiza por triplicado.
Debe ponerse especial cuidado en la preparacin de los patrones del analito para la
calibracin, de manera que las concentraciones de calibrado se conozcan con la mxima
precisin posible. Este requisito se relaciona con el hecho de que la recta de regresin se
ajusta mediante ecuaciones que suponen que los valores del eje x (concentraciones) tienen una
incertidumbre considerablemente menor que los del eje y (respuestas).
Slo a modo de ejemplo, si se realizan mediciones de absorbancia como respuesta,
podemos suponer que el nivel de incertidumbre en la respuesta puede ser de alrededor de
0,005 unidades de absorbancia. Si los valores de las respuestas son, en promedio, de 1 unidad
de absorbancia, esto implica un nivel relativo de incertidumbre de aproximadamente 0,5% en
la respuesta. Por lo tanto, se deben preparar patrones de calibrado cuyas concentraciones se
conozcan con un error menor al 0,5%. Preparar soluciones de calibrado, por ejemplo, con
incertidumbres del orden del 0,1% en promedio, requiere pesar ms de 100 mg de reactivo,
preparar soluciones en matraces calibrados de al menos 100 mL, tomar alcuotas con pipetas
aforadas calibradas, etc.
5
Medicin de la respuesta de los patrones
Una vez preparados los patrones de concentracin conocida, se miden sus respuestas
analticas, incluyendo rplicas de cada medicin. Usualmente cada patrn se mide por
triplicado. Es importante establecer la siguiente nomenclatura: si se emplean 6 patrones, cada
uno por triplicado, entonces el nmero de niveles diferentes de concentracin (p) es 6, y el
nmero total de puntos de la recta de calibrado (m) es 18.
Estimacin de los parmetros de la regresin
El anlisis de los datos de calibrado mediante regresin lineal implica el clculo de la
pendiente (A) y ordenada al origen (B) de la recta ajustada a la ecuacin y = A x + B. Los
valores estimados de A y B se calculan mediante las siguientes ecuaciones:
A =

=
=

=
m
i
i
m
i
i i
xx
xy
x x
y y x x
Q
Q
1
2
1
) (
) )( (
(1)
B = x A y (2)
donde x
i
es la concentracin de cada uno de los m patrones de calibrado, x es el promedio de
las concentraciones de calibrado, y
i
es la respuesta en cada punto e y es el promedio de las
respuestas de los patrones de calibrado.
Adems de los valores individuales de A y B, es importante tener una idea de su
incertidumbre asociada, ya que los datos instrumentales llevan asociados un error que
depende del ruido instrumental, y el ajuste por cuadrados mnimos slo provee estimaciones
de la pendiente y ordenada al origen. Los desvos estndar en los parmetros A y B se calculan
con las siguientes ecuaciones:
s
A
=
xx
x y
Q
s
/
(3)
s
B
=
xx
x y
Q
x
m
s
2
/
1
+ (4)
En las ecuaciones precedentes, el parmetro s
y/x
es el desvo estndar de los residuos de la
regresin y est dado por:
s
y/x
=
2
)

(
1
2

=
m
y y
m
i
i i
(5)
donde y
i
es la respuesta experimental de cada patrn de calibrado e
i
y

representa la respuesta
estimada en cada punto, esto es,
i
y

= A x
i
+ B. En la ecuacin (5) se emplean m 2 grados de
libertad, ya que hay m datos disponibles, y 2 parmetros estimados en la regresin (A y B).
Estos parmetros estadsticos dan tambin una idea de la bondad de la regresin. Es
deseable que s
y/x
sea lo ms pequea posible; no obstante su valor est limitado por el ruido
instrumental. La distribucin de los residuos, es decir, el modo en que los valores de (y
i

i
y

)
varan con la respuesta, cumple tambin un papel importante en el anlisis de la adecuacin
de los datos al modelo lineal, como veremos ms adelante.
6
Prediccin en muestras incgnita
Los valores de A y B se requieren para realizar predicciones en muestras incgnitas, a
travs de la ecuacin y
inc
= A x
inc
+ B, de donde puede obtenerse la concentracin estimada del
analito en la muestra:
x
inc
= (y
inc
B) / A (6)
donde y
inc
es, en general, un promedio de las respuestas obtenidas para un determinado
nmero de rplicas de la incgnita (habitualmente tres).
Un resultado no es tal, sin embargo, si no est acompaado por su correspondiente nivel
de incertidumbre. Para informar x
inc
con su incertidumbre asociada, y establecer su nmero
correcto de cifras significativas, es necesario calcular el error estndar en la concentracin
predicha s(x
inc
), lo cual se lleva a cabo mediante la siguiente expresin:
s(x
inc
) =
xx
x y
Q A
y y
m n A
s
2
2
inc
/
) ( 1 1
+ + =
xx
x y
Q
x x
m n A
s
2
inc
/
) ( 1 1
+ + (7)
donde s
y/x
es el desvo estndar de los residuos de la regresin dado por la ecuacin (5), A es
la pendiente de la recta de regresin, n es el nmero de rplicas de la muestra incgnita, m es
el nmero total de patrones de calibrado, y
inc
es el promedio de las respuestas de las rplicas
de la incgnita, y es el promedio de las respuestas de los patrones de calibrado, y Q
xx
fue
definido en la ecuacin (1).
La ecuacin (7) es responsable de que la incertidumbre en la prediccin dependa de cada
muestra y no de la calibracin en forma global, ya que para cada muestra incgnita hay un
valor predicho de la concentracin (x
inc
) y por lo tanto un valor asociado del desvo estndar
s(x
inc
). La forma de la ecuacin (7) proviene de un anlisis de la propagacin de las distintas
fuentes de error a la concentracin predicha. Puede demostrarse que hay dos fuentes
principales de incertidumbre: 1) la seal medida para la muestra incgnita y 2) las seales
medidas para las muestras de calibrado. La primera contribuye con el trmino (1/n) dentro de
la raz cuadrada de la ecuacin (7), y la segunda con los trminos

+
xx
Q
x x
m
2
inc
) ( 1
, que
colectivamente reciben el nombre de leva (del ingls leverage). La leva mide, de algn modo,
la "distancia" de la muestra incgnita al centro de la calibracin. Dado que la leva es mnima
cuando la concentracin de la incgnita es igual al promedio de las concentraciones de
calibrado (esto es, cuando x
inc
= x ), se concluye que el mtodo posee su mxima precisin en
este ltimo caso. De ah que se recomiende analizar muestras cuya concentracin de analito
sea cercana al centro de las concentraciones de calibrado. La extrapolacin a concentraciones
mucho mayores o menores que el promedio de la calibracin aumenta la leva y con ello el
error en la prediccin.
Otra conclusin que puede extraerse de la ecuacin (7) es que el efecto de la calibracin
sobre el error de prediccin ser tambin menor si m > n, es decir, cuando el nmero de
patrones de calibrado es superior al de rplicas empleadas para predecir.
En todo caso, el anlisis de la ecuacin (7) muestra que, para muestras no demasiado
alejadas del centro de la calibracin, y dado que en general se cumple que m > n, el error
estndar en la concentracin se puede aproximar por s(x
inc
) = s
y/x
/ (A n
1/2
).
Debe notarse finalmente que el intervalo de confianza para la concentracin predicha
puede calcularse multiplicando el valor del desvo estndar dado por la ecuacin (7) por el
correspondiente coeficiente de student para un dado nivel de confianza (usualmente 95%) y
un nmero de grados de libertad igual a (m 2).
7
Cifras de mrito del mtodo
Las cifras de mrito de un mtodo analtico se utilizan regularmente con el propsito de
calificar un determinado mtodo y comparar sus propiedades analticas con las provistas por
otras tcnicas. Incluyen, entre otras, las siguientes:
Sensibilidad de calibracin
Sensibilidad analtica
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Rango dinmico
Rango lineal
Debe notarse que la expresin "cifras de mrito" es la traduccin correcta del ingls
figures of merit. Esta ltima no debe traducirse como "figuras de mrito".
Sensibilidad de calibracin
La sensibilidad de calibracin es igual a la pendiente de la recta de calibrado:
SEN = A (8)
Indica la variacin de respuesta producida por una unidad de variacin de concentracin
del analito, y sus unidades son de seal concentracin
1
.
Sensibilidad analtica
La sensibilidad de calibracin no es adecuada para comparar dos mtodos analticos
cuando estos estn basados en respuestas de diferente naturaleza (por ejemplo, absorbancia y
fluorescencia, o absorbancia y medidas electroqumicas, etc.). Para ello es preferible utilizar
la llamada sensibilidad analtica , definida por la relacin entre la sensibilidad y el ruido
instrumental:
= SEN / s
y
(9)
donde s
y
es una medida conveniente del nivel de ruido en la respuesta. Para estimar el nivel de
ruido pueden usarse dos procedimientos, que en teora deberan coincidir. En el primero, se
estima el ruido instrumental (s
y
) a travs de los desvos de las rplicas de las mediciones de
calibrado respecto de sus promedios:
s
y
=
p m
y y
p
i
r
j
i ij

