Pr tic Lbortoril 5

Reaes caractersticas dos

glcidos


Trabalho Realizado Por:
Beatriz Lopes Dias Vieira da Silva 45517
Cludia Filipa Abreu Miranda-44813
Hugo Daniel dos Santos Videira-44804



2

ndice

Sumrio
1. Resumo ...................................................................................................................................... 3
2. Apresentao, Tratamento e Discusso dos Resultados .......................................................... 4
2.1. Testes de identificao de glcidos ..................................................................................... 4
2.2. Doseamento de glcidos redutores numa farinha alimentar ................................................. 7
Reao do mtodo do dinitrosalicilato ........................................................................................ 8
Clculo da concentrao de glucose ......................................................................................... 9
3. Bibliografia .............................................................................................................................. 11
Lehninger Principles of Biochemistry, 6th Edition David L. Nelson, Michael M. Cox,
Macmillan, International Edition, 2013....................................................................................... 11
4. Questes a desenvolver .......................................................................................................... 11















3

1. Resumo



























4

2. Apresentao, Tratamento e Discusso dos Resultados

2.1. Testes de identificao de glcidos

2.1.1. Chave dicotmica de identificao de glcidos


2.1.2. Quadro-resumo dos resultados obtidos.

2.1.3. Discusso dos resultados obtidos
Estrutura qumica dos glcidos utilizados:
















Amido
Glucognio (uma molcula est
entre parntesis rectos)
5



Teste Benedict
O reagente de Benedict uma soluo alcalina de CuSO
4
com Na
2
Co
3
e citrato de
sdio (Na
3
C
6
H
5
O
7
). O io citrato forma um complexo com o io Cu
2+
, impedindo que este
precipite da soluo sob a forma de Cu(OH)
2
(de cor azul) ou CuO (de cor preta). O Cu
2+
do
reagente de Benedict oxida os glcidos redutores presentes numa soluo, originando uma
variedade de produtos ao mesmo tempo que Cu
2+
reduzido a Cu
+
.
Os glcidos que contm grupos hemiacetlicos esto em equilbrio na forma de um
agente redutor muito activo enodiol. A sua presena garante a reduo dos ies Cu
2+
a
Cu
+
levando a formao de hidrxido cuproso que por aquecimento se transforma em
xido cuproso que se identifica por ser insolvel e de cor vermelha. Para umm glcido ser
redutor a extremidade do carbono anomrico (C1 para as hexoses e C2 para as pentoses)
pode estar ou no livre, ou seja, pode ou no, devido sua reatividade, ter funes de
aldedo (capacidade que a ligao dupla tem de ceder um par de eletres).
Foram testados sete glcidos diferentes, sendo o tubo controlo da reao, o tubo
de ensaio contendo gua destilada e reagente de Benedict. Analisando os resultados
obtidos, apenas as solues de xilose, glucose, frutose e lactose reagiram, o que foi
possvel observar pelas alteraes de cor e formao de precipitado, por isso conclui-se
que so os nicos glcidos redutores.
No caso da glucose, frutose e xilose verifica-se que apresentam a extremidade do
carbono anomrico livre, o que as torna potenciais glcidos redutores, fazendo com que o
resultado da reao com o reagente de Benedict seja positivo. Verificou-se que, nessas
solues ocorreu uma mudana de colorao do azul para laranja avermelhada, assim
como a formao de precipitado, donde se conclui que os carbonos anomricos livres
reduziram o cobre do reagente. Estes resultados experimentais permitem afirmar que
tanto a xilose, como a glucose e a frutose so oses redutoras.
Observou-se, tambm, a formao de um precipitado e alterao de cor para
laranja avermelhado no tubo que continha a lactose, que um disido. Apesar de ser um
disido composto por duas oses (a galactose e a glucose), a lactose um glcido redutor,
uma vez que o carbono anomrico da glucose se encontra em condies de reduzir o
cobre do reagente (livre).
Quanto aos restantes tubos, estes tiveram reaes negativas (tubos que
continham sacarose, amido e glucognio) porque os grupos hemiacetlicos fazem parte
das ligaes entre os monmeros, ficando assim indisponveis, como no caso da sacarose
ou ento os grupos redutores encontram-se no interior dos polisidos (estrutura em
hlice) ou ocupados a fazer ligaes glucosdicas ficando no reativos, no caso do amido e
do glucognio.
6




