M. de toxicidad M.

de toxicidad
EXPOSICI EXPOSICI EXPOSICI EXPOSICI N NN N XBs XBs XBs XBs- -- -CIN CIN CIN CIN TICA TICA TICA TICA
Efectos t Efectos t Efectos t Efectos t xicos xicos xicos xicos
Absorci Absorci Absorci Absorci n, metabolismo, n, metabolismo, n, metabolismo, n, metabolismo,
Distribuci Distribuci Distribuci Distribuci n, eliminaci n, eliminaci n, eliminaci n, eliminaci n nn n
Oral aguda o repetida, Oral aguda o repetida, Oral aguda o repetida, Oral aguda o repetida,
inhalaci inhalaci inhalaci inhalaci n, piel n, piel n, piel n, piel
Sistemas/ Sistemas/ Sistemas/ Sistemas/ rganos (SNC, pulm rganos (SNC, pulm rganos (SNC, pulm rganos (SNC, pulm n, reproductores, n, reproductores, n, reproductores, n, reproductores, etc etc etc etc), ), ), ),
Nivel celular/bioqu Nivel celular/bioqu Nivel celular/bioqu Nivel celular/bioqu mico mico mico mico
Nivel molecular (DNA, RNA, prote Nivel molecular (DNA, RNA, prote Nivel molecular (DNA, RNA, prote Nivel molecular (DNA, RNA, prote nas) nas) nas) nas)
Toxicodinmica:
Mecanismos de toxicidad de XBs
Estudia la manera de actuar de los xenobiticos
para ejercer sus efectos txicos sobre los
organismos vivos.
Cuando las defensas de la clula o del organismo se agotan, se
produce el efecto txico.
La toxicidad es la capacidad de un XB de producir un dao en las
clulas, tejidos u organismos; es una propiedad intrnseca de cada
compuesto y la intensidad de su efecto es dependiente de la dosis.
- Cambios pequeos en la estructura pueden acompaarse de cambios
importantes en la toxicidad.
- Las caractersticas estructurales: como epoxis, presencia de radicales
libres, etc, aumentan la reactividad y la posibilidad de reaccin txica.
Los organismos tienen defensas para manejar e intentar deshacerse
de la agresin qumica.
M. de toxicidad M. de toxicidad
Importancia del estudio del
mecanismo de accin txica
1. Proponer un tratamiento adecuado
en casos de intoxicacin.
2. Estudiar el desarrollo y uso de un
antdoto.
3. Aplicar pruebas diagnsticas.
4. Comprender las alteraciones
producidas a nivel bioqumico.
M. de toxicidad M. de toxicidad
La interaccin entre un XB o de sus metabolitos con una
biomolcula puede cambiar o alterar la funcin biolgica
de sta y en consecuencia derivar en una mala funcin,
un colapso del sistema, daos celulares, etc.
Conocer estas interacciones ser til para:
M. de M. de
toxicidad toxicidad
Mecanismos de
Mecanismos de
citotoxicidad
citotoxicidad
de
de
XBs
XBs
2 2- -Interacci Interacci n con METABOLITOS n con METABOLITOS
* * Da Da o o oxidativo oxidativo
- generacin de ROS, peroxidacin de lpidos, ( GSH) ( GSH)
Niveles de acci
Niveles de acci

n del t
n del t

xico
xico
1 1- -Interacci Interacci n con PROTE n con PROTE NAS y alteraci NAS y alteraci n de n de
su actividad su actividad
- - prdida de funcin crtica: unin a receptores, canales
inicos , , inhibicin de enzimas [ Or-P ]
- activacin de una respuesta perjudicial: induccin
enzimtica [ Or-Cl ], generacin de haptenos
3 3- -Interacci Interacci n con DNA, desregulaci n con DNA, desregulaci n de la expresi n de la expresi n n
g g nica y/o replicaci nica y/o replicaci n: n: alteraciones en divisin celular,
transcripcin y sntesis de protenas
M. de toxicidad M. de toxicidad
* Alteraciones metab * Alteraciones metab licas ( licas ( Ca2+, ATP Ca2+, ATP), ),
desregulaci desregulaci n de la actividad y n de la actividad y muerte celular: muerte celular:
- - apoptosis, necrosis
MECANISMOS MOLECULARES DE LA
MECANISMOS MOLECULARES DE LA
TOXICIDAD INTR
TOXICIDAD INTR

