PRACTICA

CULTIVANDO MICROORGANISMOS

INTEGRANTES DE EQUIPO 1

Castrelln Salazar Salvador
Cedillo Ponce Dulce Marcela
De luna Garca Julieta
Hernndez Prez Diana Magaly
Palomino Huerta Anah
Saucedo Varela Felipe de Jess
Soto Olivas Jess Ismael



OBJETIVOS DE LA PRCTICA
Realizar la esterilizacin de los materiales que se utilizaran para preparar un medio de
cultivo.
Tener el conocimiento y aplicarlo para saber cmo se prepara un medio de cultivo (como
lo es el agar nutritivo).
Realizar cultivos de bacterias por los mtodos de estra, extensin en superficie y vaciado
en placa.
Tomar muestras de las manos y la boca de algn compaero para cultivar las bacterias que
tiene el.



















INTRODUCCIN
Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de
los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es
decir, se le aaden organismos) y a continuacin incubado en condiciones que favorezcan el
crecimiento microbiano. El crecimiento de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo axnico o
puro contiene un nico tipo de microorganismos.
Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben
estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.
Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales
inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento. Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de
otras.
El agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriolgicos. Se disuelve
completamente a 100C y se solidifica al enfriarse a 40C.
De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:
Lquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de
cultivo y no tienen agar en su formulacin.
Semislidos: Contienen 0.5% de agar en su formulacin. Se utilizan para estudiar la movilidad de
las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).
Slidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulacin. Estos medios inmovilizan a las clulas,
permitindoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al
microbilogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan ms de un tipo de colonia
no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar tambin se utilizan para la determinacin de
clulas viables (recuento en placas).
De acuerdo a su composicin, los medios de cultivo pueden clasificarse en:
Definidos: es aqul medio de cultivo del cual se conoce su composicin exacta. Son muy
utilizados en estudios fisiolgicos. Los medios mnimos son medios definidos que nicamente le
proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse
ptimamente.
Complejos: es aqul del cual no se conoce la composicin exacta del medio. A menudo, los
medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras
sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composicin qumica exacta. Estos
medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos
nutricionales muy complejos.
De acuerdo a su funcin, los medios de cultivo se clasifican como:
Medios selectivos: Son aqullos que poseen uno o ms componentes aadidos, los cuales
inhibirn o prevendrn el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promovern el
crecimiento de las especies deseadas. Uno puede ajustar las condiciones fsicas de un medio de
cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo para los organismos de inters.
Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con
base en alguna caracterstica observable en su patrn de crecimiento en el medio, ya sea por
produccin de algn pigmento o por cambios de color en el medio debido a indicadores de pH, o
por halos de degradacin de algn componente en el medio de cultivo.
Medios de enriquecimiento: Contienen algn componente que permite el crecimiento de cierto
tipo especfico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras.
Medios enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran nmero
de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biolgicos poco usuales como
sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc.










MATERIALES DE LA PRCTICA

MATERIALES
Asa acodada
Asa bacteriolgica
Cinta testigo
Auto clave
Incubadora
Termmetro
Papel canela
Tape
Matraz Erlenmeyer
Tubos de ensaye con tapa rosca
Mechero Fisher
Cajas Petri
Pipeta volumtrica










REACTIVOS
Alcohol
Agar nutritivo
Agua destilada
Agua de horchata

ESTERILIZACIN DEL MATERIAL A USAR
Antes de comenzar a trabajar con la esterilizacin del material tenemos que limpiar nuestra mesa
de trabajo con alcohol o cloro para asegurarnos de que no haya ninguna bacteria presente que
pueda invadir nuestros instrumentos, medio de cultivo o algo con lo que estemos trabajando.

1.- Lavar con agua y con jabn todo el material que vamos a utilizar (Asa acodada o de Digralsky,
Pipetas 1/10ml, Cajas Petri, Matraz Erlenmeyer de 500ml)
2.- Poner a secar el material que lavamos o secarlo con alguna toallita.
3.- Cortar el papel estraza en trazos que vallamos a usar.
4.- Apilar las cajas Petri de 10 en 10 y colocarlas en un papel estraza. (20 cajas por empaque)






5.- Envolver de manera indicada y que no quede ningn espacio por el que pueda circular aire,
sellar con cinta, y colocar un trozo de cinta testigo para la esterilizacin, etiquetar.




