Prof Glria Maria

Vinhas
Agentes Fsicos
Inibio do crescimento
microbiano
O Controle de uma populao microbiana visa:
- Prevenir a transmisso de doenas;
- Evitar a decomposio de alimentos;
- Evitar a contaminao da gua e do ambiente;
- Evitar a contaminao de processos fermentativos.

Esse controle de micro-organismos possvel pela ao de

agentes fsicos e qumicos, que possuem propriedades em
destruir a clula microbiana, ou de impedir a sua reproduo.
POR QUE CONTROLAR O
CRESCIMENTO MICROBIANO?
Esterilizao - A prtica da esterilizao visa a
incapacidade de reproduo de todos os organismos
presentes no material, causando a morte
microbiana (vrus, bactrias e fungos) at que a
probabilidade de sobrevivncia do agente
contaminante seja menor que 1:1.000.000 quando
um objeto considerado estril.
Mecanismos - Os possveis mecanismos de
destruio microbiana esto associados com os
principais aspectos estruturais de uma clula
bacteriana. Uma compreenso de como um agente
atua sobre os micro-organismos possibilita a seleo
do agente mais efetivo. A alterao do estado fsico
do citoplasma, a inativao de enzimas, ou o
rompimento da membrana ou parede celular, pode
levar morte da clula bacteriana.
CONTROLE DA POPULAO
MICROBIANA
CONTROLE DA POPULAO
MICROBIANA
Desinfeco:
Desinfetante
Germicida
Assepsia:
Antissptico
Biocid
a
Biosttico
X
X
Remoo ou destruio
dos organismos vivos
capazes de causar
damos e ou infeco
Agentes qumicos
aplicado em pessoas
e animais para
eliminao de
microrganismo
patognicos
TAXA DE MORTE MICROBIANA
DEFINIES:
baseado em uma nica propriedade: capacidade de
se reproduzir. A morte microbiana ocorre na forma
exponencial. Aps uma rpida reduo da populao,
a taxa de morte torna-se mais lenta devido
sobrevivncia de clulas mais resistentes.
Para avaliar a eficincia de um agente microbicida,
uma amostra do material tratado cultivada para
determinar o nmero de sobreviventes, isto , aqueles
que podem crescer e multiplicar-se.
FATORES QUE INFLUENCIAM O
TRATAMENTO MICROBIANO
1. TAMANHO DA POPULAO MICROBIANA;
2. NATUREZA DO MATERIAL QUE CONTM OS
MICRO-ORGANISMOS;
3. INTENSIDADE OU CONCENTRAO DOS
AGENTES;
4. TEMPO DE EXPOSIO;
5. TEMPERATURA DE EXPOSIO;
6. CARACTERSTICAS DA POPULAO MICROBIANA;
7. CONDIES AMBIENTAIS.
AGENTES FSICOS
I) Altas temperaturas
Calor: 1) Seco
2) mido
Pasteurizao
II) Baixas Temperaturas
III) Dessecamento
IV) Presso Osmtica
V) Filtrao
VI) Radiao
INFLUNCIA DA TEMPERATURA
Em relao a temperatura, os micro-organismos so
classificados em 3 grupos:
- Psicrfilos: crescem em baixas temperaturas (15 a 20C) ou
temperatura inferior;
- Mesfilos: crescem em temperaturas moderadas (25 a 40C);
- Termfilos: crescem em altas temperaturas (40 a 70C)
Termfilos extremos (70 a 110C).
INFLUNCIA DA TEMPERATURA
Curva de crescimento caracterstica de diferentes micro-
organismos.
ALTAS TEMPERATURAS - CALOR
Mata os micro-organismos desnaturando suas enzimas;
A resistncia ao calor varia de acordo com o micro-organismo.
- Ponto de Morte Trmica (PMT): menor temperatura em que
todos os micro-organismos em uma suspenso lquida sero
mortos por calor em 10 min;
