Investigacin y Saberes 2012

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Investigacin y Saberes, Vol. I No. 2 (2012): 37-43
Artculo cientfico
PRODUCTIVIDAD DE LPIDOS Y COMPOSICIN DE CIDOS GRASOS DE CINCO ESPECIES DE
MICROALGAS
Yatal Montero-Snchez
1
, Araz Gallo
1
, Liliana M. Gmez
2
, Inaudis lvarez
2
, Leonor C. Sabina
1
, Yanet
Tmbara
3
, Alberto lvarez
3
, Marln C. Alfonso
1
y Luis R. Ramrez
1

1
Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar. (ICIDCA) Va Blanca y Carr. Central No
804 CP 11000 C. Habana. Cuba.
2
Centro Nacional de Electromagnetismo Aplicado. (CNEA) Ave. Las Amricas s/n CP
90900 Santiago de Cuba.
3
Centro de Ingeniera Gentica y Biotecnologa. (CIGB) Ave 31 e/ 158 y 190 AP 6162.
Cubanacn. Playa. Cuba. yatali.montero@icinaz.minaz.cu, yanet.tambara@cigb.edu.cu
Enviado (11.04.2012) Aceptado (30.08.2012)
RESUMEN
Las aplicaciones productivas y comerciales de las microalgas son tan diversas como numerosas son las especies
que integran este grupo de organismos. Recientemente el empleo de las microalgas como fuente renovable de
energa ha sido objeto de inters de la comunidad cientfica internacional. Las microalgas como fuente renovable de
aceite para la produccin de biodiesel ofrecen una alternativa para solucionar la futura crisis energtica que
acontecer como resultado del agotamiento de los combustibles fsiles. El primer paso en el desarrollo de la
tecnologa para la produccin de biodiesel de microalgas es sin dudas la seleccin de la especie adecuada. En el
presente trabajo se estudiaron cinco cepas de microalgas a las que se les determin las productividades de biomasa
y lpidos totales, as como el perfil de cidos grasos de sus aceites. Se seleccion como mejor candidata la especie
Chlorella vulgaris por presentar las ms altas productividades de biomasa (0.150 g L
-1
da
-1
) y lpidos (42.49 mg L
-1
da
-1
). El perfil lipdico de su aceite, compuesto en su mayora por cidos grasos de 16 y 18 tomos de carbono, es
adecuado para el proceso de produccin de biodiesel.
Palabras clave: microalgas, cidos grasos, biodiesel, vinazas.
ABSTRACT
Production and commercial applications of microalgae are as diverse as the numerous species which exits in this
group of organisms. Recently the use of microalgae as a renewable source of energy has been of interest to the
international scientific community. Microalgae as a renewable source of oil for biodiesel production offer an
alternative for solving future energy crisis will happen as a result of fossil fuel depletion. The first step in the
development of technology for the production of biodiesel from microalgae is undoubtedly the proper species
selection. In this paper we studied five strains of microalgae which were determined productivities of biomass and
total lipid and fatty acid profile of the oils. Was selected as the best candidate for the species Chlorella vulgaris has
higher biomass productivity (0.150 g L
-1
day
-1
) and lipid (42.49 mg L
-1
day
-1
). The lipid profile of the oil, consisting
mainly of fatty acids of 16 and 18 carbon atoms is suitable for biodiesel production process.
Keywords: algae, fatty acids, biodiesel, vinasse.
INTRODUCCIN
Es ampliamente reconocida en nuestros das la imposibilidad de mantener la dependencia mundial a los
combustibles fsiles como proveedores de energa; no solo debido a la rpida disminucin de sus
reservas mundiales sino tambin por el nocivo efecto ambiental que estos producen.
Los biocombustibles se presentan como una tentadora opcin a esta crisis energtica-medioambiental
puesto que son obtenidos a partir de fuentes biolgicas que tienen como ventajas que son renovables,
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biodegradables, producen menos emisiones y no contribuyen al incremento del dixido de carbono en la
atmsfera
1
.
La obtencin de biodiesel a partir de aceites de origen vegetal posee algunos problemas asociados a la
necesidad de tierras, agua y gran cantidad de fuerza de trabajo para su siembra, cultivo y cosecha.
Aunque se han encontrado especies de plantas oleaginosas capaces de desarrollarse en tierras no aptas
para la produccin de alimentos, siguen latentes los dems problemas mencionados.
El cultivo de microalgas surge entonces como una alternativa ya que adems de ser una fuente
renovable de aceites, se pueden desarrollar en aguas residuales con el doble beneficio de la
biorremediacin
2-5.
