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htm
S
S

ntesis de
ntesis de
Prote
Prote

nas
nas
:
:
Ret
Ret

culo
culo
Endopl
Endopl

smico
smico
Retculo Endoplsmico
Es una red de tubos ramificados y sacos aplanados e interconectados que se
extiende a travs de citoplasma.
Constituye ms de la mitad de la membrana total de las clulas y representa
alrededor del 10% de volumen celular.
ROL:
Sntesis de protenas solubles y de mb. linfocitos y cls pancreticas
Sntesis de lpidos: triglicridos y fosfolpidos hepatocitos
Reservorio de Ca
2+
: retculo sarcoplsmico del msculo
Dos zonas: REL asociado a sntesis de lpidos
RER asociado a ribosomas: prots. secretoras y constitutivas de
organelos
RUTA SECRETORA
Sntesis de protenas en la clula
Lodish et al, 2004
Sntesis de protenas en el RE
El RE internaliza selectivamente las protenas a medida
que stas son sintetizadas (transporte co-traduccional) en
los ribosomas asociados al RE rugoso mediante la cadena
polipeptdica naciente.
Protenas solubles
Transportadas y almacenadas en el lumen del RE antes de
ser destinadas al lumen del organelo de destinacin (RE,
A. de Golgi o lisosomas) o para secrecin.
Protenas de transmembrana
Quedan embebidas en su membrana. Algunas de estas
protenas tienen funciones en el RE y otras en la
membrana de otros organelos o en la MP.
Secuencia seal hidrofbica
especfica ubicada en el
extremo N-terminal (16-30
AA's) de la cadena naciente lo
dirige a la membrana del RE.
El polipptido creciente
atraviesa la membrana del RE
va protenas especficas.
Partcula de reconocimiento seal
Sntesis e insercin de protenas de membrana en el RE
Clase 1: poseen una secuencia seal y una secuencia hidrofbica interna que
constituir el segmento hlice de transmembrana.
Clase 2: poseen mltiples segmentos transmb. A medida que la cadena
naciente que sigue al primer hlice se elonga, se transporta a travs del
translocador hasta que se forma el segundo -hlice. Esta hlice acta como
una secuencia de detencin de transferencia.
peptidasa
Secuencia hidrofbica interna
Clase 1
Clase 2
Cmo se pliegan las protenas en el lumen del RE?
.
1. A travs de protenas chaperonas (ayudan a mantener desplegada la prot). Una de las
pples. protenas del RE de la familia de las Hsp 70 (heat shock proteins) es BiP (binding
protein).
BiP se une a la protena no plegada apenas sta cruza la membrana y luego media el
plegamiento y ensamblaje de las protenas formadas por mltiples subunidades dentro del
RE.
BiP presenta afinidad por regiones hidrofbicas expuestas e hidroliza ATP uniendo y
liberando la protena en cada ciclo de hidrlisis.
2. Formacin de enlaces disulfuro.
La formacin de los enlaces disulfuro, S-S, entre las cadenas laterales de los residuos
cistena es un importante aspecto del plegamiento de protenas en el RE.
Estos enlaces no se forman en el citosol ya que posee un ambiente reductor que
mantiene los residuos cistena en su estado reducido (R-SH). En el RE el ambiente es ms
oxidante lo que facilita la formacin de estos enlaces.
La formacin de enlaces disulfuro es catalizada por la enzima protena disulfuro isomerasa
(PDI) localizada en el lumen del RE.
Modificacin post-traduccional: GLICOSILACIN
Adicin de azcares a la cadena polipeptdica.
RE: N-glicosilacin
Golgi: O-glicosilacin
Funcin:
hacer a la protena ms resistente a la digestin por proteasas
Ayudar en el proceso de plegamiento en el ER
Guiar la protena al organelo de destinacin, sirviendo de seal para el
empacamiento de la protena en la vescula apropiada.
