CROMATOGRAFA DE GASES CON DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES Cdigo: M2-SAPc-03 Versin: 1.0 Fecha: 2012-12-14 Pgina: 1 de 20
1. OBJETIVO
Describir la metodologa para la determinacin de Bifenilos Policlorados (PCB) en extractos de suelos, sedimentos y lodos por cromatografa de gases con detector de captura de electrones (ECD).
2. ALCANCE DE LA APLICACIN
2.1. Este mtodo es usado para determinar las concentraciones de bifenilos policlorados (PCB) como aroclores o congneres individuales en extractos de suelos y sedimentos usando columnas capilares con detector de captura de electrones (ECD). Los compuestos referenciados en la siguiente tabla pueden ser determinados utilizando un sistema analtico de una o dos columnas.
2.2. Los Aroclores son mezclas de varios congneres de PCB. Cuando las muestras contienen ms de un Aroclor, es necesario que el anlisis se realice por un analista experimentado, para lograr niveles aceptables tanto cualitativos como cuantitativos, teniendo en consideracin que los Aroclores se degradan por exposicin por largo tiempo a determinadas condiciones ambientales envejecimiento o por tratamientos tecnolgicos, generando seales que pueden presentar diferencias significativas respecto a los perfiles de los patrones de los picos de los Arocloros empleados como estndares.
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Los aroclores de la lista en la seccin 2.1, son los comnmente especificados en las regulaciones de la US EPA. La cuantificacin de PCB como aroclores es apropiada para algunas regulaciones, sin embargo, presenta dificultad cuando los aroclores han estado expuestos en el medio ambiente por largo tiempo.
2.3. Este mtodo proporciona los procedimientos para la determinacin de un grupo seleccionado de los 209 posibles congneres de PCB, como otro medio de medir las concentraciones de Aroclores degradados. Los 19 congneres de PCB mencionados anteriormente han sido probados por este mtodo y fueron elegidos debido a que muchos de ellos representan congneres especficos para las formulaciones de Aroclores (Ver tabla 6). Los procedimientos de anlisis para los 19 congneres pueden ser apropiados para el anlisis de otros congneres que no estn incluidos en este mtodo y puede ser utilizado como un modelo para el desarrollo de dicho procedimiento. Sin embargo, los 209 congneres de PCB no se pueden separar utilizando columnas de cromatografa de gases y los procedimientos descritos en este mtodo. Si el procedimiento es extendido para abarcar otros congneres, el analista debe documentar bien la resolucin de los congneres que estn siendo analizados, ya que debido al comportamiento qumico y cromatogrfico de algunos de estos compuestos se genera co-elucin de los congneres de inters.
2.4. Realizar el anlisis de PCB por congneres proporciona una mayor precisin en la cuantificacin, cuando se conoce que los PCB estn presentes. Como resultado, este mtodo puede ser usado para determinar Aroclores, algunos congneres de PCB o PCB totales, dependiendo de los regulaciones o necesidades de cada anlisis. El mtodo de los congneres es de especial valor en la determinacin de Aroclores degradados. Este mtodo no es apropiado para la determinacin de los congneres coplanares en los niveles de partes por trilln.
2.5. La identificacin de los compuestos se basa en el anlisis por una sola columna que debe ser confirmada en una segunda columna. Este mtodo describe las condiciones analticas para una segunda columna cromatogrfica que puede ser utilizada para confirmar las medidas hechas con la primera columna. Se recomienda tambin el mtodo USEPA 8270 GC/MS (Cromatografa de gas con espectrmetro de masas) como una tcnica confirmatoria, si la sensibilidad lo permite.
2.6. Este mtodo incluye la opcin de anlisis en doble columna. La opcin permite una configuracin del equipo de dos columnas analticas unidas a un nico puerto de inyeccin. La opcin permite que una sola inyeccin sea utilizada para el anlisis en las dos columnas. El analista debe tener la precaucin que la opcin de dos columnas (dual columna) puede no ser la apropiada cuando el instrumento sufre stress mecnico o cuando muchas muestras fueron inyectadas en un periodo corto, o cuando son analizadas muestras contaminadas.
2.7. El analista debe seleccionar las columnas, detectores y procedimiento de calibracin adecuados para el analito de inters que se desea analizar. Debe establecer los valores de rendimiento para cada matriz especfica, la estabilidad del sistema analtico,
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y la calibracin del instrumento debe establecerse para cada clase de matriz analtica (Ej. Solucin de Hexano a partir de extractos de muestras, muestras disueltas en aceite, etc.).
2.8. Este mtodo debe ser utilizado bajo la supervisin de un analista experimentado en el uso del cromatgrafo de gas (GC) y hbil en la interpretacin de cromatogramas. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este mtodo.
3. FUNDAMENTO TERICO
3.1. Fundamento conceptual Los PCB son un grupo de 209 compuestos relacionados, conocidos como congneres, los cuales difieren en el nmero de tomos de cloro unidos a la molcula del bifenilo.
En general, estas sustancias son apolares y no inflamables. La solubilidad en agua est en el rango de 0,08 mg/L a 6 mg/L para congneres mono y dicloro sustituidos, y entre y 0,007 mg/L y 0,175 mg/L para todos los dems. Son solubles en solventes orgnicos, aceites y grasas. Adems, los PCB son qumicamente inertes bajo condiciones cidas y bsicas, tienen altos puntos de ebullicin y baja conductividad elctrica. Sus propiedades, como la temperatura de ebullicin y la presin de vapor, varan con el nmero de cloros y su posicin en la estructura del bifenilo. Los congneres con uno o cuatro tomos de cloro son lquidos aceitosos y los PCB altamente clorados son grasas y ceras. Son muy resistentes a diversos oxidantes, al oxgeno, metales activos y otros productos qumicos.