La industria alcoholera por ejemplo, genera como desecho una gran cantidad de
vinazas, a razn de 12 a 18 litros por litro de alcohol destilado, que a menudo provoca serios problemas
medioambientales por ser un residual muy agresivo. Aun as contiene una gran cantidad de nutrientes
que se pueden aprovechar para el cultivo de microalgas disminuyendo as su carga contaminante.
Entre las ventajas de las microalgas se encuentra que pueden crecer fotosintticamente por lo que la
adicin de una fuente de carbono al medio no es requerida para su crecimiento, convirtindose adems
en grandes sumideros de CO2
6-8
. El contenido de lpidos y cidos grasos de las microalgas vara de
acuerdo con las condiciones de cultivo; en algunos casos, el contenido de lpidos puede incrementarse
por condiciones de no suministro de nitrgeno u otro factor de estrs
9, 10
.
La obtencin de cidos grasos a partir de microalgas tiene como ventaja principal su gran productividad
por hectrea. Con respecto a los cultivos agrcolas, la productividad de las microalgas es 30 veces
superior al maz o la soja
22
. En cultivos cuyo contenido de cidos grasos sea solo de un 30% de su peso
seco, su productividad con respecto al cultivo de la palma africana (la reina de las oleaginosas) llega a ser
unas 10 veces superior.
Una de las dificultades asociadas a la produccin de cidos grasos a partir del cultivo de microalgas es la
localizacin e identificacin de las especies adecuadas. Se conocen ms de 40.000 especies de microalgas,
de las cuales slo se han explorado los usos potenciales de apenas unas decenas de las cuales no ms de
10 son explotadas comercialmente a gran escala. Los trabajos de pesquisaje de nuevas especies son
lentos, complejos y costosos, especialmente para la localizacin de nuevas especies ricas en cidos grasos.
Alrededor de 30 cepas de microalgas han sido estudiadas para elegir la mejor productora de lpidos, y
el gnero Nannochloropsis result ser uno de los mejores candidatos
11
. Varios investigadores en cambio,
se han centrado en Chlorella sp.
12, 13
, que parece ser una buena opcin para la produccin de biodiesel
puesto que aunque existen otras especies tan productivas como esta, posee una gran capacidad para
crecer a partir de un gran nmero de sustratos as como una gran adaptabilidad a dismiles condiciones
ambientales, otros factores a tener muy en cuenta a la hora de seleccionar una cepa como candidata para
la produccin de biodiesel. En el presente trabajo se estudiaron seis cepas de microalgas con el fin de
determinar la mejor candidata para su cultivo como fuente de lpidos para la produccin de biodiesel. Se
evalo adems la capacidad de esta cepa para crecer a partir de vinazas de destilera como una estrategia
futura para disminuir los costos de produccin de la biomasa e implementar un sistema de tratamiento a
este residual tan agresivo.
METODOLOGA
Cepas de microalgas y condiciones de cultivo: Se estudiaron cinco cepas de microalgas del Banco de
Cepas del Laboratorio de Ecotoxicologa del Centro Nacional de Electromagnetismo Aplicado. Las cepas
estudiadas fueron Dunaliella salina, Scenedesmus acuminatus, Haematococcus pluvialis y Chlorella
vulgaris, aisladas de ecosistemas cubanos y cultivadas en erlenmeyers con 150 mL de medio Bristol
14
y
una cepa de Nannochloris sp. Todos los cultivos se desarrollaron bajo iluminacin continua a 3 500 lux
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con lmparas luz blanca de 40 W y agitacin constante en zaranda. El crecimiento celular se determin
mediante cmara de recuento hematolgico Neubauer improved.
Separacin de la biomasa: Los cultivos fueron colectados a los 10 das, al final de la fase de crecimiento
exponencial. La biomasa fue separada por centrifugacin durante 20 min a 3 500 rpm y se determin el
peso de la biomasa obtenida con un 86 % de humedad.
Determinacin de lpidos totales: Se determin el contenido de lpidos totales
15
, sometiendo la muestra
a 85C durante dos horas en la primera etapa de extraccin con la mezcla cloroformo metanol.
