UNIVERSIDADE FEDERAL DO MARANHO

CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA

CURSO DE QUMICA INDUSTRIAL



Vanessa Danielle Diniz da Silva
Bolsista UFMA


Prof. DR. Paulo Roberto Brasil de Oliveira Marques
Orientador


ESTUDO DE CONSTRUO E CARACTERIZAO DE SENSORES COMPSI-
TOS RGIDOS BASEADOS EM CARBONO, MODIFICADOS COM MEDIADO-
RES ELETROANALTICOS PARA CONSTRUO DE BIOSSENSORES ENZI-
MTICOS.











So Lus
2013
2


Vanessa Danielle Diniz da Silva
Bolsita UFMA

_______________________________________________________
Prof. Dr. Paulo Roberto Brasil de Oliveira Marques
Orientador




ESTUDO DE CONSTRUO E CARACTERIZAO DE SENSORES COMPSI-
TOS RGIDOS BASEADOS EM CARBONO, MODIFICADOS COM MEDIADO-
RES ELETROANALTICOS PARA CONSTRUO DE BIOSSENSORES ENZI-
MTICOS.

Relatrio parcial apresentado ao Programa
Institucional de Bolsas de Iniciao Cient-
fica PIBIC, na Universidade Federal do
Maranho.







So Lus
2013
3

RESUMO

Os biossensores, sobretudo os enzimticos, atraem crescente ateno por parte
dos pesquisadores devido as suas caractersticas nicas, que prometem mudar completa-
mente o panorama atual da qumica analtica. Por serem dispositivos que permitem uma
gama de modificaes em sua estrutura, se mostram extremamente versteis. O presente
trabalho apresenta uma proposta de avaliao da modificao de eletrodos compsitos com
4 tipos diferentes de mediadores eletroqumicos, objetivando futuras construes de bios-
sensores enzimticos mediados.. Neste trabalho foram realizados a construo e o desen-
volvimento do sensor compsito de grafite e resina epxi, o processo de limpeza mecnica,
e as primeiras etapas de caracterizao eletroanaltica bem como o estudo eletroanaltico de
diferentes modificaes dos compsitos com distintos mediadores. Como composio do
sensor, utilizou-se seringa de insulina para o invlucro e fios de cobre para o contato eltri-
co. Seu corpo foi preenchido com pasta de resina/endurecedor (Araldite
@
) + grafite e grafi-
te/mediador. Foram estudados quatro mediadores na composio eletrdica, 7,7,8,8-
tetracianoquinodimetano (TNCQ), azul de metileno, meldola blue e ftalocianina de cobalto;
sendo os eletrodos modificados com 1,7% de mediador na pasta e deixados em repouso
durante 24h para processo de cura e obteno do eletrodo compsito. Estes foram lixados e
posteriormente avaliados via voltametria cclica e voltametria de pulso diferencial em tam-
po fosfato pH 7,2, frente ao ferricianeto de potssio. O estudo do comportamento de sen-
sores modificados por diferentes mediadores muito importante na deteco de algum
composto por este sensor, uma vez que cada mediador possui sua faixa tima de trabalho.
No geral, com exceo do compsito de ftalocianina de cobalto, todos apresentaram picos
redox definidos em regies especficas de potencial. Comparando-se, o eletrodo compsito
a partir da modificao com TCNQ apresentou os melhores resultados, sendo o mais indi-
cado para construes futuras de biossensores enzimticos mediados. Os resultados indi-
cam que os eletrodos compsitos construdos de forma artificial em laboratrio apresentam
bons resultados, com comportamento semelhante ao convencional e podem ser utilizados
na construo de biossensores.