Diferentes ismeros de PCB con el mismo nmero de cloros pueden dar una respuesta diferente en el detector. Las mezclas que contienen una misma cantidad de PCB pero diferentes fracciones de ismeros, puede dar diferentes cromatogramas, por lo que esta tcnica es efectiva slo cuando los estndares y los especmenes de prueba presentan una correspondencia entre s. Los Aroclores son estndares adecuados, ya que estos son las mezclas que se encuentran con mayor frecuencia en lquidos aislantes, entre las que se destacan los aroclores 1242, 1254 y 1260.
3.2 Fundamento de la tcnica analtica La cromatografa de gases es una tcnica de separacin, en el cual la muestra es separada por una particin diferencial de los analitos entre una fase mvil gaseosa y una fase estacionaria lquida, dependiente de la afinidad qumica del analito por la fase estacionaria y de la presin de vapor del analito.
Entre los detectores ms utilizados para el anlisis de bifenilos policlorados en matrices ambientales se encuentra el de captura de electrones (ECD); un detector selectivo ya que responde a compuestos capaces de capturar electrones, particularmente compuestos halogenados. Este detector mide la conductividad elctrica de la corriente de gas afluente resultante de su exposicin a una radiacin ionizante de un radio ncleo. El radio ncleo utilizado es el 63 Ni, el cual emite partculas (electrones de baja energa); estas
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partculas cargadas negativamente colisionan con las molculas del gas portador produciendo ms electrones de alta energa.
Los electrones formados por este proceso establecen una corriente estacionaria entre el nodo y el ctodo. Se aplica una diferencia de potencial entre 20 y 100 V de corriente directa. Cuando un analito electronegativo eluye captura algunos de los electrones del fondo lo cual produce una reduccin de corriente estacionaria.
Los iones del analito negativos que se mueven lentamente no son colectados por el nodo. La extensin de la absorcin de electrones, y la reduccin de la corriente, es proporcional a la concentracin del analito.
El peso de la muestra (2- 30 g) es determinado por la tcnica de extraccin a utilizar.
En general las muestras slidas son extradas con acetona/hexano (1:1) o cloruro de metileno/acetona (1:1) utilizando el mtodo de extraccin por ultrasonido (Mtodo USEPA 3550), soxhlet (Mtodo USEPA 3540 y 3541), Microondas (Mtodo USEPA 3546) u otra tcnica apropiada.
Pueden ser aplicados al extracto una gran variedad de pasos de limpieza, dependiendo de su naturaleza o de las interferencias de la matriz y del analito de inters. Las interferencias en los extractos son eliminadas usando el mtodo de limpieza con cido sulfrico/permanganato (Mtodo US EPA 3660 y 3665 A) o limpieza con florisil (Mtodo USEPA 3546).
Despus de la limpieza, el extracto es analizado mediante la inyeccin de una alcuota de muestra al cromatgrafo de gases equipado con una columna capilar estrecha o amplia de slica gel fundida y detector de captura de electrones (GC/ECD).
3.3 Interferencias del mtodo
Las fuentes de interferencias en este mtodo pueden ser agrupadas en tres categoras generales:
3.3.1 Contaminaciones del solvente, reactivos o material utilizado para procesar la muestra. 3.3.2 Contaminacin en el gas de arrastre, partes en el revestimiento de la columna o en la superficie del detector. 3.3.3 Compuestos extrados a partir de la matriz de la muestra y para los cuales el detector produce una respuesta, como los pesticidas clorados y algunos de sus anlogos. (DDT, DDE y DDD).
NOTA: Un estndar de los anlogos del DDT debe ser inyectado para determinar cul de los picos de los PCB o Aroclor puede ser sujeta a interferencias en las columnas analticas utilizadas. El DDT puede interferir con el ltimo pico del Aroclor 1254 en algunas muestras de suelo y sedimentos.
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3.3.4. Coelucin de los analitos relacionados, no todos los 209 congeneres de PCB pueden ser separados con las columnas de GC y el procedimiento descrito en este mtodo. Si este procedimiento se amplia para abarcar otros congneres, el analista deber documentar la resolucin obtenida para estos congneres y establecer procedimientos para la presentacin de informes de resultados.
3.3.4.1 La interferencia por steres de Ftalato introducidos durante la preparacin de la muestra pueden causar un mayor problema en la determinacin de PCB:
Estos compuestos pueden ser removidos antes del anlisis utilizando el mtodo de limpieza de extractos con cido sulfrico/permanganato para la determinacin de bifenilos policloradoas (PCB) en suelos y sedimentos. Los plsticos flexibles comunes contienen una cantidad variable de steres de Ftalato, los cuales pueden ser fcilmente extrados por filtracin o lixiviacin a partir de los materiales durante las operaciones de laboratorio.
Contaminacin cruzada del material de vidrio limpio rutinariamente ocurre cuando son manipulados los plsticos durante el procedimiento de extraccin, especialmente cuando son manipulados con la superficie hmeda de solvente.
Las interferencias provenientes de steres de Ftalato pueden ser mejor minimizadas evitando el contacto con materiales plsticos y verificando todos los solventes y reactivos. Se requiere una exhaustiva limpieza del material de vidrio para eliminar contaminacin por steres de Ftalato.