Obtencin de los metil steres de los cidos grasos: A 150 mg de aceite se le adicionaron 5 mL de
disolucin de metxido de sodio en metanol al 10% y se coloc en un tubo hermticamente sellado a 85

C
en termostato seco durante dos horas con agitacin vigorosa ocasional. Se dej enfriar a temperatura
ambiente y se le adicion 5 mL de n-hexano y 5 mL de agua destilada y se agit durante un minuto. Se
dej reposar hasta la separacin de las dos fases. Se extrajo una alcuota de 4 mL de la fase orgnica
(superior) hacia otro tubo de ensayo y se desech el resto. Al segundo tubo de ensayo se le adicion 5.0
mL de n-hexano y 5 mL de hidrxido de sodio en metanol 1 N, se sell y se agit en zaranda durante un
minuto. Se dej reposar hasta la separacin de las fases y se extrajo una alcuota de 2 mL de la fase
orgnica (superior) hacia un vial y se sec en una centrifuga evaporadora al vaco para eliminar el
disolvente.
Cromatografa de gases: Los steres metlicos resuspendidos en 1 mL de n-hexano fueron analizados en
un cromatgrafo de gases Agilent Technologies 7 890 A equipado con detector de ionizacin de llama
(FID) una columna HP-5 30m x 0.32 mm, 0.25 mm de dimetro interno con un gradiente de temperatura
de 10C min.
-1
desde 135 hasta 255C y 270C por 3 min. Se emple hidrgeno como gas portador
manteniendo un flujo de 1 mL min.
-1
El volumen de inyeccin fue de 1 l en modo Split 100:1. La
temperatura del inyector y del detector fue de 250C.
RESULTADOS Y DISCUSIN
Determinacin de la productividad de biomasa y lpidos de las microalgas de estudio
Teniendo en cuenta las productividades reportadas en la literatura por diferentes grupos de
investigacin y su disponibilidad en el cepario del Laboratorio de Ecotoxicologa del CNEA se seleccion
un total de cinco cepas de microalgas, para determinar su contenido lipdico en nuestras condiciones de
cultivo y decidir cul (o cuales) es adecuada para ser empleada como fuente de lpidos para la produccin
de biodiesel. En la tabla I se relacionan las cinco cepas de microalgas seleccionadas para el presente
estudio as como su porcentaje de lpidos respecto a la biomasa y su productividad.
El porcentaje de lpidos en la biomasa de las cepas estudiadas oscil entre el 13 y el 51%, siendo el
mayor contenido lipdico el alcanzado por la microalga Nannochloris sp. y el ms bajo de H. pluvialis.
Atendiendo al criterio de clasificacin, que considera como microalgas oleaginosas a todas aquellas con la
capacidad de acumular lpidos por encima del 20% de su peso seco. Tres de las microalgas en estudio,
Nannochloris sp., Dunaliella salina y Chlorella vulgaris se presentan como posibles fuentes de lpidos para
la industria al presentar contenidos de lpidos en su estructura de 51, 29 y 28%, respectivamente, valores
que concuerdan con los referidos por Mata y colaboradores (2010)
16
.
Sin embargo, la presencia de un elevado contenido de lpidos en la biomasa microalgal no siempre es
garanta para el empleo de una especie como fuente de lpidos. Aquellas especies con mayor por ciento
lipdico, a menudo son tambin de crecimiento lento. Tal es el caso de Botryococcus braunii que aunque
capaz de almacenar entre 50 y 75% de lpidos en base a su peso seco, su productividad es de tan solo 5
mgL
-1
d
-1 16
.
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TABLA I. Contenido de aceite y productividad de las microalgas seleccionadas para el estudio.
Especie de microalga % de lpidos
Productividad de
lpidos (mgL
-1
d
-1
)
Productividad de
biomasa (gL
-1
d
-1
)
Scenedesmus acuminatus 15.3 2.40 0.020
Nannochloris sp. 51.0 1.46 0.003
Dunaliella salina 29.2 5.42 0.020
Chlorella vulgaris 27.8 42.49 0.150
Haematococcus pluvialis 13.4 11.96 0.090
De manera general la productividad y el contenido de lpidos se encuentran inversamente relacionados,
un hecho que se explica gracias al elevado costo metablico de la biosntesis de lpidos. En el presente
trabajo aquellas especies capaces de acumular la mayor cantidad de lpidos fueron tambin las que
presentaron menores productividades de biomasa, confirmando que elevados contenidos lipdicos y altas
productividades de biomasa (la cualidad ms deseada para la produccin de biodiesel a partir de
microorganismos) son mutuamente excluyentes. Por tanto el mejor productor de lpidos ser aquella
cepa que muestre la mejor combinacin de productividad de biomasa y contenido lipdico.
