AMINOACIDOS Y PROTEINAS.

Garca, L. C
1
; Orejuela, R.S.
2

UNIVERSIDAD DEL VALLE - DEPARTAMENTO DE QUMICA.




1. DATOS, CALCULOS Y RESULTADOS.
a). acidez de los aminocidos
Se tom en un vidrio reloj 0,1 mL de cido
aminoactico al 2%, se le adicion agua y
con un trozo de papel indicador de midi el
pH. Se colore y al comparar con la micro-
escala, se obtuvo que el pH del cido fue
de 6.

b). Formacin de una sal compleja de
cido aminoactico.
Se disuelven en 5.0mL de agua 0.256 g de
Gly y 1.016 g de CuO, la suspensin se
hierve por 15 min hasta que toma una
coloracin azul, se filtra el exceso de CuO y
el filtrado se evapora hasta la formacin de
cristales azules.
Compuesto %
Rend.
Caracterstica
Sal de cido
aminoactico
81.39 Cristales
azules
El rendimiento de la reaccin fue calculado con base
en reactivo lmite glicina.
c). Coagulacin de la albmina.
Se tomarn cinco tubos de ensayo, a cada
uno se le adicion 1 mL de solucin de
clara de huevo, y se hicieron las siguientes
pruebas:
Tubo 1: Calentamiento, la solucin se
someti a calor y a los 78 C, se coagulo su
coloracin es blanca.
Tubo 2: Se adicion 4mL de etanol al
hacer la mezcla esta se coagula y la
coloracin es blanca.
Tubo 3: Se adicion HCl concentrado al
hacer la mezcla esta se coagula y la
coloracin es blanca.
Tubo 4: Se adicion HNO
3
al hacer la
mezcla esta se coagula se forma un
precipitado color amarillo, lo que indico que
si hubo coagulacin.
Tubo 5: Se adicion NaOH concentrado al
hacer la mezcla se observa que no se
coagula y es totalmente transparente.

d). Reaccin xantoproteica.
En un tubo de ensayo se tom 1.0 mL de
la solucin de clara de huevo con 0,5 mL
de cido ntrico concentrado y se calent
por varios minutos, por ltimo se agregaron
varias gotas de NaOH. La solucin antes
del calentamiento es de color amarillo
intenso con presencia de precipitado.
Despus del calentamiento se observa un
precipitado con la solucin color amarilla.
Al adicionar el Hidrxido de Sodio se
observa un precipitado blanco con una
solucin amarilla-anaranjada.
e). Reaccin de biuret.
En un tubo de ensayo se calent por unos
minutos la mezcla de 1.0 mL de solucin
clara de huevo, 1.0 mL de solucin al 10%
de NaOH y varias gotas de solucin al 2%
de sulfato de Cobre (II). Se observ una
coloracin violeta intenso.
f). Reaccin coloreada del formaldehido
para protenas.
Se agrega a una solucin de albmina de
huevo, 5 gotas de formaldehdo, la solucin
es translucida y al agregar cido sulfrico
concentrado, la solucin es amarilla y se
observan cogulos blancos que forman una
fase.

2. ANALISIS DE RESULTADOS
Reaccin xantoproteica

La albumina tiene todos los 20 -A.A. en su
secuencia entonces las pruebas que sean
positivas para sus aminocidos tambin
permiten identificar la presencia de una
protena.

Esta reaccin se debe a la formacin de un
compuesto aromtico nitrado de color
amarillo, cuando las protenas son tratadas
con cido ntrico concentrado.
Generalmente, se forma primero un
precipitado blanco que cambia a amarillo al
calentarlo. El color se empieza a tornarse
anaranjado cuando la solucin se vuelve
bsica. La prueba da resultado positivo en
aquellas protenas con aminocidos
portadores de grupos bencnicos, tirosina,
fenilalanina y triptfano, obtenindose
nitrocompuestos de color amarillo, que se
vuelven anaranjados en medio fuertemente
alcalino (formacin del cido pirmico o
trinitrofenol). En esta prueba se produce la
nitracin del anillo bencnico presente en
dichos aminocidos.
La reaccin xantoproteica es especfica
para los grupos fenilos sustituidos. En ella
ocurrir la nitracin del grupo fenilo que
posea una molcula orientadora para
posiciones orto del anillo cuando se ponga
en contacto con el cido ntrico. La
nitracin de este anillo determinar que el
compuesto resultante tenga un color
amarillo.
En esta reaccin el cido ntrico producir
la desnaturalizacin e hidrlisis parcial de
las protenas y por lo tanto las protenas
que contengan a los aminocidos
mencionados anteriormente tambin darna
positiva la reaccin.