3.4 Interferencias de matriz
Verificar que no se presente contaminacin durante la recoleccin, almacenamiento y transporte de las muestras. Es indispensable que se analice blancos de muestra para demostrar que no se presenta este tipo de contaminacin y proporcionar validez a los resultados.
Tener en cuenta que dependiendo del origen de las muestras, se pueden presentar interferencias por efecto de matriz. Las interferencias de matriz pueden variar dependiendo de la fuente de las muestras y su diversidad y ocurren por la coextraccin de contaminantes contenidos en ella.
Dependiendo de la fuente de la cual sea tomada la muestra se pueden presentar interferencias, en estos casos se requiere la aplicacin de anlisis confirmatorio (columna dual o cromatografa de gases acoplado a espectrometra de masas) para incrementar la confiabilidad de la identificacin y cuantificacin de compuestos determinados por el mtodo aplicado.
La inyeccin sucesiva de matrices desconocidas puede producir interferencias por efecto memoria de muestras anteriores, ya sea de componentes de la matriz, como de los
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analitos de inters. Este problema debe evitarse, realizando una inyeccin o ms de solvente despus de la muestras de concentraciones altas, con un elevado ruido de fondo o peridicamente cada nmero de inyecciones definido en el laboratorio.
4. ASPECTOS DE SALUD Y SEGURIDAD LABORAL
Tenga cuidado en el manejo de los reactivos y estndares utilizados en el anlisis debido a que su toxicidad o carcinogenicidad no han sido evaluados en forma definitiva.
Cada compuesto manipulado debe ser considerado como potencialmente peligroso para la salud y se debe minimizar la exposicin.
Mantener las fichas de seguridad de las sustancias utilizadas en la aplicacin de esta metodologa, las cuales deben ser conocidas por los analistas o tcnicos que manejan estas sustancias.
Para realizar la manipulacin de PCB es indispensable utilizar los siguientes equipos de seguridad: respirador con filtro para vapores orgnicos, gafas de seguridad, guantes de nitrilo y bata de laboratorio.
4.1. Disposicin de Residuos
Cumpla con la normatividad vigente en el pas, sobre disposicin de residuos slidos, lquidos y emisiones en general provenientes de actividades analticas.
5. EQUIPOS
5.1. Cromatgrafo de gases.
Un sistema analtico completo con cromatgrafo de gas apropiado para la inyeccin en columna, split-splitless y todos los accesorios requeridos incluyendo jeringas, columnas analticas, gases, detector de captura de electrones (ECD), y registrador/integrador o sistema de datos.
5.2. Columnas de cromatografa de gas (GC):
Este mtodo describe los procedimientos para anlisis por sistemas de una y dos columnas (dual). El mtodo de una sola columna involucra un anlisis para determinar que un compuesto que est presente, seguido por un segundo anlisis para confirmar la identidad del compuesto. La tcnica de una sola columna pueden emplear columnas de dimetro pequeo (0,32 mm ID) o columnas de dimetro grande (0,53 mm ID). El sistema de dos columnas involucra una sola inyeccin que es dividida en dos (2) columnas que son montadas en un mismo cromatgrafo de gas. La tcnica de dos columnas nicamente utiliza columnas de gran dimetro (0,53 mm ID).
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Las columnas listadas en esta seccin son las columnas utilizadas para desarrollar el mtodo y obtener los resultados. La mencin de estas columnas en este mtodo no excluye el uso de otras columnas que puedan ser utilizadas (encontradas en el mercado o desarrolladas en el laboratorio). El laboratorio puede utilizar columnas documentando los datos de rendimiento (Ej. Resolucin cromatogrfica, lmites de deteccin) que sean iguales o excedan a los rendimientos descritos en este mtodo, o como apropiadas para el propsito de la aplicacin.
Las columnas de dimetro pequeo para anlisis con una sola columna se listan a continuacin (use ambas columnas para confirmar los compuestos identificados a menos que sea empleada otra tcnica de identificacin como GC/MS)
5.2.1 Columna capilar, Fase metilpolisiloxano (DB-1), dimetro interno 0.32 mm, longitud 30 m, espesor de pelcula 1.0 m. 5.2.2 Capilar, Fase slica fundida 95% dimetil 5% fenilpolisiloxano (DB-5) o equivalente, longitud 30 m, dimetro interno 0,25 mm, espesor de pelcula de 0,25 m. 5.2.3 Columna capilar, Fase Mezcla 1:1 dimetil silicona y polietilenglicol (Durawax- DX3), dimetro interno 0.32 mm, longitud 30 m, espesor de pelcula 0.25m.
Los tres pares de columnas recomendadas se enumeran a continuacin.
5.2.4 Par 1 de columnas: Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con SE-54 (DB-5, SPB-5, RTx-5 o equivalente) con un pelcula de 1,5 m de espesor.
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con 50% de fenil Metilpolisiloxano (DB-1701 o equivalente), con una pelcula de 1,0 m de grosor.
El par 1 de columnas debe ser montado con la presin adecuada en una unin divisora de vidrio de tres vas en forma de Y (J&W Scientific, Catalog N. 705- 0733) o un conector de slica fundida en forma de Y (Restek, Catalog No. 20405), o equivalente.
5.2.5 Par 2 de columnas Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con SE-54 (DB-5, SPB-5, RTx-5 o equivalente) con un pelcula de 0,83 m de espesor.
