- Ana Mota - Antnio Gaspar - Andreia Ferreira - Carolina Gandra - Madalena Sofia - Pedro Santos
Introduo O que biotecnologia? Biotecnologia uma cincia aplicada que integra conhecimentos da biologia, Engenharia, qumica para o processamento de materiais e substncias por agentes biolgicos (organismos, clulas) para a obteno de produtos e servios. A Biotecnologia um conceito muito lato que pode ser separado em termos de Biotecnologia tradicional que envolve por exemplo a produo de cerveja, o fabrico de queijo e iogurte e a seleco de plantas hbridas e a Biotecnologia moderna que faz a aplicao dos conhecimentos da Biologia Molecular da Bioqumica e das Tecnologias de DNA Recombinante numa perspectiva da produo. A legislao para os impostos nos EUA define Biotecnologia como aplicao de tecnologias como as Tcnicas de DNA Recombinante, Bioqumica, Biologia Celular e Molecular, Gentica e Engenharia Gentica, Tcnicas de Fuso Celular e novos Bioprocessos utilizando organismos vivos ou partes de organismos para produzir ou modificar produtos, para melhorar plantas ou animais, para identificar alvos para o desenvolvimento de pequenas molculas farmacuticas, para transformar sistemas biolgicos em processos teis ou produtos ou ainda para desenvolver microorganismos com fins especficos.
Aplicaes da biotecnologia Agricultura Pecuria Indstria Sade Evoluo da biotecnologia No incio, muito antes de o Homem conhecer aprofundadamente o conceito de biologia, j se lidava com ela na produo de vinho, cerveja e po. A biotecnologia tradicional era utilizada apenas com o objetivo de obter produtos alimentares. Nos dias de hoje, incide na manipulao de DNA, de onde podemos concluir que tcnicas como a fermentao para a produo de alimentos que no esto incutidas no conceito atual.
Importncia biomdica dos anticorpos A biotecnologia investiga novas formas do sistema imunitrio actuar ou mesmo formas artificiais que ajudam este a actuar, quando este incapaz ou a sua resposta insuficiente para um determinado agente patognico, nomeadamente na imunidade mediada por anticorpos. Quando um organismo invadido por um agente patognico desencadeia-se uma resposta imunitria, podendo ser esta, mediada por anticorpos - sintetizados pelas clulas B. Caso seja essa a situao, ento o antignio (que geralmente contm diferentes determinantes antignicos), ir provocar a activao de diferentes linfcitos B, atravs do reconhecimento feito pelos receptores membranares - imunoglobulinas. A activao de diferentes linfcitos B levar clonagem desses respectivos linfcitos, posteriormente d- se a diferenciao de diferentes plasmcitos, que por sua vez originaro anticorpos policlonais. Uma das aplicaes dos anticorpos policlonais no controlo de doenas, como por exemplo do ttano, utilizando um soro que contm anticorpos antitetnicos. Nesta situao, desenvolve-se uma imunidade passiva, uma vez que os anticorpos foram transmitidos e no produzidos pelo prprio indivduo e adquiridos artificialmente por seroterapia. Este soro pode ser obtido do sangue de cavalos vacinados com a bactria do ttano. Uma clula B divide-se em clones, estes diferenciam-se em plasmcitos, originando anticorpos monoclonais (provenientes do mesmo clone).
Os diferentes anticorpos produzidos tm um grau de especificidade/eficcia relativa, em relao a um determinado antignio. Em termos biomdicos interessam os anticorpos com maior especificidade/eficcia. Como nos interessam os anticorpos mais especficos/eficazes, ento deveramos isolar a clula B produtora desse mesmo anticorpo, e em laboratrio produzir indefinidamente anticorpos monoclonais especficos. S que os linfcitos B no duram mais do que uma semana em meio de cultura, porque so clulas terminais, no se dividem e sofrem, passado algum tempo, apoptose (morte programada), sendo por isso a produo de anticorpos monoclonais baixa por esta via. aqui que entra a biotecnologia, no melhoramento da produo industrial de anticorpos monoclonais. Para a resoluo deste problema contriburam as investigaes de Milstein e Kohler.