- Tempo de Morte Trmica (TMT): perodo mnimo de tempo em
que todos os micro-organismos sero mortos em condies
especficas;
- Tempo de Reduo Decimal (TRD ou D): o tempo, em min, em
que 90 % de uma populao microbiana em uma
determinada temperatura ser morta.
1) CALOR SECO:
Causa a oxidao dos constituintes orgnicos da clula
(queima lentamente a clula) - temperatura elevada;
Flambagem (Chama direta) : processo onde o material
levado diretamente ao fogo, seja seco ou embebido em lcool
(utilizado na desinfeco de alas de cultivo / inoculao).
ALTAS TEMPERATURAS - CALOR
A chama azul
chega a atingir
800C
Estufa esterilizante : amplamente utilizada para as vidrarias,
instrumentos de corte e outros materiais (160C por 2h ou
180C por 1h).
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
SECO
Incinerao : processo drstico de eliminao dos micro-
organismos e que destroem o produto. Ex: eliminao de
carcaas de animais ou de outros materiais contaminados.
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
SECO
2) CALOR MIDO:
mais eficiente que o calor seco para destruir os micro-
organismos, isto porque o calor mido causa a desnaturao e
coagulao de protenas vitais, como as enzimas.
-Esterilizao por calor mido:
- Fervura (100C);
- Vapor de fluxo livre;
- Vapor de gua sobre presso - Autoclave.
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
Fervura:
Mata as formas vegetativas presente no lquido;
No destri endoesporos bacterianos, vrus da hepatite prons,
que podem resistir a 100
o
C.
Vapor de fluxo livre (no pressurizado):
Equivalente a gua fervente;
No mata os endoesporos bacterianos e alguns vrus.
Um tipo do vrus (o da hepatite) pode sobreviver a at 30 min de
fervura e alguns endoesporos bacterianos resistem fervura por mais
de 20h.
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
MIDO
Vapor de gua:
Vapor de gua sobe presso o mtodo mais prtico e seguro
de aplicao de calor mido;
Em um sistema fechado a volume constante o aumento de
presso permitir um aumento de temperatura;
Fornece temperaturas maiores do que aquelas possveis com
vapor sem presso ou gua fervente.
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
MIDO
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
MIDO
Autoclave :
o aparelho destinado a
esterilizao com vapor sob
presso;
121C por 15 min.
suficiente para matar todos
os micro-organismos e seus
endoesporos.
Certos meios bacteriolgicos e drogas qumicas no
podem ser aquecidos alm de 100C sem serem
afetados de maneira adversa. Mas, se suportarem a
temperatura de vapor livre (100C), possvel esteriliz-
los atravs da esterilizao fracionada
( tindalizao ).
O processo envolve o aquecimento do material a 100C
em trs dias sucessivos, com perodos de incubao
intercalados. Os esporos resistentes germinaro durante
as fases de incubao e, nas subsequentes exposies
ao calor, as clulas vegetativas sero destrudas. Porm,
se os esporos existentes no germinarem durante o
perodo de incubao, o material no ser esterilizado.
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
Cintica de destruio trmica de micro-organismos:
T
1
T
2
T
1 T
3
T
2
l
n