6.- Colocar un poco de algodn en el extremo de la pipeta con el que pipeteamos.
7.- Con una tira de papel estraza envolver la pipeta sin dejar libre un espacio por el que pueda
circular aire, sellar con masking tape, colocar un poco de cinta testigo.












8.- Con un pedazo de papel estraza envolver el asa Acodada o de Digralsky, sellar con Masking
tape, y colocar un poco de cinta testigo para la esterilizacin.
9.- Colocar nuestros instrumentos que preparamos para esterilizacin en el Horno y encender a
una temperatura mxima.

10.- Colocar un termmetro de ms de 200C y esperar a que la temperatura llegue a los 180C.

11.- Cuando la temperatura de nuestro Horno sea de 180C esperar 2 HORAS, abrir un poco el
Horno y checar si ya se torn de otro color.
12.- Cuando la cinta testigo se haya tornado de un color distinto al que tena, nuestra esterilizacin
de los instrumentos est completa.
13.- Para el Matraz Erlenmeyer vamos a hacer un tapn con gasas y algodn que ajuste a la boca
del Matraz pero sin quedar apretado. (La gasa envuelve al algodn).
14.- Colocarle el tapn al Matraz previamente seco, etiquetar.







15.- Con papel estraza crear una especie de gorrito que cubra la boca del matraz y el tapn.






PREPARACIN DEL AGAR.
1.- Realizar clculos para ver cunto Agar necesitamos por tanta agua.
2.- Pesar en la Balanza Digital la cantidad de Agar que vamos a necesitar (5 gr en 100ml de agua
para semislido y 15 gr para solido).

3.- Hacemos un montaje de Tripie con anillo de hierro y tela de alambre con asbesto.
3.- Colocar un poco de agua en el Matraz y vaciarle el Agar, Aforamos a la cantidad que deseamos
obtener y movemos el matraz en crculos.








4.- Colocar el Matraz en la tela de asbesto y encender el Mechero Fisher, poner a calentar el
Matraz, cuidndolo, estar dando agitaciones de manera manual con guantes de asbesto para
evitar quemaduras.

5.- Cuando el Agar comience a Hervir esperar un minuto, notaremos que nuestra solucin es ms
trasparente. Taparemos nuestro Matraz con el tapn previamente elaborado y colocaremos el
sombrerito de papel estraza sobre del Matraz.
6.- Nuestro mtodo de cultivo est preparado.





ESTERILIZACIN DEL AGAR
1.- Realizar un montaje para colocar el Autoclave con 4 Mecheros Fisher calentndola.


2.- Colocar una gradilla de hierro dentro del autoclave para generar ms altura y que no pegue tan
directo el calor, poner la parrilla que tiene la autoclave y colocar agua hasta un nivel que
sobrepase como 1 cm la parrilla,
3.- Acomodar los Matraces dentro del Autoclave de modo que no queden amontonados, sellar
bien el Autoclave con su tapa. (Poner un poco de cinta testigo a los Matraces)

4.- Esperar a que el Autoclave llegue a 15lb/pulg2 (121C), cuando este en esa temperatura,
apagamos 3 Matraces y los retiramos, dejamos uno y lo colocamos en medio del autoclave para
que su calor sea uniforme.

5.- Cuando este un solo mechero tenemos que mantener la temperatura de 121C durante 15 min.
(Retirando y colocando de nuevo el mechero).

5.- Una Vez pasados los 15 min, retirar por completo el mechero, colocar un trapo hmedo en la
tapa del Autoclave, con unos guantes de Asbesto puestos vamos a abrir un poco la vlvula de
vapor de modo que la presin dentro del Autoclave vaya disminuyendo hasta alcanzar el 0, bajar
el Autoclave del montaje realizado con mucho cuidado.


6.- Una vez alcanzado el 0 esperar un poco y abrir con mucho cuidado el Autoclave procurando
alejar la cara porque el vapor que emite es demasiado caliente.
7.- Sacar los Matraces del Autoclave con mucho cuidado, checar la cinta testigo para ver si se llev
a cabo bien la esterilizacin.








8.- Enfriar las paredes el Matraz sin que le caiga agua a nuestro medio de cultivo hasta alcanzar
una temperatura de aproximadamente 45C.

PREPARACIN DE LAS CAJAS PETRI CON EL MEDIO DE
CULTIVO
1.- Encender el Mechero de Fisher, abrir nuestras Cajas Petri cerca del Mechero perforando por la
mitad y abrindolas de ese modo, sacarlas y colocarlas cerca del Mechero junto con nuestro
medio de cultivo.

