2 Documentos de la SEQC - diciembre 2011

1. INTRODUCCIN
El estudio de la linealidad es importante en el diseo, seleccin y
validacin de los procedimientos de medida. Los fabricantes de los
equipos de medida o reactivos para el diagnstico in vitro, deben
informar sobre la linealidad del procedimiento de medida en unas
condiciones de uso determinadas.
Los procedimientos de medida deben ser lineales en todo el
intervalo de medida. Por linealidad se entiende que existe una
correspondencia lineal entre el valor obtenido y el valor conven-
cionalmente verdadero. El intervalo de medida queda defnido por
un lmite inferior (el valor crtico) y un lmite superior denominado
lmite de dilucin o lmite de linealidad.
La falta de linealidad es consecuencia de utilizar una funcin
de calibracin inadecuada y ocasiona errores sistemticos. El caso
ms frecuente es utilizar una funcin recta, cuando la relacin
entre seal y concentracin sigue en realidad una funcin similar
a una sigmoidal o hiperblica. Otro caso frecuente es que la falta
de linealidad ocurra nicamente en el tramo fnal del intervalo
de medida.
El laboratorio clnico debe verifcar el lmite de linealidad solo
cuando se han modifcado las condiciones de uso o cuando existe
sospecha de alteracin de la linealidad, bien sea por resultados
anmalos obtenidos con muestras de pacientes, por los datos del
control de la calidad o por otras verifcaciones que se hayan reali-
zado. Se requiere un estudio completo de la linealidad en caso de
que el procedimiento de medida haya sido diseado en el propio
laboratorio clnico.
2. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIN
El objeto de este documento es proporcionar recomendaciones
para el estudio de la linealidad de los procedimientos de medida
en el laboratorio clnico.
El campo de aplicacin abarca todos los procedimientos de medida
utilizados en el laboratorio clnico y se refere a la linealidad sin
contemplar posibles diluciones ni modifcaciones del volumen de
la muestra por el instrumento.
3. NORMAS PARA CONSULTA
- Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of the
Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical
Approach: Approved Guideline-Second Edition. Document EP6-A.
CLSI, Pennsylvania; 2003.
- International Vocabulary of Metrology. Basic and general
concepts and associated terms (VIM). ISO/IEC Guide 99-12:2007.
Comit Conjunto para las Guas de Metrologa (JCGM); 2008
(<www.bipm.org>).
4. DEFINICIONES
Analito: componente que se indica en el nombre de una magnitud
mensurable [ISO 18153:2004, apartado 3.1]
Error de medida: diferencia entre el valor medido de una magnitud
y el valor de referencia de una magnitud [VIM:2008, apartado 2.16].
Procedimiento recomendado para el estudio de la linealidad
de los procedimientos de medida en el laboratorio clnico
Documento Tcnico (2011)
Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular
Comit Cientfco
Comisin de Metrologa
N. Serrat Ors, F.J. Gella Toms, N. Alonso Nieva, B. Boned Juliani, F. Canalas Reverter, S. Izquierdo lvarez,
R. Lopez Martnez

jgella@biosystems.es
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Procedimiento recomendado para el estudio de la linealidad de los procedimientos de medida en el laboratorio clnico
NOTA 1: El concepto de error de medida puede utilizarse:
a) cuando existe un valor de referencia de una magnitud nico
al cual referirse, lo que se produce cuando se hace una calibracin
mediante un patrn de medida donde el valor medido tiene una
incertidumbre de medida insignifcante o si se da un valor conven-
cional; en este caso el error de medida es conocido.
b) si se supone que el mensurando es representado por un valor
verdadero nico o un conjunto de valores verdaderos de intervalo
insignifcante; en este caso el error de medida es desconocido.
NOTA 2: No debe confundirse el error de medida con un error de
produccin o un error humano.