Teniendo en cuenta las consideraciones anteriores, la candidata de eleccin para trabajos futuros con
vistas a su explotacin como fuente de cidos grasos para la produccin de biodiesel, result ser la
microalga C. vulgaris. Esta especie adems de presentar un elevado contenido lipdico en su estructura
present la mayor productividad de biomasa (0.15 gL
-1
d
-1
) y por consiguiente la mayor productividad de
lpidos (42 mgL
-1
d
-1
) del total de cepas estudiadas. Por otra parte, el cultivo de C. vulgaris cuenta con la
ventaja adicional de ser fcilmente adaptable a diferentes condiciones de cultivo y sustrato
17-20
,
caractersticas deseables para cultivos a gran escala. Presenta, adems, un corto ciclo de crecimiento por
lo que el tiempo de cultivo es mucho menor disminuyendo as el riesgo de contaminacin con especies no
deseadas.
Determinacin de la composicin de cidos grasos de los lpidos de las microalgas de estudio
El contenido y perfil lipdicos de las microalgas son considerados como propios de la especie y no del
gnero, de manera tal que este parmetro vara notablemente entre las especies individuales de cada
grupo taxonmico
21
. La figura 1 muestra los perfiles de cidos grasos de las fracciones lipdicas de las
microalgas estudiadas. El porciento relativo de algunos cidos grasos saturados e insaturados se
relaciona en la tabla II.
No todos los lpidos microalgales son satisfactorios para la produccin de biodiesel. Sin embargo, los
apropiados para ello (cidos grasos, libres y unidos covalentemente al glicerol y sus derivados) son
producidos con frecuencia y constituyen la mayor fraccin de los lpidos totales, usualmente del 20% al
40%
22,23
. Para la obtencin de biodiesel de elevada calidad es necesario partir de cidos grasos de cadena
larga
24
. Las especies estudiadas presentaron cidos grasos de 12 a 19 tomos de carbono, dentro de los
cuales fueron mayoritarios aquellos con cadenas carbonadas de 16 y 18 carbonos por lo que estos
extractos lipdicos son adecuados como materia prima para la produccin de biodiesel.
Como se muestra en la tabla I, la fraccin lipdica con un mayor porcentaje de insaturacin le
corresponde a la microalga D. salina. Este resultado concuerda con lo observado por Garibay y
colaboradores quienes reportan el predominio de cidos grasos polinsaturados en microalgas de
ecosistemas salinos mientras en los dulceacucolas prevalecen los cidos grasos saturados y mono-
insaturados
25
. El incremento del nmero de insaturaciones de los cidos grasos de partida provoca una
mayor inestabilidad del biodiesel por su tendencia a la oxidacin
26
por lo que de acuerdo a nuestros
resultados, el aceite de D. salina no es recomendable para este tipo de producciones.
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Figura 1. Perfil de lpidos, por cromatografa gaseosa con detector de ionizacin de llama, de los steres metlicos
de cidos grasos de los aceites de las cepas estudiadas. (1) Scenedesmus acuminatus (2) Nannochloris sp. (3)
Dunaliella salina (4) Chlorella vulgaris y (5) Haematococcus pluvialis.
5
3
1
2
4
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TABLA II. Contenido de cidos grasos del aceite de las microalgas estudiadas.
cidos grasos
(% relativo)
Microalgas
S. acuminatus Nannochloris D. salina C. vulgaris H. pluvialis
C12:0 0.00 0.76 0.85 0.44 0.00
C14:0 0.00 2.45 0.38 0.27 0.00
C16:0 22.19 21.18 0.43 21.59 22.04
C18:0 0.37 0.00 0.00 0.52 14.02
C18:1 5.33 8.81 6.62 7.67 29.77
C18:2 56.89 0.00 0.00 21.94 23.40
C:19:0 0.69 2.77 0.94 0.17 0.45
saturados 23.25 27.15 2.59 22.98 36.51
insaturados 76.75 72.85 97.41 77.02 63.49

De las especies de microalgas estudiadas la mejor candidata para la produccin de biodiesel result ser
C. vulgaris por la elevada productividad de lpidos que esta microalgas es capaz de alcanzar as como por
la adecuada naturaleza de los mismos. Teniendo en cuenta que aunque algunas especies de lpidos se
expresan de manera constitutiva, su acumulacin a gran escala ocurre como respuesta a la existencia de
condiciones adversas para el crecimiento celular. Posteriores estudios del cultivo de esta microalga bajo
diferentes condiciones de estrs, deben hacerse para evaluar la posibilidad de potenciar la acumulacin
de lpidos en su biomasa.
CONCLUSIONES
De las cinco especies estudiadas, la microalga Chlorella vulgaris fue la mejor fuente de cidos grasos
para la produccin de biodiesel en correspondencia con su elevado contenido lipdico y la adecuada
calidad de sus cidos grasos, as como a su elevada productividad celular.
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