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con 50 por ciento de fenil metilpolisiloxano (DB-1701 o Equivalente), con una pelcula de 1,0 m de grosor.
El par 2 de columnas debe ser montado en una T de inyeccin de vidrio 8. (Supelco, Catalog No 2-3665M), o equivalente.
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5.2.6 Par 3 de columnas
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con SE-54 (DB-5, SPB-5, RTx-5 o equivalente) con un pelcula de 1.5 m de espesor.
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con 35 por ciento de fenil metilpolisiloxano (HP-608, DB-608, SPB-608, RTx-35, o equivalente), con una pelcula de 0,5 m de grosor.
Este par de columnas se montan en inyectores y detectores separados.
5.3 Matraces volumtricos de 10 y 25 mL, para preparacin de estndares.
5.4 Balanza analtica con precisin de pesada 0,0001g.
6. REACTIVOS
Utilice reactivos grado pesticida en todos los procedimientos, salvo se indique lo contrario. Se entiende que todos los reactivos deben cumplir con las especificaciones del comit de reactivos analticos de la Sociedad Americana de Qumica, para los reactivos que cuenten con tales especificaciones. Otros grados de reactivos pueden ser usados evaluando primero que el grado de pureza del reactivo es lo suficientemente alto para permitir su uso sin disminuir la exactitud de la determinacin.
NOTA: Almacene las soluciones estndar (estndares stock, mixtos, calibracin, interno, y surrogates) a 4 C en un contenedor, sellados con tapas de tefln (PTFE), protegido de la luz. Cuando el estndar es preparado, se recomienda que las alcuotas sean almacenadas individualmente en pequeos viales. Todas las otras soluciones estndar deben ser reemplazadas despus de seis (6) meses o cuando los ensayos control de calidad de rutina indiquen algn problema
6.1. Solventes
Intercambie a n-Hexano o Isooctano antes del anlisis, los solventes utilizados en los procedimientos de extraccin y limpieza incluyen n-Hexano, Dietilter, Cloruro de Metileno, Acetona, Acetato de Etilo, e Isooctano (2,2,4-trimetilpentano). Se pueden requerir Acetona o Tolueno para la preparacin de algunas soluciones estndar.
La calidad mnima requerida de estos solventes es grado cromatogrfico. A continuacin se ofrece una lista de los diferentes grados de pureza permisibles para los solventes en el anlisis de PCB: Grado cromatogrfico (para cromatografa gaseosa o cromatografa lquida de alta resolucin).
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Grado pesticidas (bajo en residuos de compuestos orgnicos). Grado anlisis en trazas (bajo en residuos de compuestos inorgnicos).
Cada casa fabricante posee sus propios nombres para los diferentes tipos de grados de pureza. Lo ms importante, es demostrar que los solventes utilizados no interfieren de ninguna forma con el anlisis ya sean de la calidad sugerida o de una superior.
Cada uno de los solventes debe ser analizado para demostrar estar libre de Ftalatos.
6.2. Agua grado reactivo libre de compuestos orgnicos.
Todas las referencias de agua en este mtodo se refieren a Agua reactivo libre de compuestos orgnicos.
6.3. Soluciones Estndares Stock (Madre)
Pueden ser preparadas a partir de materiales estndar puros o pueden ser compradas como soluciones certificadas.
6.3.1. Para preparar las soluciones estndar stock pese exactamente cerca de 0,0100 g de compuesto puro. Disuelva el compuesto en Isooctano o Hexano y diluya a volumen en un matraz volumtrico de 10 mL. Si la pureza del compuesto es del 96% o mayor, el peso puede ser utilizado sin la correccin del clculo de la concentracin de la solucin estndar stock.
6.3.2. Puede utilizar soluciones estndar stock preparadas comercialmente de cualquier concentracin si sta es certificada por el productor o por una fuente independiente.
6.3.3. Transfiera la solucin estndar a un vial mbar de vidrio con tapa cubierta interna y almacene a temperatura de 4C y protegida de la luz. Estas soluciones deben reemplazarse despus de 6 meses o en el momento en que los resultados de comparacin con los blancos fortificados o las muestras de control indiquen que presentan problemas.
6.4. Soluciones Estndares de Calibracin para Aroclores.
Un estndar que contiene una mezcla de aroclor 1016 y aroclor 1260 incluye muchos de los picos representativos de las cinco mezclas de aroclor. Inicialmente la calibracin inicial de mltiples puntos empleando una mezcla de estos aroclor a 5 concentraciones debe ser suficiente para demostrar la linealidad de la respuesta del detector sin la necesidad de realizar calibraciones iniciales de mltiples puntos para cada uno de los siete aroclores. Adems, esta mezcla se puede utilizar como un estndar para demostrar que una muestra no contiene picos que puedan representar uno de los aroclores. Este
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estndar puede utilizarse para determinarse la concentracin de los aroclores 1016 o 1260 en caso que estn presentes en una muestra.
Prepare los estndares de calibracin con un mnimo de cinco (5) concentraciones diferentes por dilucin del estndar stock con Hexano o iso-octano. Las concentraciones deben corresponder al rango de concentraciones encontradas en muestras reales y en el rango lineal del detector.