Teste de Barfoed
As oses e os disidos redutores tm velocidades de reao distintas quando em
contacto com o reagente de Barfoed (soluo de acetato de cobre em cido actico) pelo
que se podem distinguir por este mtodo. A capacidade redutora de oses e disidos
diminuda em meio cido ao contrrio do que acontece no teste de Benedict. No entanto,
tal como no mtodo antes referido, ocorre a oxidao das oses e o Cu
2+
reduzido a Cu
+
,
precipitando sob a forma de xido cuproso de cor vermelha.
As mesmas sete solues foram testadas com este mtodo, utilizando-se
novamente como controlo negativo o tubo que continha gua destilada, no entanto aqui j
foram utilizados controlos positivos, sabendo-se que as solues que as solues de xilose,
glucose e frutose continham oses redutoras.
Pelos resultados do Quadro , conclui-se que os resultados obtidos foram os es-
perados: resultados positivos para os tubos que continham solues de xilose, glucose e
frutose oses redutoras (resultado do teste anterior), negativos para a lactose e a sacaro-
se disidos, com capacidades de oxidao do grupo carboxilo do carbono onomrico
significativamente inferiores que as das oses e tambm negativos para o amido e o glu-
cognio visto que os ltimos dois so polisidos, assim sendo no ocorre reao e o Cu
2+

no reduzido.

Teste do Iodo
O Teste do Iodo permite identificar a presena de polisidos em soluo, mais
ou menos ramificados, devido formao de um composto corado com cores diferentes
para os diferentes glcidos. Deste modo, polisidos ramificados com hlices interrompidas
originam complexos castanhos e polisidos muito ramificados com pequenos segmentos
helicoidais formam complexos castanho-avermelhados.
Depois de aplicado este mtodo a todos os tubos, comprovou-se que o teste
apenas deu positivo na presena de polisidos, o amido e o glucognio.
Teoricamente, uma vez que tanto o amido como o glicognio so polisidos
ramificados, na presena do reagente KI, forma-se um complexo de iodo, conferindo
soluo uma colorao varivel, de acordo com o grau de ramificao. Uma vez que o
amido um polisido pouco ramificado, apresenta uma colorao menos intensa do que o
glicognio, que um polisido mais ramificado. Este ltimo apresenta uma colorao mais
intensa.
7

de salientar que a sacarose, que tal como o amido e o glucognio tinha dado
resultado negativo nos outros dois testes, neste teste no obteve um resultado positivo
pois no se observou qualquer alterao, uma vez que esta um disido e no tem
capacidade de reagir com o iodo. Nos restantes tubos, como era esperado, obtiveram-se
resultados negativos, pois para ocorrer um resultado positivo necessrio que o glcido
apresente mais de 35 resduos de glucose da que com os sidos e os disidos se obtenha
um resultado negativo.
2.2. Doseamento de glcidos redutores numa farinha
alimentar

Fluxograma comentado

Pesar 80 mg de farinha alimentar
e reduzir a p fino com o auxlio de um almofariz

Pesar aproximadamente 50 mg de amostra e registar a massa at ao dcimo de mg

Transferir o material pesado para um tubo de ensaio e adicionar
10mL de H
2
SO
4
1,5M

Aquecer o tubo de ensaio num banho de gua em ebulio durante 20min na hotte, agitando
de vez em quando

Arrefecer o tubo torneira e transferir o contedo para um erlenmeyer de 50mL com rolha

