ESTERILIZACIN

46 ENERO/FEBRERO12 FARMESPAA INDUSTRIAL

Introduccin
La LC-MS es una tcnica extremadamente
verstil, altamente sensible y selectiva, utili-
zada usualmente en laboratorios farmacu-
ticos, bioanalticos, medioambientales, de
alimentos y bebidas, clnicos, forenses, de
protemica, de metabolmica y de desa-
rrollo de frmacos.
Un buen rendimiento cromatogrco y la
obtencin de datos espectrales de masas
de alta calidad dependen de la pureza del
agua1. El agua puede contener diversas
impurezas capaces de inuir negativamen-
te en el rendimiento cromatogrco por su
impacto sobre la resolucin, la integracin
y las lneas basales, introduciendo picos
fantasma y alterando la selectividad de la
fase estacionaria. Las partculas presentes
en el agua impura pueden daar el siste-
ma LC y originar bloqueos de columna que
tienen como consecuencia un aumento de
los tiempos de parada, mientras que los
contaminantes inicos pueden hacer que
resulte ms complicada la interpretacin de
los espectros de masas, al interferir con la
identicacin y cuanticacin espectral de
analitos de bajo nivel.
Compuestos orgnicos
Los contaminantes orgnicos presentes en
el agua pueden provocar diversos proble-
mas cromatogrcos. Si se hallan presentes
en la fase mvil, los compuestos orgnicos
pueden competir con el analito para jarse
a los puntos activos de la fase estacionaria.
Esto reduce la cantidad de analito retenido
en la columna y en consecuencia eluido,
con la correspondiente reduccin de sen-
sibilidad del mtodo. Si sobre la supercie
de la columna se acumulan compuestos or-
gnicos pueden limitar el acceso de anali-
tos y disolventes a puntos activos, teniendo
como resultado problemas de transferencia
de masa y prdida de resolucin, mientras
que cualquier acumulacin en la cabeza de
la columna puede causar picos fantasma.
Adicionalmente, la acumulacin de conta-
minantes orgnicos en la columna puede
tener como resultado un incremento de la
contrapresin y, en ltimo trmino, acortar
la vida de la columna. En situaciones en que
los niveles de contaminacin orgnica sean
muy elevados, es posible que los compues-
tos orgnicos se acumulen con el tiempo y
acten como una nueva fase estacionaria,
provocando picos con colas y cambios en
los tiempos de retencin.
La cromatografa lquida - espectrometra de masas (LC-MS) es una
potente tcnica analtica que combina las capacidades de separacin
de la cromatografa lquida de alto rendimiento (HPLC) o la croma-
tografa lquida de ultra alto rendimiento (UHPLC) con el anlisis de
masas por espectrometra de masas. Se presta mucha atencin a que
la calidad de los patrones, los disolventes orgnicos y las fases mvi-
les para HPLC sean de la mxima pureza, pero frecuentemente se da
por sentado la calidad del agua, que puede tener un impacto sobre
el rendimiento cromatogrco y la calidad de los datos espectrales
de masas.
Dr. Paul Whitehead, PhD, CChem, FRSC,
ELGA Labwater R&D Facility (England)
El agua ultrapura proporciona un
rendimiento excelente en el anlisis LC MS
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Bacterias
Las bacterias originan subproductos org-
nicos, tales como pirgenos, nucleasas o
fosfatasa alcalina, que pueden provocar blo-
queos de columna y problemas cromato-
grcos, como los descritos anteriormente.
Iones
Los contaminantes inicos pueden modi-
car la fuerza inica de una solucin, lo que
puede afectar a algunas separaciones cro-
matogrcas. Los analitos pueden formar
considerables aductos con iones metlicos
contaminantes, como Na+ y K+, lo que
complicara la interpretacin del espectro
de masas.
Partculas y coloides
Las partculas pueden causar daos en la
bomba de HPLC y tambin ha-
cer que se bloqueen columnas.
Este efecto es an ms importan-
te para los usuarios de UHPLC, ya
que los tamaos muy pequeos
de las partculas y los menores
dimetros de esas columnas ha-
cen que sean ms susceptibles
a un bloqueo prematuro que
sus equivalentes de HPLC. Los
coloides pueden ser absorbidos
irreversiblemente por la fase es-
tacionaria, causando un cambio
en la eciencia de separacin de
la columna.
Radiacin ultravioleta (UV)
Pasar el agua a travs de un rayo
de luz ultravioleta descompone
los compuestos orgnicos. Una longitud
de onda de 185 nm descompone y oxida
efectivamente las molculas que contienen
carbono, produciendo fragmentos ioniza-
dos para su posterior eliminacin por inter-
cambio inico, mientras que una longitud
de onda de radiacin UV ms larga (254
nm) altera la actividad de los enzimas bac-
terianos, impidiendo la replicacin. Para
maximizar la descomposicin de las mol-
culas orgnicas, PURELAB Ultra Analytic y
PURELAB ex utilizan una lmpara UV de
espectro total.
Medios
Los cartuchos de PURELAB Ultra Analytic
y PURELAB ex contienen perlas sintticas
de carbn activado, que absorben una am-
plia variedad de compuestos orgnicos, y
resinas de intercambio inico de alta pureza
para minimizar la liberacin de impurezas.
Puricar el agua para LC-MS
La elevada sensibilidad de la LC-MS requie-
re el uso de agua ultrapura para la prepa-
racin de todos los reactivos, tampones,
fases mviles y todos los pretratamientos
de muestras
2
. Para aplicaciones LC-MS
ultrasensibles que requieran niveles muy
bajos de carbono orgnico total (COT), es
muy recomendable el agua PURELAB Ultra
Analytic (Tipo 1+) de ELGA generalmente
con una resistividad de 18,2 M.cm, un va-
lor COT muy bajo, inferior a 2 ppb (gura 1)
y unos niveles bacterianos inferiores a 0,1
UFC/ml. Para todas las dems aplicaciones
LC-MS, se recomienda el equipo PURELAB
ex de ELGA, con un COT inferior a 5 ppb.
Conclusin
Para todas las aplicaciones
LC-MS se debe utilizar agua
ultrapura con una elevada
resistividad (>18,2 M.cm),
libre de partculas, com-
puestos orgnicos e inicos,
para garantizar un buen ren-
dimiento cromatogrco y
unos datos de espectro de
masas de alta calidad. 9
Referencias
1 Whitehead, P. Ultra-pure water for
HPLC. Why is it needed and how is it
produced? Laboratory Solutions, De-
cember 1998
2 ASTM Standard Guide for Bio-appli-
cations Grade Water D 5196-06 Grco LCMS. Niveles de COT en PURELAB Ultra Analytic y PURELAB ex 3