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Trtatamiento
Microbiolgico
Eduardo Benalczar G.
Julio 2003
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Microorganismos en el agua de los yacimientos:

1) Tipos de microorganismos:

Las bacterias abarca una amplia clase de microorganismos de gran inters en las
operaciones con agua. La clula de la bacteria tiene una estructura poco visible,
inclusive cuando se observa con el microscopio. En la aparte externa se tiene la pared de
la clula que proporciona su forma. En la parte interna hay una membrana
semipermeable que rodea el contenido de la clula bacterial, y realiza un control
selectivo del paso de substancias entre la clula y el ambiente externo. La clula est
llena de agua que contiene diferentes minerales y qumicos.

La mayora de las especies tienen movilidad propia a travs del agua por medio de una
cola; figura 5-68.

Figura 5-68
Membrana
semipermeable
Pared de
la clula
Cola
ADN
3
Las e ucarias es un grupo de microorganismos que incluyen a las algas, hongos y
protozoarios.

Algas:

Son plantas unicelulares que contienen clorofila. A travs de la fotosntesis fabrican
sus alimentos, para lo cual utilizan la luz solar como fuente de energa y del CO
2
extraen el carbn. A pesar de que requieren de luz solar para su crecimiento, tambin
se desarrollan lentamente en la oscuridad.

Las algas pueden formar limo en la superficie del agua que se identifica fcilmente
por el color verde o verde-azulado. A menudo se encuentra en los sitios estancados o
en las torres de enfriamiento.

Estn presentes en el agua de mar, aunque no como limos. Existen en cantidades
importantes en la mayora de aguas de mar y contribuyen substancialmente al
taponamiento.

Hongos:

Generalmente crecen mejor en ambientes aerbicos y causan pocos problemas en los
sistemas de inyeccin.

Protozoarios:

Son la forma ms simple de vida animal. Se encuentran en aguas frescas y salinas, y
requieren de oxgeno para vivir. En los sistemas de inyeccin de agua se hallan en los
tanques y piscinas. Tambin se encuentran en los filtros cuando el agua es aireada. El
control de los otros microorganismos, eliminar la poblacin de protozoarios.
4
Los ocanos en el mundo contienen especimenes queselos conocecomo plancton.
Estetrmino es aplicado atodos los animales y plantas queviven librementeen el agua,
los cuales por su limitadafuerzademovimiento, derivan junto alas corrientes deagua
marina. Esto no significaqueno puedan nadar; algunos crustceos y larvas depeces
pueden nadar muy bien, pero no son capaces demoversems rpido quelas corrientes
marinas.

El plancton puede ser agrupados por tamaos:

Megaloplancton: animales grandes como el jellyfish.
Macroplancton: visibles al ojo humano, tamao de1 mm.
Microplancton: organismos detamao menor a1mmy mayor a75 micras
Nanoplancton: ms pequeos, incluyeplantas minsculas, bacterias y especimenes
llamados flagellatos.
Ultraplancton: flagellatos detamao menor a5 micras.
5
2) Clasificacin de las bacterias:

Se pueden clasificar de varias formas:

Tamao y forma:

Las bacterias son extremadamente pequeas, alrededor de 0.5 micras de dimetro, y
existen miles de especies. Las bacterias tienen formas variadas como esferas,
cilindros rectos o cilindros curvados. Por la forma que tienen se las conoce como:

i) Una sola esfera: coccus
Varias esferas: cocc
Como informacin de inters, una cadena de cocc se llama streptococcus,
mientras una forma plana de las cocc se conoce como staphylococus.
ii) Cilindro recto: bacillus
iii) Cilindros curvos:
Vibrio: sola curva en forma de C
Sigmoid: forma de S
Spirillum: dos o ms curvas en forma de espiral o tornillo
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Crecimiento:

La principal razn por la cual las bacterias crean muchos problemas es la velocidad
con que ellas pueden multiplicarse o reproducirse. Algunas pueden duplicar su
poblacin en 20 minutos bajos condiciones ideales, lo que significa que una sola
bacteria puede llegar a ser una prspera colonia en pocas horas. Un puado de limo
del agua puede contener tantas bacterias como la poblacin mundial.

Las bacterias pueden soportar un amplio rango de temperaturas de 14 a 210 F, valores
de pH de 0 10.5, y concentraciones de oxgeno de 0 a casi 100%. Sin embargo, en los
sistemas de agua, ellas crecen mejor en un rango de pH de 5-9 y temperaturas
menores a 180 F. Prefieren agua fresca, pero tambin pueden desarrollarse en
salmueras. Se adaptan con facilidad a las condiciones de los sistemas y son
resistentes.

Las bacterias pueden vivir en grupos o colonias adheridas a los slidos de la
superficie del metal llamadas sessile, o en los slidos suspendidos del agua. Cuando
se encuentran con los SST en el agua, se las conoce como planctnicas, nadadoras
o flotadoras.

La mayora de bacterias son sessile. Se ha reportado que en un sistema tpico existen
1,000 a 100,000 veces ms las bacterias en los depsitos adheridos a las paredes, que
las flotantes. Tambin se ha demostrado que las bacterias sessile cuando crecen
producen una sustancia pegajosa llamada polisacrido, que utiliza para cementarse
o adherirse a las superficies slidas.

La produccin continua de polisacrido forma una biomasa que rodea y cubre a la
bacteria. Esta biomasa puede llegar a ser bastante gruesa, 1 mm de espesor. Dentro de
las capas de polisacridos pueden coexistir colonias de dos tipos diferentes de
bacterias, creando una poblacin mixta adherente.
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Requerimiento de oxgeno:

Unaclasificacin comn en los sistemas petroleros es saber si unabacterianecesitao
no oxgeno paravivir; seclasifican en:

i) Bacterias aerbicas: requieren oxgeno paracrecer
ii) Bacterias anaerbicas: crecen mejor en ausenciadeoxgeno
iii) Bacterias facultativas: crecen en presenciao ausenciadeoxgeno.
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b) Problemas originados por las bacterias:

Como se indic anteriormente, las bacterias pueden generar corrosin y taponamiento.
Pueden afectar a lacorrosin en los sistemas petroleros de la siguiente forma:

i) Produciendo H
2
S, por lo tanto incrementan la corrosin.
ii) Producen cidos orgnicos que inician o aceleran la corrosin del metal debajo de las
colonias.
iii) Producen enzimas que pueden incrementar la corrosin por participacin directa en el
proceso electroqumico.
iv) Oxidan el hierro soluble en el agua, causando la precipitacin y forman depsitos
llamados tuberclos que aceleran la corrosin mediante la formacin de celdas de
concentracin.
v) Por combinacin de los tems anteriores.

El taponamiento puede resultar de la accin bacteriana debido a la formacin de
biomasas de bacterias, la generacin de productos de corrosin como FS, o la
precipitacin del hierro soluble del agua.
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1) Bacterias Reductoras de Sulfato (SRB):

Las bacterias reductoras de sulfato causan los mayores problemas en los sistemas de
inyeccin de agua. Ellas reducen los iones sulfato o sulfito del agua en iones sulfuro,
formndose H
2
S como subproducto.