= = 1
2
1
) (
(10)
donde p es el nmero de niveles de concentracin estudiados en la recta, r es el nmero de
rplicas de cada punto, y
ij
es el valor de la respuesta correspondiente a cada nivel y rplica, e
i
y es el promedio de las respuestas de las rplicas para cada nivel de concentracin. En la
ecuacin (10), el nmero de grados de libertad es m p, ya que de los m datos disponibles, p
grados de libertad se reservan para el clculo de las p medias
i
y . Este clculo se ilustra en
forma detallada en el ejercicio resuelto que acompaa al presente documento.
En el segundo mtodo de estimacin del nivel de ruido, se lo estima como el desvo
estndar de los residuos de la regresin lineal, el parmetro ya definido s
y/x
[vase la ecuacin
(5)].
Si los datos estudiados cumplen la relacin lineal entre respuesta y concentracin, los dos
mtodos anteriormente descritos deben proveer resultados similares en cuanto a la estimacin
del ruido instrumental.
8
Lmite de deteccin
Es la mnima concentracin detectable de manera confiable por la tcnica. En la
definicin moderna, el lmite de deteccin (LOD) se calcula en funcin del desvo estndar de
la concentracin predicha para una muestra blanco (s
0
).
4
Para estimar s
0
se recurre a la
ecuacin (7), escrita del modo siguiente:
s(x
inc
) =
xx
x y
Q
x x
m n A
s
2
inc
/
) ( 1 1
+ + (11)
Si suponemos que se analiza una muestra por triplicado (lo ms usual es n = 3) en la que
el analito no est presente (x
inc
= 0), la ecuacin (11) se reduce a:
s
0
=
xx
x y
Q
x
m A
s 2
/ 1
3
1
+ + (12)
aunque s
0
ser diferente si se emplea un nmero diferente de rplicas. En todo caso, es
importante informar qu valor de n se considera en el clculo de s
0
y por lo tanto del LOD.
Como se muestra en la Figura 1, el LOD se calcula mediante una prueba de hiptesis
estadstica. En primer lugar se fija una concentracin llamada nivel crtico (L
C
en la Figura 1),
a partir de la cual se toman decisiones respecto de la deteccin del analito. Para
concentraciones superiores a L
C
, existe una probabilidad de cometer el llamado error de
tipo I o falso positivo. Este ltimo consiste en aceptar errneamente la hiptesis alternativa,
admitiendo que el analito est presente cuando en realidad est ausente. Como se aprecia en la
Figura 1, la probabilidad de cometer este error de tipo I est dada por la zona sombreada de
azul (rea ), siendo la "distancia" de L
C
al cero de la escala igual al producto de s
0
por el
coeficiente t
,
. Si se toma igual a 0,05, entonces una concentracin superior a L
C
tendr
slo un 5% de probabilidad de constituir un falso positivo.
Del mismo modo, existe una probabilidad de cometer un error de tipo II o falso
negativo, en el que se acepta errneamente la hiptesis nula, admitiendo que el analito est
ausente cuando en realidad est presente (zona sombreada de rojo en la Figura 1, con
probabilidad igual a ). Si se toma tambin como 0,05, la probabilidad de obtener un falso
negativo ser del 5%. En este caso la distancia de L
C
a la concentracin correspondiente a
dicho valor de es el producto del coeficiente t
,
por s
0
, considerando que este ltimo
parmetro es muy cercano al desvo estndar en la concentracin de una muestra blanco.
Puede notarse entonces que el valor de LOD depende de y , y de los desvos estndar
de las dos curvas gaussianas de la Figura 1. En general, ambas probabilidades se toman como
iguales 0,05, mientras que los desvos estndar se suponen ambos iguales a s
0
. De este modo,
el LOD est dado por:
5

LOD = 2 t
0,05,m2
s
0
(13)
definicin que ha sido adoptada tambin por IUPAC
6
e ISO.
7
En la prctica, dado que m es un
nmero relativamente grande, el valor de (2t
0,05,m2
) tiende a 3,3, por lo que una ecuacin
aproximada para el lmite de deteccin es LOD = 3,3 s
0
.
Ntese que antiguamente se defina el LOD contemplando nicamente errores de tipo I,
como la concentracin correspondiente a una relacin seal/ruido igual a 3, lo que equivale a
fijar el lmite de deteccin como LOD = 3s
bl
/ A, donde s
bl
es el desvo estndar en la seal
del blanco. En esta aproximacin, la probabilidad de cometer errores de tipo I era de 0,1%,
que corresponde a t
0,001,
= 3 (para un nmero muy grande de grados de libertad). Esta
definicin, ya abandonada por la IUPAC, no contempla los errores de tipo II.

9

Figura 1. Prueba de significacin empleada para estimar el lmite de deteccin. L
C
es el
nivel crtico, LOD el lmite de deteccin, y las probabilidades correspondientes a errores
de tipo I y II respectivamente, s
0
el desvo estndar del blanco (en unidades de concentracin)
y t
,
y t
,
los coeficientes de student para grados de libertad.
Lmite de cuantificacin
Es la mnima concentracin cuantificable en forma confiable. Este parmetro (LOQ) se
toma como la concentracin correspondiente a 10 veces el desvo estndar (en unidades de
concentracin) del blanco, con lo cual:
LOQ = 10 s
0
(14)
De este modo, el desvo estndar relativo (DSR) para una concentracin igual al LOQ es
del 10%, nivel que se toma convencionalmente como el mximo DSR aceptable para
cuantificar el analito en una muestra.
Rango dinmico
Se considera que va desde la menor concentracin detectable (el LOD) hasta la prdida de
relacin entre respuesta y concentracin; vase la Figura 2, adaptada de la excelente obra de
Valcrcel.
8
El rango dinmico es tambin el rango de aplicabilidad de la tcnica. En la zona
de prdida de la linealidad, podra aplicarse, en principio, un mtodo de regresin polinmica
para la calibracin (o algn otro de naturaleza no lineal), de modo que nada impide que dicha
zona sea utilizada con propsitos predictivos.
Rango lineal
Se considera que el rango lineal comprende desde la menor concentracin que puede
medirse (el LOQ) hasta la prdida de la linealidad (Figura 2). Una manera conveniente de
medir el cumplimiento de la linealidad es a travs de la relacin que existe entre la variancia
de la regresin, medida por (s
y/x
)
2
[ecuacin (5)], y la del ruido instrumental, medida por (s
y
)
2

[ecuacin (10)]. Si la primera es significativamente mayor que la segunda, se supone que hay
causas de desvo de la ley lineal que son estadsticamente superiores al ruido en la respuesta.
Para emplear esta prueba es esencial que se cumpla el supuesto bajo el cual se realiza el ajuste
lineal, esto es, que los errores en concentracin de calibrado sean menores que en respuesta.
De lo contrario, se acumularan en (s
y/x
)
2
incertidumbres derivadas de la imprecisin en las
concentraciones de los patrones, que nada tienen que ver con el ruido instrumental o las
prdidas de la linealidad.
La prueba estadstica que se utiliza para determinar si los datos se ajustan a la ley lineal es
la F: en primer lugar se calcula un valor "experimental" de F, dado por:
0

Hiptesis
alternativa:
analito presente
a este nivel
Prediccin L
C
Hiptesis nula:
analito ausente
LOD
(t
,
+t
,
) s
0

10
Concentracin
R
e
s
p
u
e
s
t
a
Rango lineal
Rango dinmico
LOD
LOQ
Extremo superior
del rango lineal
Prdida de la relacin
respuesta-concentracin
F
exp
=
( )
( )
2
2
/
y
x y
s
s
(15)
Luego se compara este valor con el crtico que se encuentra en tablas de F (de una cola)
para m 2 y m p grados de libertad, y un determinado nivel de confianza, por ejemplo 95%.
Si F
exp
< F, se acepta que los datos se comportan linealmente. Alternativamente, se calcula la
probabilidad p
F
asociada a este valor de F
exp
, y se considera que la prueba de linealidad es
aceptada si p
F
> 0,05. Esta prueba se describe en detalle en el trabajo de Danzer y Currie.
1



























Figura 2. Rangos dinmico y lineal de un mtodo analtico.














11
Concentracin
R
e
s
i
d
u
o
s
0
R
e
s
i
d
u
o
s
0
R
e
s
i
d
u
o
s
0
A
B
C






































Figura 3. Residuos de la regresin. A) Comportamiento
lineal. B) Comportamiento no lineal. C) Comportamiento
lineal con alta incertidumbre en la concentracin de los
patrones.


