NMX-V-021-1986. BEBIDAS ALCOHLICAS DESTILADAS.

DETERMINACIN
DE METANOL. DISTILLATED ALCOHOLIC BEVERAGES. DETERMINATION
OF METHANOL. NORMAS MEXICANAS. DIRECCIN GENERAL DE NORMAS.

PREFACIO

En la elaboracin de esta Norma, participaron los siguientes Organismos:

Cmara Regional de la Industria Tequilera.
Tequila Sauza, S.A. de C.V.
Tequila Cuervo, S.A.
Tequila Herradura, S.A.
Tequila la Unin, S.A.
Industrias Vincolas Domecq, S.A.
Bufete Qumico, S.A. de C.V.
Comit Consultivo de Normas de Bebidas Alcohlicas.
Bacard y Compaa, S.A. de C.V.
Direccin General de Normas

1. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIN

Esta Norma establece dos mtodos para determinacin de metanol en bebidas
alcohlicas destiladas. Mtodo qumico y mtodo cromatogrfico (cromatografa de
gases).

2. REFERENCIAS

Esta Norma se complementa con la siguiente Norma Mexicana vigente:

NMX-V-013 Bebidas alcohlicas destiladas.- Determinacin del por ciento de alcohol
en volumen, en la escala Gay Lussac a 288 K (15 C).

3. MTODO QUMICO

3.1 Reactivos y materiales

Los reactivos deben ser de grado analtico; y por agua debe entenderse agua destilada.

3.1.1 Disolucin acuosa de cido fosfrico 1:20
3.1.2 Disolucin acuosa de permanganato de potasio 1:20
3.1.3 Disolucin acuosa de bisulfito de sodio (NaHSO
3
) 1:20
3.1.4 Disolucin de cido cromotrpico

Disolver 50 mg de cido cromotrpico o de su sal de sodio en 100 cm de cido
sulfrico al 75%.

3.1.5 Acido sulfrico concentrado
3.1.6 Bisulfito de sodio
RECOPILADO POR:
EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS

3.1.7 Disolucin acuosa al 5% de la sal sdica del cido cromotrpico.

Debe filtrarse si presenta turbiedad y prepararse por lo menos cada semana.

3.1.8 Disolucin de permanganato de potasio en cido fosfrico: Disolver 3 g de
permanganato de potasio con 15 cm de cido fosfrico en un matraz
volumtrico de 100 cm, llevar al aforo con agua. Esta disolucin se debe
preparar por lo menos cada mes.

3.1.9 Alcohol etlico bidestilado. Por destilacin simple, eliminando el 15% de
cabezas en cada una de las destilaciones y recolectando el 50%. Estas
destilaciones deben efectuarse a una velocidad aproximada de 250 cm/30 min.

3.2 Aparatos y equipo

3.2.1 Matraz de destilacin de 500 cm.
3.2.2 Refrigerante tipo Liebig de 40 a 60 cm de longitud con el extremo inferior
terminado en tubo y con la punta cortada en bisel.
3.2.3 Trampa de vapor
3.2.4 Matraces volumtricos de 50 cm
3.2.5 Pipetas volumtricas de 1 y 2 cm
3.2.6 Termmetro graduado de 273 a 373 K (0 a 100 C)
3.2.7 Bao mara con regulador de temperatura.
3.2.8 Bao de hielo.
3.2.9 Espectrofotmetro.
3.2.10 Equipo comn de laboratorio

3.3 Preparacin de la muestra

Cuando el extracto seco de la muestra exceda de 0.7 g/l o esta presente coloracin,
destilar como se indica en NMX-V-013. Diluir la muestra a una concentracin de
alcohol entre 5 y 6 % en volumen y usar para la prueba.

3.4 Procedimiento

3.4.1 Mtodo cualitativo (identificacin del alcohol metlico) En un tubo de ensayo
poner dos gotas de destilado, agregar una gota de disolucin de cido fosfrico
(1:20) y una gota de disolucin de permanganato de potasio (1:20), mezclar
cuidadosamente y dejar reposar la mezcla durante un minuto.