Error de medida mximo permitido: valor extremo del error
de medida, con respecto al valor de una magnitud de referencia
conocida, permitido por especifcaciones o regulaciones, para una
medida, un instrumento de medida o un sistema de medida deter-
minados [VIM:2008, apartado 4.26].
NOTA 1: Los trminos error de medida mximo permitido o lmite
de error son en general utilizados cuando hay dos valores extremos.
NOTA 2: No debe utilizarse el trmino tolerancia para designar
el error de medida mximo permitido.
NOTA 3: Las especifcaciones de error mximo permitido deben ser
establecidas por cada laboratorio para cada procedimiento de medida.
Error sistemtico: componente del error de medida que, en me-
diciones repetidas, se mantiene constante o vara de forma previsible
[VIM:2008, apartado 2.17].
NOTA 1: El valor de referencia de una magnitud para un error
sistemtico es un valor verdadero, un valor medido de un patrn
de medida con la incertidumbre de medida insignifcante o un valor
convencional.
NOTA 2: El error sistemtico y sus causas pueden ser conocidos o
desconocidos. Puede aplicarse una correccin para compensar un
error sistemtico conocido.
NOTA 3: El error sistemtico es igual a la diferencia entre el error
de medida y el error aleatorio.
NOTA 4: Tambin llamado desviacin y sesgo.
Intervalo de medida: conjunto de valores de magnitudes de un
mismo tipo que un instrumento de medida o un sistema de medida
determinado puede medir con una incertidumbre instrumental dada,
en condiciones determinadas [VIM:2008, apartado 4.7].
NOTA 1: No debe confundirse el lmite inferior de un intervalo de
medida con el lmite de deteccin.
NOTA 2: En el laboratorio clnico habitualmente abarca desde el
valor crtico hasta el lmite de dilucin.
Lmite de dilucin: lmite superior del intervalo de medida.
Mensurando: magnitud que se quiere medir [VIM:2008,
apartado 2.3].
NOTA 1: La especifcacin de un mensurando requiere el conoci-
miento del tipo de magnitud y la descripcin del estado del fenmeno,
cuerpo o substancia que implica la magnitud, incluyendo cualquier
componente pertinente y las entidades qumicas involucradas.
NOTA 2: La medicin, incluyendo el sistema de medida y las con-
diciones en las cuales se efecta la medicin, podran modifcar el
fenmeno, cuerpo o substancia de forma que la magnitud medida
podra ser diferente del mensurando.
NOTA 3: En qumica, el analito o el nombre de una substancia o
componente, son trminos utilizados a menudo en lugar de men-
surando. Esta utilizacin es errnea porque estos trminos no se
referen a magnitudes.
Procedimiento de medida: descripcin detallada de una medida
de acuerdo con uno o ms principios de medida y a un mtodo
de medida determinado, fundamentado en un modelo de medida
e incluyendo todo el clculo destinado a obtener un resultado de
medida [VIM:2008, apartado 2.6].
NOTA 1: Un procedimiento de medida est habitualmente documenta-
do de forma detallada para permitir que un operador efecte la medida.
NOTA 2: Un procedimiento de medida puede incluir una aclaracin
en relacin a una incertidumbre objeto.
NOTA 3: Existe una jerarqua metrolgica de procedimientos de
medida (vase la norma ISO 17511:2004).
Valor crtico (LC): valor mnimo de la estimacin de una mag-
nitud para el cual la probabilidad de que el valor verdadero de la
magnitud sea cero es (habitualmente 0,05) (IUPAC).
NOTA 1: Trmino alternativo aceptado nivel crtico.
NOTA 2: Trminos no recomendados lmite de identifcacin,
sensibilidad, dosis mnima detectable, lmite de deteccin.
NOTA 3: Un valor estimado superior o igual al valor crtico corres-
ponde (habitualmente con el 95 % de probabilidad) a una muestra
con analito. Por el contrario, un valor estimado inferior al valor
crtico no demuestra ausencia de analito.