2.- Agarrar una Caja Petri, retirar el tapn del Matraz donde se encuentra el medio de cultivo y
vaciar un poco en la Caja Petri (A la mitad de la caja aproximadamente), cerrar la Caja Petri y
colocarla por en algn lugar de la mesa sin hacer movimientos bruscos.

3.- Una vez que tengamos nuestras 20 Cajas Petri llenas de Agar hasta la mitad, vamos a esperar a
que se solidifique, el Agar tiene una propiedad que hace que se pueda solidificar a 40C por esa
razn el vaciado debe de realizarse de manera rpida.

4.- Una vez solidificado el Agar vamos a almacenar nuestras Cajas Petri en el refrigerador para
conservar nuestro medio de cultivo para cuando lo vallamos a utilizar, de preferencia usarlo al da
siguiente as aun estar en muy buen estado.


SIEMBRA EN CAJAS PETRI

MTODO DE ESTRA
1. Limpiar y esterilizar el rea de trabajo con alcohol o cloro.
2. Prender el mechero Fischer para que el ambiente y el rea de trabajo se vaya esterilizando
y cerrar puertas, ventanas y todo tipo de corrientes de aire.
3. Tener todos los materiales que usaremos ya listos.
4. Etiquetar las cajas Petri con el nombre de quien lo cultivo, fecha y si es posible el nombre
de la bacteria que se cultivar.
5. Primeramente elegimos la caja Petri que usaremos ya con el respectivo medio de cultivo y
su etiqueta.
6. Flamear el asa bacteriolgica hasta que se ponga al rojo vivo.
7. Dejar que el asa se enfri.
8. Tomamos el tubo de ensaye donde est la muestra y le quitamos la tapa rosca (con el
dedo meique la destapamos y mantenemos la tapa rosca hasta que volvamos a taparlo)
sin ponerla en la mesa.
9. Flamear la boca del tubo de ensaye.
10. Introducir el asa bacteriolgica al tubo de ensaye cuidando de que no toque las paredes
de ste.
11. Tomar y arrastrar solo una poco de la muestra.
12. Flamear nuevamente la boca del tubo de ensaye y taparlo.
13. Tomamos las cajas Petri con la mano izquierda y la abrimos solo con una mano.
14. Hacemos la primer estra (stas primeras estras deben de ser muy juntas, y aprox.
Haremos unas 4). Cerramos la caja.
15. Esterilizamos el asa y dejamos que se enfre.
16. Le damos vuelta un poco a la caja Petri y la abrimos.
17. Hacemos las segundas estras, arrastrando bacterias de las primeras (stas son un poco
ms separadas que las primeras). Cerramos la caja.
18. Esterilizamos el asa y dejamos que se enfre.
19. Rotamos un poco la caja Petri y la abrimos.
20. Hacemos las terceras estras, arrastrando bacterias de las segundas (son ms separadas
que las segundas). Cerramos la caja.
21. Esterilizamos el asa y la dejamos enfriar.
22. Rotamos nuevamente la caja Petri y la abrimos.
23. Hacemos la cuarta y ltima estra, arrastrando bacterias de las terceras (son mucho ms
separadas y al final de stas terminaran en un churrito en medio de la caja).Cerramos la
caja.
24. Esterilizamos muy bien el asa bacteriolgica.
25. Y ponemos la caja boca abajo (esto es para que cuando las bacterias hagan sus
necesidades no estn sobre ellas y les impida su crecimiento y desarrollo).
26. Colocamos las cajas en la incubadora y las dejamos 24 horas a 37C.
27. Esterilizamos de nuevo el rea de trabajo con alcohol o cloro.
28. Por ltimo nos lavamos muy bien las manos.
NOTA: Todo este procedimiento debe hacerse cerca del mechero y con el cuidado que se
requiere.






BOCA DE SALVADOR
ste cultivo fue hecho con los microorganismos que se encuentran en la boca del compaero
Salvador.
MATERIALES REQUERIDOS:
Hisopos estriles.
Caja Petri con agar.
PROCEDIMIENTO:
1. Se esteriliza el rea de trabajo con un trapo conteniendo cloro o alcohol.
2. Encender el mechero Fisher para esterilizar el rea.
3. Se rompe el paquete de los hisopos estriles y se acerca la caja Petri al mechero.