Agregar disolucin acuosa de bisulfito de sodio (1:20), gota a gota, hasta que el color
violeta del permanganato de potasio desaparezca. Si la mezcla toma coloracin caf
agregar una gota de disolucin acuosa de cido fosfrico (1:20), a la disolucin incolora
resultante, agregar 5 cm
3
de disolucin de cido cromotrpico recientemente preparado,
y calentar la mezcla en bao mara a 333 K (60C) durante diez minutos.

En presencia de metanol se observa una coloracin violeta, si la reaccin cualitativa es
positiva, procdase a cuantificar el metanol.

3.4.2 Mtodo cuantitativo


Poner 2 cm de la disolucin de permanganato de potasio en cido fosfrico en un
matraz volumtrico de 50 cm, colocndolo en un bao de hielo, adicionar 1 cm de la
muestra diluda y fra, y dejar reposar 30 minutos en el bao de hielo.

Decolorar con un poco de bisulfito de sodio slido y agregar 1 cm de disolucin de
cido cromotrpico al 5%. Agregar lentamente, gota a gota, 15 cm de cido sulfrico
concentrado, dejndolo escurrir por las paredes del matraz, agitando constantemente, y
colocar en bao mara entre 333 y 348 K (60 y 75 C) durante 15 minutos. Enfriar y
adicionar con agitacin agua hasta un volumen prximo al aforo, enfriar a temperatura
ambiente y llevar al aforo con agua, homogeneizar y reposar durante 5 minutos.

Preparar un blanco con alcohol etlico al 5.5 % en volumen y una solucin patrn
conteniendo 0.025 % en volumen de metanol en alcohol etlico al 5.5 % en volumen;
tratar de igual manera que la muestra diluda, leer la absorbancia de la solucin patrn y
de la muestra a 575 nm utilizando el blanco para el ajuste del espectrofotmetro.

3.5 Expresin de resultados

El contenido de metanol expresado en miligramos por 100 cm
3
de alcohol anhidro, se
calcula con la siguiente frmula:

A 100
M = x 0.025 x FD x 0.790 x x 1000
A G.A.R.

En donde:

M = Metanol expresado en mg por 100 cm de alcohol anhidro.
A = Absorbancia de la muestra.
A' = Absorbancia de la disolucin patrn de metanol.
.025 = % de metanol en la solucin patrn.

vol. total de la dilucin
FD =
vol de la muestra empleada en la dilucin

G.A.R. = Grado alcohlico real de la muestra a 288 K (15 C) en la escala
Gay Lussac, determinado de acuerdo con la NMX-V-013.

0.790 = Densidad del metanol expresado en g/cm
3


3.6 Repetibilidad del mtodo

La diferencia entre dos resultados sucesivos, obtenidos en las mismas condiciones, no
debe exceder de 5 % del promedio de los mismos. En caso contrario repetir las
determinaciones.

3.7 Reproducibilidad del mtodo


La diferencia entre dos determinaciones no deber exceder de 15 % del promedio de las
mismas.

4. MTODO CROMATOGRFICO ("CROMATOGRAFA DE GASES")

4.1 Fundamentos

4.1.1 Este mtodo se basa en los principios de la cromatografa de Gases y consiste en
la inyeccin de una pequea cantidad de la muestra (constituda por una mezcla
de sustancias voltiles) en el inyector de un Cromatgrafo de Gases en el que
son vaporizadas y transportadas por un gas inerte a travs de una columna
empacada o capilar con un lquido de particin que presenta solubilidad
selectiva con los componentes de la muestra, ocasionando su separacin.

Los componentes que eluyen de la columna pasan uno a uno por el "Detector", el cual
genera una seal elctrica proporcional a su concentracin, la que es transformada por el
registrador ( integrador) en una grfica de concentracin contra tiempo llamada
cromatograma.

4.1.2 La identificacin de cada componente registrado como un pico en el
cromatograma, se realiza por inyeccin del los componentes que se sospecha
contiene la muestra en forma pura y en las mismas condiciones que la muestra,
midiendo el tiempo de retencin en esas condiciones. Tambin se puede
comprobar por adicin del componente a la muestra e inyectndola nuevamente
para apreciar el incremento de altura o rea del pico correspondiente.