SRB
SO
4
=
S
=
(5-101)

S
=
+ 2H+ H
2
S
(g)
(5-102)

S
=
+ Fe
++
FeS
(s)
(5-103)

Cuatro tipos de problemas pueden resultar de la accin reductora de estas bacterias:

o Pueden precipitar directamente de la reaccin de corrosin y causar picaduras
directamente entre las colonias y el metal, como se observa en la figura 5-69.
o La generacin de H
2
S puede incrementar la corrosividad del agua. S el sistema es
agrio, el H
2
S adicional generado por las bacterias tendr poco o no afectar la
corrosividad del agua. Sin embargo, si el sistema fue originalmente dulce, la
adicin de H2S por las bacterias, aumentar considerablemente la velocidad de
corrosin y generar picaduras en todas partes.
o La presencia de SRB en los sistemas originalmente dulces, crea la posibilidad de
producir fracturamiento por sulfuros y ampollamiento del acero dulce.
o La corrosin agria produce el slido insoluble sulfuro de hierro que es un
excelente material taponante. En las experiencias de campo con un slido
formado por sulfuro de hierro, parafinas y carbonatos, la accin taponante se
produjo en las tuberas horizontales, reduciendo el dimetro interno hasta en un 60
%; en las lneas verticales o tubing de los pozos inyectores, no se tuvo mayores
inconvenientes, igual en la cara de la formacin.
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Las bacterias SRB se las encuentra con mayor probabilidad en las reas estancadas o
de baja velocidad, y debajo de las escalas o sedimentos. Sitios comunes para la
actividad bacteriana en los sistemas de inyeccin de agua son los tanques, filtros y
puntos muertos del sistema; as como en los pozos que son fuentes de agua.
Figura 5-69
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Tipos de bacterias SRB:

Alrededor de nueve familias o gneros de bacterias SRB se conocen. Sin embargo, la
mayora de problemas de corrosin se atribuyen a los miembros de dos familias:
Desulfovibrio y Desulfotomaculum. Las especies ms conocidas de estas familias se
detallan en la tabla 5-28, y son las responsables de la corrosin.

Tabla 5-28

De los organismos reductores de sulfato, el ms encontrado en los campos petroleros
pertenece al gnero Desulfovibrio.

Desulfotomaculum puede formar esporas, que es una estructura que se forma dentro
del cuerpo de una bacteria. Las esporas son resistentes a la temperatura, cidos,
alcoholes, desinfectantes, secantes, enfriadores y muchas otras condiciones adversas.
Pueden permanecer por cientos de aos y luego germinar en condiciones favorables.
Una espora tiene varias caractersticas de un germen, pero no es una estructura
reproductiva.
Gner o Especies For ma
Desulfovibrio africanas Sigmoid rod
desulfuricans Vibrio
salexigens Vibrio
vulgaris Vibrio
Desulfotomaculum nigrificans * rod
orientis curved rod
* Antiguamente Clostridium nigrificans
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Efecto de la salinidad:

Las SRB se encuentran en rangos de salinidades desde cerca de cero hasta la
saturacin. Muchas desulfovibrio toleran la sal y pueden crecer en concentraciones de
NaCl tan altas como 100,000 ppm. Mayores concentraciones tienden a limitar el
crecimiento.

Dos especies de desulfovibrio tienen requerimientos especficos de salinidad.
Desulfovibrio salexigens se desarrollan en una concentracin mnima de 25,000 ppm,
mientras que la Desulfovibrio vulgaris requieren una carga menor a 10,000 ppm.

Desulfotomaculum rara vez se encuentran en aguas con ms de 20,000 ppm de NaCl.
Por encima de 20,000 ppm, la poblacin es casi siempre Desulfovibrio.
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Efecto de la presin, temperatura y pH:

Las SRB como grupo de familia de este tipo de bacterias, tienen tolerancia relativa a
la temperatura desde 40-170 F, un rango de pH entre 5 y 9, y presiones hasta de
14,500 psi. Valores absolutos de estas variables en ambientes naturales no se ha
podido establecer con certeza.

Los siguientes rangos se han obtenido en laboratorio en un medio artificial:

o Desulfovibrio: el rango ptimo de crecimiento es de 77-110 F, con una lmite
mximo de 120 F.
o Desulfotomaculum nigrificans: la temperatura ptima de crecimiento es 130 F.
Disminuye un poco el crecimiento a 150-160 F, y pueden sobrevivir a 170 F.
o Desulfotomaculum orientis: tienen un ptimo crecimiento a una temperatura de
85-100 F, pero cuando la temperatura es de 108 F se mueren.
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Nutricin:

La bacterias absorben sus nutrientes directamente del ambiente que les rodea. Cada
clula contiene protenas llamadas enzimas que les ayuda a descomponer las
molculas nutrientes y extraen la emerga de estas.

Las bacterias SRB requieren un nmero grande de nutrientes para crecer. Algunos de
estos son:

o Carbn: las SRB son heterotrficas, estos significa que todas o la mayora de
sus clulas de carbn estn derivadas de substancias orgnicas y generan CO
2
cuando crecen. Utilizan materiales orgnicos disueltos en el agua como los cidos
orgnicos o alcoholes como fuente de carbn. Aparentemente no pueden usar
los hidrocarburos del petrleo.
o Nitrgeno y Fsforo:
o Hierro disuelto: tienen un absoluto requerimiento por concentraciones
relativamente altas de hierro disuelto.
o Sulfato, Sulfito, Bisulfito, o iones Tiosulfato: el diagnstico primario es que crecen
con la reduccin de iones sulfato a sulfuro, pero pueden tambin crecer con sulfito
y otros compuestos reducidos a sulfuros.

La falta de cualquiera de los nutrientes nombrados limitar el crecimiento.

Una fuente de nitrgeno es rara y siempre ser un limitante en el crecimiento de las
SRB en los sistemas de inyeccin de agua. Por lo tanto, es improbable que los
compuestos que contienen nitrgeno como los inhibidores de corrosin estimulen el
crecimiento bacteriano.
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Efecto del oxgeno disuelto y el sulfuro de hidrgeno:

Las SRB se encuentran en las superficies oxigenadas de las aguas como los ocanos.
Estn generalmente en muy pequeos nmeros y no se multiplican a una velocidad
apreciable. Sin embargo, si el agua es desaireada antes de la inyeccin, el ambiente
ser libre de oxgeno e ideal para su crecimiento.

Es posible que crezcan en los sistemas aireados con la ayuda de las bacterias
aerbicas. Estas formarn limo adherente en la superficie metlica y consumen
oxgeno en su crecimiento; generan un ambiente anaerbico debajo de los depsitos,
suministrando un medio apropiado para el crecimiento de las SRB.

El sulfuro de hidrgeno disminuye la velocidad de crecimiento y puede, en altas
concentraciones, bajar el crecimiento a cero. Esto es verdad porque el sulfuro de
hidrgeno reaccionar con el hierro disuelto para formar sulfuro de hierro,
eliminando uno de sus nutrientes.
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Reservorios agrios:
Por accin de bacterias SRB
Inicialmente fueron reservorios dulces
Generalmente se inyecta agua con sulfatos
Concentraciones altas de H2S en gas de pozos productores (3,100 mg/L)
Reservorios someros por baja temperatura favorecen crecimiento
El agua de los pozos inyectores enfra el entorno y crecen bacterias
EL H2S producido viaja con el agua de inyeccin a los pozos productores
Las bacterias se desarrollan en la matriz porosa y los biocidas no son
totalmente efectivos
Zobell calculque las SRB podran viajar entre 2 y 40 pies por ao.
Los efectos de un reservorio agrio se presentan con el aumento de la
corrosin en las facilidades de produccin por fracturamiento por sulfuros
y/o ampollamiento por hidrgeno.
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2) Bacterias oxidantes del hierro:

Son capaces de oxidar los iones ferrosos en el agua y formar una envoltura de
hidrxido frrico alrededor de ellos en su crecimiento. Las principales bacterias son
Siderocapsa, Gallionella y Sphaerotilus. Se clasifican como bacterias aerbicas,
auque pueden crecer tambin en ambientes con concentraciones bajas de oxgeno (<
0.5 ppm).