NSECA de
NSECA de
XBs
XBs
M. de toxicidad M. de toxicidad
Primarios Primarios
Inhibicin de enzimas, procesos bioqumicos
Alteracin del metabolismo energtico celular
Bioactivacin y generacin de especies reactivas (ROS y RNS)
Alteracin del balance redox (estrs oxidativo)
Secundarios Secundarios
Peroxidacin de lpidos
Alteracin de la homeostasis inica (Ca2+)
Unin covalente, desnaturalizacin de protenas, dao al DNA
Terciarios Terciarios
Alteracin de funciones metablicas no esenciales para la clula
pero s para el organismo
Cambios morfolgicos apreciables
Muerte celular (necrosis / apoptosis)
Desde el punto de vista de su desarrollo:
Bioactivaciones
Bioactivaciones
Transforman los compuestos en otros con mayor
reactividad qumica, compuestos electroflicos con alta
afinidad por nuclefilos: DNA, RNA, protenas, etc.
Conjunto de reacciones metab Conjunto de reacciones metab licas que incrementan la licas que incrementan la
toxicidad de los compuestos ( toxicidad de los compuestos (XBs XBs) de origen ) de origen
El BALANCE entre bioactivacin, detoxicacin y los mecanismos de
defensa de la clula es lo que determina si un metabolito reactivo
puede o no puede producir efectos txicos en las clulas.
La mayora de las bioactivaciones se producen como
consecuencia del metabolismo por CYP 450:
1. Metabolitos reactivos con mayor capacidad que sus precursores
para asociarse con biomolculas e interferir en sus funciones:
el N-hidroxilo del acetaminofen; el epoxi-benzo-a-pireno,
radicales libres, N-xidos, S-xidos, etc.
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2. Compuestos que generan especies reactivas de oxgeno (ROS) .
Quinonas, paraquat, etc.
M
M

s Ejemplos
s Ejemplos
Los derivados mas polares Los derivados mas polares o polarizables suelen ser
mas reactivos, i.e. N-hidroxilos, epoxis, etc.
El 7,8-dihidrodiol-9,10-epoxi-benzo(a)pireno
(resistente a la epoxi hidrolasa) se une al DNA, es
carcinognico.
Los derivados derivados dihalogenados dihalogenados se conjugan con glutation y pueden
generar sulfonios reactivos
Los derivados derivados oxo oxo suelen ser mas reactivos y mas txicos. La
hidrlisis por esterasas suele desactivar.
La inestabilidad de los glucur glucur nicos nicos hace que, , a veces, antes de su
excrecin puedan hidrolizarse hidrolizarse por las glucuronidasas; por ejemplo los
conjugados de N-OH OH- -aminas aminas que se hidrolicen generarn metabolitos
reactivos.
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Los Carbenos Carbenos y radicales libres son y radicales libres son reactivos con nuclefilos:
cidos nuclicos y protenas.
Rutas de
Rutas de
Bioactivaci
Bioactivaci

n
n
y toxicidad: casos
y toxicidad: casos
1- El tejido blanco contiene las enzimas para bioactivar
el XB y el lugar blanco para la especie txica:
- el Cit P450 bioactiva al Cl
4
C por deshalogenacin y el radical
Cl
3
C

reacciona con protenas y lpidos in situ

Cuando la vida media de los MR es larga vida media de los MR es larga pueden sufrir
bioactivacin en un tejido y ejercer la toxicidad en otro: :
2- Un tejido no blanco bioactiva al XB y ste experimenta una segunda
bioactivacin en el tejido blanco:
- el benceno es oxidado a fenol por el Cit P450 en hgado y pasa a mdula sea
donde pasa a hidroquinol, donde causa dao.
3- Un tejido no blanco bioactiva al XB y ste produce dao otro tejido
blanco:
- el hexano se oxida a 2,5-hexanodiona por el Cit P450 y la ALD en Hig. El
metabolito produce ligaduras cruzadas en los neurofilamentos, daando los
nervios perifricos.
M. de toxicidad M. de toxicidad
Mecanismos de Defensa
Mecanismos de Defensa
las enzimas de biotransformacin, de las dos
fases.
Los organismos tienen defensas para manejar la Los organismos tienen defensas para manejar la
agresi agresi n qu n qu mica y cuentan con: mica y cuentan con:
la presencia de antioxidantes (GSH, redoxinas, vitaminas, etc.) que
eliminan radicales libres y reducen las especies txicas
las protenas plasmticas que ligan los txicos en el plasma
sanguneo impidiendo su difusin hacia los tejidos.
M. de toxicidad M. de toxicidad
La clula responde a los estmulos externos adaptndose, si el cambio
va mas all de su capacidad de adaptacin se provoca un dao.
Algunas etapas del dao son REVERSIBLES, cuando funcionan los
mecanismos de defensa y de reparacin.
Si el estmulo es severo y persistente provoca dao y muerte celular.
Respuesta t
Respuesta t