4.1.3 La cuantificacin se puede efectuar por cualquiera de 3 mtodos;
Normalizacin, Estandarizacin Externa y Estandarizacin Interna, siendo ste
ltimo el nico que se describe a continuacin: La cuantificacin por
Estandarizacin Interna; consiste en obtener el cromatograma de la muestra
estandarizada, o sea adicionada de una sustancia llamada estndar interno que
deber aparecer en un sitio del cromatograma, libre de traslapes y desde luego
no deber ser componente de la muestra, aunque es recomendable que sea de la
misma naturaleza qumica y del mismo rango de concentracin que el
componente de la muestra por cuantificar (Metanol). Debern obtenerse
cromatogramas paralelos con soluciones de concentracin conocida del
componente por cuantificar (Metanol) y del estndar interno (por ejemplo
Butanol o Hexanol) y trazar una curva de calibracin que tenga por ordenadas la
relacin de concentraciones correspondientes al componente por cuantificar y al
estndar interno.

Esta curva servir para situar en sus ordenadas la relacin de reas correspondientes al
componente por cuantificar y al estndar interno del cromatograma de la muestra
estandarizada y as ubicar la relacin correspondiente de concentraciones.

4.2 Reactivos y materiales

Los reactivos debern ser de pureza adecuada; y por agua debe entenderse agua
destilada o desmineralizada.


4.2.1 Alcohol Etlico de alta pureza y libre de metanol
4.2.2 Disolucin de Metanol al 0.5% m/v (1 g/200 cm) en Alcohol Etlico de 40
G.L.
4.2.3 Disolucin de Metanol al 0.1 % m/v poner 20 cm de disolucin de Metanol al
0.5 % (ver 4.2.2) en un matraz volumtrico de 100 cm y aforar con Alcohol
Etlico de 40 G.L. Se pueden usar mltiplos de estas cantidades conservando
las mismas concentraciones.
4.2.4 Disolucin de Estndar Interno al 0.5 % m/v (1 g/200 cm en el alcohol etlico
de 40 G.L.
4.2.5 Disolucin de Estndar interno 0.1 m/v Poner 20 cm de disolucin de Estndar
Interno al 0.5 % (ver 4.2.4) en una matraz volumtrico de 100 cm y aforar con
alcohol etlico de 40 G.L.

Se pueden usar mltiplos de estas cantidades conservando las mismas concentraciones.

El estndar interno puede ser N-Butanol, N-Hexanol, u otro alcohol que no se traslape
con los componentes de la muestra.,

4.2.6 Disolucines de estndar interno y metanol para muestras que contengan 128 y
650 mg de metanol por 100 cm de alcohol anhidro (disoluciones de trabajo A.
B. C. D y E, para la curva de calibracin). Ver la siguiente tabla:

DISOLUCIN
MG DE
ESTNDAR
100 CM
3

MG DE
METANOL
100 CM
3

CM
3
DE
DISOLUCIN
AL 0.5% DE
METANOL
CM
3
DE
DISOLUCIN
AL 0.5% DE
ESTNDAR
RELACIN
METANOL
ESTNDAR
CM/CE
A
B
C
D
E
150
150
150
150
150
50
100
150
200
250
10
20
30
40
50
30
30
30
30
30
0.33
0.67
1.00
1.33
1.67

En la tabla anterior las diluciones de las columnas 3 y 4 se refieren a cm de las
soluciones al 0.05% de metanol y del estndar, que se debern diluir a 100 cm en el
mismo matraz con etanol de 40 G.L. para tener las concentraciones que se indican en
las columnas 1 y 2 y la relacin de concentraciones que se indican en la columna 5 que
sern abscisas de la curva de calibracin; las ordenadas sern las relaciones de rea del
pico de metanol entre el rea del pico del estndar.