Veracidad de medida: concordancia entre la media de un nmero
infnito de valores medidos repetidos y un valor de referencia de
una magnitud [VIM:2008, apartado 2.14].
NOTA 1: La veracidad de medida no es una magnitud y no puede
expresarse numricamente.
NOTA 2: La veracidad de medida vara en sentido inverso al error
sistemtico, pero no est relacionada con el error aleatorio.
NOTA 3: No debe usarse el trmino exactitud de medida por el
de veracidad de medida ni viceversa.
5. PROCEDIMIENTO
5.1. Protocolos experimentales
Para el estudio de la linealidad, los resultados de las mediciones
son comparados con los valores tericos relativos de las diluciones
efectuadas de una muestra elevada.
Se contemplan dos protocolos experimentales distintos:
- Para validar la linealidad: El protocolo es adecuado para iden-
tifcar o validar el intervalo lineal y es apropiado para fabricantes
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de productos para diagnstico in vitro o para el laboratorio clnico
si se trata de un procedimiento de medida propio.
- Para verifcar el lmite de linealidad: apropiado para el labora-
torio clnico si se trata de procedimientos de medida comerciales.
5.2. Diseo experimental
5.2.1. Muestras para el estudio
Para realizar el estudio son necesarias 2 muestras iniciales:

- Muestra elevada: Con un valor del mensurando cercano (veri-
fcacin) o superior (validacin) al lmite de linealidad supuesto.
Idealmente debe ser una muestra de paciente o una mezcla de
muestras con valor elevado. Si esto no es posible, puede utilizarse
una mezcla de muestras enriquecida mediante la adicin del analito
1

para conseguir una concentracin sufcientemente elevada. En caso
de que exista, tambin puede emplearse un material de referencia.
- Diluyente: Con valor cero o muy bajo del mensurando (< 1/20
del valor de la muestra elevada). Idealmente debe ser una muestra
de paciente o una mezcla de muestras. Si esto no es posible, tambin
puede emplearse una disolucin salina o similar que imite la matriz
de las muestras. En caso de que exista, tambin puede emplearse un
diluyente de muestras recomendado por el fabricante.
5.2.2. Preparacin de diluciones
Las pipetas empleadas para preparar las diluciones deben estar
debidamente calibradas. Las diluciones a preparar son distintas segn
el protocolo experimental escogido. Mezclar adecuadamente cada
dilucin y proteger las muestras de la evaporacin y del deterioro.
- Para identifcar o validar el intervalo de linealidad: Se re-
comienda utilizar 6 muestras preparadas tal como se indica en la
tabla: las muestras 1 y 6 son el Diluyente y la Muestra Elevada, las
muestras 2 a 5 son diluciones de la Muestra Elevada en el Diluyente
y deben prepararse por duplicado.
Muestra
n
Diluyente
(mL)
Muestra Elevada
(mL)
Valor
relativo
1 1 0 0
2 0,8 0,2 2
3 0,6 0,4 4
4 0,4 0,6 6
5 0,2 0,8 8
6 0 1 10
- Para verifcar el lmite de linealidad: Se precisan solo 2 mues-
tras: la Muestra Elevada, y una dilucin 1/2 de la Muestra Elevada
en el Diluyente, por duplicado.
5.2.3. Mediciones
Antes de ejecutar las mediciones, el laboratorio debe haberse
familiarizado con el procedimiento de medida a evaluar y haber
diseado, aplicado y comprobado un proceso adecuado para el
control de calidad de las series analticas.
Medir el mensurando en las muestras descritas en el apartado anterior,
segn el protocolo escogido, y utilizando el procedimiento de medida
en estudio. Distribuir las muestras duplicadas y de forma aleatoria para
evitar efectos de arrastre y deriva. Medir todas las muestras en una
misma serie. Si el procedimiento de medida tiene elevada imprecisin,
es conveniente aumentar el nmero de replicados de cada muestra.