Como produzir anticorpos monoclonais? 1- Injecta-se o antignio num rato,o que ir provocar a activao de linfcitos B. 2- Extrai-se linfcitos B do bao do rato (rgo de circulao e armazenamento dos linfcitos B, resultado da resposta ao antignio). Isola-se esses linfcitos. 3- Em paralelo, crescem clulas de mieloma clulas B que sofreram uma mutao-, em meio de cultura. Os plasmcitos resultantes destas clulas so imortais, multiplicando-se indefinidamente. 4- Associa-se linfcitos B a clulas de mieloma, dando origem a clulas hbridas. 5- Separa-se as clulas hbridas por diluies sucessivas. Da diferenciao (expanso) de cada clula hbrida resulta um hibridoma. 6- Depois, d-se a expanso clonal. Os hibridomas tem a mesma funcionalidade dos plasmcitos, segregando anticorpos monoclonais indefinidamente,em cultura. 7- Alguns hibridomas so congelados para uso futuro.
Aqui a grande descoberta so os hibridomas, que conjugam as duas caractersticas pretendidas: segregao de anticorpos monoclonais com a mesma especificidade das clulas B e produo permanente em meios de cultura (propriedade conferida pela clula tumoral, mieloma).
Os anticorpos monoclonais tm aplicao no diagnstico de tumores e de infees ocultas, na teraputica de tumores, infees e doenas autoimunes, sendo tambm utilizados para evitar a rejeio no caso dos transplantes.
Biotecnologia na produo industrial de substncias teraputicas - Antibiticos - Vitaminas - Vacinas - Protenas - Esterides Antibiticos O que o Antibitico? Antibitico nome genrico dado a uma substncia que tem capacidade de interagir com micro-organismos, unicelulares ou pluricelulares, que causam infees no organismo. Ou seja substncias que atingem bactrias, embora possa ser utilizado em sentido mais amplo (contra fungos). Sendo assim os antibiticos podem ter uma atividade bactericida, quando tem efeito letal sobre a bactria ou bacteriosttica se inibem a reproduo ou e o metabolismo das bactrias. Neste ltimo caso a pessoa ou hospedeiro infetado tem tempo para ativar a sua resposta imunitria e o antibitico, digamos que vai s ajudar. Os antibiticos so usados em medicina humana e veterinria (para tratar doenas causadas por bactrias); como promotores de crescimento em animais (utilizados na criao de gado, piscicultura, indstria alimentar); como pesticidas para controlar infeces bacterianas em campos de cultivo, nomeadamente de cereais e para prevenir infeces bacterianas (por exemplo: antes de intervenes cirrgicas).
Histria do 1 antibitico (penicilina) Alexander Fleming, foi um mdico microbiologista, que procurava substncias capazes de matar ou impedir o crescimento de bactrias em feridas infetadas. Devido ao facto de na Primeira Grande Guerra muitos soldados terem morrido devido a ferimentos mal-tratados que originaram infees. Em 1928 Fleming desenvolveu pesquisas sobre bactrias Staphylococcus utilizando colnias cultivadas em placas de Petri em que o meio de cultura era a gelose. Entretanto decidiu ir de frias e esqueceu-se de guardar as placas de Petri quando regressou reparou que as placas apresentavam fungos como era normal, visto no terem sido guardadas. Contudo, depois de um amigo lhe pergunta como ia a suas pesquisa, uma das situaes despertou-lhe interesse pois apresentava uma mancha transparente perto dos fungos. Fleming retirou esse fungo e fez uma cultura do mesmo. Identificou o fungo como Penicillium. Fez ainda culturas do fungo em meio liquido e filtrou-as. Esse filtrado impedia o desenvolvimento das mesmas bactrias, pois continha uma substancia antibacteriana que Fleming denominou de penicilina. Como esta no revelava toxidade para os animais surgiu a ideia de a usarem para tratar doenas de origem bacteriana. Ento isolaram e purificaram-na.
Produo de substncias teraputicas Utiliza-se um processo de Biotransformao ou Bioconverso. Este consiste na utilizao de microrganismos ou da sua maquinaria enzimtica, para a transformao de um substrato num determinado produto. Divide-se em trs fases: Preparao do material; Bioconverso; Recuperao de produtos.