xica
xica
La toxicidad de un XB es la capacidad de producir un La toxicidad de un XB es la capacidad de producir un
efecto perjudicial como consecuencia de la reactividad efecto perjudicial como consecuencia de la reactividad
de un XB y es una propiedad intr de un XB y es una propiedad intr nseca de cada nseca de cada
compuesto compuesto
la respuesta txica es cualquier cambio que
produce una lesin celular permanente
o la interrupcin de la homeostasis de una clula que la lleva a
una alteracin irreversible y a la muerte.
La caracterizacin de los efectos txicos es esencial en la
evaluacin del riesgo potencial de una sustancia.
M. de toxicidad M. de toxicidad
LA RESPUESTA TXICA OCURRE CUANDO TODAS LAS
DEFENSAS HAN SIDO VENCIDAS
Incluidos los mecanismos de reparacin.
Variaciones en la
Variaciones en la
respuesta t
respuesta t

xica a
xica a
XBs
XBs
M. de toxicidad M. de toxicidad
XENOBI XENOBI TICO TICO activaci activaci n n
Radicales libres
Ultracorta Lugar de formacin
CYPs
Inhibidores suicidas
CYP CYP
Vida media
Lugar de accin
Especies reactivas
de oxgeno
Metabolitos reactivos
Conjugados inestables
Muy larga Todo el organismo
Efectos acumulativos
Corta Macromolculas de la
propia clula
Larga Tejidos alejados del
lugar de produccin
Media Clulas del tejido
Clulas sanguineas
M. de toxicidad M. de toxicidad
Alteraci
Alteraci

n de procesos bioqu
n de procesos bioqu

micos
micos
por acci
por acci

n directa de
n directa de
xenobi
xenobi

ticos
ticos
Deficiencia de metabolitos o cofactores
Compuesto Intermediario Efecto
Metionina S-AMEtionina Deficiencia adenina/ ATP
Galactosamina UDP-galactosamina Depleccin UTP, UDP
Etanol NADPH Desequilibrio NADH/ NAD+
M. de toxicidad M. de toxicidad
Alteraci
Alteraci

n del balance energ

n del balance energ

tico celular
tico celular
Aumento del consumo de ATP para:
Aumento del consumo de ATP para:
(demanda energ
(demanda energ

tica)
tica)
- Sntesis de novo de GSH (ciclo del -glutamilo)
Conjugacin con metabolitos (GSH-t)
Oxidacin de GSH y Eliminacin de GS-SG
Alteracin de los gradientes inicos (ATPasas)
Disminuci
Disminuci

n de la producci
n de la producci

n de ATP a
n de ATP a
causa de:
causa de:
-Disfuncin mitocondrial
M. de toxicidad M. de toxicidad
Qu
Qu

es el ESTR
es el ESTR

S OXIDATIVO ?
S OXIDATIVO ?
1. Alteracin en la clula del balance entre los sistemas
oxidantes (generadores de especies reactivas) y los
antioxidantes (preventivos, secuestradores y reparadores).
2. Si el balance queda desplazado a favor de procesos
oxidativos se produce:
- Aumento de especies reactivas de oxgeno (ROS)
Anin superxido (O
2
-
)
Radical hidroxilo (OH
-
)
Perxidos (-O-O-)
- Disminucin de GSH y del pool de nucleotidos NAD(P)H
M. de toxicidad M. de toxicidad
PEROXIDACI
PEROXIDACI

N LIP
N LIP

DICA
DICA
Reaccin por radicales que, en presencia de oxgeno y lpidos insaturados
se propaga en cadena y conduce a la degradacin oxidativa de los
lpidos de la membrana celular (MDA= malonildialdehido).
Definici Definici n n
Alteracin de las propiedades fisico-qumicas de las membranas y de la
funcionalidad de las enzimas alojadas en ellas. Se producen
productos de degradacin altamente txicos para la clula
(aldehdos, hidroperxidos, cetonas, etc.).
Efectos Efectos
Radicales libres generados durante la biotransformacin de XBs (CYP).
Especies reactivas de oxgeno generadas durante el metabolismo celular
oxidativo.
Compuestos capaces de sufrir repetidos ciclos de oxidacin y reduccin
en el interior de la clula.
Causas Causas
M. de toxicidad M. de toxicidad
PEROXIDACI
PEROXIDACI