Las bacterias oxidantes del hierro pueden causar problemas de corrosin y
taponamiento. No participan directamente en el proceso de corrosin, pero ayudan al
desarrollo de las SRB bajo la capa de hidrxido o creando celdas de concentracin de
oxgeno. Un gran nmero de estas bacterias pueden causar la precipitacin de
importantes cantidades de hidrxido frrico y producir taponamiento. Se las
encuentra generalmente en aguas frescas y en algunas ocasiones en salmueras.

3) Bacterias formadoras de limo:

Son capaces de producir abundante limo en las superficies de las tuberas. Las
principales son Pseudomonas, Flavobacterium, Enterobacter, Escherichia y Bacilus.
Ocasionan taponamiento y contribuyen a la corrosin como las bacterias oxidantes de
hierro, recubriendo una parte de la superficie. Se puede encontrar en aguas salinas o
frescas, en ambientes aerbicos y anaerbicos. Sin embargo, estn comnmente es
sistemas aerbicos con baja salinidad.
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4) Cultivo de bacterias:

Tiene como objetivo hacer que las bacterias se desarrollen en un ambiente artificial;
es una tcnica estndar para estimar su poblacin.

Una muestra de agua que contiene bacterias se coloca en un lquido conocido como
medio de cultivo, que es una solucin formada de agua y nutrientes para que las
bacterias de inters crezcan y se multipliquen. En algunos medios de cultivo se
colocan indicadores de crecimiento; por ejemplo, en las SRB se aade un clavo de
hierro, para que el H
2
S producido reaccione con el hierro y forme el precipitado negro
insoluble de sulfuro de hierro.

La composicin del agua para un medio de cultivo puede ser arbitraria, por ejemplo
10,000 ppmde NaCl, o puede ser hecha muy similar al agua analizada. Existen varias
posibilidades para usar el agua como medio de cultivo:

o Usar una solucin de cloruro de sodio de concentracin similar al agua de inters.
o Preparar un agua sinttica de composicin similar al agua de inters.
o Usar agua esterilizada del campo, cuando sea factible. La composicin del agua,
incluyendo los micronutrientes, sern muy similares al sistema actual como sea
posible.

La norma API RP 38 describe el mtodo recomendado para examinar las aguas
de inyeccin y se emplean en la mayora de laboratorios.
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1 mL de muestra de agua
1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Nmero 1 2 3 4 5 6
de botella
Factor de 1:10 1:100 1:1,000 1:10,000 1:100,000 1:1000,000
dilucin
Tcnica de la dilucin
Figura 5-70
20
Las reglas de juego establecen que no se puede transferir parte de una bacteria de
una botella inoculada a otra. Esto quiere decir que cuando se retira 1 mL de la botella
inoculada que contiene 10 mL de lquido, debe haber al menos 10 bacterias en la
botella, o un promedio de 1 bacteria por mL, antes de la transferencia. Por ejemplo, si
hubieran solo 8 bacterias en la botella, el promedio de la poblacin sera 0.8 bacteria
por mL, y la transferencia no puede ocurrir de acuerdo a las reglas.

En una forma anloga, si hubieran 15 bacterias en una botella, el promedio de la
poblacin es de 1.5 bacterias por mL. Como es permitido un nmero determinado de
transferencias, al retirar un mL de muestra se coger una bacteria para la prxima
botella.

Ejemplo adicionales se presentan en la tabla 5-29.

Tabla 5-29

Nmero de series 1 2 3 4 5 6 7 8
Un mL de muestra original 10 50 90 100 250 600 850 1000
Primera botella 10 50 90 100 250 500 850 1000
Segunda botella 1 5 9 10 25 50 85 100
Tercera botella 0 0 0 0 2 5 8 10
Cuarta botella 0 0 0 0 0 0 0 1
Nmero de bacterias
21
Tipos de cultivos:

En la prctica, dos tipos de medios de cultivo se utilizan normalmente, por lo tanto,
dos series separadas de diluciones se realizan: una para las SRB y otra para las
bacteria totales o generales.

o Bacterias Reductoras de Sulfato: las bacterias contadas por este mtodo incluyen
Desulfovibrio. Desulfotomaculum tambin pueden ser detectados. Sin embargo, si
las condiciones del sistemas son favorables para el desarrollo de las
Desulfotomaculum, se deber emplear un medio especfico para su identificacin.

El medio utilizado para las SRB es el descrito en la norma API RP 38. Una vez
que las botellas han sido inoculadas, se recomienda incubar por un perodo de 28
das. La temperatura de incubacin ser la que tenga el sitio de muestreo del
sistema, con una variacin de 9 F. S esta temperatura no se puede obtener, se
pondr en una estufa ente 77 y 100 F.

La botella puede contener hierro ferroso o un clavo de hierro. El crecimiento de
bacterias se obtiene cuando en las botellas se observa un precipitado negro de FeS,
producto de la reaccin entre el H
2
S y los iones ferrosos.
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o
Conteo de bacterias generales:

Las botellas para las bacterias generales, heterotropica y facultativa, emplean un
medio de cultivo diferente. Un perodo de incubacin de 5 das es comn.

El conteo de bacterias generales incluye las bacterias aerbicas generales, como
las formadoras de limo, y puede tambin incluirse a las bacterias anaerbicas y
facultativas. No incluye las bacterias oxidantes de hierro, que son difciles de
cultivar en un medio artificial; y, generalmente se detectan a travs del
microscopio.

Tres tipos de medio de cultivo se utilizan para la determinacin de las bacterias
heterotrpicas:

i) Caldo de cultivo estndar: el crecimiento se detecta por la formacin de una
turbidez que es ocasionada por las clulas de las bacterias, siendo evidente
cuando el conteo excede 1000,000 por mL.
ii) Dextrosa de rojo fenol: este medio contiene azcar y rojo fenol que es un
indicador cido-base y cambia de rojo a amarillo cuando el pH del medio de
cultivo baja a menos de 6.6. Cuando el azcar es fermentada u oxidada por la
bacteria, varios cidos orgnicos se producen, diminuyendo el pH y cambiando
el color del indicador.

El crecimiento bacteriano se presenta por cambio de color, turbidez o ambos.
La turbidez indica la presencia de bacterias generales y el cambio de color la
presencia de bacterias productoras de cido.
iii) Tioglicolato: este medio es usado para detectar bacterias anaerbicas
heterotrpicas. El crecimiento se observa por la generacin de turbidez.

Una vez inoculadas las botellas, se colocan en una incubadora o estufa a la misma
temperatura que las SRB.
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Conteo final:

Como regla comn se tiene que las bacterias generales aparecern dentro de los tres
primeros das del cultivo; y, las SRB de dos a cuatro semanas. Las botellas deben
examinarse diariamente y anotar los resultados. La lectura final se reportar despus
de 5 das para las bacterias generales y 28 para las SRB, a menos que la experiencia
proporcione resultados aceptables con anticipacin.


Interpretacin de resultados:

El nmero de bacterias presentes en el mililitro original del agua inoculada en la
primera botella puede ser estimada usando la tabla 5-29.