Los estndares individuales de cada uno de los otros cinco aroclores servirn de ayuda para los analistas en el reconocimiento del perfil de los patrones. Suponiendo que los aroclores 1016/1260 se han utilizado para demostrar la linealidad del detector, los cinco estndares restantes de aroclores tambin puede ser usada para determinar el factor de calibracin para cada aroclor cuando se utiliza un modelo de regresin lineal. Preparar un estndar de cada uno de los otros aroclores. Las concentraciones deben generalmente corresponden a el punto medio del rango lineal del detector.
6.5. Soluciones Estndares de Calibracin para congneres de PCB
Si los resultados se determinan para los distintos congneres de PCB, los estndares se pueden preparar desde los 19 congneres listados en la seccin 2.1. Este procedimiento puede ser apropiado para otros congneres, pero el analista debe documentar la resolucin de los congneres para informar de los resultados de coelucin.
Los estndares de los congneres se pueden preparar de manera similar a los aroclores, o pueden ser comprados como soluciones certificadas. Prepare los estndares de calibracin con un mnimo de cinco (5) concentraciones diferentes por dilucin del estndar stock con Hexano o Iso-octano. Las concentraciones deben corresponder al rango de concentraciones encontradas en muestras reales y en el rango lineal del detector.
6.6. Estndar Interno.
Cuando los congneres de PCB se han de determinar, el uso de un estndar interno es recomendable. El decaclorobifenil (PCB 209) puede ser utilizado como estndar interno, agregndose a cada extracto de muestra antes del anlisis, incluyndolo en cada uno de los estndares de calibracin.
Cuando los PCB se han de determinar cmo aroclores, el estndar interno normalmente no se utiliza y el decaclorobifenil se emplea como estndar de surrogate.
Prepare una solucin de 5.0 mg/l de decaclorobifenil, y agregue una porcin de 10 L de esta solucin en cada extracto de muestra de 1 mL.
6.7. Estndar surrogate
El rendimiento del mtodo debe ser monitoreado utilizando compuestos surrogate. Los estndares surrogate son adicionados a todas las muestras, blanco de mtodo, adiciones
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de matriz, y estndares de calibracin. Los siguientes compuestos son sugeridos como estndares surrogates:
Cuando los PCB se han de determinar como aroclores, el decaclorobifenil puede ser utilizado como un surrogate, y se aade a cada muestra antes de la extraccin. La concentracin de la solucin recomendada es de 5.0 mg/L en acetona, el tetracloro-m- xileno tambin puede ser utilizado como surrogate para el anlisis de aroclores.
Cuando la determinacin se realiza como congneres, el decaclorobifenil es utilizado como estndar interno y por lo tanto no puede ser utilizado como surrogate. El tetracloro- m-xileno puede ser utilizado como surrogate para el anlisis de los congneres de PCB. La concentracin de la solucin recomendada es de 5.0 mg/L en acetona.
El 2,2',4,4',5,5-hexabromobifenilo puede ser usado como estndar interno o surrogate.
Transfiera las soluciones estndares a un vial mbar de vidrio con tapa cubierta interna y almacene a temperatura de 4C y protegida de la luz. Estas soluciones deben reemplazarse despus de 2 meses o en el momento en que los resultados de comparacin con los blancos fortificados o las muestras de control indiquen que presentan problemas.
7. MATERIALES E INSUMOS
7.1 Mortero 7.2 Micropipetas con puntas desechables de tefln. 7.3 Pipetas Pasteur. 7.4 Papel de aluminio. 7.5 Marcadores vidriograf. 7.6 Pipeteador de caucho. 7.7 Balones aforados de vidrio clase A, con tapa esmerilada. 7.8 Viales mbar, con tapa rosca plstica y con septa de tefln / goma roja de 2 mL. 7.9 Papel absorbente. 7.10 Frascos de vidrio mbar con tapa rosca para residuos de solventes. 7.11 Frasco para residuos de PCB. 7.12 Viales transparentes de 20 y 50 mL, con tapa plstica y septa de tefln. 7.13 Jeringas analticas (10 L, 100 L y 1000 L)
Nota: Todos los viales utilizados para el anlisis deben ser nuevos, o en su defecto, previamente lavados y sometidos a tratamiento trmico en un horno. Las septas deben ser nuevas. Una vez este tipo de insumos se utilizan para el anlisis de PCB en aceites deben descartarse de manera adecuada segn las disposiciones de los entes reguladores competentes.
8. CONSIDERACIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA
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Los extractos deben ser almacenados bajo refrigeracin en la oscuridad y analizados dentro de los 40 das posteriores a su extraccin.
9. LIMPIEZA DE MATERIAL
El material de vidrio debe limpiarse de acuerdo al siguiente protocolo para asegurar su limpieza:
9.1. Enjuague todo material de vidrio con el ltimo solvente utilizado tan pronto como sea posible. 9.2. Lave con agua del grifo y detergente neutro; enjuague con agua del suministro y agua destilada, en este orden. 9.3. Escurra el agua. 9.4. Enjuague todo el recipiente con acetona y deje secar 9.5. Coloque el material en una mufla o estufa que alcance 400C (A excepcin del material volumtrico) 9.6. Dejar enfriar el material 9.7. Tapar el material con papel de aluminio o invierta y almacene en un ambiente limpio para prevenir la acumulacin de polvo u otros contaminantes
10. PREPARACIN DE MUESTRAS
10.1. Extraccin de la Muestra
Las muestras de suelos y sedimentos son extradas con acetona/hexano (1:1) o diclorometano/acetona (1:1) utilizando el mtodo de extraccin por ultrasonido (Mtodo USEPA 3550), soxhlet (Mtodo USEPA 3540C y 3541), Microondas (Mtodo USEPA 3546) u otra tcnica apropiada (Mtodos 3545, 3562).