Como se pode observar no esquema, feita uma cultura com microorganismos naturais ou transformados em que depois se selecionam os melhores. Feito isto, so colocados num fermentador com todas as caractersticas necessrias para se desenvolverem (em meio lquido). Por fim os microorganismos so filtrados. Se os investigadores precisarem de produtos extracelulares vo utilizar o filtrado, por outro lado, se quiserem produtos intracelulares utilizaro os microorganismos que ficaram no filtro. Resistncia aos antibiticos As bactrias resistem aos antibiticos em parte pelos nossos hbitos teraputicos. Devido ao uso intensivo dos mesmos, at porque os antibiticos, por vezes, so vendidos sem prescrio mdica e os doentes tomam antibiticos desnecessariamente, nomeadamente para tratamento de doenas virais (gripe). Ou ento essa resistncia deve- se ao facto de as bactrias sofrerem mutaes pois h bactrias naturalmente resistentes aos antibiticos (pois adaptaram-se para sobreviver na sua presena, desenvolvendo os mecanismos necessrios. Esses mecanismos de resistncia so hereditrios, isto , uma bactria transmite sua descendncia a resistncia aos antibiticos, assim como s bactrias em volta. Sendo assim a resistncia pode surgir por aquisio de mutaes espontneas (devido modificao da informao gentica ou por aquisio de material gentico de outras bactrias. Neste ltimo caso, pode haver transferncia (disseminao) de material gentico, nomeadamente dos genes que codificam para a resistncia aos antibiticos, que se pode encontrar em elementos genticos mveis (plasmdeos e transposes).
Vitaminas As vitaminas so substncias orgnicas existentes nas clulas vivas, indispensveis regulao do metabolismo do organismo a que pertencem Como obter vitaminas? A maioria produzida por sntese qumica. Podem-se obter em alimentos frescos e medicamentos.
Produo rentvel provocar mutaes e seleccionar os mutantes mais produtivos; fornecer aos microrganismos os nutrientes necessrios (sacarose, protenas, cobalto); evitar a contaminao por outros microrganismos.
Funes das vitaminas Actuam na produo de hormonas, de clulas sanguneas e de material gentico. Na sua ausncia, estas reaces seriam lentas pelo que seria impossvel manter o organismo vivo.
Vacinas As vacinas so substncias que contm agentes patognicos mortos ou atenuados de forma a estimularem o sistema imunitrio sem se desenvolverem.
Como se produzem? So produzidas a partir de agentes patognicos enfraquecidos.
Como actuam? Os agentes patognicos (vrus ou bactrias), atenuados ou mortos, ao serem introduzidos no organismo, suscitam uma reao do sistema imunolgico e, desencadeiam a produo de anticorpos que acaba por tornar o organismo resistente a esse agente.
Componentes das vacinas As vacinas so constitudas por: - antignio, componente mais importante cujas caractersticas dependem do tipo de vacina. - solvente, que pode ser gua estril mas tambm pode ter pequenas quantidades de constituintes biolgicos onde so produzidas as vacinas. - conservantes, antibiticos e estabilizadores que evitam as invases bacterianas. - adjuvante, um composto que aumenta o efeito da resposta imunolgica do individuo.
Importncia da vacinao A vacinao uma forma muito simples de fortalecer o organismo contra determinadas infeces.
Problemas da vacinao As vacinas no rejeitam totalmente o aparecimento de doenas, apenas previnem o aparecimento destas. Para alm disso, ainda enfraquecem o sistema imunolgico e fazem com que se perca a capacidade de reagir a novas doenas que podem surgir no futuro. Os efeitos colaterais provocados pelas vacinas so outra preocupao. Acredita-se que as vacinas podem causar doenas neurolgicas, doenas degenerativas, e que a aplicao de vrias vacinas de uma vez pode sobrecarregar o sistema imunolgico.
Vacinao e imunizao Vacinao significa a aplicao de vacinas, enquanto imunizao a capacidade que o organismo tem de reconhecer o agente causador da doena e produzir anticorpos a partir da doena adquirida ou por meio da vacinao, ficando protegido temporria e permanentemente. A imunizao pode ser de dois tipos: activa ou passiva. Imunizao activa A proteo produzida pelo sistema imune da prpria pessoa , geralmente, permanente. O prprio organismo reage e produz o anticorpo (atravs da vacina ou toxide). Este tipo de imunizao pode durar toda a vida pois um processo onde se verifica memria imunolgica, ou seja, depois de serem produzidos anticorpos contra uma determinada patologia, este tipo de defesa vai ficar guardada na memoria do organismo. Futuramente, se a patologia afectar o mesmo indivduo, ser mais fcil o combate a esta doena, pois os anticorpos j esto formados e prontos a actuar contra o agente patognico.
Imunizao passiva Faz-se pelo fornecimento de imunidade temporria pela administrao de anticorpos pr-formados. A proteo , ento, transferida de uma pessoa (ou animal) para outras, ou seja, de outro organismo para outro. , portanto, uma proteo imediata embora seja temporria e seja apenas uma proteo vlida para um curto perodo de tempo.
