Tecnologas modernas: de Vacunas tradicionales a nueva generacin Vaccinologa: Concepcin, puesta a punto, elaboracin, control, administracin y vigilancia Desarrollo de vacunas Manipulacin de ADN Ingeniera de Protenas Anticuerpos monoclonales Objetivos a cumplir Incremento en la seguridad: Evita manipular microorganismos virulentos Evita reversin de virulencia Incremento eficacia: Mayor especificidad Incorporacin de adyuvantes intrnsecos Ms inocuas Manipulacin y medidas de bioseguridad Mayor rendimiento del antgeno Vacunas DIVA Inactivadas Vacunas a subunidades - pptidos sintticos - A partir de E. coli, levaduras o vegetales Atenuadas Vacunas delecionadas - por mutagnesis Vacunas vectores recombinantes - Antgenos portados por vectores virales o bacterianos Especiales Vacunas a ADN Tipos de vacunas Mtodos de obtencin de sub unidades: Convencionales Purificadas a partir de cultivos de las bacterias o virus Nuevas tecnologas Protenas de fusin expresados: en bacterias, levaduras , clulas de insectos infectadas por baculovirus, en plantas Pptidos sintticos o biosintticos Toxoides por detoxificacin gentica Cmo se seleccionan las subunidades? Algunas estrategias: Estudio genmico o genomics Cmo se seleccionan las subunidades? Mapeo de epitopes B Mapeo de epitopes B Mapeo de epitopes T Mapeo de epitopes T : ELISPOT 1- LP + pptidos 9 aa Anti-IFN recombinante 2- Estmulos: pptidos PHA medio 3- Cultivo 24 h Anti-IFN r biotinilado N de Clulas Formadoras de IFN CULTIVO 10 das Estreptavidina- peroxidasa 4 Cloro-alfa Naftol 4- Revelado 5- Conteo de puntos Identificacin de % de LT productores de IFN gamma Propiedades de vacunas a pptidos Ventajas seguridad inocuidad Desventajas Baja inmunogenicidad, requieren adyuvantes potentes Restriccin haplotpica Requieren epitopes B y T Posibilidad de Mimotopes Vacunas a subunidades producidas por recombinantes Vacuna a subunidades Producida por bacterias recombinantes Protenas de fusin producidas en E. coli: Ventajas bacterias de fcil cultivo rpido crecimiento rendimiento de produccin elevado no se manipula el agente patgeno Desventajas purificacin engorrosa Riesgo de desnaturalizacin El plegamiento no correcto puede cambiar los epitopes conformacionales Ausencia de glicosilacin Ejemplos de vacunas veterinarias a subunidades expresadas en plantas Ventajas y desventajas Tabaco: buen modelo de expresin de protenas, bajo costo de preservacin (se mantiene por un buen periodo de tiempo), produce algunos compuestos txicos. Papa: fcil de manipular, fcil de propagar, almacenamiento por largos periodos de tiempo sin refrigeracin. Necesita coccin previa que puede desnaturalizar los antgenos y disminuir su inmunogenicidad. Bananas: baratas, no necesita coccin, las protenas son estables. el rbol tarda 2 o 3 aos en madurar y dar frutos. Una vez arrancada del rbol se madura y estropean rpidamente. Alfalfa: grandes cosechas varias veces al ao Vacunas a genes deleteados o insertados J-5 E. coli Common core vaccine Protein analyses of MDBK cells harvested after infection with BoHV-1 wild-type (wt) Schnbken, BoHV-1wt 2204 (challenge virus), BoHV-1gE or BoHV-1gETK. Lysates of infected and uninfected cells (MDBK) were separated by SDS- PAGE, and Western blots were analysed with monoclonal antibody against (a) glycoprotein E (94 kDa) and (b) A monospecific rabbit-antiserum against TK (37 kDa). Vacuna deletada para herpes virus bovino Deleteada en glicoproteina E gE y en timidin kinasa viral TK Vacunas a vectores recombinantes Vacuna a vectores recombinantes Ejemplos de vacunas a vectores virales Propiedades de vacunas a vectores Ventajas Permite llevar el Ag a las diferentes zonas de induccin Permite lograr respuestas inmunitarias en mucosas, sistmicas, humorales y celulares Administracin oral o parenteral Desventajas Necesidad de confirmar su no virulencia en poblaciones heterogneas de animales. Difciles de obtener Canine Distemper-Adenovirus Type 2-Parainfluenza-Parvovirus Vaccine, Modified Live Virus, Canarypox Vector RM Recombitek C4, Merial Ltd. USA, 1998-10-07 Canine Distemper-Adenovirus Type 2-Parainfluenza-Parvovirus Vaccine, Modified Live Virus, Canarypox Vector, Leptospira Bacterin RM Recombitek C6, Merial Ltd. USA, 1998-10-07 Equine Influenza Vaccine, Killed Virus, Purified Subunits Equilis Equenza Intervet International B.V. NETH 2003-07-17 West Nile Virus Vaccine, Modified Live Virus, Canarypox Vector Recombitek Equine West Nile Virus Merial Ltd. USA 2004-04-30 Feline Rhinotracheitis-Calici-Panleukopenia-Rabies Vaccine, Modified Live Virus, Canarypox Vector Purevax Feline 3/RabiesMerial Ltd. - USA2000-06-19 Rabies Vaccine, Live Canarypox Vector Purevax Feline RabiesMerial Ltd. - USA 2000-03-30 Distemper Vaccine, Live Canarypox Vector Purevax Ferret Distemper Actinobacillus Pleuropneumoniae Subunit Vaccine Pleuro-Star 4 Novartis Animal Health Canada Inc. - CAN 1997-02-14 Vacunas a ADN Vacunas genticas Ventajas Fciles de manufacturar No se inoculan microorganismos vivos El ADN es qumicamente estable Posible manipulacin de la respuesta inmune Respuesta inmunolgica humoral y celular de larga vida Desventajas Tolerancia Integracin al genoma Posibilidad de estmulo de oncogenes Anticuerpos anti-ADN Antgenos proteicos o mimotopes vacunas a DNA aprobadas West Nile Virus para Equinos Lab. Fort Dodge (Powel 2004) Haematopoietic Necrosis Virus del salmn Lab. Aqua Health Canada Novartis (Lorenzen y col 2005) Vacuna de melanoma oral para caninos Lab. Merial (Bergman y col 2008) Comparacin de la inmunizacin con protenas o polinucletidos LTCD4+ , CD8+ y LB Predominante LTCD4+ y LB Respuesta celular Msculo, piel Msculo, piel Sitios de inyeccin Ambos, clase I y II Clase II Presentacin por MHC Si Solo por el adyuvante Liberacin lenta siempre algunas Glicosilacin/ Estructura conservadas Clulas somticas del husped exgeno Origen del antgeno DNA Protenas Eficiencia de las vacunas de nueva generacin comparadas con la tradicional Diferentes esquemas de vacunacin Prime-boost Diferentes formulaciones de vacunas antirrbicas Aplicaciones no clsicas Control hormonal Control de tejido adiposo Anticuerpos enzimticos Vacunas contra antgenos estomacales del parsito Inmunotecnologa