NOTA: El uso de hexano-acetona en general, reduce la cantidad de interferencias que son extradas y mejora la relacin seal-ruido.
Se utilizan muestras con adiciones conocidas para verificar la aplicabilidad de la tcnica de extraccin para cada tipo de muestra. Agregue una cantidad conocida de analito a cada tipo de muestra para determinar el porcentaje de recuperacin y el lmite de deteccin para la muestra.
10.2. Limpieza del Extracto.
Los procedimientos de limpieza pueden no ser necesarios para muestras matriz relativamente limpias, otros extractos pueden requerir una preparacin adicional antes del anlisis. El procedimiento especfico de limpieza utilizado depende de la naturaleza de la muestra y de las cualidades que sern objeto de la medida. Generalmente, los extractos
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de suelos y sedimentos para la determinacin especfica de bifenilos policlorados (PCB) se purifican con cido sulfrico/permanganato (Mtodo USEPA 3565A) o con florisil (Mtodo USEPA 3546).
11. PROCEDIMIENTO ANALTICO
11.1. Condiciones Cromatogrficas
Este mtodo permite al analista escoger entre una configuracin de un puerto de inyeccin para una o dos columnas, pueden utilizarse columnas de diferentes dimetros (grande o pequeo), la identificacin se basa en los tiempos de retencin a partir de una columna pero debe ser confirmada por una segunda.
11.1.1. Anlisis con una sola columna.
Este mtodo capilar GC/ECD permite al analista la opcin de utilizar columnas capilares de pequeo dimetro 0,25 0,32 mm ID o columnas capilares de gran dimetro 0,53 mm ID. Los datos de rendimiento son proporcionados para ambas opciones.
El uso de columnas de dimetro pequeo (< 0,32 mm ID) es recomendado cuando el analista requiere cromatogramas de alta resolucin. El uso de columna de dimetro pequeo es apropiado para muestras relativamente limpias o para extractos que han sido preparados por uno o ms de los procesos de limpieza referenciados en este mtodo. Las columnas de dimetro mayor (0,53 mm) son apropiadas para muestras complejas.
En la tabla 1 y 2 presentan las condiciones de operacin del GC para el mtodo de anlisis en una sola columna.
11.1.2.| Anlisis por dos Columnas.
El mtodo de dos columnas - dos detectores involucra el uso de dos columnas tubulares abiertas de slica gel fundida de 30 m * 0,53 mm ID con distintas polaridades, de este modo, el analito es separado por diferentes selectividades. Las columnas son conectadas por una T en el puerto de inyeccin y separada para dos detectores de captura de electrones. Las condiciones de operacin del cromatgrafo de gases se listan en la tabla 3.
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Tabla 1. Condiciones cromatogrficas para columnas de dimetro pequeo para anlisis en una sola columna Columna Parmetro Especificacin
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,25 mm 0,32 mm ID enlazada qumicamente con SE-54 (DB-5 o Equivalente), una pelcula de 1 m de espesor.
Gas de arrastre Helio Flujo del gas de arrastre 25 cm/s a 180C Presin del gas de arrastre 9 psi Temperatura del inyector 250 C Volumen de inyeccin 5.0 uL Modo de inyeccin Split 1:1, Flujo 20 mL/min Temperatura del detector 290 C Temperatura del horno Desde 180 C a 260 C a una velocidad de 4C/min, y mantener a 260 C
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,25 mm ID enlazada qumicamente con 35 por ciento de fenil metilpolixilosano (DB-608, SPB-608, o equivalente), con un revestimiento de 2,5 m de grosor, y una pelcula de 1 m de grosor.
Gas de arrastre Helio Flujo del gas de arrastre 25 cm/s a 180C Presin del gas de arrastre 9 psi Temperatura del inyector 250 C Volumen de inyeccin 5.0 uL Modo de inyeccin Split 1:1, Flujo 20 mL/min Temperatura del detector 290 C Temperatura del horno Desde 160 C mantenido 2 min a 290 C a una velocidad de 5C/min, y mantener a 290 C mantenido a 1 min.
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Tabla 2. Condiciones cromatogrficas para columnas de dimetro grande, anlisis en una sola columna Columna Parmetro Especificacin
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con SE-54 (DB-5, SPB-5, RTx-5 o equivalente), con una pelcula de 1,0 m de grosor. Gas de arrastre Helio Flujo del gas de arrastre 6 mL/min Presin del gas de arrastre 9 psi Temperatura del inyector 250 C Volumen de inyeccin 5.0 uL Modo de inyeccin Split 1:1, Flujo 20 mL/min Temperatura del detector 290 C Temperatura del horno Desde 180 C a 260 C a una velocidad de 4C/min, y mantener a 260 C
Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con 50 por ciento de fenil metilpolixilosano (DB-1701 o equivalente), con una pelcula de 1,0 m de grosor.
Gas de arrastre Helio Flujo del gas de arrastre 25 cm/s a 180C Presin del gas de arrastre 9 psi Temperatura del inyector 250 C Volumen de inyeccin 5.0 uL Modo de inyeccin Split 1:1, Flujo 20 mL/min Temperatura del detector 290 C Temperatura del horno Desde 160 C mantenido 2 min a 290 C a una velocidad de 5C/min, y mantener a 290 C mantenido a 1 min.