Muchos oligosacridos se exponen en la superficie celular formando la
capa de carbohidratos y pueden funcionar en el reconocimiento entre
las clulas.
Glicosilacin de unin-N
La adicin de azcares a la cadena lateral de residuos
Asparragina dentro de una secuencias especfica de AsN-X-
Ser/Thr . La glicosilacin ocurre en el grupo NH2.
enlace glicosidico
unin-N
Por oligosacaril-transferasa
en el interior del RE
No es cualquier Asparragina (Asn) sino una secuencia consenso de Asn-X-Ser/Thr
Si no se remueven las 3 molculas de glucosa y una manosa, la protena no puede
ser exportada hacia el aparato de Golgi
Figure 12-53 Molecular Biology of the Cell (
Garland Science 2008)
Primera importancia de la Glicosilacin: Control de Calidad
Figure 12-53 Molecular Biology of the Cell (
Garland Science 2008)
Primera importancia de la Glicosilacin: Control de Calidad
No todos los dominios de las protenas adquieren su estructura correcta de manera
autnoma. Muchos necesitan apoyo de protenas chaperonas.
La unin de Calnexina y Calreticulina (chaperonas) permite que las protenas
adquieran su conformacin correcta.
La glucosil-transferasa evala la condicin de las protenas y, si estn mal plegadas, le
adiciona una glucosa a su rbol de glicosilaciones, devolvindole la afinidad por las
chaperonas.
Pese a esto, hasta un 80% de los polipptidos de algunas protenas terminan mal
estructurados (por ejemplo: hoja en lugar de helix). Estas protenas son dislocadas al
citoplasma, ubiquitinadas y degradadas por el proteosoma.
Trfico Vesicular
En verde: ruta endoctica
En rojo: ruta biosinttica-secretora
En azul: rutas de retorno
Aparato de Golgi
Qu es?
Dnde est?
Cul es su funcin?
Cmo llegan a l las protenas del RE?
Qu es?
Consiste en una serie de sacos aplanados o cisternas formando pilas.
Cada pila consiste de 3 a 6 cisternas y su nmero depende del tipo
de clula.
Est compartimentalizado en tres regiones: cis, medial y trans.
Alberts et al, 2002
Ubicacin
Cerca del ncleo.
Clulas animales: pilas unidas por conexiones tubulares formando un complejo.
Clulas vegetales: apilamientos normalmente dispersos en el citoplasma.
Cmo est
conformado?
Cada pila de Golgi tiene
dos caras: una de entrada
o cis, adyacente al RE y
una de salida o trans,
dirigida hacia la MP.
RE
MP
Funcin
Procesar y empacar macromolculas (lpidos,
protenas) antes de que ellas sean enviadas a
su destino. (Ppal. Glicosilacin de protenas)
Modificaciones de N-glicosilacin: continuacin
del procesamiento realizado en RE. Se eliminan
grupos de manosas, y se agregan otros
azcares como galactosa, fucosa, N-
acetilglucosamina y c. Silico.
Modificaciones de O-glicosilacin.
O-glicosilacin
Generalmente serina y treonina unen directamente N-
acetilgalactosamina a la que se pueden agregar otros
azcares, de uno a la vez, y son catalizada por
diferentes glicosiltransferasas. El proceso comienza en
el Golgi cis y finaliza en el trans (no requiere la
secuencia aminoacdica Asn-X-Ser/Thr)
Los oligosacridos de unin-O son generalmente cortos
(1 a 4 residuos de azcares).
Transporte desde RE a Golgi
Todo el transporte posterior a RE ocurre mediante vesculas (ciclos de yemacin y
fusin).
-> Slo las protenas plegadas correctamente abandonan el RE.
Ruta Biosinttica secretora: protenas van desde RE a membrana plasmtica,
o mediante endosomas tardos a los lisosomas.