N LIP
N LIP

DICA
DICA
Iniciaci Iniciaci n n
Propagaci Propagaci n n
Terminaci Terminaci n n
L L pido pido
Radical Radical lip lip dico dico
Peroxiradical Peroxiradical lip lip dico dico
Hidroper Hidroper xido xido lip lip dico dico
Fragmentaci Fragmentaci n y n y
MDA, ( MDA, (malonildialdeh malonildialdeh do do) )
etc. etc.
M. de toxicidad M. de toxicidad
EFECTOS de la Alteraci
EFECTOS de la Alteraci

n de la
n de la
HOMEOSTASIS intracelular del Ca2+
HOMEOSTASIS intracelular del Ca2+
Aumento de la salida de calcio desde los reservorios
intracelulares (mitocondria o RE) o de su entrada desde el
exterior.
Alteracin de la recaptacin del calcio por la mitocondria y
el RE o de su bombeo al exterior.
Activacin de fosfolipasas
Activacin de proteasas no lisosmicas
Activacin de las endonucleasas
Formacin de blebs (vesculas) en las membranas
La [Ca2+] en la clula depende:
- Bombeo de Ca2+
- Reservorios de Ca2+ en RE, mitocondria y protenas
CONSECUENCIAS
M. de toxicidad M. de toxicidad
Eventos
Eventos
en la
en la
Citotoxicidad
Citotoxicidad
por
por
XBs
XBs
Estr Estr s s oxidativo oxidativo
Metabolitos reactivos
T T XICO XICO
Muerte Celular Muerte Celular
Uni Uni n n
covalente covalente
Radicales de oxgeno
Peroxidaci Peroxidaci n n
lip lip dica dica
Alteraciones del Alteraciones del
citoesqueleto citoesqueleto
Alteraci Alteraci n n
permeabilidad de permeabilidad de
la membrana la membrana
Alteraci Alteraci n homeost n homeost tica tica
del calcio intracelular del calcio intracelular
Activacin fosfolipasas
y endonucleasas
Depleccin de GSH
Modificacin de SH de protenas
Inactivacin de Ca2+ ATPasas
Vesculas en membrana
Estructura mitocondrial
preservada
Cambios nucleares
Fragmentacin cromatina
Cuerpos apoptticos
Hinchamiento celular
irreversible
Ruptura de membrana
Cambios mitocondriales
Cromatina preservada
Reaccin inflamatoria
DA
DA

O CELULAR INDUCIDO por

O CELULAR INDUCIDO por
XBs
XBs
M. de toxicidad M. de toxicidad
Caracter
Caracter

sticas de los procesos de

sticas de los procesos de
Apoptosis
Apoptosis y y
Necrosis
Necrosis
Proceso fisiolgico o patolgico
Altamente regulado
Activa sntesis de protenas y RNA
Condensacin de la cromatina y
fragmentacin del DNA
La membrana plasmtica permanece
intacta hasta el final: formacin de
cuerpos apoptticos
Eliminacin por heterofagia
No sale contenido celular al exterior
No produce inflamacin
Participan enzimas celulares que causan
cambios bioqumicos y morfolgicos muy
caractersticos
No existe hinchamiento mitocondrial,
aunque la mitocondria juega un papel
activo.
Accidental
Siempre patolgica
No regulada
La membrana plasmtica se
destruye tempranamente
Salida del contenido celular
Inflamacin
Cambios bioqumicos y
morfolgicos: hinchamiento del
citoplasma (oncosis) e
hinchamiento mitocondrial.
M. de toxicidad M. de toxicidad
Muerte celular por Necrosis /
Muerte celular por Necrosis /
Apoptosis
Apoptosis
TNF, FasL Estrs celular:
XBs, ROS, lesin DNA,
Ac biliares
DISC
FADD, TRADD Bax
Caspasas iniciadoras 8 Bid
ceramida
- ATP
+ ATP
Citocromo c
Apoptosoma
Apaf -1
Caspasas efectoras 3, 6 y 7 Caspasa 9
La apoptosis, a diferencia de la necrosis,
consume ATP, cuya energa es utilizada para
la activacin de las caspasas, cuya activacin
en cascada produce los efectos apoptticos
Receptores de muerte
NECROSIS
MITOCONDRIA
APOPTOSIS
Lesiones reversibles
Lesiones reversibles
Prdida de ATP porque disminuya la
actividad ATPasa
Prdida del control del volumen
Aumento de la velocidad glicolisis, para ATP
Aumento de la permeabilidad de la membrana y
disminucin de la actividad mitocondrial, ligera
vesiculacin
Desprendimiento de los ribosomas del R.E.
rugoso
M. de toxicidad M. de toxicidad
Lesiones irreversibles
Lesiones irreversibles
Vacuolizacin de las mitocondrias
Dao masivo en la membrana celular
Crecimiento de los lisosomas
Prdida de protenas, coenzimas y RNA.
Entrada de Ca
2+
y activacin de proteasas y fosfatasas
Condensacin nuclear y agregacin de cromatina (picnosis)
Destruccin de cromatina (carilisis)
Digestin enzimtica del citoplasma y del ncleo
Fragmentacin nuclear (carirrexis)
M. de toxicidad M. de toxicidad