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Tabla 3. Condiciones cromatogrficas para el anlisis en dos columnas (dual) Columna Parmetro Especificacin Columna 1: Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con SE-54 (DB-5, SPB-5, RTx-5 o equivalente) con un pelcula de 0,83 m de espesor. Columna 2: Columna capilar de slica fundida de 30 m * 0,53 mm ID enlazada qumicamente con 50 por ciento de fenil metilpolisiloxano (DB-1701 o Equivalente), con una pelcula de 1,0 m de grosor. Gas de arrastre Helio Flujo del gas de arrastre 6 mL/min Presin del gas de arrastre 9 psi Temperatura del inyector 250 C Volumen de inyeccin 5.0 uL Modo de inyeccin Split 1:1, Flujo 20 mL/min Temperatura del detector 290 C Temperatura del horno Desde 180 C a 260 C a una velocidad de 4C/min, y mantener a 260 C
12. METODOLOGA DE CLCULO
12.2. Calibracin por estndares En la cuantificacin de PCB no es necesario saber la composicin de cada especie individualmente sino el tipo de Aroclor presente y la cantidad total del mismo. El tipo de Aroclor se identifica cualitativamente, al comparar el perfil obtenido con uno de los estndares conocidos.
Cada uno de los Aroclores debe calibrarse previamente, realizando curvas en solvente, para este efecto se diluye en solvente cada estndar de cada Aroclor, partiendo de las soluciones descritas en la seccin 6.3. Una vez se ha logrado una solucin de trabajo confiable, deben realizarse diluciones de la misma a por lo menos 5 puntos diferentes de concentracin y en un rango que incluya los niveles de concentracin de mayor importancia en el anlisis. Una vez los estndares se han inyectado se obtienen los perfiles caractersticos para cada Aroclor. Este perfil caracterstico permite identificar cualitativamente que Aroclor est presente en las muestras; adems, deben escogerse los picos ms representativos del perfil; es decir, aquellos con mayor rea, resolucin, mejor simetra y que slo pertenezcan al Aroclor en cuestin; para realizar curvas de calibracin externa con cada uno de estos picos de modo que cada Aroclor tenga, como mnimo tres picos de cuantificacin, cada uno con su respectiva curva de calibracin.
Despus de identificar el tipo de Aroclor, este se cuantifica por medio de los picos caractersticos escogidos. Cada pico tendr una concentracin caracterstica. Esta se calcula de la siguiente manera.
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Donde: : concentracin de PCB (en mg Aroclor /L solucin ). : rea del pico. : pendiente (obtenida de la regresin lineal). : intercepto (obtenido de la regresin lineal).
La concentracin obtenida de cada pico se promedia (aritmtica o ponderadamente) para obtener un resultado global de la concentracin del Aroclor. Es importante realizar la cuantificacin con mucho cuidado, verificar la veracidad de los datos y analizarlos usando herramientas estadsticas. Si las concentraciones muestran resultados dispares con desviaciones por fuera de lo admitido no puede reportarse presencia del Aroclor ni su concentracin en la muestra; no obstante, debe informarse la presencia de PCB en la misma.
La regresin lineal puede corresponder a una calibracin externa o a una calibracin por estndar interno. Dependiendo del tipo de calibracin la frmula que define la pendiente vara. Este mtodo es aplicable a la cuantificacin de PCB como Aroclores o como congneres.
12.3. Calibracin por Factor de Respuesta Los Aroclores, o los PCB como congneres, pueden cuantificarse usando el mtodo de Factor de Respuesta (RF). Para ello se usa un estndar interno en conjunto con un estndar de una concentracin similar a la que podra tener la muestra. Una vez analizado el estndar y la muestra se utiliza la siguiente ecuacin:
Donde: : concentracin de PCB en la muestra (en mg Aroclor /L solucin ). : rea del pico en la muestra. : rea del estndar interno en la muestra. : rea del pico en el estndar. : rea del estndar interno en el estndar. : concentracin de PCB en el estndar (en mg Aroclor /L solucin ).
12.4. PCB como Aroclores En caso de que la concentracin final de PCB en la muestra se reporte como Aroclores en suelo (mg/kg), se calcula a partir de la siguiente ecuacin:
s f PCB T m V C PCB
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Donde: : concentracin total de PCB en el suelo o sedimento (mg Aroclor /kg Suelo/sedimento ). : concentracin de PCB (en mg Aroclor /L solucin ). V f : Volumen final de aforo del extracto (L solucin ). m s : Masa inicial de muestra (en Kg muestra ).
Es importante resaltar que la es una aproximacin del contenido real de PCB. Para que sea verosmil, el perfil de la muestra debe coincidir satisfactoriamente con el de un Aroclor nicamente. Para mezclas de Aroclores o perfiles irreconocibles es indispensable realizar la cuantificacin por congneres individuales, procedimiento que no se cubre en este protocolo.
12.5. PCB como congneres Cuando los PCB se han analizado como congneres cada uno se concibe como un analito individual. Independiente del mtodo de calibracin utilizado, la concentracin final de PCB, a partir de la determinacin de los congneres se calcula as:
Donde: : Concentracin total de PCB en el aceite (mg Aroclor /kg suelo/sedimento ). : Concentracin de cada congnere individual (en mg Aroclor /L solucin ). V f : Volumen final de aforo del extracto (L solucin ). m s : Masa inicial de muestra (en Kg muestra ).
La es una medida en base hmeda. Si es necesario expresarla en base seca, debe determinarse el porcentaje de humedad con un mtodo vlido y recalcularla partiendo de la obtenida anteriormente.
13. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD ANALTICA
Remitirse al protocolo Aseguramiento de la Calidad y Estandarizacin de Mtodos Cromatogrficos, para especificaciones de los procedimientos de control de calidad.
El laboratorio debe demostrar la competencia tcnica para aplicar la metodologa en el anlisis de PCB y otros contaminantes ambientales con el fin de asegurar y demostrar la obtencin de resultados confiables. El laboratorio deber implementar, mantener, soportar y aplicar las buenas prcticas de laboratorio, que son la base para las dems estrategias de demostracin de la competencia. Lo anterior incluye un programa formal de aseguramiento de la calidad. El laboratorio tambin debe mantener registros de los documentos de control de calidad generados.
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13.1. Demostracin de la Competencia
El requerimiento mnimo de control de calidad exigido incluye la demostracin de la capacidad del laboratorio, anlisis de blancos de reactivos, la muestra de control de laboratorio y muestras enriquecidas.
Cada laboratorio debe demostrar ser competente para llevar a cabo el anlisis de PCB. Esto implica competencia en el mtodo de preparacin de la muestra y la tcnica de determinacin utilizada, generando datos aceptables de exactitud y precisin para el analito de inters en una matriz sin interferentes. El laboratorio debe verificar la validez de sus figuras de mrito cada vez que se realice un cambio de personal o se realicen cambios en los equipos.
Para demostrar la capacidad inicial del laboratorio se debe determinar las figuras de mrito de la metodologa de anlisis (linealidad y rango de trabajo, porcentaje de recuperacin, la desviacin estndar relativa y el lmite de deteccin para cada Aroclor); a partir de los datos obtenidos en el proceso de validacin. Las figuras de mrito que se obtengan con este mtodo dependen del tratamiento de la muestra y su efecto matriz. Cada laboratorio est en capacidad de escoger los criterios de aceptacin regulados que utilizar para sus figuras de mrito.
13.2. Control de Calidad del Mtodo
El laboratorio debe evaluar el efecto matriz sobre el desempeo del mtodo, determinando precisin, exactitud y lmite de deteccin.
El anlisis de las muestras se realiza por secuencias. Cada secuencia de anlisis contiene un mximo 20 muestras, adems del control analtico que consiste en un blanco de reactivos (inyectado como chequeo para confirmar la ausencia de contaminacin cruzada), blanco de muestra, la muestra de control de laboratorio, una rplica de muestra y una muestra enriquecida con el analito. La recuperacin de los analitos en la muestra enriquecida debe ser determinada y comparada con los lmites de control establecidos por el laboratorio.
La muestra de control de laboratorio consiste en una alcuota de una matriz limpia (control), similar a la matriz de la muestra y de igual peso o volumen, dopada con los analitos de inters. Cuando los resultados del anlisis de la muestra enriquecida indican un problema potencial debido a su composicin, el resultado de la muestra de control de laboratorio se utiliza para verificar que el laboratorio puede realizar el anlisis en una matriz sin interferentes.
La calibracin debe verificarse regularmente usando la muestra de control de laboratorio, cuyo valor de concentracin debe estar entre 15% de la concentracin esperada. Cuando la concentracin del estndar excede los lmites aceptables, el laboratorio debe detener el anlisis y tomar la accin correspondiente.
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Si la calibracin se realiza utilizando un estndar interno, ste debe evaluarse para ser aceptado. La medida del rea del estndar interno no debe superar el 50% de rea del promedio calculado en la calibracin. Cuando el rea del estndar interno esta fuera de los lmites, el laboratorio debe verificar la metodologa y efectuar las medidas necesarias para mantener la validez de su mtodo.
Se recomienda que el laboratorio adopte prcticas adicionales de aseguramiento de la calidad para el uso de este mtodo. Las prcticas especficas que se deben realizar dependen tanto de las necesidades del laboratorio como de la naturaleza de las muestras. El laboratorio debe analizar materiales estndar de referencia y participar en estudios de evaluacin relevantes.
13.3. Desempeo del Mtodo
El procedimiento descrito en el presente protocolo fue corroborado. Para ello se utilizaron muestras reales de suelos y sedimentos, hexano para anlisis de trazas y estndares certificados de los Aroclores. Se analizaron extractos de muestras que contenan una adicin de los compuestos de inters a dos concentraciones distintas. Se determin la precisin evaluada como repetibilidad instrumental y reproducibilidad intermedia del mtodo; as como la exactitud del mismo.
14. PROPUESTA DE VALIDACIN DEL MTODO
Ver el documento Aseguramiento de la Calidad y Estandarizacin de Mtodos Cromatogrficos.
15. BIBLIOGRAFA
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EPA, U. S., Florisil Cleanup. EPA 3620C, 2007.
EPA, U. S., Sulfuric Acid/Permanganate Cleanup. EPA 3665A, 1996.
EPA, U. S., Ultrasonic Extraction. EPA 3550C, 2007.
EPA, U. S., Soxhlet Extraction. EPA 3540C, 1996.
EPA, U. S., Automated Soxhlet Extraction. EPA 3541, 1994.
EPA, U. S., Microwave Extraction. EPA 3546, 2007.
EPA, U. S., Pressurized Fluid Extraction. EPA 3545, 1996.
EPA, U. S., Supercritical Fluid Extraction of Polychlorinated biphenyls (PCB) and organochlorine pesticides. EPA 3545, 2007.