Tambin es til, como en todo ajuste por cuadrados mnimos, examinar visualmente la
distribucin de los residuos de la regresin. Un grfico de residuos (y
i
A x
i
+ B) en funcin
de x
i
puede ser muy informativo respecto de la presencia de no linealidades, ya que el valor de
F
exp
puede resultar significativo no solamente porque la relacin entre las variables no sea
lineal, sino por incertidumbres en la preparacin de los patrones. La Figura 3 ilustra casos
representativos al respecto. En el caso A), el comportamiento es lineal: se espera que la
12
distribucin de los residuos sea al azar, y que la variabilidad interna de las rplicas a cada
nivel de concentracin sea comparable a la variabilidad global (precisamente este es el sentido
de la prueba estadstica F antes comentada). En el caso B) se aprecia visualmente que los
residuos poseen un comportamiento parablico, caso tpico de desvos de la ley lineal.
Finalmente, en el caso C), los residuos muestran una variabilidad global significativamente
mayor que la que presentan las rplicas a cada nivel. Esta situacin es tpica de la presencia de
mayor incertidumbre en las concentraciones nominales de los patrones de calibrado que en la
seal instrumental, aunque el sistema se comporte linealmente. De ah que se haya puesto
hincapi en la necesidad de contar con patrones cuya concentracin se conozca con mayor
precisin que el ruido instrumental. En general, sin embargo, la distribucin de los residuos
no es tan clara como los casos presentados en la Figura 3, por lo que es importante aplicar el
criterio estadstico F.
Debe notarse que no hemos empleado, en todo este documento, al parmetro r, el
coeficiente de correlacin, an cuando popularmente se recurre a l como prueba de
linealidad o de bondad del ajuste. En este sentido, vale la pena repetir textualmente el
siguiente pasaje del trabajo de Danzer y Currie:

"el coeficiente de correlacin, que es una
medida de la relacin de dos variables azarosas, no tiene ningn significado en la calibracin
analtica, debido a que los valores de x no estn distribuidos al azar".
1
El coeficiente de
correlacin se emplea para responder preguntas tales como: est correlacionada la
concentracin de antimonio con la de plomo en muestras de agua de una zona productora de
metales?. En este caso se trata de analizar si existe correlacin entre variables sobre las que el
operador tiene muy poco control.
Programas de computacin
Los mtodos descritos en esta clase pueden aplicarse con cualquier programa comercial
que sea capaz de efectuar una regresin por cuadrados mnimos. Los parmetros faltantes
pueden calcularse luego "a mano" con las ecuaciones provistas en este documento. En este
sentido, la obra de Gardiner
2
hace una excelente descripcin del uso de la planilla de clculo
EXCEL para propsitos analticos en general, y para estudios mediante regresin univariada
en particular.
Para quienes deseen introducirse al mundo del entorno matricial MATLAB, esencial para
clculos avanzados en quimiometa, se proveen dos rutinas que calculan todos los parmetros
aqu descritos, y permiten calibrar y predecir a partir de datos univariados. Confiamos que la
discusin del ejercicio resuelto que se acompaa, el contenido del documento 'COMO
OPERAR CON MATLAB.PDF', as como las rutinas 'LR_CAL.M' y 'LR_PRED.M',
proveern la informacin requerida para organizar los datos e implementar las rutinas.
Tambin se proveen programas independientes ejecutables en QB, como alternativa para
quienes no puedan acceder a MATLAB: 'LR_CAL.EXE' y 'LR_PRED.EXE'. Para operarlos
puede consultarse el documento 'COMO OPERAR CON QB.PDF'.
Ejercicio resuelto

1) La Tabla 1 proporciona un ejemplo de datos de respuesta-concentracin para su anlisis,
incluyendo respuestas medidas por triplicado. Grafique los datos de respuesta en funcin de la
concentracin y compruebe en forma visual que se desvan de la linealidad. Establezca un
lmite superior del rango lineal en forma cualitativa, para luego compararlo con el calculado
mediante una prueba estadstica apropiada.



13
Tabla 1. Concentraciones y respuestas para un rango en el que se sospecha
que existen desvos de la linealidad.
Concentracin
del patrn
Respuesta 1 Respuesta 2 Respuesta 3
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
7,00
8,00
9,00
10,00
0,06
1,44
2,82
4,15
5,29
6,61
7,79
8,89
10,03
10,84
11,87
0,08
1,56
2,76
4,20
5,46
6,54
7,70
8,97
9,88
10,91
11,81
0,06
1,41
2,90
4,08
5,52
6,69
7,69
8,83
9,77
10,65
11,90

Note que los valores de concentracin estn dados con una precisin de 0,01, lo cual
implica un error relativo porcentual promedio de 0,01100/5 = 0,2% (Tomamos 5 como el
valor promedio de las concentraciones de calibrado). Los valores de respuesta tambin estn
informados con una incertidumbre de 0,01 unidades, si bien un anlisis cualitativo de la
variabilidad de los replicados indica que la incertidumbre en esta medicin es mayor que lo
informado en la Tabla 1. Posteriormente haremos un anlisis ms detallado, pero en principio
es importante verificar que la incertidumbre relativa es mayor en la respuesta que en la
concentracin.
Usuarios de MATLAB: los datos de la Tabla 1 estn contenidos, en el formato apropiado
para ser estudiados por la rutina 'LR_CAL.M' de Matlab, en el archivo de texto
'DATOS_EJ_RES_COMPLETOS.TXT'.
Usuarios de QB: los datos estn en el archivo de texto 'D_E_R_C.TXT', para ser
estudiados por el programa 'LR_CAL.EXE'.

2) La Tabla 2 muestra los mismos datos que la Tabla 1, restringidos hasta un lmite
superior de concentracin para el cual se cumple la linealidad (ms adelante se muestra cmo
se lleg a esta conclusin).

Tabla 2. Concentraciones y respuestas para un rango en el que existe
linealidad.
Concentracin
del patrn
Respuesta 1 Respuesta 2 Respuesta 3
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
0,06
1,44
2,82
4,15
5,29
6,61
0,08
1,56
2,76
4,20
5,46
6,54
0,06
1,41
2,90
4,08
5,52
6,69

Usuarios de MATLAB: los datos de la Tabla 2 estn contenidos, en el formato apropiado
para ser estudiados por la rutina 'LR_CAL.M' de Matlab, en el archivo de texto
'DATOS_EJ_RES_LINEAL.TXT'.
Usuarios de QB: los datos estn disponibles para ser estudiados por el programa
'LR_CAL.EXE' en el archivo de texto 'D_E_R_L.TXT'.
14
Calcule los valores de la pendiente y ordenada al origen para la recta ajustada con los
datos de la Tabla 2.

3) Estime los desvos estndar en la pendiente y ordenada al origen, e informe los valores
de A y B con el nmero correcto de cifras significativas.

4) La Tabla 3 muestra los valores de la respuesta para cuatro muestras incgnita, todos por
triplicado.

Tabla 3. Respuestas para cuatro muestras incgnita.
Muestra Respuesta 1 Respuesta 2 Respuesta 3
1
2
3
4
0,69
2,20
3,55
4,82
0,65
2,13
3,41
4,71
0,75
2,05
3,52
4,70

Los datos de la Tabla 3 estn contenidos, en el formato apropiado para ser estudiados por
la rutina 'LR_PRED.M' de Matlab, en el archivo de texto 'DATOS_EJ_RES_TEST.TXT'.
Estime la concentracin del analito en las cuatro muestras de la Tabla 3, calcule sus
desvos estndar e informe el resultado con el nmero apropiado de cifras significativas.

5) Calcule las cifras de mrito del mtodo.
Respuesta detallada
1) El anlisis de estos datos mediante los programas LR_CAL.M (Matlab) o
LR_CAL.EXE (QB) indica que los datos no se comportan en forma lineal. En particular, se
obtiene un valor de F
exp
de 8,88, con una probabilidad asociada p
F
de 0,001. La grfica de los
residuos es informativa al respecto:





















15
2) Los valores estimados, dados por las ecuaciones (1) y (2) son, para el ejemplo de la
Tabla 2, A = 1,3174 y B = 0,1237. Estos ltimos nmeros tienen, probablemente, ms cifras
significativas que lo permitido por sus desvos estndar. Para acotarlos al nmero correcto de
cifras es necesario estimar sus incertidumbres.

3) Los desvos estndar calculados son s
y/x
= 0,1, s
A
= 0,01 y s
B
= 0,04. Lo correcto es
informar la pendiente y ordenada al origen de la recta ajustada del modo que sigue:

A = 1,32(1)
B = 0,12(4)

En la Tabla 3 encontrar un resumen de todos los clculos intermedios necesarios para
estimar A, B y sus errores estndar.

Tabla 3. Parmetros necesarios para el clculo de A, B, s
A
y s
B
.
i x
i
x
i
x y
i
y
i
y (x
i
x )
2
(x
i
x ) (y
i
y )
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
2,50
1,50
0,50
0,50
1,50
2,50
2,50
1,50
0,50
0,50
1,50
2,50
2,50
1,50
0,50
0,50
1,50
2,50
0,06
1,44
2,82
4,15
5,29
6,61
0,08
1,56
2,76
4,20
5,46
6,54
0,06
1,41
2,90
4,08
5,52
6,69
3,36
1,98
0,60
0,73
1,87
3,19
3,34
1,86
0,66
0,78
2,04
3,12
3,48
2,01
0,52
0,66
2,10
3,27
6,25
2,25
0,25
0,25
2,25
6,25
6,25
2,25
0,25
0,25
2,25
6,25
6,25
2,25
0,25
0,25
2,25
6,25
8,39
2,97
0,30
0,37
2,81
7,98
8,34
2,79
0,33
0,39
3,06
7,81
8,69
3,01
0,26
0,33
3,15
8,18
Total Q
xx
= 52,5 Q
xy
= 69,17
Promedio x = 2,50 y = 3,42

4) Los valores de prediccin se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4. Predicciones en muestras incgnita.
Muestra Respuesta
promedio (y
inc
)
Concentracin
predicha (x
inc
)
Desvo
estndar
a
s(x
inc
)
DSR = 100 s(x
inc
)
/ x
inc
(%)
1
2
3
4
0,70
2,13
3,49
4,74
0,44
1,52
2,56
3,51
0,05
0,05
0,05
0,05
12
3,3
1,9
1,4
a
A partir de la ecuacin (6), insertando s
y/x
= 0,1; A = 1,32; n = 3; m = 18; y
inc
de la
columna 2 de la Tabla 4, y = 3,42 y Q
xx
= 52,5. Note que los valores pueden
aproximarse por s(x
inc
) = s
y/x
/ (A n
1/2
), tal como se dijo en la parte terica.
16