Por exemplo: Ao amamentar, os anticorpos passam da mae para o beb atravs do leite materno. O soro tambm contm protenas incluindo os anticorpos que protegem o organismo contra infees.
Tipos de vacinas
Tipos de vacinas Vacinas inactivadas ou inertes Inteiras Fraes do agente patognico Vacinas "vivas" atenuadas Vacinas produzidas por recombinao gentica Vacinas inactivadas ou inertes
Inteiras O agente bacteriano ou viral inactivado e fica totalmente incapaz de se multiplicar, mas mantm todas as suas componentes e preserva a capacidade de estimular o sistema imunitrio. A vacina VIP (poliomielite) exemplo de uma vacina inactivada inteira. A poliomielite uma doena infecciosa causada por poliovrus, que pode determinar paralisia flcida (permanente ou transitria) ou morte.
Situao vacinal Recomendao Intervalo entre as doses Vacinao completa Uma dose suplementar ---------------- Vacinao incompleta Completar at terceira dose 4-6 semanas No vacinado Trs doses 4-6 semanas
Fraes do agente infecioso Podem ser partculas virais fracionadas, toxinas naturais cuja actividade foi anulada, antignios capsulares de bactrias ou de vrus, ou antignios membranares de bactrias.
Desvantagem: requerem a toma de 3 a 5 dose para induzir a resposta imunitria adequada e, mais tarde, esta resposta tem de ser estimulada atravs de reforos da vacina.
A vacina contra o ttano um dos exemplos deste tipo de vacinas. O ttano uma doena infecciosa mas no contagiosa do sistema nervoso, caracterizado por violentos espasmos musculares causado pelas toxinas de uma bactria chamada de Clostridium tetani. A imunizao feita aps 3 doses da vacina trplice contra ttano, coqueluche e difteria. Aps essa primeira imunizao, deve-se repetir a vacinao a cada 10 anos com a vacina dupla (ttano/difteria). A vacina no contm a bactria viva e pode ser administrada em gestantes. Aps uma leso, todos que tiverem tomado a ltima dose h mais de 5 anos devem receber o reforo.
Vacinas vivas atenuadas
O agente patognico, obtido a partir de um indivduo infectado, enfraquecido por meio de passagens por um hospedeiro no natural, ou por um meio que lhe seja desfavorvel. O resultado destas passagens o agente que, quando inoculado num indivduo, multiplica-se sem causar doena, mas estimulando o sistema imunolgico. Normalmente estas vacinas so eficazes apenas com uma dose.
A BCG (vacina contra a tuberculose) uma vacina viva atenuada, derivada da micobactria Mycobacterium bovis aps esta ser desprovida de virulncia por sucessivas passagens em meio de cultura. A BCG eficaz apenas com a aplicao de uma dose. Esta vacina deve ser aplicada o mais rpido possvel.
Vacinas produzidas por recombinao gentica
Estas vacinas dizem-se combinadas ou polivalentes e so designadas em funo do nmero de componentes.
Exemplo: a DTP trivalente, a DTP-Hib tetravalente e a DTP-Hib-VIP pentavalente. A vacina DTP uma associao de toxides diftrico, tetnico e da Bordettella pertussis inactivada, tendo o hidrxido ou fosfato de alumnio como adjuvante e o timerosal como imunizador.
A vacina DTP deve ser utilizada de rotina na infncia, a partir dos dois meses de idade, por via intramuscular profunda. O esquema bsico recomendado consiste em trs doses com intervalo de 30-60 dias, com um reforo entre 6 a 12 meses depois da terceira dose, de preferncia no 15 ms de idade.
Protenas Microrganismos na produo de protenas humanas possvel atravs da engenharia gentica, que determinados microrganismos produzam protenas humanas. Ao incorporar numa bactria uma sequencia do DNA humano que codifica determinada protena, esse microrganismo recombinante pode produzir grandes quantidades dessa protena. Agora iremos referir algumas das protenas farmacuticas mais importantes obtidas atravs da biotecnologia.
Fatores de coagulao do sangue
esquerda a bactria no tem o ativador de plasminognio (que uma substncia anticoagulante). direita com o anticoagulante, dissolve-se o cogulo, invade o tecido e depois vai para a corrente sangunea. A aplicao d-se por exemplo no tratamento da hemofilia e de outras doenas que afetam a coagulao do sangue.
Fatores de crescimento de colnias celulares Usado no tratamento de cancro como coadjudvante de quimioterapia.
Fator de crescimento da epiderme Tratamento de cancro, lceras e feridas da pele.