4. Coger un hisopo y pasar por toda la boca del compaero, ya sea, mejillas, encas, lengua,
dientes, y paladar.



5. Abrir la caja Petri con cuidado.
6. Cerca del mechero realizar el cultivo, pasando el hisopo por toda la caja Petri.

7. Cerrar la caja Petri.
8. Poner una etiqueta del cultivo.
9. Rotular la caja Petri para el desarrollo y crecimiento.
10. Tirar el hisopo.
11. Llevar el cultivo a la incubadora.






MANOS DE SALVADOR
ste cultivo se elabor con las manos sucias del compaero Salvador despus de ir al sanitario.

1. Se esteriliza el rea de trabajo con un trapo con alcohol o cloro.
2. El mechero Fisher tiene que estar encendido.
3. Cerca del mechero se abre la caja Petri.
4. Con la mano del compaero se frotara suavemente el agar, por toda la caja Petri.
5. Cerrar la caja.
6. Rotular la misma.
7. Colocar una etiqueta del cultivo con cinta masking tape.
8. Llevar la caja hacia la incubadora para el desarrollo.


















AGUA DE HORCHATA
1. -Esterilizar nuestra mesa con alcohol o con cloro.
2. Tomar la caja Petri y ponerla cerca dl mechero para evitar accidentes.
3. Tomamos la pipeta y quitamos el papel empezando de arriba hacia abajo hay que cuidar
de no tocar la pipeta ya que se puede contaminar
4. Pipeteamos el agua de horchata la cual es la que se va examinar.
5. Ya una vez teniendo nuestra sustancia la que se va examinar la abrimos un poco cerca del
mechero para introducir el agua en la caja Petri y con el asa acodada empezamos a
extender la solucin despus de acabar con este paso tapamos nuestra caja y la
invertimos para llevarla a la incubadora y ah crezcan nuestras bacterias.



OBSERVACIONES Y ANLISIS
Se debe de tener mucho cuidado al manejar bacterias, ya que se pueden causar
enfermedades
Se observ que hay que tener mucho cuidado al manejar los instrumentos de
esterilizacin, porque puede haber un accidente si no se manejan adecuadamente
Es muy importante cerciorarse de que los instrumentos a utilizar en microbiologa tengan
una buena esterilizacin, de lo contrario, no se obtendrn los resultados esperados
Se debe de manejar una muy buena cultura de higiene, tanto por parte de los alumnos,
como por parte del encargado del laboratorio y del profesor
Los procedimientos requieren de extrema paciencia, as como de muy buena atencin por
parte del que est llevando a cabo el proceso
se observ que el esterilizar el rea de trabajo y cumplir al pie de la letra las indicaciones
se obtienen lo que se quiere encontrar.
El resultado de las bacterias de la boca de Salvador nos impresion bastante pero es
lgico, ya que todos tenemos microorganismo en nuestra boca.

Caractersticas de las colonias encontradas en los cultivos
Nombre Forma Borde Superficie Color Tamao Aspecto Luz
Reflejada
Consistencia Luz
transmitida
E. coli Circular Entero Ondulada Crema 1 mm Hmedo
Liso
No
refleja
luz
Viscosa No
transmite
luz
Bacterias
en la
mano de
Salvador
Circular Entero Ondulada Blanco
Amarillo
Naranja
1 mm Hmedo
Liso
Son
brillosas
Viscosa S
transmite
luz
Bacterias
en el
agua de
horchata
Circular Entero Ondulada Amarillo
Blanco
1 mm Hmedo
Liso
Son
brillosas
Viscosa No
transmite
luz


EVIDENCIAS



Envolviendo los materiales a utilizar con
papel estraza para su posterior
esterilizacin.


Al matraz se
le coloc un
tapn de
gasa y
algodn
junto con un
gorrito de
papel
estraza.
Preparando el
medio de cultivo
en el cual haremos
nuestra siembra.
Esterilizando el
medio de cultivo
en una autoclave
a 121 C por 15
minutos a 15
libres de presin.





















Preparando
nuestro medio
de cultivo en las
cajas Petri
previamente
esterilizadas.
Realizando el mtodo de siembra por
estra cruzada.


























Realizando el mtodo de
siembra por extensin de
superficie de una muestra de
agua de horchata.
Realizando una siembra de la saliva de
la boca de Salvador.
Colocando las cajas Petri con
los cultivos dentro de la
incubadora a 37C.

