Puede notarse que la concentracin predicha se acot a dos cifras decimales significativas,
teniendo en cuenta que los desvos estndar son todos aproximadamente de 0,05 unidades.
Ntese que los valores de s(x
inc
) son iguales en la Tabla 4 porque se informan con una sola
cifra significativa, aunque su clculo detallado demuestra que difieren entre s, de la manera
prevista por el efecto de la leva.
Es importante destacar tambin que el desvo estndar relativo (DSR) dado en la Tabla 4
es alto para la primera muestra, y razonablemente bajo para las otras. En el primer caso, la
concentracin predicha es tambin baja. Estas consideraciones se relacionan con la mnima
concentracin detectable por la tcnica, que se considerar a continuacin.
Tambin pueden fijarse los intervalos de confianza alrededor de una prediccin,
empleando los coeficientes de student de dos colas para un 95% de confianza y (m 2) grados
de libertad. Por ejemplo, para la muestra No. 4 en la Tabla 4:
x
inc
= 3,51 t(p = 0,05; 16 GL) s(x
inc
) = 3,51 2,1 0,05 = 3,5 0,1

5) Es importante analizar la grfica de los residuos para este caso.
























Como puede verse en la figura anterior, la distribucin de los residuos conserva an
rastros de la falta de linealidad de los datos, pero la prueba F dice que esta impresin no es
estadsticamente relevante: F
exp
= 1,58, p
F
= 0,21. La Tabla 5 ilustra el clculo detallado de s
y

para esta prueba.
En el presente ejemplo, la sensibilidad est dada por SEN = 1,32 (Unidades de
respuesta)(Unidades de concentracin)
1
Para el clculo de la sensibilidad analtica se requiere una estimacin del nivel de ruido
instrumental. Para los datos de la Tabla 2, p = 6, r = 3, s
y
= 0,08 (vase la Tabla 5 para el
detalle del clculo).

17
Tabla 5. Parmetros requeridos para el clculo de s
y
.
i j y
ij

i
y (y
ij

i
y )
2


1
1
2
3
0,06
0,08
0,06

0,03
0,0009
0,0025
0,0081

2
1
2
3
1,44
1,56
1,41

1,47
0,0009
0,0081
0,0036

3
1
2
3
2,82
2,76
2,90

2,83
0,0001
0,0049
0,0049

4
1
2
3
4,15
4,20
4,08

4,14
0,0001
0,0036
0,0036

5
1
2
3
5,29
5,46
5,52

5,42
0,0169
0,0016
0,0100

6
1
2
3
6,61
6,54
6,69

6,61
0,0000
0,0049
0,0064

Total

=

= =
p
i
r
j
i ij
y y
1
2
1
) ( 0,081

A partir de los resultados de la tabla anterior, se puede calcular un nivel de ruido
instrumental de (0,081/12)
1/2
= 0,08. Dado que, para los mismos datos, s
y/x
= 0,1, puede
notarse que ambos procedimientos para estimar el ruido producen resultados similares.
Empleando 0,1 unidades de respuesta como nivel de ruido, podemos calcular la sensibilidad
analtica para el ejemplo en estudio a partir de la ecuacin (10), como = SEN / s
y/x
= 13
(Unidades de concentracin)
1
.
El parmetro se interpreta mejor en trminos de su inversa. El valor de
1
(0,08
unidades de concentracin en nuestro caso) indica la menor diferencia de concentracin que
puede apreciarse a lo largo del intervalo de aplicacin de la tcnica analtica.
Con respecto al lmite de deteccin, puede estimarse como LOD = 2t
0,05,16
0.06 = 0,2.
Se interpreta este ltimo resultado diciendo que la tcnica es capaz de detectar al analito
cuando est en concentraciones superiores a 0,2.
Para el ejemplo de la Tabla 2 el LOQ se calcula como 0,6 unidades de concentracin. Se
interpreta como la menor concentracin que se puede cuantificar, esto es, en el intervalo de
concentracin entre 0,2 y 0,6 la tcnica puede detectar pero no cuantificar al analito.
Con esto se comprueba que la concentracin predicha para la muestra incgnita No. 1 de
la Tabla 4 est por debajo del LOQ, lo cual explica el alto valor de DSR.
Con respecto al rango dinmico, la mxima concentracin probada fue de 10,00 unidades
(Tabla 1). Hasta esa concentracin existe un cambio de respuesta al cambiar la concentracin,
por lo que, a falta de mayor informacin, supondremos que el rango dinmico est entre 0,3 y
10 unidades de concentracin.
Para estimar el rango lineal, se recurre a los datos de la Tabla 1, y se comprueba que para
este caso, si se incluyen todos los datos, F
exp
= 8,88, p
F
= 0,001, con lo cual dichos datos se
declaran no lineales. Si vamos quitando datos, comenzando con los de mayor concentracin, y
recalculamos los valores de F
exp
y sus p
F
asociadas, se obtienen los resultados informados en
la Tabla 6.
18
Tabla 6. Rangos de concentracin y estudio de la linealidad mediante la prueba F.
Rango de concentracin F
exp
p
F

0-10
0-9
0-8
0-7
0-6
0-5
8,88
6,69
4,62
3,50
2,73
1,58
0,001
0,001
0,001
0,007
0,031
0,214

Estos resultados indican que a partir de una concentracin de analito igual a 6 unidades se
pierde la linealidad. En realidad, la no-linealidad se mantiene. Debera decirse que a partir de
6 unidades de concentracin no es posible distinguir la incertidumbre por falta la linealidad de
la incertidumbre intrnseca de la respuesta analtica.
La Tabla 7 resume las cifras de mrito calculadas.

Tabla 6. Cifras de mrito.
Cifra de mrito Valor (unidades)
Sensibilidad

Sensibilidad analtica
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Rango dinmico
Rango lineal
SEN = 1,32 (Unidades de respuesta)(Unidades de
concentracin)
1

= SEN / s
y/x
= 13 (Unidades de concentracin)
1
LOD = 0,2 (Unidades de concentracin)
LOQ = 0,6 (Unidades de concentracin)
0,2-10,0 (Unidades de concentracin)
0,6-6,0 (Unidades de concentracin)

Ejercicios propuestos

1) Se analiza una serie de muestras patrones mediante dos mtodos analticos, uno basado
en medidas de absorbancia y otro basado en medidas de fluorescencia. Los resultados se
muestran en la siguiente tabla:

Concentraciones de patrones y respuestas obtenidas mediante dos mtodos analticos.
Concentracin
del patrn
Mtodo A Mtodo B
Respuesta
1
Respuesta
2
Respuesta
3
Respuesta
1
Respuesta
2
Respuesta
3
0,000
0,100
0,200
0,300
0,400
0,500
0,01
0,17
0,32
0,48
0,64
0,79
0,02
0,17
0,33
0,48
0,64
0,79
0,02
0,17
0,32
0,48
0,64
0,79
2,0
17,4
32,5
47,8
63,2
78,4
1,9
17,4
32,6
47,8
63,3
78,5
1,9
17,3
32,6
48,0
63,3
78,4

Calcule las cifras de mrito para cada mtodo. Cul de estos mtodos puede considerarse
ms sensible? Qu parmetro(s) emplea para justificar la mayor sensibilidad de un mtodo
sobre el otro?.

2) Se mide por triplicado una muestra incgnita, usando ambos mtodos descriptos en el
problema anterior. Los resultados se presentan en la siguiente tabla:
19

Mtodo A Mtodo B
Respuesta
1
Respuesta
2
Respuesta
3
Respuesta
1
Respuesta
2
Respuesta
3
0,25 0,26 0,25 25,2 25,1 25,3

Calcular la concentracin del analito por ambos mtodos, y estimar su desvo estndar.
Qu comentarios pueden hacerse respecto de estos resultados?

Se recomienda emplear las rutinas de MATLAB 'LR_CAL.M' y 'LR_PRED.M' (o sus
versiones respectivas en QB) organizando los datos de los ejercicios propuestos de la manera
que se presenta en los archivos de texto correspondientes al ejercicio resuelto.

3) En el anlisis fluorimtrico de un compuesto, se realizan dos curvas de calibrado,
empleando dos longitudes de onda diferentes para la excitacin. En el caso A, la emisin del
compuesto est superpuesta con la dispersin Ramana del solvente, y el analista observa por
lo tanto la presencia de un blanco constante de intensidad significativa. Decide modificar la
longitud de onda de excitacin, en este caso generando los datos del caso B, donde el blanco
parece ser menor.
En la tabla siguiente se informan los datos de calibracin para cada caso, en sus
respectivos rangos lineales. Qu conclusiones pueden extraerse respecto de las cifras de
mrito de estos dos casos?