Ruta Endoctica, las molculas son ingeridas y trasladadas a endosomas
tempranos y va endosomas tardos van a los lisosomas
Rutas de Recuperacin (de retorno)
Existen 3 tipos de vesculas recubiertas:
Vesculas recubiertas por clatrina
Vesculas recubiertas por COPI (coatmero)
Vesculas recubiertas por COPII (coatmero)
Donde:
a. Transporte desde A. de Golgi y M. Plasmtica
b. y c. Transporte desde RE y desde cisternas del A. de Golgi
Figure 13-4 Molecular Biology of the Cell (Garland Science 2008)
Vesculas recubiertas y Transporte Vesicular.
Figure 13-5 Molecular Biology of the Cell (Garland Science 2008)
Subunidad de clatrina Subunidad de clatrina
Triskelion Triskelion
Ensamblaje de las Vesculas recubiertas por Clatrina.
Protenas Adaptadoras se unen a Protenas de Transmembrana, que capturan
molculas solubles (cargo)
Ensamblaje y Desensamblaje de la Cubierta de Clatrina.
Una vez que la vescula se ha formado se pierde la cubierta de clatrina.
Formacin de yema
Formacin de una Vescula recubierta por COPII
Protena Sar-GTP: se une a membrana y recluta a las protenas de cubierta.
Figure 13-13d Molecular Biology of the Cell (Garland Science 2008)
Las vesculas yemadas del RE se funden formando estructuras llamadas agrupaciones
tbulo vesiculares. Estas estructuras se movilizan hacia el Golgi cis a travs de
microtbulos y en su camino van yemando vesculas cubiertas de protenas (no
clatrina): COPI.
Estas vesculas regresan al RE protenas residentes en el RE (i.e. BiP) que han escapado
y otras que participan en la yemacin del organelo.
Alberts et al, 2002
Modelos para explicar la mantencin de la estructura polarizada del Golgi y la movilizacin de las
protenas de un compartimento a otro.
Modelo de transporte vesicular: las cisternas son estructuras estticas y las protenas en trnsito
se transportan en vesculas COP-I que yeman de un compartimento y se funden con el siguiente. El
flujo retrogado se hara tambin a travs de vesculas COP-I.
Modelo de maduracin de las cisternas : Las cistenas son estructuras dinmicas que maduran a
medida que se movilizan a travs de la pila. La compartimentalizacin de las enzimas del Golgi se
hara por flujo retrgrado en vesculas COP-I.
Organizacin y transporte de protenas en las cisternas del Golgi
Alberts et al, 2002
Compartimentalizacin funcional del
Aparato de Golgi .
Las cisternas del Golgi estn organizadas
en una serie de compartimentos de
procesamiento: red Golgi cis, cisternas
cis, cisternas mediales, cisternas trans,
red Golgi trans.
Durante su paso a travs del Golgi las
protenas sufren posteriores
modificaciones covalentes de las
cadenas de oligosacridos en estos
compartimentos.
En las clulas vegetales el aparato de
Golgi adems est involucrado en la
sntesis del los polisacridos complejos
de la pared celular.
Protenas que son residentes del RE y se escapan al cis Golgi son devueltas por
transporte vesicular.
Un R de membrana del cis Golgi las captura y regresa (reconocen la seal de
retencin de RE).
Si se elimina la seal la protena es secretada (y a la inversa).
REPASO!!!
Transporte desde la Red Trans Golgi hacia los Lisosomas Transporte desde la Red Trans Golgi hacia los Lisosomas
Todas las protenas llegan hasta la zona trans para ser destinadas (con excepcin
de las protenas residentes permanentes del A. de Golgi)
Lisosomas: organelo donde ocurre digesti Lisosomas: organelo donde ocurre digesti n intracelular n intracelular
Los lisosomas contienen hidrolasas cidas o enzima hidrolticas (digieren desechos
intra y extracelulares, microorganismos fagocitados, entre otros).
En su membrana hay protenas de transporte para que salgan: azcares,
nucletidos, aminocidos (para excrecin o re-utilizacin).
Adems estn las bombas de H
+
(mantienen el pH cido del lisosoma).