Lavar o tubo cuidadosamente com 12mL de NaOH a 10% e transferir para o mesmo erlenmeyer

Aquecer ligeiramente o erlenmeyer e filtrar enquanto quente para um balo de 50mL

Lavar o erlenmeyer com gua destilada quente e adicion-la ao papel de filtro para transferir
todo o hidrolisado

8

Prefazer o volume do balo at 50 mL. Agitar bem.

necessrio reduzir a farinha a p fino para evitar a pesagem de ar que existe entre os
flocos e assim diminuir o erro experimental, e tambm aumentar a superfcie de contacto para
faciltiar a reaco de hidrlise.
necessrio registar o valor da massa at ao dcimo de mg para o clculo mais da
quantidade de glcidos redutores que esto presentes na farinha ser feito de forma mais
rigorosa e precisa evitando assim um desvio maior relativamente ao vlaor real.
A adio de cido sulfrico permitiu a hidrolisao cida de polisidos, obtendo-se
oses redutoras. Alm disso, o H
2
SO
4
desnatura as protenas. O aquecimento deve ser feito na
hotte, porque o cido encontra-se concentrado e com a evaporao ocorre libertao de gases
txicos.
A adio de NaOH neutralizar o cidoem excesso e tornar o meio alcalino para que a
reao com DNS ocorra.
A filtrao mais rpida se a soluo estiver quente, permitindo assim a recolha de
oses redutoras enquanto que os polisidos no hidrolisados ficam retidos no papel de filtro.
Com o aquecimento o DNS reduzido na presena de glcidos redutores e a soluo
adquire uma cor castanho-avermelhada.
Reao do mtodo do dinitrosalicilato
Em presena de um glcido redutor, o cido 3,5dinitrosaliclico reduzido a cido 3-
amino-5-nitrosalicilato, por perda de 2 tomos de oxignio ( um dos grupos NO
2
do cido
inicial passa a NH
2
, existindo no cido final apenas um grupo NO
2
) e entrada de 2 hidrognios,
medida que os grupos aldedo do glcido redutor so oxidados a grupos carboxilo, como
mostrado na figura (). O cido 3-amino-5-nitrosalicilato tem uma cor castanho-avermelhada e
pode ser doseado espectrofotometricamente a 540 nm.
Figura 1-Esquema da reaco qumica do mtodo do dinitrosalicilato
9

y = 2.2908x + 0.0006
R = 0.9482
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16
A
b
s
o
r
v

n
c
i
a
(
5
4
0

n
m
)

Concentrao (mg/mL)
Clculo da concentrao de glucose
Para a realizao do clculo da concentrao de glucose nos tubos de ensaio,
comeou-se por calcular a concentrao final dos tubos de ensaio que continham glucose a 5
mg/mL, com volumes iniciais diferentes e volume final de 25 mL.
Tubo 1

Para os restantes tubos, os clculos foram iguais, variando s o volume inicial.

Tubo n. 0 1 2 3 4 5 6
Concentrao final 0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,14
Absorvncia 0,007 0,059 0,113 0,176 0,217 0,227 0,309
Tabela 1 - Registo dos valores das concentraes finais das solues que contm Glucose 5,0 mg/mL.
Com estes valores possvel fazer a recta de calibrao e depois determinar a
concentrao de glucose. A absorvncia do tubo 0(controlo), foi subtrada a todos os valores
de absorvncia de modo a que a recta passe na origem.









Grfico 1-Absorvncia vs Concentrao
10

A recta de calibrao y=2,2908x + 0,0006 sendo que y a absorvncia e x a
concentrao. A partir desta recta possvel calcular os valores de absorvncia dos tubos 7,8 e
9.
Tubo 7
Abs
540
= 0,004
y=2,2908x + 0,0006 0,004 = 2,2908x + 0,0006 x = 1,48 x10
-3
mg/mL
Este valor corresponde concentrao final nos 25 mL. Mas a amostra foi diluida at perfazer
o valor de 50 mL e depois desse volume foram retirados volumes diferentes de soluo aos
quais foi adicionado o reagente.