Caso A
Muestra Concentracin Respuesta 1 Respuesta 2 Respuesta 3
1
2
3
4
5
6
0,000
0,198
0,392
0,583
0,769
0,950
0,78
3,38
5,75
8,53
10,97
13,40
0,80
3,44
6,16
8,51
11,04
13,08
0,82
3,51
6,01
8,68
10,89
13,37

Caso B
Muestra Concentracin Respuesta 1 Respuesta 2 Respuesta 3
1
2
3
4
5
6
7
8
0,000
0,198
0,392
0,583
0,769
0,950
1,130
1,310
0,01
1,96
3,75
5,59
7,30
9,07
10,83
12,08
0,03
1,88
3,75
5,52
7,35
8,95
10,71
12,11
0,04
1,90
3,80
5,56
7,27
9,03
10,46
12,21

20
El 42,57 % de toda la estadstica est equivocado.

Clase 2
Regresin lineal



"Elliptical viewpoint", escultura, tomada de www.sculpture-
design.com.
Material suministrado con la clase 2
Para esta clase se proveen los siguientes archivos:
LECTURA ADICIONAL CLASE 2.PDF, documento de Adobe con un trabajo
educativo para lectura adicional.
Archivos de texto (*.TXT) conteniendo datos tpicos para estudios de exactitud y
comparacin de mtodos.
Archivos (*.M) con rutinas para el entorno de programacin MATLAB.
Archivos (*.EXE) con programas ejecutables en QB.
Parte 2: exactitud y comparacin de mtodos analticos
En este segundo captulo sobre regresin lineal exploraremos su uso para el anlisis de la
exactitud de un mtodo analtico y para la comparacin de dos mtodos analticos diferentes.
La teora se expone en este documento, pero se recomienda consultar paralelamente el
ejemplo concreto que se analiza en la seccin Ejercicio Resuelto.
La discusin que sigue est basada en trabajos recientes acerca del empleo de ensayos de
recuperacin para la validacin y comparacin de mtodos,
9
as como en la obra clsica de
Massart y colaboradores.
10

Para el estudio de la exactitud de un mtodo analtico, es usual preparar una serie de
patrones con concentraciones conocidas del analito de inters, diferentes a las utilizadas en la
etapa de calibracin. Luego se determina la concentracin del analito en cada uno de ellos por
interpolacin en la recta de calibrado, y se analiza la exactitud de la determinacin a travs de
la recuperacin de las concentraciones nominales del analito.
21
Por otro lado, cuando se desean comparar dos mtodos analticos, se determina, por
ambos mtodos, el contenido de un analito en una serie de muestras en las que su
concentracin es variable (dentro del rango lineal de cada uno de ellos).
En ambos casos se trata de comparar parejas de valores que idealmente seran iguales, y
estudiar el posible desvo de esta situacin ideal, en un contexto estadstico y con un cierto
nivel de confianza. Es por esta razn que ambos procedimientos se incluyen en la presente
clase.
Exactitud de un mtodo analtico
Si se dispone de una serie de patrones de concentracin conocida para la validacin de un
mtodo analtico, se procede del modo siguiente. En primer lugar se miden sus respuestas,
incluyendo rplicas de cada medicin (usualmente cada patrn se mide por triplicado). Se
estima la concentracin a partir de cada respuesta analtica, se promedian los valores para
cada nivel y se calcula el desvo estndar asociado. Luego se realiza una regresin lineal de
los promedios en funcin de las concentraciones nominales a cada nivel. El anlisis difiere en
ciertas sutilezas respecto del realizado en el caso de la Clase 1.
La nomenclatura empleada aqu se describe a continuacin: x indica la variable
concentracin nominal de cada nivel, y la variable concentracin promedio predicha para las
rplicas de cada nivel, n el nmero de rplicas, q el nmero de niveles de validacin
estudiados, y s(y
i
) el desvo estndar en la seal para cada nivel de concentracin (x
i
). Hay q
desvos estndar, dados por:
s(y
i
) =
1
) (
1
2

=
n
y y
n
j
i ij
(1)
En la ecuacin (1), y
ij
indica la concentracin para el patrn i en la rplica j, e
i
y es el
promedio de las n rplicas para el nivel i.
Debemos notar que una de las premisas para realizar un estudio por regresin lineal
simple es que la variancia de la variable y sea aproximadamente constante, u
homoscedstica.
11
La Figura 1 muestra las diferencias entre una variancia homoscedstica y
otra heteroscedstica.
En la calibracin de datos analticos se supone que la distribucin del ruido instrumental
es constante a lo largo del rango de calibracin, o en otras palabras, que la respuesta analtica
es homoscedstica. Esto no es necesariamente as, sin embargo, si la variable y es la
concentracin predicha para patrones de validacin, y no la respuesta analtica.
Como se estudi en la Clase 1, el desvo estndar en la concentracin predicha mediante
una recta de calibrado no es constante para diferentes muestras, sino que vara con la
concentracin del analito. Es decir que, en principio, la variable y que estamos considerando
en esta clase no es homoscedstica. En estos casos, se recomienda realizar una regresin
lineal mediante cuadrados mnimos ponderados (WLS, por weighted least-squares) y no una
regresin ordinaria (OLS, por ordinary least-squares) como la empleada en la Clase 1.
Dado que el mtodo WLS es ms complicado que el OLS, lo recomendable es
previamente verificar si efectivamente la variancia no es constante, para utilizar el primero en
los casos en los que es estrictamente necesario. Una prueba de constancia de la variancia (o
prueba de la homoscedasticidad) puede realizarse mediante el uso del parmetro estadstico F,
calculando el valor "experimental" F
exp
definido por el cociente entre el mximo y el mnimo
valor de las variancias en las rplicas de los patrones [se toma como medida de cada variancia
el valor de s(y
i
)
2
]:
22
F
exp
=
[ ]
[ ]
2
2
) ( min
) ( max
i
i
y s
y s
(2)
Este valor se compara luego con el valor crtico de tablas para n 1 y n 1 grados de
libertad (usualmente con el 95% de confianza). Si F
exp
> F
crit
entonces se recomienda calcular
los parmetros A y B de la regresin con el mtodo WLS que se describe ms adelante.





Figura 1. Arriba, variancia homoscedstica; abajo, variancia heteroscedstica.
Regin de confianza en el caso homoscedstico
Si se ha podido aplicar el mtodo OLS descrito en la Clase 1, debido a que las variancias
son aproximadamente constantes, se dispone de los valores ajustados de A y B y de sus
desvos estndar. Estos parmetros han sido utilizados tradicionalmente para determinar si las
concentraciones estimadas de los patrones de validacin se diferencian estadsticamente (o
no), de las nominales. El procedimiento consista en verificar si los valores ideales de A y B (1
y 0 respectivamente) estaban contenidos dentro de los correspondientes intervalos de
confianza para la pendiente y ordenada al origen ajustadas. Sin embargo, actualmente se
considera que este procedimiento es incorrecto, puesto que no tiene en cuenta que A y B no
23
son variables estadsticamente independientes, y que siempre existe un cierto grado de
correlacin entre ellas.
El procedimiento correcto debe considerar el intervalo de confianza conjunto entre la
pendiente y la ordenada al origen. Este intervalo es una regin en el plano de las dos variables
(pendiente y ordenada al origen) que tiene forma elptica. Por este motivo, la prueba
estadstica correcta consiste en investigar si el punto (1,0) est contenido en la regin elptica
de confianza conjunta de la pendiente y la ordenada al origen. La prueba se conoce como
EJCR (por elliptical joint confidence region). Especficamente, la regin elptica est
descripta por la siguiente ecuacin:
9

2 , 2
2
/
1
2 2
1
2
2 ) ( ) )( ( 2 ) (

= =
= + +
q x y
q
i
i
q
i
i
F s x A x B A B q (3)
En la ecuacin precedente, y son las variables que corresponden a las dos dimensiones
del plano en que se representa la regin elptica, y F
2
,
q2
es el valor del parmetro estadstico
F con 2 y q 2 grados de libertad para un dado nivel de confianza (usualmente 95%).
Por lo tanto, debe dibujarse en un grfico bidimensional la regin anterior y verificar si
contiene al punto (1,0). Detalles de cmo se dibuja esta elipse en un caso particular se dan en
el ejercicio resuelto del documento que se acompaa. La Figura 2 ilustra este tipo de regin
para un caso tpico: si el punto (1,0) no est contenido dentro de la elipse, esto implica que el
mtodo no es exacto.
Es importante remarcar que el tamao de la elipse, que est controlado, entre otros
parmetros, por el desvo estndar de la regresin s
y/x
, da una idea de la precisin del mtodo
analtico que se est probando. En este sentido, es importante utilizar un nmero significativo
de niveles de concentracin para la prueba de exactitud, de manera que s
y/x
sea representativo
de la regresin. De lo contrario, si se emplean slo unos pocos niveles de concentracin, se
corre el riesgo de que la elipse abarque un rea considerable, e incluya al punto ideal (1,0)
slo por azar. Vase la Figura 3 para aclarar este punto.
Ntese que el valor de s
y/x
en este caso es similar al parmetro usualmente empleado en la
comparacin de concentraciones predichas y nominales, llamado RMSE (por root mean
square error):
RMSE =
q
y y

2
nominal predicho
) (
(4)
Se divide el numerador por q (y no por q 1) debido a que RMSE no es un desvo
estndar, sino la raz cuadrada de una media de desvos.














24
Pendiente
1.0 1.1
O
r
d
e
n
a
d
a

a
l

o
r
i
g
e
n
-0.2
0.0
0.2
Pendiente
1.0 1.1
O
r
d
e
n
a
d
a

a
l

o
r
i
g
e
n
-0.2
0.0
0.2














Figura 2. Dos regiones elpticas de confianza conjunta. Izquierda, mtodo exacto.
Derecha, mtodo no exacto. El cuadrado marca el punto ideal (1,0).