Tabla 5-29

Por ejemplo, si en las botellas 1, 2 y 3 crecen despacio, pero las botellas 4 a 6
permanecen claras, el agua contendr de 100 a 999 bacterias por mL, y el conteo
reportado ser de 1,000 bacterias/mL.
No botella Factor de No de bacterias No de bacterias
inoculada dilucin observadas reportadas
(bacteria/mL) (bacteria/mL)
1 1:10 1 a 9 10
2 1:100 10 a 99 100
3 1:1,000 100 a 999 1,000
4 1:10,000 1,000 a 9,999 10,000
5 1:100,000 10,000 a 99,999 100,000
6 1:1'000,000 100,000 a 999,999 1'000,000
24
o Problemas comunes en la interpretacin del crecimiento: existen una serie de
acontecimientos comunes que pueden interferir en la interpretacin de los
resultados obtenidos con la tcnica de dilucin seriada. Algunos son:

i) Todas las botellas indican crecimiento: si todas las botellas tienen indicios de
crecimiento bacteriano, no es posible estimar su poblacin. Por ejemplo, s las
seis botellas de una serie son positivas, se debera reportar que la poblacin es
igual o mayor a 1000,000 por mL.

ii) Inmediatamente positivas: s la primera botella inoculada para detectar
SRB se negrea despus de dos horas, esto no es por accin de las bacterias.
Las SRB crecen rpido pero no demasiado rpido. El color negro es el sulfuro
de hierro resultante de altas concentraciones de H
2
S en la muestra de agua que
reacciona con el hierro disuelto en el medio de cultivo.

S aparece el precipitado negro en la primera botella del cultivo de SRB en
menos de dos horas, se deben tomar las siguientes precauciones:

I. Proceder con la dilucin seriada. Las botellas 2 a 6 generalmente
permanecern claras y pueden ser usadas para detectar el crecimiento.
II. Recoja unos 50 mL de agua en una botella esterilizada y adicione una
tableta de Alkaseltzer. El Alkaseltzer eliminar la mayor parte de H
2
S de
la muestra, cuando la tableta se ha disuelto completamente, tomar un
mililitro con una jeringuilla esterilizada e inicie la inoculacin.
25
Similarmente, s la primera botella para detectar las bacterias generales se
vuelve turbia, o amarilla en el caso del rojo fenol, despus de una hora de
la inoculacin, no ser por accin de las bacterias. Puede ser por efecto de
alta turbiedad en la muestra o un pH muy bajo que causa cambio de color.

i) Botellas intermedias claras (bottle skipping): algunas veces una de las
botellas del medio de una serie inoculada permanece clara, mientras que las
botellas aledaas indican la presencia de bacterias. S esto ocurre, el salto u
omisin de una botella se ha presentado, y el resultado a reportarse ser de la
botella mayor que muestre la presencia de bacterias.

Por ejemplo, se asume que en una serie inoculada, las botellas 1, 2 y 4 indican
el crecimiento bacteriano, mientras que las botellas 3, 5 y 6 permanecen claras
despus del tiempo apropiado de incubacin. Existen algunas explicaciones
posibles incluyendo una contaminacin accidental de la botella 4. Sin
embargo, rara vez se conocer porque ha ocurrido, y tendr que hacerse
cuestionamientos razonables al problema. En este ejemplo, s se considera que
las botellas fueron numeradas correctamente, se reportar el valor de la cuarta
botella 10,000/mL; aunque se recomienda repetir la incubacin para ratificar o
rectificar los resultados.
26
Significado de los resultados:

Este mtodo permite estimar el nmero de bacterias planctnicas flotantes en el
agua. Debido a que la mayora de bacterias en un sistema son del tipo sessile,
pegadas a las superficies slidas, no es un buen mtodo para calcular el nmero de
bacterias presentes o viviendo en un sistema. No obstante, es una prueba muy rpida
y ha provedo resultados satisfactorios del nivel de actividad bacterial.

A menudo el nmero absoluto de bacterias en una agua es de menos importancia que
los cambios en la poblacin. S el nmero de bacterias aumenta desde la fuente de
agua hasta el pozo inyector, es casi un hecho que la actividad bacterial est
aumentando considerablemente, y ser una fuente de problemas graves de corrosin
y/o taponamiento. En forma anloga, el incremento de la poblacin bacteriana en un
sitio especfico del sistema es un inicio de crecimiento de las bacterias.

o Conteo de bacterias generales: si el conteo es menor a 10,000 organismos por mL
no se consideran problemticas en un sistema no tratado. Como regla general
valores de 100,000/mL indica una fuerte posibilidad de taponamiento y se
necesitar tratamiento con biocidas. Paralelamente a un alto grado de
contaminacin, se presentarn disminucin del caudal de inyeccin e incremento
de la presin de inyeccin, as como taponamiento de los filtros. Una parte de la
poblacin bacteriana crecer en las superficies slidas y no se detectar por esta
tcnica.
o SRB: la presencia de una sola bacteria reductora de sulfato se considera como un
potencial problema. Las SRB son bacterias sessile y este mtodo solo detecta las
bacterias planctnicas o flotantes. Como los depsitos son numerosos, existirn
numerosas bacterias adheridas en las paredes del sistema por cada bacteria que
est flotando en el agua.
27
b) Deteccin rpida de las bacterias y mtodos de conteo:

La tcnica del cultivo depende del desarrollo de las bacterias para su identificacin.
Pueden estar presentes en una muestra dada, pero no pueden crecer en un medio de
cultivo, y no detectarn. Adicionalmente, el crecimiento se demora , y el uso de esta
tcnica y el conteo no es rpido.

Hay una serie de mtodos que permiten conocer ms rpidamente la poblacin
bacteriana en los sistemas petroleros. Estos detectan directamente las bacterias o
enzimas que estn asociadas con una tipo de bacteria en particular.

Algunos de las tcnicas ms comunes de valoraciones rpidas de bacterias se resumen a
continuacin. Para informacin ms completa se puede revisar la norma NACE
TM0194, Field Monitoring of Bacterial Growth in Oilfield Systems.
28
Examinacin al microscopio:

La tcnica del microscopio es extremadamente til para microbilogos entrenados.
Por ejemplo, las bacterias oxidantes de hierro y formadoras de limo pueden ser
rpidamente identificadas con una fase de contraste en el microscopio. Sin embargo,
es a menudo difcil distinguir las bacterias de los slidos suspendidos.

o Microscopio Fluorescente: para reconocer a una bacteria del medio que lo rodea
se aplica un tinte o tintura, que le permitir fluorecer o resplandecer cuando es
expuesta a una luz ultravioleta de apropiada longitud de onda. Se pueden distinguir
fcilmente de partculas no vivientes de tamao y forma similar, observndolas a
travs del microscopio con luz UV. Esta tcnica se conoce como Microscopa
fluorescente y permite contar directamente las bacterias en un corto tiempo.

Las clulas son concentradas por filtracin a travs de una membrana de
policarbonato en una superficie plana. Las membranas de acetato de celulosa
retienen las partculas de slidos suspendidos.
29
I. Tintura para clulas: las clulas totales pueden obtenerse usando tintes, que
se combinan con el material celular presente en las clulas vivas o muertas. Los
tintes usados para este propsito son el anaranjado de acridina y el DAPI (4,6
diamidio-2-fenilindole). El nmero total de clulas vivas puede ser
determinado usando el tinte FDA (diacetato fluorescente).
II. Tintura anticuerpo: el tinte fluorescente es ligado a los anticuerpos, los cuales
buscarn las clulas de las SRB. Por lo tanto, solo las bacterias reconocidas por
los anticuerpos fluorescern bajo el microscopio. La mayor ventaja de este
mtodo es la velocidad, los resultados se obtienen en dos horas.