1,48 x10
-3
mg/mL

Massa de glucose na soluo:
Vi=50 mL

50 1,4 mg
Para os outros os tubos, os clculos efectuados foram os mesmos. A seguir apresenta-
se um quadro com os resultados obtidos.

Mdia de concentrao:
(1,48 x10
-3
+2,36 x10
-3
+ 3,23 x10
-3
)/3 = 2,35 x10
-3
mg/mL
Massa mdia de glucose:
Tubo n 7 8 9
Absorvncia
(540nm)
0,004 0,006 0,008
Concentrao
(mg/mL)
1,48 x10
-3
2,36 x10
-3
3,23 x10
-3

Volume de
hidrosilado (mL)
1,3 1,6 2
Massa de glucose
(mg)
1,4 1,84 2,02
11

(1,4+ 1,84 + 2,02)/3 = 1,75 mg
Percentagem (m/m):
%(m/m) = (massa final/massa hidrosilado) x 100
%(m/m) = (1,75/50,2) x 100 %(m/m) = 3,49%
%(m/m) Nestum=84,7%
O rendimento desta experincia foi muito baixo. Conclui-se que houve uma srie de
erros na experincia que contribuiram para um decrscimo do rendimento: erros na medio
de volumes, a hidrlise cida pode no ter sido totalmente eficaz, a filtrao tambm no foi
totalmente eficaz e houve perda de glcidos na transferncia do reagente de um recipiente
para o outro.

3. Bibliografia
Quintas, A., Halpern, M.J., Freire, A.P. Eds., Bioqumica Organizao Molecular da Vida,
Lidel, Lisboa, 2008.
Lehninger Principles of Biochemistry, 6th Edition David L. Nelson, Michael M. Cox,
Macmillan, International Edition, 2013.