5.3. Anlisis e interpretacin de los resultados
5.3.1. Validacin de la linealidad
Representar grfcamente los resultados de concentracin obte-
nidos (valor medio de los replicados) frente al valor relativo de la
muestra (ver ejemplo en anexo 1). Muchas veces, la simple inspeccin
visual de la grfca es sufciente para establecer la linealidad y el valor
del lmite superior. El lmite superior debe ser la concentracin ms
elevada que se encuentra sobre el segmento aparentemente lineal.
Si la linealidad no es tan evidente en la inspeccin visual se
recomienda proceder de la siguiente forma:
a) Calcular la regresin lineal de todos los puntos.
b) Calcular para cada punto la diferencia entre las concentraciones
medidas y las concentraciones calculadas por la recta de
regresin.
c) Representar grfcamente las diferencias frente al valor relativo
de las diluciones (anexo 1).
La linealidad en el intervalo de medida estudiado se confrma
cuando los valores de las diferencias oscilan aleatoriamente por en-
cima y por debajo del valor cero. Adems, ninguna de las diferencias
debe sobrepasar el error defnido previamente como admisible. Esta
Comisin recomienda establecer como error admisible la mitad del
error mximo permitido para el procedimiento de medida.
La falta de linealidad en el intervalo de medida estudiado se
evidencia por el aspecto en forma de curva de los puntos y porque
una o ms de las diferencias superan el error admisible.
5.3.2. Vericacin del lmite de linealidad
Para verifcar el lmite de linealidad se realiza el siguiente clculo:
2 x C
0,5ME
- C
ME
donde C
ME
es la media de los valores obtenidos para la Muestra
Elevada y C
0,5ME
es la media de los valores obtenidos para la dilucin
de la Muestra Elevada.
El lmite de linealidad es correcto si la diferencia no supera el valor
establecido como admisible. Esta Comisin recomienda establecer
como error admisible la mitad del error mximo permitido para el
procedimiento de medida.
6. LIMITACIONES
El principal problema de los estudios de linealidad descritos en
este documento se encuentra en la preparacin de las diluciones
por dos causas distintas:
a) Las diluciones deben ser preparadas con un elevado grado
de exactitud.
b) Muchos procedimientos de medida son afectados por la matriz
de las muestras. Por este motivo es conveniente que el dilu
1
El analito puede adicionarse en forma de sustancia pura o de una disolucin muy con-
centrada, siempre y cuando no se modifque signifcativamente la matriz de la muestra.
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Procedimiento recomendado para el estudio de la linealidad de los procedimientos de medida en el laboratorio clnico
yente empleado sea parecido a las muestras a examinar. Si
esto no es posible, debe considerarse que una falta de linealidad
puede estar causada por el cambio de matriz de la dilucin.
7. BIBLIOGRAFA
1. Johnson R. Assessment of bias with emphasis on method comparison.
Clin Biochem Rev 2008; 29:S37-S42.
2. Thompson M, Ellison SLR, Wood R. Harmonized guidelines for single-
laboratory validation of methods of analysis (IUPAC Technical Report).
Pure Appl Chem 2002; 74;835-55.
3. College of American Pathologists. 2010 Calibration Verifcation / Linearity
Surveys Users Guide. www.cap.org.
8. ANEXO 1. ESTUDIO DE LINEALIDAD.
EJEMPLOS
La fgura muestra 2 ejemplos de estudios de linealidad. En las
fguras de la izquierda se ilustra un caso en donde se confrma la
linealidad en todo el intervalo de medidas. En cambio, en las fguras
de la derecha, se muestra un ejemplo de falta de linealidad en el
intervalo ensayado.
En las grfcas superiores la lnea discontinua indica la igualdad
(no es la recta de regresin).
En las grfcas inferiores las lneas continuas indican los lmites
de error admisible (5 % en estos ejemplos).
Figura. 1.
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