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Absorbancia a 520 nm
Curva Estandar de Determinacin de vitamina C
Figura 22: Curva estndar de cido ascrbico para la determinacin del contenido de
vitamina C
3. Preparacin de la muestra
La fruta fue lavada con agua destilada y luego se separ la pulpa de la cscara y
semilla. Se utiliz la pulpa para la preparacin de los extractos. Se peso 1 g de muestra y se
mezcl con 9 mL de solucin de cido metafosforico al 6% y se llev a centrifugar a 6000
RPM por espacio de 10 minutos a 4C. Luego se procedi a filtar con paper Whatman N1,
seguido de otra filtracin usando papel filtro 0.45 m ambas al vaco.
4. Procedimiento
Una vez obtenida la solucin de trabajo (muestra), con una micropipeta se tom
1200 L de la muestra (sobrenadante claro) y se diluyo con 400 L de reactivo DTC en
un tubo de ensayo. Este procedimiento se realiz por triplicado. Al mismo tiempo se
prepar un blanco con 1200 L de solucin de cido metafsforico al 6% en lugar de la
muestra y se procedi de igual manera que con la muestra.
Se agit en el vortex y se llev a incubar en bao mara a 37 C por un tiepo de 3
horas.
Transcurrido el tiempo se procedo a enfriar por un espacio de 10 minutos, haciendo
uso de hielo. Luego se aadi lentamente 2 mL de solucin fra de cido sulfrico 12mol/L
a cada uno de los tubos de ensayo, y se procedi agitar la mezcla en el vortex.
Se llev a cero el espectrofotmetro haciendo uso del blanco, para ello se transfiri
la solucin a una cubeta de vidrio limpia, sacudindose cuidadosamente para eliminar las
burbujas que podran estar presentes y se realiz la lectura a 520 nm.
Se elabor una curva patrn utilizando cido ascrbico como compuesto de
referencia. Los resultados se expresaron en mg equivalente de cido ascrbico / 100g de
muestra.
a + bX: Proviene de la curva estndar.Donde X: Abs
520nm.
La ecuacin que se obtuvo
a partir de la grfica de la curva estndar es la siguiente:y = 3,9222x + 0,0085.
V: (Volumen de solvente en mL + Volumen de muestra en mL) / (Volumen de
muestra en mL). Se asume que la muestra tiene densidad igual a 1, es decir 1g=1mL.
mg de cido ascrbico/100 mL muestra = (a + bX) *V