Prueba de O-F

Fundamento: Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos por la va fermentativa o por la va oxidativa.
Las bacterias anaerobias los fermentan; las facultativas pueden fermentarlos o degradarlos oxidativamente;
las aerobias estrictas slo pueden oxidarlos.
Para detectar si las bacterias utilizan los carbohidratos por la va oxidativa o fermentativa se utiliza el agar
OF, que contiene agar, peptona y azul de bromotimol como indicador de pH. Inicialmente el medio es de
color verde (pH 7,1) y vira a amarillo cuando el medio se acidifica (pH de 6 a 7,6) producto de la
fermentacin u oxidacin del carbohidrato.
Interpretacin de resultados:
Si el tubo de oxidacin "O" se torna amarillo, pero el de fermentacin "F" queda verde la bacteria es
una oxidadora, no fermenta ese carbohidrato
Si el tubo "O" permanece verde y el tubo "F" se torna amarillo: la bacteria fermenta pero no oxida, es
una fermentadora, una anaerobia estricta, no oxida.
Si ambos tubos quedan amarillos: bacteria anaerobia facultativa, oxida y fermenta el carbohidrato
Si ambos tubos quedan verdes: bacteria inerte, no utiliza el carbohidrato por ninguna va metablica
Prueba de rojo metilo y voges proskauer
Polipeptona
Glucosa
Fosfato dipotsico
Agua destilada

Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un microorganismo de fermentar la glucosa con
produccin de cido por la va cido mixta(e.coli, salmonella, shigella, o con produccin de un producto final
neutro (acetona) por la va butanodilica (klebsiella)
La prueba rojo de metilo y Vogues-Proskauer son dos pruebas en una. Las bacterias que siguen
principalmente la va de fermentacin cidos mixtos a menudo producen suficiente cido para mantener un
ph menor de 4.4.
La prueba de rojo de metilo se utiliza para identificar las bacterias entricas en base a su patrn de
metabolismo de la glucosa. Todos los entricos inicialmente producen cido pirvico a partir de
metabolismo de la glucosa. Algunos entrica posteriormente usar la ruta del cido mixto para
metabolizar el cido pirvico a otros cidos, tales como cidos lctico, actico, frmico y. Estas
bacterias se llaman positivos de rojo de metilo e incluyen Escherichia coli y Proteus vulgaris.
Posteriormente, otros entricos utilizan la va butilenglicol para metabolizar el cido pirvico a
productos finales neutros. Estas bacterias se llaman metil-red-negativo y Serratia marcescens incluyen
y Enterobacter aerogenes. A uno de los tubos se le aade unas gotas (4-5) de solucin indicadora de
Rojo de Metilo. Se agita para homogeneizar y se observa la coloracin. Se considera positiva si vira al
rojo y negativa si permanece amarillo.
Algunos microorganismos producen acetona o acetil metil carbinol por descarboxilacin de dos
molculas de cido pirvico (producto final de la gluclisis). La acetona es un producto intermedio de
la fermentacin butiln-gliclica, que conduce a la formacin de 2, 3 butanodiol. Tanto la acetona
como el 2,3 butanodiol son productos neutros de la fermentacin de la glucosa que llevan el pH del
medio a un valor aproximado de 6 o ms, y un aumento en la produccin de dixido de carbono,
respecto a la prueba Rojo de Metilo. La acetona en un medio fuertemente alcalino (NaOH o KOH) y en
presencia de Oxgeno se oxida a diacetilo. El diacetilo reacciona con compuestos que contengan
ncleos de guanidina, como la arginina, presente en el medio (peptona por ejemplo), y da un
compuesto color rojo-rosado-violceo. Se agrega -naftol para aumentar la sensibilidad. Esta prueba
caracteriza a ciertas especies de las Enterobacteriaceae, e indicar que la glucosa es fermentada por la
va butanodilica.A la otra porcin de cultivo se le aade: 0,6ml del Reactivo A de Voges-Proskauer
(alfa-naftol 5% en etlico absoluto). El medio adquiere un aspecto lechoso. 0,2ml del Reactivo B de
Voges Proskauer (KOH 40%). Desaparece el aspecto lechoso y se agita fuertemente. Si la prueba es
positiva, antes de cinco minutos aparece un color rosado-violceo, ms o menos intenso, que se inicia
en la parte superior del tubo. Si la prueba es negativa no aparece coloracin alguna.
Hidrlisis del almidon
Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una hidrlisis extracelular
preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las distintas bacterias elaboran para este fin una
cierta variedad de enzimas extracelulares que se segregan al medio.
El almidn es un carbohidrato complejo que es degradado por microorganismos que contienen amilasas. Las
molculas de yodo estn atrapadas dentro de la hlice no ramificada de unidades de glucosa de la cadena
de amilosa para formar un compuesto de inclusin azul. Si la red se desintegra como ocurre durante la
hidrlisis del almidn y las dextrinas por definicin se produce una mezcla de dos molculas de polisacridos
poliglucosa: amilosa lineal que solo da glucosa con la hidrlisis se denomina glucosn.
Procedimiento: ioduro da un color azul con el almidn. Crecimiento de un organismo en una placa que
contiene almidn. Sumergir la placa en ioduro de Gram y buscar las zonas claras alrededor de las colonias.
Incubar a 35+- 2C por 24-25 horas
Prueba del Citrato : En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el
citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo
bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en
medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar
citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la
consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del
ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este
ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de
carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de
la produccin de citrato permeasa
Citrato de sodio
Cloruro de sodio
Fosfato dipotsico
Fosfato monoamnico
Sulfato de magnesio
Azul de bromotimol
Prueba de TSI
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el
desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato
de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la
fuente de iones Fe
3+
, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color
negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el
cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que
reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Extracto de carne
Pluripeptona
Cloruro de sodio
Lactosa
Sacarosa
Glucosa
Sulfato de hierro y amonio
Tiosulfato de sodio
Rojo de fenol
Agar

1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o
sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.
fermentacin es el proceso por el que las clulas pueden obtener energa sin llevar a cabo un proceso de
fosforilacin oxidativa. Esto es: en la fermentacin, la energa se obtiene mediante un proceso qumico de
fosforilacin a nivel de substrato sin que se produzca una variacin neta del poder reductor de la clula.
en un proceso de fermentacin tanto el donador de electrones como el aceptor son compuestos orgnicos,
mientras que en un proceso de respiracin el donador de los electrones es orgnico y el aceptor inorgnico.