Figura 3. Distintos tipos de elipses, de acuerdo con la exactitud y precisin: verde, exacta
y precisa; celeste, exacta e imprecisa; amarilla, inexacta e imprecisa; naranja, inexacta y
precisa. El cuadrado negro marca el punto ideal (1,0).

Regresin ponderada
Si los datos no cumplen con la prueba de homoscedasticidad, el anlisis de los datos de
validacin debe hacerse mediante regresin lineal ponderada. En este caso se calculan la
pendiente (A) y ordenada al origen (B) de la recta ajustada a la ecuacin y = A x + B,
minimizando la siguiente suma ponderada de cuadrados (SC):
SC =

=

q
i
i i i
y y w
1
2
)

( (5)
Pendiente
O
r
d
e
n
a
d
a

a
l

o
r
i
g
e
n


25
donde w
i
es el "peso" o "ponderacin" aplicado a cada punto de la regresin, q el nmero de
puntos, y
i
el valor de la variable y en cada punto (los promedios
i
y de las rplicas) e y es el
promedio de los valores de la variable y. En el mtodo OLS utilizado en calibracin, la suma
de cuadrados no incluye peso o ponderacin alguna.
Cuando los datos son heteroscedsticos, el peso w
i
se define como inversamente
proporcional a la variancia de la variable en el punto i:
w
i
=
2
) (
1
i
y s
(6)
El efecto concreto del pesado de los datos en forma inversamente proporcional a su
variancia es dar mayor contribucin, en la regresin, a los datos ms precisos, y
comparativamente menor peso a los menos precisos.
Los valores estimados de A y B de una regresin lineal ponderada se calculan mediante las
siguientes ecuaciones:
A =
2
1
1
) (
) )( (
w
q
i
i i
q
i
w i w i i
x x w
y y x x w

=
=
(7)
B =
w
y A
w
x (8)
donde x
i
es la concentracin de cada uno de los q patrones de validacin, y los parmetros
w
x
e
w
y son las coordenadas del centro de gravedad pesado por donde pasa la recta ajustada, que
estn dadas por:
w
x =

=
=
q
i
i
q
i
i i
w
x w
1
1
(9)
w
y =

=
=
q
i
i
q
i
i i
w
y w
1
1
(10)
En el mtodo WLS el parmetro s
y/x
(el desvo estndar de los residuos de la regresin)
est dado por:
s
y/x
=
2
)

(
1
2

=
q
y y w
q
i
i i i
(11)
donde y
i
es la respuesta experimental, e
i
y

representa la respuesta estimada en cada punto,

esto es,
i
y

= A x
i
+ B.
El lector podr comprobar que si todos los w
i
son idnticos entre s (homoscedasticidad
perfecta), las ecuaciones anteriores se reducen al caso OLS tratado en la Clase 1.
Regin de confianza en el caso heteroscedstico
Cuando se aplica el mtodo WLS para determinar A y B, la prueba de exactitud del
mtodo analtico es idntica a la descrita en el caso OLS, excepto que la ecuacin que
describe la elipse de confianza conjunta es:
26
2 , 2
2
/
1
2 2
1 1
2
2 ) ( ) )( ( 2 ) (

= = =
= + +
q x y
q
i
i i
q
i
i i
q
i
i
F s x w A x w B A w B (12)
Comparacin de mtodos analticos
La comparacin de dos mtodos se lleva a cabo disponiendo de una serie de muestras para
las que se ha determinado el contenido de un analito por dos mtodos alternativos.
Usualmente se mide cada muestra por triplicado por ambos mtodos, y se aplica un modelo de
regresin lineal para verificar si los resultados provistos por ambos mtodos son comparables.
Cada muestra estudiada proporciona entonces una concentracin predicha por cada uno de
los dos mtodos, acompaadas por sus respectivas variancias. Supongamos que los resultados
determinados por el mtodo 1 se consideran la variable x y los provistos por el mtodo 2 la
variable y (en la comparacin de un mtodo dado frente a otro considerado como referencia,
este ltimo se toma como mtodo 1). Ambas variables, por lo tanto, tienen asociada una
incertidumbre finita. La regresin lineal de y vs. x en este caso difiere tanto del mtodo OLS
como del WLS, ya que en estos dos ltimos la suposicin bsica es que no hay error en la
variable x, aunque en realidad debera decirse que en OLS y WLS la incertidumbre asociada a
la variable x (concentracin nominal de patrones) es significativamente menor que la asociada
a la variable y (respuesta analtica de los patrones, o concentracin predicha por un dado
mtodo). Este supuesto no se cumple en la comparacin de mtodos analticos, y es necesario
recurrir a un mtodo de regresin que tenga en cuenta los errores en ambos ejes. Un mtodo
popular para estos casos es el de cuadrados mnimos bivariados o BLS (por bivariate least-
squares).
12

En la tcnica BLS la pendiente y la ordenada al origen de la recta ajustada se obtienen
minimizando una funcin idntica a la mostrada en la ecuacin (5), excepto que los pesos son
una funcin de las variancias en ambas variables:
[ ]
1
2 2 2
) ( ) (

+ =
i i i
x s A y s w (13)
En otras palabras, los pesos de la regresin "doblemente ponderada" BLS se eligen como
inversamente proporcionales a una combinacin de las variancias en x y en y.
Lamentablemente no existen frmulas explcitas para estimar la pendiente y la ordenada al
origen cuando los pesos tienen la forma dada por la ecuacin (13), y debe recurrirse a un
algoritmo matemtico iterativo que no est disponible en los programas comerciales de ajuste
por cuadrados mnimos. Esto es as porque en la ecuacin (13) interviene la pendiente
estimada A, que a su vez depende de los pesos.
Sin embargo, hay ocasiones en que no es imprescindible aplicar el mtodo BLS: cuando la
variancia en la variable x es significativamente menor que en la variable y, la comparacin
puede realizarse con xito empleando el mtodo WLS, considerando que no hay error en la
variable x. De hecho, si s(x
i
)
2
<< s(y
i
)
2
, la ecuacin (13) se reduce al caso WLS en que w
i
=
s(y
i
)
2
. Por este motivo se aconseja asignar, para la regresin lineal, la variable x a los valores
hallados por el mtodo ms preciso, y la variable y al mtodo menos preciso.
Si puede hacerse esta ltima aproximacin, la comparacin de mtodos consiste en el
clculo de la pendiente y ordenada al origen mediante WLS, y consideracin de la regin
elptica de confianza conjunta, tal como se describi para el estudio de exactitud. Si el punto
ideal (1,0) est contenido dentro de la elipse, los mtodos son comparables estadsticamente
en cuanto a la prediccin de la concentracin del analito en las muestras de validacin.
Se recomienda consultar el trabajo que se adjunta (LECTURA ADICIONAL CLASE
2.PDF), en el que se ilustran los peligros de no emplear el mtodo correcto de regresin para
la comparacin de mtodos analticos. Tambin se discute el hecho de que en ciertos casos los
mtodos WLS y BLS pueden producir resultados similares, pero muy diferentes a los
provistos por OLS.
27
Programas de computacin
Usuarios de MATLAB: se provee acceso a la rutina EJCR.M que puede usarse para
aplicar los mtodos OLS, WLS y BLS, y generar la elipse correspondiente.
Usuarios de QB: se provee acceso al programa EJCR.EXE, que realiza las operaciones
necesarias pero no grafica la elipse. Esta ltima puede obtenerse importando los datos
generados por el programa en un entorno grfico apropiado.
Vase tambin el ejercicio resuelto detalladamente que se acompaa.
Ejercicio resuelto
1) La Tabla 1 muestra datos para analizar la exactitud de un mtodo analtico. Determine si
el mtodo es exacto mediante regresin lineal y estudio de la regin elptica de confianza
conjunta para A y B.

Tabla 1. Concentraciones nominales de patrones, y valores hallados por un
mtodo analtico (con sus desvos estndar).
Muestra Nominal Hallada
(promedio de
cinco rplicas)
Desvo estndar
1
2
3
4
5
6
7
0,05
5,16
9,91
14,90
19,80
24,90
30,00
0,06
5,02
10,00
15,20
19,90
25,00
30,00
0,06
0,05
0,04
0,02
0,03
0,04
0,06

2) La Tabla 2 muestra datos para la comparacin de dos mtodos analticos (promedios de
tres rplicas en cada caso), incluyendo los desvos estndar de cada uno. Compare los
resultados mediante regresin WLS y anlisis de la regin elptica conjunta.

Tabla 2. Concentraciones halladas por dos mtodos analticos con sus desvos
estndar.
Muestra Mtodo 1 Desvo
estndar
Mtodo 2 Desvo
estndar
1
2
3
4
5
6
7
0,05
5,16
9,91
14,90
19,80
24,90
30,00
0,03
0,02
0,02
0,01
0,02
0,01
0,03
0,06
5,02
10,00
15,20
19,90
25,00
30,00
0,06
0,05
0,04
0,02
0,03
0,04
0,06
Respuesta detallada
1) En primer lugar debemos determinar si los datos de la Tabla 1 son homoscedsticos.
Para ello calculamos el cociente:
F
exp
=
[ ]
[ ]
9
) 02 , 0 (
) 06 , 0 (
) ( min
) ( max
2
2
2
2
= =
i
i
y s
y s

28
Dado que este ltimo valor es mayor que el de tabla [F
crit
(95%,4,4) = 6,5] concluimos
que los datos son heteroscedsticos, y que debemos emplear el mtodo WLS para el anlisis
por regresin lineal. Calculamos entonces los pesos w
i
de cada dato, los que se renen en la
Tabla 3. El clculo de cada peso se realiza mediante la ecuacin:
w
i
=

q
i
i
i
y s
y qs
1
2
2
) (
) (

De esta manera, se consigue que la suma de los pesos sea igual a q, lo que facilita los
clculos.