Fig. 17 Reaccin Xantoprotica
9
En el laboratorio se obtuvo el respectivo
precipitado primero y despus el color
amarillo que luego torn naranja,
demostrando que la prueba es positiva y
que la clara de huevo contiene
aminocidos portadores de grupos
bencnicos como la tirosina, fenilalanina y
triptfano
10
.

Reaccin de Biuret

La prueba de Biuret es una buena prueba
general para las protenas y la intensidad
del color violeta es una medida del nmero
de enlaces peptdicos. Algunas sustancias
como la oxamida pueden dar falsos
resultados positivos en ensayos cualitativos
de protenas.

El Reactivo de Biuret es aquel que detecta
la presencia de protenas, pptidos cortos y
otros compuestos con dos o ms enlaces
peptdicos en sustancias de composicin
desconocida. Est hecho de hidrxido
potsico (KOH) y sulfato cprico (CuSO
4
),
junto con tartrato de sodio y potasio
(KNaC
4
H
4
O
6
4H
2
O). El reactivo, de color
azul, cambia a violeta en presencia de
protenas, y vira a rosa cuando se combina
con polipptidos de cadena corta. El
hidrxido de potasio no participa en la
reaccin, pero proporciona el medio
alcalino necesario para que tenga lugar
9
.
El nombre de la reaccin procede del
compuesto coloreado formado por la
condensacin de dos molculas de urea
con eliminacin de amoniaco.




Fig. 18 Reaccin de Biuret

Esta reaccin est dada por aquellas
sustancias cuyas molculas contienen dos
grupos carbamino (-CO-NH) unidos
directamente o a travs de un solo tomo
de carbono o nitrgeno. El reactivo de
Biuret contiene Cu
2
SO
4
en solucin acuosa
alcalina (gracias a la presencia de NaOH o
KOH). La reaccin se basa en la formacin
de un complejo de coordinacin entre los
iones Cu
2+
y los pares de electrones no
compartidos del nitrgeno que forma parte
de los enlaces peptdicos. Esta ltima
reaccin provoca un cambio de coloracin:
violeta prpura o violeta rosado. Debe
sealarse que el color depende de la
naturaleza de las protenas; protenas y
pptidos dan un color rosado.
La reaccin debe su nombre al Biuret, una
molcula formada a partir de dos de urea (
H
2
N-CO-NH-CO-NH
2
), que es la ms sencil
la que da positiva esta reaccin, comn a t
odos los compuestos que tengan dos o m
s enlaces peptdicos consecutivos en sus m
olculas
8
.

Fig. 19 Estructuras de urea, Biuret y pptido
8


En el laboratorio se obtuvo la coloracin vio
leta lo que demuestra que la clara del huev
o contiene protenas y pptidos, que se rec
onocen por el complejo formado que result
a al unirse el cobre con los tomos de nitr
geno de los enlaces peptdicos.

Reaccin Coloreada del Formaldehdo
para protenas

La solucin de albumina de huevo
reacciona con el formaldehdo y la solucin
es traslucida, al adicionar el cido sulfrico
concentrado se observa el precipitado
blanco indicativo de la coagulacin y la
formacin de la imina correspondiente. En
el equilibrio se bloquea el grupo amino
entonces se pierde el carcter anftero del
aminocido.
La reaccin que se presenta es la adicin
del grupo amino, por tener un par
electrnico libre, el carboxilo del
formaldehido es protonado por el cido
sulfrico lo que le confiere una carga
positiva al carbono, provoca que el doble
enlace del C-O se rompa, y el cido
sulfrico lo protona para que salga como
agua, y el grupo amino pierde un protn y
forma el doble enlace con el carbono.

H
2
CC
NH
2
COOH
+
H
H
H
O
Formaldehdo
H
2
CC
N
COOH
H
C
H H
Albumina
H
2
SO
4
Fig. 20 Reaccin de la solucin albumina con
formaldehdo



4. CONCLUSIONES

- En la prueba de Biuret el color
violeta rosado del complejo, es
caracterstico de protenas y
pptidos, y resulta de la reaccin
de los iones Cu
2+
con los
electrones de tomos de nitrgeno
de dichos compuestos.

- Los -aminocidos como la glicina,
se pueden determinar mediante
pruebas colorimtricas en solucin
alcalina a travs de un
acomplejamiento con Cu
2+
.