Los lisosomas no son formados directamente, son el producto de la maduracin de
los Endosomas tardos que van recibiendo enzimas y transportadores desde el Ap.
Golgi
pH: 5
H+
ATP
ADP + Pi
A
m
i
n
o

c
i
d
o
s
a
z

c
a
r
e
s
n
u
c
l
e

t
i
d
o
s
Maduracin
pH: 5
0.2 a 0.5 um
Cmo se destinan las protenas que van desde el A. de Golgi hasta el Lisosoma?
La manosa de los N-oligosacridos de la protenas de los lisosomas se fosforilan.
Las enzimas lisosomales se clasifican en la red trans Golgi por un receptor proteico
que reconoce al marcador manosa 6-fosfato.
Se dirigen a ---- a Endosomas Tardos - Lisosomas
Vescula de Transporte
Cmo se destinan las protenas que van desde el A. de Golgi hasta el Lisosoma?
La manosa de los N-oligosacridos de la protenas de los lisosomas se fosforilan.
Las enzimas lisosomales se clasifican en la red trans Golgi por un receptor proteico
que reconoce al marcador manosa 6-fosfato.
Se dirigen a ---- a Endosomas Tardos - Lisosomas
Vescula de Transporte
Las Tres Rutas de Degradaci Las Tres Rutas de Degradaci n en los Lisosomas n en los Lisosomas
1 1 Endocitosis: Endocitosis:
-El material se descarga en los
Endosomas Tempranos donde:
Parte del material se recicla a la
membrana plasmtica
Parte se descarga en los
Endosomas Tardos, organelos
que vienen del RE con hidrolasas
cidas (pH del organelo = 6)
A partir de los Endosomas
Tardos se generan los
Lisosomas. Lisosomas.
Las Tres Rutas de Degradaci Las Tres Rutas de Degradaci n en los Lisosomas n en los Lisosomas
2 2 Ruta de Degradaci Ruta de Degradaci n en n en
Lisosomas Lisosomas
Degradacin de partes de la
propia clula. Ejemplo: organelos
como la mitocondria.
Membranas del RE engloban a la
mitocondria formndose un
Autofagosoma, el que
posteriormente se unir a un
Lisosoma.
3 3 Ruta de Degradaci Ruta de Degradaci n en n en
Lisosomas Lisosomas
Ocurre en clulas especializadas
en fagocitar microorganismos
(macrfagos y neutrfilos).
Se forman fagosomas los que
formarn ms tarde Lisosomas.
Transporte desde la membrana Plasm Transporte desde la membrana Plasm tica v tica v a Endosomas: a Endosomas:
Endocitosis Endocitosis
Pinocitosis: fluidos y solutos pequeos (<150 nm dimetro)
Fagocitosis: grandes partculas como microorganismos (>250 nm dimetro)
Formacin de Vesculas recubiertas por clatrina en la membrana plasmtica (M.P.)
Las vesculas se forman a partir de depresiones de la M.P. recubiertas en su parte
citoslica por clatrina (pits).
En la mayora de las clulas animales estas vesculas se utilizan para captar
macromolculas especficas Endocitosis mediada por Receptor. Endocitosis mediada por Receptor.
Para que haya Endocitosis deben formarse las vesculas recubiertas por clatrina
Las clulas captan colesterol (proceso de
endocitosis mediada por receptor)
Ves Ves culas de Transporte culas de Transporte:
Se forman en regiones revestidas de la membrana (revestidas de clatrina o
coatmero).
Este recubrimiento se elimina antes de la fusin con la vescula receptora.
Clatrina: media el transporte de los R de transmembrana de LDL y de manosa 6P.
Coatmero (Protenas COP): media el transporte vesicular en la ruta por defecto (RE-
Golgi-Mb. Plasmtica)
Adaptina: captura a diferentes R.