4.2.7 Solucin de muestra estandarizada (Adicionado de Estndar interno).

En un matraz volumtrico de 100 cm, poner 30 cm de estndar interno (Ver 4.2.4) y
aforar con la muestra preparada (Vase 4.4)

4.2.8 En caso de debidas que contengan menos de 128 mg de metanol por 100 cm de
alcohol anhidro, elaborar una curva de calibracin equivalente a la del inciso
4.2.6 pero cambiando las concentraciones de metanol y estndar interno, Vase
Tabla 2:

DISOLUCIN
MG DE
ESTNDAR
100 CM
3

MG DE
METANOL
100 CM
3

CM
3
DE
DISOLUCIN
AL 0.1% DE
METANOL
CM
3
DE
DISOLUCIN
AL 0.1% DE
ESTNDAR
RELACIN
METANOL
ESTNDAR
CM/CE

A
B
C
D
E
3
3
3
3
3
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
3
3
3
3
3
0.33
0.67
1.00
1.33
1.67
F
G
H
I
J
8
8
8
8
8
4
6
8
10
12
4
6
8
10
12
8
8
8
8
8
0.50
0.75
1.00
1.25
1.50
K
L
M
N
O
30
30
30
30
30
10
20
30
40
50
10
20
30
40
50
30
30
30
30
30
0.33
0.67
1.00
1.33
1.67

En la tabla anterior las diluciones de las columnas 3 y 4 se refieren a cm de las
soluciones al 0.1 % de metanol y del estndar interno que se debern diluir a 100 cm en
el mismo matraz con alcohol etlico de 40 G.L. para tener las concentraciones que se
indican en las columnas 1 y 2.

4.3 Aparatos y equipos

4.3.1 Cromatgrafo de Gases equipado con detector de ionizacin de flama, siendo
opcional el sistema dual con programador de temperatura, registrador integrador
o sistema de procesamiento de datos (computador).

Parmetros de operacin recomendables.

En cada caso debern optimizarse de acuerdo a la situacin geogrfica y al aparato, la
temperatura de la columna isotrmica 423 K 10 K (150 C 10 C) o programada de:
inicial 343 K (70 C) de cero a cuatro minutos y aumento lineal de 4 - 8 K (4 - 8 C) por
minuto hasta llegar a 393 K (120 C), manteniendo esta temperatura constante.

Temperatura del inyector 423 K (150 C).
Temperatura del detector 473 K (200 C).
Flujo del gas portador 50 cm/min. (Aproximadamente).

Las condiciones de operacin ptimas varan de acuerdo a la columna e instrumentos
utilizados, los cuales son determinados por medio de soluciones estndares, y curvas de
nmero de platos tericos (N) contra velocidad lineal del gas o flujo (optimizacin por
ecuacin de VAN DEEMTER).

Los parmetros sern ajustados para obtener resolucin ptima entre el metanol y el
etanol de acuerdo a la siguiente ecuacin:

2 (nT)
R =
am + ae

R = Resolucin
nT = Diferencia de tiempos de retencin

am = Amplitud del pico en la base correspondiente al metanol
ae = Amplitud del pico en la base correspondiente al etanol

Nota: Las unidades de nT, am y ae debern ser las mismas

Con objeto de obtener cromatogramas confiables debern tomarse las siguientes
precauciones:

Acondicionamiento y saturacin de la columna
Limpieza del inyector
Deteccin de fugas del sistema
Estabilidad de flujo de gas
Optimizacin del detector (flujos de hidrgeno y aire)
Estabilidad de la temperatura
Repetibilidad de los cromatogramas

4.3.2 Columnas

4.3.2.1 Especificaciones de columna empacada:

Material: inerte a la muestra (vidrio o acero inoxidable).
Longitud: 1.8 - 6.0 m.

Dimetro interior: 2 mm aproximadamente

Relleno (empaque); apropiado para obtener resolucin mayor o igual a uno entre el
metanol y el etanol.

Se recomienda entre otros el siguiente: Fase fija o lquido de particin.- Polietilenglicol
1540 al 15 20%.

Soporte. Tierra de Diatomeas blanca lavada con cido y silanizada con tamao de
partcula entre las cribas M 0.180 y F 0.125 (80 y 120 ASTM).

4.3.2.2 Otras columnas

Podrn ser empleadas otras columnas cuya resolucin sea mayor o igual a uno entre el
metanol y el etanol.