La mayor limitacin del mtodo son los anticuerpos que se han manufacturado
para un tipo especfico de SRB. Sin embargo, un gran nmero de anticuerpos
para SRB pueden ser combinados para que la prueba sea muy general. El
mtodo detecta clulas vivas y muertas.-

Desafortunadamente, se necesita personal entrenado en esta tcnica, por lo que
el mtodo no es muy usado en el campo.
30
Fotometra ATP:

Los anlisis ATP determinan muy rpido los organismos vivos presentes en un agua
de inyeccin. No es especfico para bacterias, pero la mayora de organismos
presentes en las aguas petroleras son bacterias. Es particularmente til en la
evaluacin de tratamientos con biocida.

La bases del mtodo son:

i) El ATP (adenosina trifosfato) est presente en las clulas de todos los organismos
vivos.
ii) El ATP es destruido en los 20 minutos que la clula muere por la liberacin de la
enzima ATP-destroying.
iii) La cantidad de ATP por clula es una funcin lineal del volumen de la clula, por
ejemplo, el doble del volumen resultar en el doble de ATP.
31
Determinacin de enzimas:

o
Mediciones de Hidrogenaza: esta prueba se usa para detectar la presencia de la
enzima hidrogenaza, que es producida por las bacterias que utiliza el hidrgeno
como fuente de energa.

El hidrgeno es generado en el ctodo en muchas reacciones de corrosin. Este es
utilizado por bacterias como las SRB que despolarizan el ctodo y aceleran la
velocidad de corrosin. La prueba de la hidrogenaza se desarrolla usando muestra
de sessile. La muestra es expuesta a una solucin extractora de la enzima, y el
grado de oxidacin del hidrgeno, en una atmsfera libre de oxgeno, se obtiene
por un cambio de color.

Los resultados pueden obtenerse entre 30 minutos y 4 horas. Un tiempo de
exposicin de 12 horas generalmente se usa para propsitos de comparacin. La
prueba puede realizarse en el campo o en el laboratorio.

o
Mediciones de APS Reductasa: se basa en la definicin funcional de la reduccin
del sulfato, es decir, incluye las bacterias capaces de reducir en un medio
anaerbico el sulfato a sulfito. El nico requerimiento para este proceso es la
presencia de la enzima APS Reductasa, que est presente en todas las SRB, por lo
tanto al medir el contenido de esta enzima se conocer el nmero total de SRB
presentes.

La prueba requiere cerca de 20 minutos y puede llevarse a cabo en el campo o
laboratorio usando test kids comerciales. El lmite mnimo de deteccin por
este mtodo es de 1,000 clulas/mL, aunque la sensibilidad puede incrementarse
por concentracin de la muestra.
32
a) Muestro del agua para anlisis de bacterias:

Las muestras se toman para la determinacin de las bacterias sessile y planctnicas,
siendo ms comn cuantificar el nmero de bacterias planctnicas.

1) Puntos de muestreo:

Tomar muestras de agua en los siguientes puntos del sistema de inyeccin:

Fuentes de agua: cabezal del pozo, arroyos, charca, estanque, ocano o agua
producida.
Recipientes, tanques y filtros: tome una muestra a la entrada y salida, as como
en la descarga de los retrolavados en los filtros.
Pozos inyectores: tome una muestra en varios pozos inyectores localizados a
varias distancias, especialmente en los extremos.

2) Muestreo para anlisis de bacterias planctnicas:

La tcnica de muestreo es similar a la descrita en la primera parte de este captulo. Sin
embargo, algunas consideraciones adicionales se requiere:

Si utiliza un recipiente usado, debe esterilizarlo para eliminar la contaminacin; de
preferencia emplee recipientes nuevos.
El uso de mangueras de plstico o caucho que han sido usadas previamente es
considerado como una posible fuente de contaminacin. Utilice mangueras o
tuberas nuevas; y, de no ser posible, drene por lo menos un minuto antes de tomar
la muestra.
No contamine con oxgeno la muestra para anlisis de SRB
Un procedimiento alternativo es tomar directamente del chorro de agua la muestra
con una jeringuilla esterilizada y cultivarla inmediatamente.
33
3) Muestreo para bacteria sessile:

El mecanismo de Robbins fue desarrollado en la Universidad de Calgary por
Robbins y Cocterton para estimar la poblacin de las bacterias sessile en un sistema
de agua. Se inserta un cupn pequeo, esterilizado y de acero dulce, o una especie de
botn (stud) a travs de la pared de una pieza de pulgada de dimetro, de forma
que la cara del botn est pegado a la pared interna de la tubera. Efectivamente, estos
dispositivos pasan a ser parte de la pared de la tubera y facilitan un sitio para el
crecimiento de las bacterias sessile. Las corrientes laterales de agua del sistema
fluyen a travs del mecanismo, y despus de un tiempo definido de exposicin, los
botones son removidos, y el nmero de bacterias en cada botn se evala por uno de
los mtodos conocidos.

Probetas biolgicas comerciales basadas en el principio del mecanismo de Robbins
son suministradas por varios proveedores. Estas consisten de un soporte que contiene
de cinco a ocho botones o cupones. Estn disponibles en dos versiones:

Sistemas para alta presin:
Este tipo de probeta contiene de cinco a seis botones y estn diseados para
conectarse a accesorios de alta presin, figura 5-71. No se pueden instalar con
sistemas de acceso a altas presiones (retriver).

Sistemas para baja presin:

Esta probeta contiene 8 botones est sujeta a un tapn roscado de dos pulgadas. La
parte del sistema donde se coloca la probeta debe estar aislada por vlvulas y poder
despresurizar para colocarla y extraerle.
34
Figura 5-71
35
El proceso general para usar las probetas biolgicas es el siguiente:

1) Esterilizar los botones empapando en alcohol etlico, insertar en el contenedor de
plstico con pinzas. No toque con los dedos.
2) Instalar la probeta en el sistema, preferentemente en el fondo de la lnea, en la
posicin horaria 5 o 7.
3) Despus de un tiempo definido, dos a seis semanas, recuperar la probeta del
sistema y extraer rpidamente los botones. Evitar la contaminacin de estos, no
tocar con los dedos.
4) Determinar el nmero de bacterias adheridos a la superficie de cada botn. Existen
tres mtodos:

i) Cada botn se coloca en un tubo de ensayo de plstico que contiene una
solucin especial y esferas de vidrio. Las bacterias son desalojadas del botn
colocando el tubo de plstico en una centrfuga o agitando vigorosamente
por dos minutos. Una parte de la solucin se toma y se evala el contenido
bacteriano por el mtodo ATP o por dilucin seriada.
ii) Raspar la masa depositada en los botones con un bistur esterilizado. Los
slidos retirados, botones y el bistur se colocan en una solucin especial, y
luego son limpiados con un mecanismo ultrasnico. Una muestra de la
solucin se evala por dilucin seriada o por el mtodo ATP.
iii) La poblacin bacteriana en la superficie de los botones puede ser
determinada por examinacin directa con el microscopio fluorescente.

Se recomienda raspar las escalas o slidos de las paredes de las tuberas, o recoger de
los sitios donde se acumulen, para examinar la presencia de bacterias.