Tabla 3. Datos x
i
, y
i
y pesos w
i
para exactitud de mtodos.
i x
i
y
i
w
i

1
2
3
4
5
6
7
0,05
5,16
9,91
14,90
19,80
24,90
30,00
0,06
5,02
10,00
15,20
19,90
25,00
30,00
0,33
0,48
0,75
3,00
1,33
0,75
0,33

Note que los pesos son mayores para datos con menor desvo estndar.
Para la muestra nmero 1, por ejemplo, tendremos:
w
1
= 33 , 0
) 06 , 0 (
1
) 04 , 0 (
1
) 03 , 0 (
1
) 02 , 0 (
1
) 04 , 0 (
1
) 05 , 0 (
1
) 06 , 0 (
1
) 06 , 0 (
7
2 2 2 2 2 2 2
2
=
+ + + + + +

Luego debemos calcular los valores de los diferentes productos de variables y pesos, que
se muestran en la Tabla 4.


Tabla 4. Clculos parciales para el mtodo WLS.
i
i i
x w
2
i i
x w
i i
y w
i i i
y x w
1
2
3
4
5
6
7
0,0167
2,4839
7,4538
44,8281
26,4756
18,7285
10,0287
0,0008
12,8169
73,8671
667,9384
524,2178
466,3399
300,8596
0,0201
2,4165
7,5215
45,7307
26,6094
18,8037
10,0287
0,0010
12,4692
74,5380
681,3868
526,8653
468,2128
300,8596
Total 110,0153 2.046,0405 111,1304 2.064,3327

Con los resultados anteriores, calculamos:
w
x = 110,0153 / 7 = 15,72
w
y = 111,1304 / 7 = 15,88
29
A =
2
1
1
) (
) )( (
w
q
i
i i
q
i
w i w i i
x x w
y y x x w

=
=
=
= 0022 , 1
) 72 , 15 ( 7 0405 , 046 . 2
88 , 15 72 , 15 7 3327 , 064 . 2
2
2
1
2
1
=


=

=
=
w
q
i
i i
w w
q
i
i i i
x v x w
y x v y x w

B =
w
y A
w
x = 15,88 1,0022 15,72 = 0,12

Estos valores deben acotarse al nmero correcto de cifras significativas conociendo los
desvos estndar correspondientes. Los desvos estndar en la pendiente y la ordenada al
origen, estimadas por el mtodo WLS de regresin lineal, estn dados por ecuaciones
anlogas a las empleadas en el mtodo OLS, pero con los valores de x e y pesados
convenientemente:
s
A
=
xx
x y
Q
s
/

s
B
=
xx
w
x y
Q
x
m
s
2
/
1
+
donde s
y/x
se determina mediante la ecuacin apropiada para datos pesados (WLS), tal como
se describi en la parte terica:
s
y/x
=
2
)

(
1
2

=
q
y y w
q
i
i i i
= 0,16
Por su parte, Q
xx
est dado por:
Q
xx
=
2
1
2
w
q
i
i i
x q x w

=
= 316,2
A partir de estos parmetros, se obtiene (redondeando a una cifra significativa):
s
A
= 0,01
s
B
= 0,2
Por lo tanto, la pendiente y la ordenada al origen se informan como A = 1,00(1) y B =
0,1(2).
Para el estudio de la regin elptica, necesitamos los siguientes parmetros:
q = 7
=

=
q
i
i i
x w
1
110,0153
=

=
q
i
i i
x w
1
2
2.046,0405
=
2
/ x y
s 0,026
=
2 , 2 q
F 8,6
Por lo tanto, la ecuacin de la elipse estar dada por:
44 , 0 ) 1 ( 0405 , 046 . 2 ) 1 , 0 )( 1 ( 0306 , 220 ) 1 , 0 ( 7
2 2
= + +
30
La ecuacin anterior tiene la siguiente forma:
4
2
3 2
2
1
) ( ) )( ( ) ( a B a B A a A a = + +
donde a
1
, a
2
, a
3
, a
4
, A y B son constantes y y son las variables. Los valores de las
constantes son:
a
1
= 2,04610
3

a
2
= 220,03
a
3
= 7

a
4
= 0,44
A = 1
B = 0,1
La ecuacin describe una elipse en el plano (,). Para dibujar esta elipse es necesario
conocer sus lmites en el eje de las abscisas (). Estos lmites se pueden calcular a partir de
las siguientes consideraciones. En primer lugar re-escribimos la ecuacin anterior como de
segundo grado en ( B):
[ ] 0 ) ( ) )( ( ) (
4
2
1 2
2
3
= + + a A a B A a B a
Luego calculamos los valores de ( B) a partir de la resolvente de segundo grado:
( B) =
[ ]
3
4
2
1 3
2
2
2 2
2
) ( 4 ) ( ) (
a
a A a a A a A a

Observamos que slo se obtendrn valores reales de ( B) si se cumple que la expresin
dentro de la raz cuadrada es positiva; los lmites se encuentran cuando esta expresin se
iguala a cero:
[ ] 0 ) ( 4 ) (
4
2
1 3
2
2
2
= a A a a A a
de donde se pueden calcular los lmites superior e inferior de ( A) como:
LIM( A) =
1 3
2
2
4 3
4
4
a a a
a a
+
= 0,0373
Para construir una tabla de valores de y , y graficar la elipse se calculan los
correspondientes valores de dentro de estos lmites de mediante la ecuacin:
= B +
[ ]
3
4
2
1 3
2
2
2 2
2
) ) ( 4 ) ( ) (
a
a A a a A a A a

Ejemplos de pares de valores de y calculados con la ecuacin anterior son:

A
0,0373
0,0273
0,0173
0,0073
0,0027
0,0127
0,0227
0,0327
0,9627
0,9727
0,9827
0,9927
1,0027
1,0127
1,0227
1,0327
0,7110
0,6971
0,5903
0,4563
0,3027
0,1306
0,0642
0,3022
0,6520
0,3516
0,1441
0,0362
0,1970
0,3393
0,4587
0,5350

La grfica de la elipse correspondiente, construida con datos de la tabla anterior, es la
siguiente (el cuadrado slido marca el punto ideal de pendiente 1 y ordenada 0):


31
Pendiente ()
0.96 0.98 1.00 1.02 1.04 1.06
O
r
d
e
n
a
d
a

a
l

o
r
i
g
e
n

(

)
-1
0
1






















Se aprecia claramente que el punto ideal (1,0) est contenido en la elipse, por lo que el
mtodo analizado es exacto.
Usuarios de MATLAB: los datos de la tabla estn contenidos en el archivo de texto
'DATOS_EXACT_WLS.TXT', y organizados de tal modo que pueden estudiarse mediante la
rutina de MATLAB 'EJCR.M', de la manera descrita en la Clase 1. Esta rutina proporciona los
valores ajustados de pendiente y ordenada al origen, produce una figura con la
correspondiente elipse, y genera un archivo de texto que contiene los valores numricos
necesarios para graficar la regin elptica mediante programas grficos: la primera columna
de este archivo contiene los valores de pendiente y la segunda y tercera los valores de
ordenada al origen que corresponden a las dos mitades de la elipse.
Usuarios de QB: los datos estn en el archivo 'D_E_WLS.TXT' para ser estudiados por
EJCR.EXE.

2) En este caso se trata de comparar dos mtodos analticos. Los resultados del anlisis
mediante WLS son idnticos a los discutidos para la parte 1) (porqu?).
Cuando se realiza un anlisis BLS se calculan los siguientes valores de pendiente y
ordenada al origen:
A = 1.00(1)
B = 0,1(2)
Ntese que son idnticos a los hallados mediante la tcnica WLS. La explicacin es que
los valores de la variable x (las concentraciones estimadas mediante el mtodo analtico 1)
tienen desvos estndar menores que los de y (las concentraciones estimadas mediante el
mtodo analtico 2). Como consecuencia, es prcticamente lo mismo realizar el anlisis
mediante WLS o mediante BLS.
Usuarios de MATLAB: los datos de la tabla estn contenidos en el archivo de texto
'DATOS_COMPAR_BLS.TXT', y organizados de tal modo que pueden estudiarse mediante
la rutina de MATLAB 'EJCR.M', de la manera descrita en la Clase 1. Esta rutina proporciona
32
los valores ajustados de pendiente y ordenada al origen, produce una figura con la
correspondiente elipse, y genera un archivo de texto que contiene los valores numricos
necesarios para graficar la regin elptica mediante programas grficos: la primera columna
de este archivo contiene los valores de pendiente y la segunda y tercera los valores de
ordenada al origen que corresponden a las dos mitades de la elipse.
Usuarios de QB: los datos estn en D_C_BLS.TXT.
Ejercicios propuestos
1) Los valores siguientes corresponden a la comparacin entre las predicciones efectuadas
para la determinacin de teofilina en sangre mediante un mtodo espectrofotomtrico,
comparado con un mtodo de inmunofluorescencia polarizada (FPIA). No se determinaron las
muestras por triplicado debido a la cantidad insuficiente de muestra (sueros de pacientes
peditricos). Sin embargo, se estima que los desvos estndar promedio para cada mtodo son:
0.4 g ml
1
para el mtodo FPIA y 0.9 g ml
1
para el espectrofotomtrico. Llevar a cabo el
anlisis de comparacin de mtodos mediante la construccin de la elipse apropiada,
suponiendo que los desvos estndar anteriores son constantes para todos los datos.