4.3.3 Fase mvil (gas acarreador) Nitrgeno, Helio o Argn de alta pureza.
4.3.4 Hidrgeno prepurificado
4.3.5 Aire seco purificado
4.3.6 Jeringa de 5 - 10 ml
4.3.7 Pipeta o jeringa de 100 - 500 ml

4.4 Preparacin de la muestra

Cuando el extracto seco de la muestra exceda de 5 g/L destilar como se indica en NMX-
V-013. Se admite el uso de precolumna, en cuyo caso no se requiere destilar.


4.5 Procedimiento

Inyectar en el cromatgrafo de 1 a 5 microlitros de la solucin de muestra estandarizada
(ver 4.2.7) y de cada una de las soluciones estndar (A, B, C, etc. de la tabla que
corresponda) para obtener los cromatogramas respectivos, haciendo las atenuaciones
convenientes para obtener un buen cromatograma cuantitativo, verificando que la
resolucin entre el metanol y el etanol sea mayor o igual a uno.

4.6 Expresin de resultados

4.6.1 Curva de calibracin

Clculo de reas y relaciones de reas: Calcule el rea correspondiente al metanol (Am)
y al estndar interno (Ae) en cada cromatograma de las soluciones estndar (A, B, C,
etc.), divida el rea del metanol entre el rea del estndar interno y con los valores
obtenidos, trace la curva de relacin de concentraciones contra relacin de reas
(columna 5 de la tabla que corresponda, ver 4.2.6 y 4.2.8).

Ae = Area del pico del estndar
Cm = Concentracin del metanol
Ce = Concentracin del estndar
Am = Area de pico del metanol

4.6.2 Clculos en el cromatograma de la muestra, estandarizada

Calcule las reas del metanol y del estndar interno en el cromatograma y obtenga el
valor de Am/Ae con el cual se localiza en la curva de calibracin el valor de Cm/Ce.

4.6.3 Clculo final

Con el valor de Cm/Ce obteniendo para la muestra en la curva de calibracin y
conociendo la cantidad de estndar interno (Ce) agregando a la solucin de muestra
estandarizada podemos calcular la concentracin de metanol en la muestra (Cm) con las
siguientes frmulas:

Cm = Ce x Rg

En donde:

Cm = Metanol expresado en mg por 100 cm de muestra directa.
Ce = mg de estndar interno agregados a la solucin de muestra estandarizada.
Rg = Relacin de Cm/Ce obtenida en la curva de calibracin.


100
M = x Cm x FD
G.A.R.

En donde:

M = Grado Alcohlico Real de la muestra a 288 K (15) en la escala Gay Lussac,
determinado de acuerdo con la NMX-V-013.

Volumen total de la muestra estandarizada.
FD =
Volumen de la muestra diluda en la estandarizacin.

4.7 Repetibilad del mtodo

La diferencia entre dos resultados sucesivos, obtenidos en las mismas condiciones, no
debe exeder del 5% del promedio de los mismos. En caso contrario repetir las
determinaciones.

4.8 Reproducibilidad del mtodo

La diferencia entre dos determinaciones no deber exceder del 15% del promedio de las
mismas.

5 BIBLIOGRAFA

Horwite W.- Official Methods of Analysis the Association of Official Analytical
Chemists. Thirteenth Edition, 1980. Editor Washinton, D.C.

NMX-V-021-S-1980 Bebidas Alcohlicas Destiladas - Determinacin de Metanol.

6. COMPATIBILIDAD ENTRE LOS MTODOS QUMICO Y
CROMATOGRFICO

La diferencia entre las dos determinaciones no debe exceder del 15% del promedio de
las mismas, para concentraciones mayores de 50 mg de metanol por 100 cm
3
de alcohol
anhidro. En caso de concentraciones menores, la diferencia podr ser mayor debido a la
alta sensibilidad del mtodo cromatogrfico.

7. CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES

No se puede establecer concordancia por no existir referencia al momento de la
elaboracin de la presente.

Esta Norma Cancela a la: NMX-V-021-S-1980.