4. Questes a desenvolver
4.1. A forma predominante da glucose em soluo a estrutura em anel representada pela
projeo de Haworth. Porque que a glucose d um resultado positivo, reagindo
completamente, nas reaes caractersticas da sua forma em cadeia aberta?
A projeo de Haworth representa os glcidos na sua forma cclica. Em soluo a
glucose encontra-se predominantemente na sua forma cclica, em anis de cinco ou seis
carbonos que so as estruturas mais estveis, e em menor quantidade na sua forma em cadeia
aberta ou linear, que ajuda a estabilizar as formas cclicas.
Contudo, quando introduzido um reagente especfico para a estrutura de glucose em
cadeia aberta na soluo, a glucose vai reagir completamente, perturbando o equilbrio.
Segundo o princpio de Le Chatelier, o sistema vai evoluir no sentido de contrariar esta
perturbao e fazer aumentar a concentrao de glucose em cadeia aberta.
A glucose reage completamente nas reaes caractersticas da sua forma em cadeia
aberta, porque o sistema est continuamente a manter o equilbrio das espcies no meio, ou
seja, permite que quando a concentrao de glucose diminua, o sistema evolua no sentido de
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formar mais glucose em cadeia aberta. Assim, toda a glucose em cadeia aberta acaba por
reagir e estas reaes caractersticas so positivas.
4.2. Apesar de possurem uma extremidade redutora, o amido e o glucognio do um
resultado negativo nos testes de deteo de glcidos redutores. Justifique.
O amido e o glucognio so polisidos, ou seja so constitudos por muitos resduos de
oses. O amido constitudo por glucose, amilose e amilopectinas. Enquanto o glucognio
constitudo por polmeros de glucose.
O amido constitudo por amilose, que uma macromolcula linear de estrutura
helicoidal, ou seja constituda por resduos de D-glucopiranose ligados entre si por ligaes
glucosdicas -1,4. A amilopectina e o glucognio so polmeros ramificados de -glucose
unidos por ligaes glucosdicas. Contudo, o glucognio tem uma estrutura mais ramificada do
que a amilopectina e s tem uma extremidade redutora.
A amilose, a amilopectina e o glucognio efetuam ligaes pela extremidade redutora
de cada resduo osdico, o que significa que cada polisido tem apenas uma extremidade
redutora, que pertence ao ltimo resduo. Porm, no amido, a extremidade redutora do
ltimo resduo est virada para dentro da molcula, no interior da hlice estrutural. Deste
modo, os agentes oxidantes no so capazes de atacar o interior da molcula, uma vez que os
grupos no redutores esto virados para fora, impedindo o contacto.
O amido e o glucognio do um resultado negativo no teste de Benedict de deteo de
glcidos redutores, porque a extremidade redutora est no interior da molcula e nunca chega
a estar em contacto com o (Cu), o agente oxidante.
O amido uma molcula de grande dimenso, por isso existem muitos resduos de
glucose que esto ligados e que no possuem uma extremidade redutora, em relao aos
resduos que possuem essa extremidade. Se a concentrao de amido e glucognio em soluo
baixa, ento no esto em soluo molculas suficientes para que o resultado do teste de
Benedict seja positivo.
4.3. Como explica a obteno de um falso resultado positivo se efetuar um aquecimento
prolongado de algumas solues de glcidos no teste de Barfoed?
O teste de Barfoed oxida as oses atravs do io (Cu) e permite a identificao de oses
numa soluo e ainda a distino entre ose e disido. As oses e os disidos tm uma
velocidade de reao distinta com uma soluo de acetato de cobre em cido actico. As oses
reagem mais depressa do que os disidos.
Quando se efetua um aquecimento de um glcido ocorrem ruturas das ligaes
glucosdicas, quebrando os sidos e originando resduos de oses mais pequenos. Nos glcidos a
extremidade redutora responsvel pela ligao glucosdica, quando esta ligao quebrada,
a extremidade redutora fica livre em soluo, podendo reagir com agentes oxidantes no teste
de Barfoed. As oses aparecem mais rapidamente que os disidos, permitindo a sua deteo
em primeiro lugar e a presena de oses em soluo constitui um resultado positivo no teste de
Barfoed.
13

Porm, quando se efetua um aquecimento prolongado de um glcido, os disidos
comeam a ser hidrolisados e a reagir com os ies (Cu) presentes em soluo. Quando isto
ocorre obtm-se um falso positivo, pois esto a reagir disidos quando apenas se pretendem
detetar oses. Um falso positivo torna um teste no fivel pois adultera os resultados da
experincia e neste caso, impossibilita a anlise da presena ou no de oses em glcidos.
4.4. Por que foi necessrio proceder hidrlise cida da farinha alimentar previamente
aplicao do mtodo do DNS?
O DNS ou 3,5-dinitrosalicilato, quando aquecido e em meio bsico reage com glcidos
redutores para formar o 3-amino-5-nitrosalicilato. Este mtodo oxida os grupos redutores dos
glcidos, tais como os aldedos e cetonas das oses permitindo quantificar uma amostra.
A farinha alimentar composta principalmente por amido e resduos de glucose,
molculas que no so redutoras e por isso no so capazes de reagir com o DNS. Para fazer a
farinha alimentar reagir com o DNS necessrio torna-la numa molcula redutora capaz de
reagir com o composto, que oxidante. A farinha alimentar sofre uma hidrlise cida que vai
quebrar as ligaes glucosdicas e permitir que se formem oses cujas extremidades redutoras
passam a estar em contacto com a soluo, em vez de estabelecerem ligaes com outras
oses. Aps o aparecimento das oses em soluo, estas j so capazes de reagir com o DNS,
pois as extremidades redutoras das oses vo ser oxidadas pelo DNS e permitir a realizao do
mtodo.