N
t
N K
dt
dN
.
N o nmero de micro-organismos viveis por mL;
K a constante especfica de morte (min
-1
);
t o tempo em minutos.
t K
N
N
. ln
0

ln N
0
) . exp( .
0
t K N N
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
A cintica de destruio de
microrganismos se comporta com uma
cintica de primeira ordem
Cintica de destruio trmica de micro-organismos:
Como funciona a cintica de destruio para os esporos?
ln N
0
ALTAS TEMPERATURAS CALOR
Tratamento pelo calor controlado. Mata as clulas vegetativas
de micro-organismos patognicos ou no, e desse modo
prolonga a manuteno da qualidade do produto.
Tratamento Clssico: 63~66C por 30 min.
Pasteurizao de Alta Temperatura e Curto Tempo (HTST
high temperature short-time ): 72C por 15s.
Leite
Pasteurizao - submetido a temperatura (72C) enquanto flui continuamente
por uma serpentina. Conserva-se bem sob refrigerao.
Esterilizao submetido a altas temperaturas (UHT ultra-high temperature)
para que possa ser armazenado sem refrigerao (a temperatura vai de 74C
para 140C e depois retorna para a temperatura inicial).
ALTAS TEMPERATURAS -
PASTEURIZAO
Pasteurizador Tubular para Produtos Lquidos e Pastosos.
ALTAS TEMPERATURAS -
PASTEURIZAO
O congelamento comumente utilizado para preservar
alimentos, drogas e espcimes laboratoriais, e sua aplicao
depende do tipo de micro-organismo e da intensidade;
Diminuio / interrupo do metabolismo celular;
Refrigeradores comuns (0 7C): efeito bacteriosttico (a
temperatura afeta a reproduo e o metabolismo celular).;
O nitrognio lquido, em temperaturas de -196C,
empregado na preservao de muitos vrus e outros micro-
organismos, assim como as fontes de clulas de mamferos
usadas em pesquisas.
BAIXAS TEMPERATURAS
Na ausncia de gua, os micro-organismos no podem crescer
ou se reproduzir, mas podem permanecer viveis por anos
atravs das formas de resistncia (endoesporos / esporos);
Indstrias de alimentos utilizam este mtodo quando secam
frutas, carnes ou pes;
Quando a gua oferecida aos micro-organismos, eles
retornam ao seu crescimento e diviso;
Tcnica comum Liofilizao Os micro-organismos so
submetidos extrema desidratao no estado congelado e,
ento, fechados em embalagens vcuo.
DESSECAMENTO
A osmose o nome dado ao movimento da gua entre meios
com concentraes diferentes de sal separados por uma
membrana semipermevel tendncia ao equilbrio.
Presso osmtica a presso necessria para impedir
(interromper) o fluxo de gua atravs da membrana seletiva.
Isotnica Hipertnica Hipotnica
PRESSO OSMTICA
Altas concentraes de sais e acar Plasmlise;
Baixas concentraes de sais e acar Plasmoptise;
Processo semelhante ao ressecamento - retira da clula a
umidade que ela necessita para sobreviver;
Bastante utilizado na conservao de alimentos. Ex: curar
carnes (sal) e conservar frutas (acar);
Fungos mais resistentes a altas concentraes de sais.
PRESSO OSMTICA
Taxa de crescimento de alguns micro-organismos vs. a concentrao de sal.
No Halfilos: no
necessitam de sal e no
toleram a presena no meio;
Halotolerantes: no
necessitam de sal mas
toleram a presena no meio;
Halfilos: necessitam de
sal em uma concentrao
moderada;
Halfilos extremos:
necessitam de sal em altas
concentraes.
PRESSO OSMTICA
Passagem de um lquido ou gs atravs de um material
semelhante a uma tela, com poros pequenos o suficiente para
reter os micro-organismos no considerada esterilizao;
Utilizada em lquidos ou gases sensveis ao calor, como soros
animais, enzimas, meios de cultura, toxinas, vacinas, algumas
vitaminas e solues antibiticas.
Tipos de Filtro:

1. Filtro de materiais fibrosos cermica, asbesto, vidro sintetizado;
2. Filtro de membranas membranas filtrantes;
3. Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air). Filtro de Partculas de Ar de Alta
Eficincia
FILTRAO
1. Filtro de materiais fibrosos
(L de vidro)
2. Filtro de Membrana compostos
por steres de celulose ou polmeros
plsticos (terflon)
(normalmente usa-se filtro de 0,2 m)
FILTRAO
Vantagens das membranas filtrantes em relao aos filtros
mais antigos:
1 Poros com dimetros conhecidos e uniformes;
2 Filtros podem ser fabricados com qualquer tamanho de
poro;
3 Absorvem muito pouco o fluido que est sendo filtrado;
4 A filtrao mais rpida;
5 So descartveis, no necessitando etapas de lavagem e
esterilizao.
FILTRAO
Filtro de Partculas de Ar de
Alta Eficincia (HEPA ).
Um filtro HEPA constitudo
de acetato de celulose
aderido a uma folha de
alumnio Retm 99% das
partculas presentes no ar.
FILTRAO
Cabine de
Segurana Biolgica
nvel 1.
Bactrias retidas na superfcie de um filtro do tipo Isopore
(Adaptado de Prescott et al., Microbiology, 1997)
OBS: Filtro tipo Isoporo: filmes de policarbonato
FILTRAO
rdio micro-onda infravermelho visvel ultravioleta Raio-X Raio-gama
10
4
10
2
1 10
-2


10
-5
10
-6
10
-8
10
-10

10
-12

Comprimento de onda em centmetros
RADIAO
i) Radiao Ionizante ii) Radiao no-
ionizante
Raios Gama, raios X
ou feixes de eltrons
de alta Energia.
Baixo
Luz Ultravioleta (UV)
( entre 136 400nm)
Efeito bactericida (260 nm)
RADIAO
Raios Gama: emitidos por istopo radioativo:
60
Co
radioativo;
Feixes de Eltrons: so produzidos acelerando eltrons at
energias elevadas em mquinas especiais;
Raios X: so produzidos por mquinas similares as dos
feixes de eltrons e so de natureza similar aos raios
gama;
Principal efeito da Radiao Ionizante:
RADIAO IONIZANTE
Radical Hidroxila (OH) outra forma intermediria do O
2
sendo provavelmente o
mais reativo. gerado no citoplasma da clula por meio do efeito de radiaes
ionizantes. Estes radicais hidroxila so produzidos durante a respirao aerbica
na maioria dos micro-organismos.
H
2
O
h
+ H
+
OH
-