Transporte desde el Trans Golgi hacia la Superficie Celular:
Transporte desde el Trans Golgi hacia la Superficie Celular:
Exocitosis
Exocitosis
Ruta de Secreci Ruta de Secreci n Constitutiva n Constitutiva: vesculas con flujo constante. La membrana
plasmtica obtiene as sus protenas y lpidos. Las protenas solubles son destinadas a
la matriz extracelular.
Ruta de Secreci Ruta de Secreci n Regulada: n Regulada: Las protenas se almacenan en vesculas de secrecin
las que se liberan cuando son necesarias. Ejemplo: neurotransmisores, hormonas.
Ruta por defecto no regulada.
Vescula recubierta por clatrina Va Regulada
Liberacin del producto por Exocitosis.
Por seal, ejemplo, los neurotransmisores se liberan por un cambio
en el potencial de accin (estmulo elctrico).
Entra calcio a la clula y la vescula se fusiona con la M.P.
Endocitosis existe a la par de la Exocitosis Endocitosis existe a la par de la Exocitosis
Transporte al interior de Mitocondrias y Cloroplastos Transporte al interior de Mitocondrias y Cloroplastos
La mayora de sus protenas son sintetizadas en
el citosol (informacin en genes del ncleo).
Mitocondria: Mitocondria:
Espacio intermembrana
Matriz Mitocondrial
Membrana externa
Membrana interna (genoma de la mitocondria)
Cloroplasto: Cloroplasto:
Espacio y membrana tilacoidal (genoma del
cloroplasto)
Por ende, las protenas se translocan hasta
llegar al lugar de destino.
Transporte hacia la Matriz Mitocondrial Transporte hacia la Matriz Mitocondrial
Hay un pptido seal de entre 20 a 80 residuos de aminocidos en el
extremo amino terminal (con carga + y apolares) ->hlice anfiflica.
Las protenas cruzan ambas membranas mitocondriales a la vez (a
travs de protenas transportadoras, o complejos proteicos, se le
denomina tambin lugar de contacto).
Cuando se ha producido la importacin el pptido seal es degradado
en la matriz (por enzimas conocidas como peptidasas).
Transporte de Prote Transporte de Prote nas hasta la Matriz de la Mitocondria nas hasta la Matriz de la Mitocondria
Chaperonas: protenas que ayudan al cruce de la protena en su estado
desplegado y ayudan a su posterior plegamiento.
El transporte requiere ATP y un gradiente electroqumico de la membrana interna.
-Canal de Traslocacin
Chaperonas hsp70 se requieren para Translocaci Chaperonas hsp70 se requieren para Translocaci n a Matriz n a Matriz
Las protenas cruzan en estado desplegado.
Hsp70 mitocondrial = facilita el plegamiento
Transporte hacia Cloroplastos Transporte hacia Cloroplastos
Semejanzas con Transporte a Mitocondrias: Semejanzas con Transporte a Mitocondrias:
1. Es post-traduccional
2. Requieren energa
3. Requieren seales hidrofbicas en su extremo amino terminal que
luego sern eliminadas.
Diferencia: Diferencia:
En los cloroplastos no se usa la energa del gradiente electroqumico
para el transporte.
Se requiere ATP y GTP.
Transporte a luz del Tilacoide (Cloroplasto) Transporte a luz del Tilacoide (Cloroplasto)
Se requieren dos seales
1 Seal contiene Ser y Thr, adems de a hidrofbicos y se halla en el extremo
N terminal.
2 Seal tilacoidal hidrofbica.
Transporte a Peroxisomas Transporte a Peroxisomas
Organelos delimitados por una sola membrana.
Pptido Seal: 3 aminocidos ubicados en el extremo carboxilo terminal
Peroxisomas
Son pequeos organelos que contienen enzimas
involucradas en una diversidad de reacciones
metablicas, incluyendo varios aspectos del
metabolismo energtico.
Carecen de DNA y sus protenas son codificadas por
genes nucleares. Se replican por divisin.