Derivados de plaquetas (A principal funo das plaquetas a formao de cogulos, participando portanto do processo de coagulao sangunea.) Usam-se no tratamento de certo tipo de lceras.
Hormona de crescimento humano Tratamento de deficincias de crescimento infantil. A hipfise produz uma hormona de crescimento. Uma leso neste local pode provocar atrasos no crescimento ou at mesmo nanismo. Em 1981 extraa-se hormonas de crescimento da hipfise de um cadver. Por exemplo, para o tratamento de uma criana com nanismo necessria uma injeco semanal de 6mg at aos 18 anos. Alem disso, a hormona do cadver podia estar contaminada por vrus. Atualmente, esta hormona produzida industrialmente, recorrendo a biotecnologia microbiana. A partir de RNA mensageiro que codifica a hormona de crescimento obtm-se o respetivo DNA complementar. Este clonado num plasmdeo e posteriormente modificado (atravs da engenharia gentica). O DNA complementar modificado extrado do plasmdeo e integrado num vetor de expresso de depois transferido em escherichia coli. Esta em cultura produz a hormona desejada em grandes quantidades sem qualquer contaminao.
Insulina Usada no tratamento de diabetes. A Insulina a hormona responsvel pela reduo da glicemia (taxa de glicose no sangue), ao promover o ingresso de glicose nas clulas.
Anticorpos monoclonais Aplicam-se em muitas utilizaes desde a utilizao em reaes in vitro para diagnstico at utilizao in vitro no tratamento de vrios tipos de doenas.
Vacinas Existem vacinas contra a hepatite B, malria, herpes, HIV (esta ultima ainda est em fase de ensaio clnico).
Interferes Os interferes so protenas produzidas por certas clulas quando atacadas por vrus ou por parasitas intracelulares. possvel produzir grandes quantidades de interferes recorrendo a novas tecnologias. Utilizam-se diferentes clulas hospedeiras e a partir do seu RNA mensageiro e da transcriptase reversa catalisam-se novas cadeias de DNA complementar. O DNA complementar junto a um vetor atravs de ligases. O vetor possui vrias sequncias reguladoras. O vetor geneticamente modificado e, d-se a transferncia deste para a clula hospedeira. Acontece produo de protenas recombinantes. Estes interferes so utilizados no tratamento de vrias doenas (certos tumores malignos).
Como produzir interferes recorrendo a biotecnologias?
Esteroides
Os esteroides anabolizantes so substncias sintticas constitudas por hormonas sexuais masculinas. Essas hormonas promovem o crescimento muscular bem como o desenvolvimento de caractersticas sexuais masculinas. Estes esteroides so normalmente usados para melhorar o desempenho atltico. Consequncias: Diminuio da produo de espermatozides (nos homens) Ginecomastia Masculinizao (mulheres) Doenas cardiovasculares Cancro no fgado Os esteroides catablicos, muitas vezes confundidos com os anteriores, so biomolculas muito importantes no nosso organismo. Podem ser hormonas animais que regulam vrios processos metablicos; Tambm podem ser usados como medicamentos para reduzir processos inflamatrios, alergias, atrites, etc. Os esteroides podem ser sintetizados por processos qumicos, mas recorre-se muitas vezes a microrganismos. A bioconverso permite a produo destas substncias em boas condies comerciais. Consequncias: Reteno de lquidos Diabetes Osteoporose
Biotica Investiga as condies necessrias para uma administrao responsvel da vida Humana, animal e responsabilidade ambiental. Algumas perguntas que podem surgir: - Pesar, o cientista, qualquer potencial ganho contra as consequncias adversas para os animais utilizados? - Permitir o avano do conhecimento cientfico uma consciencializao da responsabilidade humana sobre a vida animal?
Concluso A biotecnologia influencia cada vez mais a sociedade atual, quer pela sua utilizao na sade, na produo de alimentos e na proteo do ambiente, quer pelas suas implicaes econmicas, ticas e sociais que as suas aplicaes despoletam. De tudo o que foi exposto, conclui-se que a biotecnologia se reveste de grande importncia e assume mesmo um carcter de urgncia face situao de polmica instalada na sociedade, e que envolve vrias das aplicaes da biotecnologia. O tema biotecnologia muito vasto, com grande quantidade de informao que facilmente acrescida de novos dados, vindos de outras reas com que interage. A biotecnologia um excelente meio para introduzir debates sobre biotica, colocando as pessoas perante diversos dilemas que os conduzem a desenvolver o pensamento crtico e a compreender que para um cidado ser responsvel tem de estar bem informado cientificamente.