El cultivo puede realizarse en botellas con tapas roscadas. Un laboratorio
especializado o compaa de qumicos debera contactarse si se decide cultivar los
residuos de escala.
36
d) Control qumico de microorganismos:

1) Tipos de qumicos:

Los qumicos usados para control de las bacterias pueden ser clasificados en varias
formas:

Funcin:

i) Bactericida: es un qumico que mata a las bacterias.
ii) Bacteriostato: es un qumico que retarda o inhibe el crecimiento de las bacterias
iii) Biocida: es un qumico que mata otras formas de vida adems de las
bacterias.
iv) Bioestato: es un qumico que retarda o inhibe el crecimiento de otras formas de
vida adems de las bacterias.
37
Composicin qumica:

o Qumicos Inorgnicos:

i) Cloro:

es el biocida inorgnico ms usado en los sistemas de inyeccin de
agua. Se usa preferentemente en aguas superficiales como agua de mar o
frescas de ros, lagos, etc. En la siguiente seccin se analiza con mayor
detalle este biocida.
ii) Dixido de cloro ClO
2
:

es usado como un bactericida en aguas industriales.
Se produce in situ por la mezcla de clorato de sodio (NaClO
3
) o clorito de
sodio (NaClO
2
) con cido clorhdrico para obtener ClO
2
. Tambin puede
obtenerse de la reaccin de clorito de sodio con cloro.

Es un fuerte oxidante y reacciona con los sulfuros en el agua para formar
sulfatos. Las principales desventajas son la fuerte corrosividad al acero y la
posibilidad de crear una mezcla combustible cuando se pone en contacto con
petrleo, limitando el uso como biocida en las operaciones de produccin.
38
o Qumicos Orgnicos:

Aldehdos, compuestos de amonio cuaternario y aminas son ejemplos
comunes de bactericidas orgnicos.

i) Aldehdos: los glutaraldehdos son ampliamente usados para el control
bacteriano. La Acrolena (CH2=CH-CHO) se usa tambin, pero con menos
frecuencia; adems, es un buen secuestrante de sulfuro de hidrgeno, pero
es incompatible con los secuestrantes de oxgeno y muchos
inhibidores de corrosin y escala. El formaldehdo o formol (CH2O) es
tambin un secuestrante de sulfuro de hidrgeno, pero su uso est
restringido por sus caractersticas de agente cancergeno.

Los aldehdos no tienen una buena penetracin en las biomasas y se
mezclan con otros compuestos como amonios cuaternarios para mejorar
esta caracterstica.

ii) Aminas y quats: los compuestos de amonio cuaternario y de fsforo
cuaternario son comnmente referidos como quats. Tienen una buena
actividad superficial y actan como muy buenos detergentes. Su uso est
limitado para aguas de bajsima salinidad como las de mar o frescas.

Las aminas son muy similares a los quats y tienen una buena actividad
superficial. Cuando se aplican continuamente se comportan como
inhibidores de corrosin.
39
2) Clorinacin:

Es muy usado porque es uno de los bactericidas menos caro y ms efectivo. Cuando
se adiciona al agua, el cloro gas se hidroliza para formar cidos hipocloroso e
hipoclrico:

Cl
2
+H
2
O H
+
+Cl
-
+ HOCl (5-104)

El cido hipocloroso se ioniza para formar el ion hidrgeno y el ion hipoclororito:

HOCl H
+
+ Cl
-
(5-105)

Efecto del pH:

El grado de ionizacin depende del pH. Valores menores a 5, el cloro molecular
est presente; por encima de este pH, los iones HOCl y OCl
-
se forman. Los
porcentajes relativos de estas especies en funcin del pH se indican en la figura 5-
72.

La efectividad del cloro depende de la especie que est presente. Por ejemplo, el
poder bactericida del HOCl es mucho mayor que el OCl
-
. Por lo tanto, a pH
altos, la efectividad del cloro disminuye. Se debe indicar que la actividad o
concentracin es solo del 1-10% a valores de pH entre 8 y 9. Sin embargo, en
aguas que contienen iones bromuro, como las aguas de mar, el cloro oxida a los
iones bromuro a la forma de HOBr, que es todava un efectivo biocida a pH de 8-
9.

La cantidad de cloro requerido como bactericida es funcin del tiempo y la
temperatura, adems del pH. La velocidad de eliminacin de bacterias se
incrementa con la temperatura y disminuye con el pH.
40
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
4 5 6 7 8 9 10
pH
%

d
e

c
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i

n
OCl - HOCl
En la tabla 5-30 se muestra algunos datos de la relacin entre el pH y la cantidad
de cloro residual requerido en un tiempo de 10 minutos.
Tabla 5-30

pH Clor o r esidual
(ppm)
6-8 0,2
8-9 0,4
9-10 0,8
El cloro residual o cloro libre es la cantidad total de cloro presente como Cl
2
,
HOCl y OCl
-
, despus de que ha eliminado los microorganismos del agua, y
constituye una cantidad de reserva para futuras contaminaciones. La inyeccin
continua de cloro debe ser suficiente para mantener un cloro residual de 0.2-0.5
ppmen el cabezal del pozo inyector.
Figura 5-72
41
Demanda de cloro:

Como el cloro es un fuerte oxidante, reacciona con muchos materiales y no
puedesobrar suficiente qumico para matar las bacterias. Por lo tanto, es
necesario establecer la cantidad de cloro que reaccionar con otros materiales, a
fin de establecer la cantidad total que se requiere. La cantidad usada por el sistema
se conoce como demanda de cloro. La cantidad de cloro que debe inyectarse
para matar las bacterias es:

Cloro requerido para control bacteriano = Cloro total inyectado Demanda de cloro (5-106)

Algunos de los materiales con los que reaccionar el cloro son:

o Ion ferroso: 1 ppm de cloro oxidar 1.6 ppm de ion ferroso a ion frrico.
o Sulfuro de hidrgeno: formar iones sulfuro e hidrgeno
o Compuestos orgnicos: algunos inhibidores de corrosin y qumicos
controladores de escala.
o Ion sulfito: de los secuestrantes de oxgeno.

Esto significa que el uso de cloro est limitado a sistemas que no tengan H
2
S o
iones ferroso.

El cloro no se emplea normalmente en sistemas que tienenlneas de inyeccin de
agua muy largas y no protegidas internamente. El cloro atacar al acero y ser
necesario inyectar cantidades mayores con el propsito de obtener un residual de
0.2-0.5 ppm en los extremos.
42
Compatibilidad:

La compatibilidad con otros qumicos que se emplean en el sistema debe revisarse.
En el caso de secuestrantes de oxgeno, dos de los siguientes procedimientos
pueden seguirse:

i) El cloro puede inyectarse aguas abajo (downstream) una distancia prudente,
para permitir que el secuestrante reaccione primero, antes de alcanzar el punto
de inyeccin del cloro.
ii) S el cloro va a ser inyectado aguas arriba (upstream) de la inyeccin de
secuestrante, una dosis adicional de este se requerir para compensar la prdida
por reaccin con el cloro. Se debe revisar si se requiere adicionar ms cloro u
otro biocida, despus de la inyeccin del secuestrante para mantener el control
bacteriano.
43
Tipos de cloro:

El cloro est disponible en varias formas. Sin embargo, desde el punto de vista del
control bacteriano, realmente no importa cual es elegido o usado, porque formar
las mismas cantidades relativas de Cl
2
, HOCl y OCl
-
, una vez adicionado al agua,
dependiendo del pH.

o Cloro lquido: es suministrado en recipientes de acero a alta presin, en
tamaos desde 105 lb a 1 tonelada. Cuando se despresuriza para su inyeccin,
este se vaporiza y se adiciona al agua con un clorinador, como se indica en
la figura 5-73.