Muestra Teofilina hallada / g ml
1

FPIA Espectrofotomtrico
1 0.0 1.4
2 6.5 5.3
3 33.2 30.6
4 9.7 12.7
5 12.2 14.9
6 14.8 17.7
7 20.1 19.9
8 15.6 18.5
9 19.3 20.4
10 16.8 22.6
11 24.2 27.1
12 28.6 29.8
13 0.0 0.0
14 3.9 1.6
15 8.0 5.7
16 11.2 14.2
17 11.4 15.3
18 14.7 17.5
19 16.5 17.6
20 16.6 19.4
21 19.8 18.7
22 19.5 18.9
23 23.0 21.2

2) En la determinacin del antibitico ciprofloxacina en orina se emplean tres mtodos
multivariados diferentes. La tabla que sigue proporciona datos para estudiar la exactitud de
cada mtodo, frente a un grupo de muestras de referencia, cuya concentracin de analito es
conocida. Grafique las correspondientes EJCR y comente los resultados. Note que no hay
datos disponibles acerca de los desvos estndar, por lo que deber realizarse un anlisis OLS.

33
Muestra Nominal Mtodo 1 Mtodo 2 Mtodo 3
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
190
87
23
13
38
150
26
58
125
65
90
160
48
75
0
0
0
0
173
80
26
6
19
142
33
67
146
63
89
158
41
64
10
5
3
11
214
86
29
14
28
145
16
60
126
67
92
172
52
68
11
8
7
7
208
107
46
28
50
160
47
80
146
75
120
174
61
92
26
21
30
27

Se recomienda emplear la rutina de MATLAB 'EJCR.M' (o su equivalente en QB)
organizando los datos del ejercicio propuesto de la manera que se presenta en los archivos de
texto correspondientes al ejercicio resuelto.

34
Resoluciones a los ejercicios propuestos
Respuestas a los ejercicios propuestos en la clase 1

1) Empleando las ecuaciones de regresin lineal y clculo de cifras de mrito expuestas en
la teora de la clase 1, se obtienen los siguientes resultados respecto de la sensibilidad:

Mtodo Sensibilidad de calibracin Sensibilidad analtica
A
B
1,552
153.0
4,310
2

1,810
3


Ntese que la sensibilidad de calibracin tiene cifras significativas compatibles con su
desvo estndar. En cambio, la sensibilidad analtica se informa con un nmero de cifras
significativas que depende del cociente sensibilidad/ruido. Dado que el ruido se conoce con
una o a lo sumo dos cifras significativas, la sensibilidad analtica se informa con dos cifras
como mximo.
Estos resultados indican que tanto la sensibilidad de calibracin como la sensibilidad
analtica es significativamente mayor para el mtodo B. Sin embargo, la sensibilidad de
calibracin es dos rdenes de magnitud mayor para B, mientras que la sensibilidad analtica es
superior, pero en menos de un orden de magnitud. La sensibilidad analtica es un mejor
parmetro para la comparacin.

2) Las concentraciones predichas para la incgnita y sus desvos estndar, usando ambos
mtodos, son:
Mtodo Concentracin (desvo
estndar)
A
B
0,153(1)
0,1517(4)

Como puede apreciarse, el desvo estndar calculado mediante el mtodo B es menor,
debido a su mayor sensibilidad analtica.
Como comentario, la sensibilidad analtica parece comportarse mejor, en cuanto cifra de
mrito, para calificar el desempeo de estos dos mtodos, ya que se correlaciona con la
precisin de cada clculo de concentracin.

3) Cifras de mrito en cada caso:

Caso Sensibilidad Sensibilidad
analtica
1/ LOD LOQ Rango
lineal
A 13,2 114,1 0,009 0,02 0,06 0,06-0,95
B 9,3 91,2 0,011 0,03 0,08 0,08-1,31

Debe notarse que el caso A posee efectivamente un blanco significativo, ya que la
ordenada al origen es significativamente distinta de cero.
En cuanto a las cifras de mrito, son algo mejores en el caso A, aunque el rango lineal es
tambin sensiblemente menor.
35
La eleccin entre estos dos casos es un ejemplo de que no se puede tener todo en la vida:
habra que decidir qu es ms importante para aplicaciones concretas, si el rango lineal
extendido o la mayor sensibilidad.

Respuesta a los ejercicios propuestos en la clase 2
1) La tabla de datos debe complementarse con la de los desvos estndar. En este caso,
dado que el desvo estndar para FPIA es menor que para el mtodo espectrofotomtrico,
podra emplearse un anlisis de tipo WLS, con los valores de desvo estndar igual a 0,9 para
todos los datos de la tabla anterior. Esto ltimo, sin embargo, es idntico al uso de un mtodo
OLS (ver la teora de la clase 2). Por lo tanto, podemos en este caso particular realizar una
regresin lineal ordinaria empleando como variable y los valores provistos por el mtodo
espectrofotomtrico y como variable x los provistos por el mtodo FPIA.
Los resultados del anlisis OLS son:
Pendiente: 0,983
Ordenada al origen: 1,35
s
y/x
: 2,35

La elipse correspondiente contiene, aunque marginalmente, al punto ideal (1,0):



Vale la pena destacar el resultado que se obtendra mediante un anlisis BLS, esto es,
considerando que tanto la variable x como la y estn sujetas a incertidumbre:
Pendiente: 0.996
Ordenada al origen: 1.16
s
y/x
: 2.39
36
Pendiente
0.8 0.9 1.0 1.1
O
r
d
e
n
a
d
a

a
l

o
r
i
g
e
n
-10
0
10
20
30
1
2
3
Como puede apreciarse en la figura siguiente, el resultado final en cuanto al estudio de la
comparacin de los mtodos es similar al hallado mediante el anlisis OLS sencillo.


La rutina de MATLAB 'EJCR.M', proporciona los valores ajustados de pendiente y
ordenada al origen, produce una figura con la correspondiente elipse, y genera un archivo de
texto que contiene los valores numricos necesarios para graficar la regin elptica mediante
programas grficos: la primera columna de este archivo contiene los valores de pendiente y la
segunda y tercera los valores de ordenada al origen que corresponden a las dos mitades de la
elipse.

2) Se requiere graficar tres elipses, calculadas por OLS, que proporcionan visualmente
una buena impresin de la exactitud y precisin relativas de los tres mtodos probados:















37
La conclusin es que el mtodo ms preciso es el 3 (menor tamao de elipse), pero es muy
poco exacto (alejado del punto ideal). El mtodo 2 es el ms exacto, y adems es ms preciso
que el mtodo 1.

38
Referencias

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Fundamentals and single component calibration, Pure & Appl. Chem. 1998, 70, 993-
1014.
2. W. P. Gardiner, Statistical analysis methods for chemists. A software-based approach,
The Royal Society of Chemistry, Cambridge, 1997.
3. J. N. Miller y J. C. Miller, Estadstica y quimiometra para qumica analtica, 4ta.
Edicin, Prentice Hall, Madrid, 2002.
4. C. A. Clayton, J. W. Hines y P. D. Elkins, Detection limits with specified assurance
probabilities, Anal. Chem. 1987, 59, 2506-2514.
5. L. A. Currie, Detection and quantification limits: origins and historical perspective, Anal.
Chim. Acta 1999, 391, 127-134.
6. L. A. Currie, Recommendations in Evaluation of Analytical Methods including
Detection and Quantification Capabilities, Pure Appl. Chem. 1995, 67, 1699-1723.
7. P. Wilrich, ISO/DIS 11843-1,2 (1995), Capability of Detection, ISO/TC69/SC6, ISO
Standard, 11843-1, 1977.
8. M. Valcrcel, Principios de qumica analtica, Springer-Verlag Ibrica, Barcelona, 1999,
p. 81.
9. A. G. Gonzlez, M. A. Herrador y A. G. Asuero, Intra-laboratory testing of method
accuracy from recovery assays, Talanta 1999, 48, 729-736.
10. D. L. Massart, B. G. M. Vandeginste, L. M. C. Buydens, S. De Jong, P. J. Lewi y J.
Smeyers-Verbeke, Handbook of Chemometrics and Qualimetrics, Elsevier, Amsterdam,
1997, Captulo 8.
11. Los trminos homoscedstico/a y homoscedasticidad existen en el contexto del
"Diccionario Estadstico" que puede consultarse en http://www.estadistico.com/dic.html.
Tambin se usan, en forma equivalente, homocedstico/a y homocedasticidad.
12. J. Riu y F. X. Rius, Assessing the accuracy of analyical methods using linear regression
with errors in both axes, Anal. Chem. 1996, 68, 1851-1857.