Contienen enzimas que oxidan varios sustratos
orgnicos, generando perxido de hidrgeno (H
2
O
2
).
La oxidacin de los cido grasos en peroxisomas
produce grupos acetilo (CH
3
-CO-), usados en reacciones
biosintticas, pero no ATP.
J unto a las mitocondrias, son los principales sitios de
utilizacin de oxgeno.
Una hiptesis es que los peroxisomas son un vestigio de
un antiguo organelo que llevaba a cabo todo el
metabolismo de oxgeno en clulas eucariticas
ancestrales.
Las inclusiones paracristalinas electro-densas estn
compuestas de la enzima urato oxidasa.
Peroxisomas
Peroxisomas
En su interior presentan catalasa catalasa.
Las enzimas usan el O
2
para eliminar
tomos de hidrgenos de compuestos
orgnicos formando el H
2
O
2
.
La catalasa usa el H
2
O
2
para oxidar
fenoles, alcoholes (ejemplo: etanol a
acetaldehdo), entre otros compuestos,
formando Agua.
Organelo detoxificador (h Organelo detoxificador (h gado y ri gado y ri n). n).
Funciones Peroxisomales
50 Enzimas diferentes
Metabolismo Lipdico:
-oxidacin de cidos grasos de Cadena muy larga
Very Long Chain Fatty Acids (VLCFA)
Corresponde a una importante fuente de energa
celular
Formacin y ruptura de Perxido de Hidrgeno:
catalasa
Biosntesis Lipdica (colesterol y plasmalgenos)
Sntesis de aminas y de cidos biliares
Catabolismo de Purinas (urato oxidasa)
Peroxisomas
-Vida media:, 1 da
-Posiblemente su funcin primordial fue la
defensa contra el oxgeno.
-Sus protenas son traducidas en en citoplasma
y luego son dirigidas al organelo mediante seales
carboxilo-terminales de su secuencia.
-PTS1, seal de protenas de matrz peroxisomal (Ser-Lys-
Leu) que es reconocida por receptores solubles que
dirigen la protena al peroxisoma.
- Las protenas de membrana poseen otras seales y
algunas provienen del retculo endoplsmico.
Proteosoma y protelisis selectiva
1. Qu es?
Es un complejo de protenas (proteasas dependientes de ATP )
que degradan protenas que poseen una seal para
degradacin y que contienen errores en su secuencia
aminoacdica (mutaciones, transcripcin, splicing, traduccin
-mal plegamiento).
2. Dnde su ubica?
Se encuentran dispersos en el citoplasma y ncleo, en varias
copias.
Figura 5-37. Molecular Biology of the Cell. 3 Edicin
Cmo est formado?
Un cilindro central formado de
muchas proteasas que tienen
sitios activos que se orientan
hacia el interior del cilindro.
Los extremos estn
delimitados por un complejo
de prots (complejo CAP) de
10 polipptidos (algunos
hidrolisan ATP).
F(x) CAP: selecciona,
despliega y expone a las
proteasas aquellas protenas
blanco para destruccin.
Proteasas: degradan
protenas a pptidos
pequeos.
Fig 6-89. Mol Biol of the Cell. 5 Ed
Procesividad
Mantiene la protena blanco unida a su complejo hasta que
todo el polipptido es degradado a pequeos fragmentos.
Fig 6-90 Mol Biol of the Cell. 5 Ed
Seal para degradacin?
Ubiquitina: pequea protena que se encuentra libre o
unida a otras protenas del citoplasma.
Fig 5-38 Mol Biol of the Cell. 3 Ed Fig 5-39 Mol Biol of the Cell. 3 Ed
NO SIEMPRE IMPLICA
DEGRADACIN.
Fig 6-93. Mol Biol of the Cell 5 Ed. Distinta marcacin de las
protenas por la ubiquitina
Existen protenas normales que
tienen vida corta y son
marcadas para destruirlas
Fig 6-94. Mol Biol of the Cell 5 Ed