El agua fluye a travs del eyector a alta velocidad creando un vaco que abre un
resorte opuesto al diafragma de la vlvula check en el cuerpo del eyector.
Cuando la vlvula check se abre, el vaco es transmitido al regulador, causando
que el diafragma abra la vlvula de entrada de cloro. El gas cloro pasa a travs
del medidor de flujo y de la vlvula de control del eyector, donde se mezcla y
se disuelve en el agua.

Precaucin: el cloro es muy venenoso y debe manejarse con mucho cuidado
44
Figura 5-73
Equipo para suministrar cloro gaseoso
45
o Generadores de Hipoclorito: el hipoclorito (OCl
-
) puede producirse en
soluciones acuosas salinas por electrolisis. La solucin salina se pasa a travs
de una celda electroltica especial llamada generador de hipoclorito, que
contiene dos electrodos: nodo y ctodo. Una corriente elctrica impresa de DC
fluye del nodo al ctodo, a travs de la solucin salina. Los iones hidrgeno se
convierten en cloro gas en el ctodo y los iones cloruro se convierten el iones
OCl
-
en el nodo como se indica en la figura 5-74.
La mezcla del gas H
2
y de la solucin de OCl
-
que sale del generador, se pasa
por un separador gas-agua para eliminar el hidrgeno gas de la solucin, antes
de que se adicione al agua del sistema. El hidrgeno es venteado por razones de
seguridad, porque tiene un lmite de inflamabilidad bajo con el aire (4.1 %).

Los generadores de hipoclorito son comnmente empleados en los sistemas de
inyeccin de agua de mar por la necesidad de eliminar el transporte y
almacenamiento del cloro lquido.
46
Figura 5-74
Generador de Hipoclorito
47
o Soluciones de hipoclorito: existen soluciones de hipoclorito de sodio o calcio
lquidas que estn disponibles y se puede inyectar con una bomba de qumico
convencional. La concentracin de hipoclorito de sodio es del 6-12 %,
dependiendo del proveedor. Estas soluciones se usan raramente porque
tienen un costo relativo alto con relacin a otras fuentes de suministro de
cloro.

o Hipoclorito de calcio slido Ca(OCl)
2
: se puede encontrar en el mercado
hipoclorito de calcio slido. El principal problema es la preparacin de la
solucin acuosa a inyectar, necesitndose de un agitador especial por la
corrosividad, y evitar el desperdicio del slido. La ventaja es que por cada in
calcio se dispondr de dos iones hipoclorito.
48
a) Seleccin de qumicos

La seleccin de los qumicos para el control bacteriano es similar a la seleccin de los
inhibidores de corrosin o escala. Primeramente se debe conocer que tipo de bacteria o
bacterias estn en el sistema, luego realizar una prueba de eliminacin in situ con
diferentes bactericidas, y finalmente su eleccin en base al mejor rendimiento tcnico y
econmico.

Algunos aspectos se considerarn en la seleccin:

Controlar o eliminar ?:

La decisin de usar un bactericida o un bacteriostato es determinada por el tipo de
bacteria en el sistema. Las SRB requieren un bactericida porque se requiere eliminar
o matar a todas las bacterias por los problemas graves que producen. Como un
nmero razonable de bacterias formadoras de limo se puede tolerar, sin tener
problemas serios, un bacteriostato se usa a menudo para su control.
49
Resistencia a los qumicos controladores de bacterias:

Con frecuencia se escucha que las bacterias han desarrollado resistencia a los
qumicos controladores de bacterias. Al parecer las bacterias pueden realizar una
mutacin gentica que las hace evolucionar y se dificulta su exterminacin; aunque
en la prctica, se piensa que esto no ocurre.

La aparente creacin de una fuerza de resistencia se evidencia por el hecho de que
un biocida gradualmente disminuye su efectividad. La explicacin ms comn se
refiere a una adaptacin selectiva de las bacterias a los biocidas. Esto significa que
ciertos miembros de una poblacin bacterial son fcilmente destruidas por un biocida
dado, mientras otros tipos de bacterias no. Despus de un cierto tiempo, las bacterias
ms resistentes al biocida llegan a ser gradualmente dominantes en la comunidad, y la
efectividad del tratamiento qumico disminuye.

Este fenmeno no ocurre siempre. Sin embargo, porque esto es posible, es una buena
idea seleccionar como mnimo dos biocidas. De esta manera, si el primer qumico que
inicia el tratamiento pierde eficiencia, el tratamiento alternado con el segundo, que
ser de una composicin diferente, resolver el problema.

Las bacterias no desarrollan una inmunidad al cloro. Sin embargo, a las
concentraciones normales de tratamiento, el cloro tiene limitada capacidad de
penetracin en los depsitos y masas orgnicas, y no es muy efectivo en sistemas
sucios. La efectividad puede mejorarse con la adicin de un surfactante apropiado.
50
Compatibilidad con el agua y otros qumicos:

Se debe asegurar que el qumico sea compatible con el agua Algunos precipitarn o
formarn sales en salmueras de alta concentracin. Tambin se revisar la
compatibilidad con el secuestrante de oxgeno y los inhibidores de corrosin y escala.

Tiempo de las pruebas:

A cualquier bactericida le toma un cierto tiempo eliminar las bacterias. Por lo tanto,
se debe conocer el tiempo que necesita un qumico en particular, para realizar este
trabajo a varias concentraciones. Un mtodo especfico para las SRB se describe en la
norma NACE Estndar TM0194.

Es necesario conocer el tiempo para eliminar las bacterias, especialmente cuando se
usa un tratamiento batch o peridico.

51
Mtodos de tratamiento:

Cuando se aplique el bactericida en forma continua, se requiere concentraciones altas
al inicio para mantener las bacterias bajo control, y luego se estabilizan las
concentraciones a valores menores.

En los tratamientos batch se requiere una alta concentracin peridica para eliminar
todas las bacterias. La concentracin, tamao del batch y el tiempo de contacto se
puede obtener de las pruebas de dilucin seriada, para luego ajustar los parmetros
con los datos de campo obtenidos con el transcurso del tiempo.

En la mayora de casos, los biocidas orgnicos se inyectan en forma peridica o batch
porque tienen un mejor desempeo tcnico y econmico que los tratamientos
continuos. Tambin la adaptacin selectiva es ms probable en los tratamientos
continuos porque las bacterias estn expuestas a concentraciones bajas de los
qumicos.

Debido a que las bacterias no desarrollan inmunidad con el cloro, este se inyecta en
forma continua. La concentracin debe ser los ms baja posible para minimizar la
corrosin y el costo del tratamiento.
52
f) Aplicacin de los qumicos:

Limpieza del sistema:

La primera regla para tener xito con los bactericidas es mantener el sistema
limpio. Un completo trabajo de limpieza es necesario y solo tiene un propsito:
remover todos los obstculos entre el bactericida y la bacteria. Si el bactericida no
entra en contacto con las bacterias, no las mata . Se recomienda:

o Limpiar todas las lneas de conduccin de agua y tubing como se recomend en la
seccin de Control de Incrustaciones; puede usarse solventes, cidos diluidos
y raspadores si es necesario.
o Abra todos los tanques, recipientes y filtros, y manualmente limpie todos los lodos
y escala acumuladas. Debe preparar un sitio apropiado para la disposicin
final o encapsulamiento, con el propsito de no contaminar las reas de
depsito. Este trabajo adicional tiene un costo que debe cuantificarse.
o Reverse el flujo en los pozos inyectores, si la cara de la formacin est taponada
con depsitos de bacterias o limo. Un fuerte agente oxidante como hipoclorito de
sodio es normalmente usado para combatirlos. Para tener mayor efectividad, luego
se adiciona una solucin de cido clorhdrico.
53
- La solucin de hipoclorito de sodio mata a las bacterias y disuelve
completamente la masa biolgica de polisacridos. El cido disuelve cualquier
material inorgnico soluble en l y neutraliza la solucin alcalina del hipoclorito;
adems, previene la precipitacin de compuestos del agua de formacin, que son
menos solubles a pH bsicos, como el carbonato de calcio.