Siembra de
las bacterias
que estn
presentes en
la boca de
Salvador.
Siembra de las
bacterias que se
encuentran en
las manos de
Salvador
despus de ir al
bao.
Siembra de las
bacterias que
estn
presentes en
el agua de
horchata.
Observando los
resultados de
nuestra siembra
de bacterias.
CONCLUSIONES
SALVADOR CASTRELLON SALAZAR

En conclusin esta prctica nos ayud a conocer algunos de los mtodos de cultivo en un medio
slido. Es muy interesante el conocer propiedades de las bacterias y como se desarrollan. Fue una
prctica sencilla pero larga la cual requiere muchos cuidados para no contaminar el cultivo.

DULCE M. CEDILLO PONCE
Esta prctica estuvo muy dinmica aunque se me presentaron algunos problemas por el hecho de
que se me olvidaban algunos pasos, gracias a esto ya tengo una mejor idea de los pasos que debo
de seguir y tener ms cuidado con ello.
JULIETA DE LUNA GARCIA
En esta prctica aprendimos los diferentes tipos de cultivos as como tambin a cultivar las
bacterias. Tuvimos que usar cubre bocas, cerrar puertas y ventanas ya que no debe de haber
bacterias en el aire. Este trabajo debe de realizarse con mucha paciencia, cuidado y dedicacin de
querer hacer bien las cosas, porque si no es as, se ver reflejado en los resultados o podra
caernos una infeccin por alguna bacteria. Estuvo muy padre, no solo aprendimos a cultivar
bacterias si no a trabajar como se debe, con paciencia y cuidado.
DIANA MAGALY HERNANDEZ PEREZ
Participar en esta prctica, fue una experiencia muy interesante, pues aprend muchas cosas que
realmente no saba.
Ha sido una de mis practicas favoritas, porque utilizamos el conocimiento de la utilizacin de
muchos instrumentos que conocimos en tercer semestre, adems fue muy interesante porque
tuvimos conocimiento de muchas bacterias, aprendimos a cultivarlas, y adems aprendimos la
tcnica de esterilizacin para cultivar microorganismos, adems de comprender que el ambiente
no est limpio, y que es una pequesima muestra de una sustancia hay millones de bacterias
dainos para el organismo.
XITLALY ANAHI PALOMINO HUERTA
Esta prctica me agrado mucho, pues conoc mucho sobre las bacterias, todos los
microorganismos, sus caractersticas, y adems aprendimos a cultivarlas, y seleccionar las
condiciones correctas para un buen crecimiento de ellas.
Creo que fue una experiencia muy bonita, porque vimos crecer a nuestras bacterias, y adems
identificamos que tipo de bacterias eran, y si las habamos cultivado bien, que era lo mas
importante.
FELIPE DE JESS SAUCEDO VARELA
Est prctica me result muy interesante, aunque un poco aburrida por el tiempo que se tiene que
esperar para que estn listos varios procedimientos.
A mi criterio, aprend mucho sobre las bacterias, sus caractersticas, cmo cultivarlas y a preparar
los medios necesarios para que puedan llevar a cabo su reproduccin y metabolismo. Tambin
aprend que los microorganismos estn ms presentes en nuestra vida de lo que pensamos y que
tambin influyen de una manera muy importante sobre las actividades que realizamos
diariamente.
JESS ISMAEL SOTO OLIVAS
El aprender sobre microorganismos, as como sus caractersticas y todo lo relacionado a ellos es
muy til para m.
Siempre se tiene que adentrar tericamente al tema para conocer que vamos a sembrar y que
vamos a cultivar, cmo y con que, por eso nos llev un poco tiempo ir acostumbrndonos a lo que
nos esperaba.
sta prctica me ha dejado muchsima experiencia, porque he aprendido a esterilizar los
materiales que se suelen utilizar en un laboratorio de microbiologa, tambin medios de cultivos
para stas y sobre todo la siembra. El saber sembrar microorganismos es un avance para mis
estudios.
Nuestro trabajo estuvo bien realizado desde mi punto de vista, mis compaeros de trabajo son
muy organizados y tenemos ese sentido de responsabilidad que nos invade para hacer las cosas
mejores cada vez. Verdaderamente la prctica estuvo un poco extensa y con bastante trabajo pero
sinceramente me agrad mucho y me gusta lo que estoy haciendo.
Enfrentamos unas dificultades al sembrar pero es una minora, ya que iremos adquiriendo esa
experiencia para poder desarrollar nuestras habilidades y hacer todo tipo de siembra.







BIBLIOGRAFA

http://dentizta.ccadet.unam.mx/Instrumenta/contenido/practicas/bacteriologia/solidos.htm
http://es.scribd.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-de-Microorganismos