- Las soluciones de hipoclorito de sodio son bastante corrosivas y deben inhibirse
primero antes de su uso. En pruebas desarrolladas por Dowell, expuso un muestra
de tubing N-80 a una solucin no inhibida del 5 % de hipoclorito de sodio a
176 F y presin atmosfrica, resultando una velocidad de corrosin de 664 mpy.
Empleando despus un inhibidor apropiado, se redujo la corrosin a valores
aceptables.
- Al tener los bactericidas ciertas propiedades de detergencia, en los sistemas que
no estn muy sucios, la aplicacin del qumico ser suficiente. Sin embargo,
rara vez se tienen este tipo de sistemas, por lo tanto, se preferir la limpieza
mecnica y qumica.

- Cuando se utilice un bactericida en una lnea de inyeccin a un pozo, la
detergencia del qumico aflojar los slidos de la superficie interna de la tubera, y
sern transportados hacia la formacin, esto puede ocasionar taponamiento. Se
recomienda instalar filtros de cartuchos en el cabezal del pozo.
Limpieza del sistema
54
Eliminar reas estancadas y de baja velocidad:

Examinar la posibilidad de eliminar las reas donde se produzca estancamiento del
agua o la velocidad de las mismas sea menor a 3 ft/s. Las bacterias se desarrollan
ms rpido en sitios de baja movilidad o estancados, modificaciones al sistema como
reducir el dimetro interno de las tuberas, ayudarn a controlar mejor el crecimiento
bacteriano.

Esterilizar el sistema:

Una vez que el sistema ha sido limpiado, este debera esterilizarse. Esto significa que
las bacterias deben aniquilarse totalmente, empleando una fuerte batch de biocida con
suficiente tiempo de residencia. No se debe olvidar de realizar el tratamiento qumico
a las lneas, tanques, filtro, pozos inyectores; y, la fuente de agua, que pueden ser
pozos productores.
55
Instituir el tratamiento:

En este punto el tratamiento es normal, y la aplicacin de los bactericidas puede
ser tipo batch o continuo. Los qumicos deberan adicionarse tan cerca como sea
posible de la fuente de agua, y en un rea donde exista una buena mezcla por
agitacin.

Los sitios comunes de aplicacin de los bactericidas son:

o Lneas de toma de agua superficiales
o En la parte anular de los pozos surtidores de agua.
o En el manifold de una estacin de produccin
o Despus de la bomba de suministro de agua
56
a) Evaluacin de los programas de tratamiento qumico:

Para conocer si los bactericidas seleccionados estn actuando o no en el sistema, se debe
monitorear permanentemente. Un buen programa de monitoreo incluir algunos de los
siguientes procedimientos, llevados a cabo en forma peridica:

1) Inspeccionar los puntos de inyeccin de qumicos para asegurarse que los productos
que se est aplicando sean los seleccionados y estn en la dosis recomendada.
2) Estimar la poblacin de las familias de bacterias planctnicas en las muestras de
agua, empleando la dilucin serial u otros mtodos de cultivos.
3) Estimar la poblacin total de planctnicas en el agua usando los mtodos ATP o
Fluorescencia Microscpica.
4) Estimar la poblacin bacteriana sessile usando el mecanismo de recoleccin de
Robbins, mtodo ATP o la Fluorescencia Microscpica.
5) Medir las concentraciones de H
2
S.
6) Examinar visualmente el agua y los slidos suspendidos.
7) Inspeccionar internamente los depsitos internos y la corrosin.

Debe tenerse en cuenta que es muy factible controlar a la poblacin de bacterias
planctnicas, pero es extremadamente difcil acabar con las bacterias sessile, y estas son
las causantes de los mayores problemas en el sistema. Cuando esto sucede, se debe a la
presencia de escala, productos de corrosin o depsitos que protegen a las
bacterias de la accin del bactericida, inhabilitando la penetracin del qumico en
la biomasa.
57
h) Radiacin ultravioleta (UV):

Es muy conocido que la luz ultravioleta eliminar las bacterias. Esta interrumpe el
crecimiento al producir alteraciones en las clulas que impide que se multipliquen. Sin
embargo, unidades ultravioletas comerciales, capaces de tratar grandes volmenes de
agua, estuvieron disponibles desde la mitad de la dcada de los ochenta.

Cuando el agua contiene bacterias que fluyen a travs de una unidad con luz ultravioleta,
la probabilidad de eliminar una bacteria dada, depende del tiempo de exposicin y
de la intensidad de la luz que alcance la bacteria. La intensidad que alcance a una
bacteria depende de:

i) La salida de la lmpara, medida en miliwats/cm
2
.
ii) La distancia entre la fuente de luz UV y la bacteria.
iii) La naturaleza y cantidad de materia suspendida en el agua. Partculas suspendidas
dispersarn una parte de los rayos UV, por lo tanto reducen la cantidad que penetrar
en el agua.
iv) Cualquier material que pueda absorber la luz UV disminuir la intensidad. Pelculas
de slidos pueden acumularse en las ventanas de cuarzo, reduciendo la intensidad de
la luz UV. Las ventanas de cuarzo son empleadas porque son transparentes a la
longitud de onda de los rayos UV.
58
- Una curva tpica de respuesta a la dosis aplicada de los rayos UV se indica en la
figura 5-75. La dosis est expresada en miliwats-seg/cm
2
, que es el producto de
la intensidad de salida multiplicada por el tiempo de exposicin. La eliminacin
relativa se expresa como la fraccin de sobrevivencia, que es el nmero de clulas
que han sobrevivido dividida para el nmero original de clulas.

- Los resultados en un campo determinado fueron de +99.9% de bacterias
SRB eliminadas. Adems, se tuvo un costo menor con la luz UV, en relacin
a un tratamiento qumico con biocida.

- La radiacin UV se utiliza para prevenir la entrada de bacterias planctnicas a un
sistema. Cualquier bacteria que escape a la eliminacin en la unidad UV, se
multiplicar en el sistema, es decir, no se tiene un efecto residual de la radiacin.
Por lo tanto, es muy probable que se requiera de un tratamiento qumico posterior
en los sistemas que han utilizado la radiacin UV.

- Debe recordarse que el uso de la luz UV est limitado a sistemas limpios, con
bajo contenido de slidos suspendidos y poca cantidad de slidos disueltos o
petrleo suspendido, debido a la habilidad de estos materiales de reducir la
intensidad de la luz a travs del agua.
Radiacin ultravioleta
59
0,001
0,01
0,1
1
10
100
0 5 10 15 20 25 30 35
Dsis UV (miliwat-seg/cm2)
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

s
o
b
r
e
v
i
v
e
n
c
i
a

(
N
s
/
N
o

*

1
0
0
)
Figura 5-75