Palavras-chave: Biossensores, Eletrodos compsitos, Mediadores eletroqumicos.
4

LISTA DE FIGURAS


Figura 1. Mecanismo de inibio da enzima acetilcolinesterase pela ao de pesticidas
organofosforados. ............................................................................................................11
Figura 2. Frmula molecular do composto 7,7,8,8-tetracianoquinodimetano (TCNQ). ......................12
Figura 3. Estrutura do invlucro utilizado na construo do sensor. Seringa de insulina e fio de
cobre. ..............................................................................................................................19
Figura 4. Sensores preparados em processo de cura por 24 h. ...........................................................20
Figura 5. Sensores compsitos prontos para uso. ..............................................................................21
Figura 6. Eletrodo compsito desmontado aps preparo e processo de cura por 24 h. .......................23
Figura 7. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo tampo
fosfato pH = 7,2. ..............................................................................................................24
Figura 8. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo de
ferricianeto de potssio 0,01 mol L
-1
. ...............................................................................25
Figura 9. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo de
ferricianeto de potssio 0,001 mol L
-1
, aps polimento. ....................................................26
Figura 10. Teste de estabilidade do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo de
ferricianeto de potssio 0,01 mol L
-1
, aps polimento, contendo 10 voltamogramas. .........27
Figura 11. Estudo de velocidade de varredura do eletrodo compsito de grafite em soluo de
ferricianeto de potssio 0,001 mol L
-1
. .............................................................................28
Figura 12. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador
TCNQ, em soluo tampo fosfato pH 7,2. ......................................................................29
Figura 13. Pulso diferencial do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador TCNQ, em
soluo tampo fosfato pH 7,3. ........................................................................................30
Figura 14. Pulso diferencial do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador TCNQ, em
soluo tampo fosfato pH 7,3, aps polimento. ...............................................................30
Figura 15. Grfico comparativo para o comportamento dos eletrodos com e sem TCNQ utilizando
voltametria cclica. ..........................................................................................................31
Figura 16. Grfico comparativo para os sinais obtidos utilizando os eletrodos com e sem TCNQ por
mtodo pulso diferencial. .................................................................................................32
Figura 18: Teste de estabilidade do sistema de eletrodo compsito de grafite e azul de metileno em
soluo tampo fosfato pH 7,2, aps polimento, contendo 10 voltamogramas. .................33
5

Figura 19: Voltametria de pulso diferencial para eletrodo de carbono modificado com mediador
azul de metileno...............................................................................................................34
Figura 20: Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador
meldola blue, em soluo tampo fosfato pH 7,2. .............................................................35
Figura 21: Voltametria de pulso diferencial para eletrodo de carbono modificado com mediador
meldola blue. ...................................................................................................................36
Figura 22: Voltametria cclica para o eletrodo de carbono modificado com mediador ftalocianina
de cobalto em PBS 7,2. ....................................................................................................37





























6

SUMRIO

1 INTRODUO ......................................................................................................................... 7
2 OBJETIVOS ........................................................................................................................... 14
2.1 Objetivo Ge!". ............................................................................................................. 14
2.2 Objetivo# E#$e%&'i%o#. ................................................................................................... 14
3 ()TERI)IS E (*TODOS. ...................................................................................................... 15
3.1 +e$!o ,!# So"-./e#. ................................................................................................... 15
3.1.1 3.1.1 T!0$1o 2o#'!to $3 742. ............................................................................... 15
3.1.2 3.1.2 So"-.1o 5451 ( ,e 2ei%i!6eto ,e +ot7##io. ................................................ 16
3.2 Re!8e6te#..................................................................................................................... 17
3.3 Vi,!i!# e (!tei!i#. .................................................................................................... 17
4 +RO9EDI(ENTOS E:+ERI(ENT)IS ....................................................................................... 1;
4.1 9o6#t-.1o ,o Se6#o ................................................................................................... 1;
4.1.1 De#e6vo"vi0e6to ,o %o$o ,o #e6#o ................................................................... 1;
4.1.2 E#t-,o ,e +e$!o e Te0$o ,e 9-! ,! (i#t-! Re#i6!<E6,-e%e,o<G!'ite. ...... 1=
4.1.3 +e$!o ,! S-$e'&%ie ,e T!b!">o. ....................................................................... 25
4.1.4 )v!"i!.1o E"eto?-&0i%!. ....................................................................................... 21
4.1.5 (o,i'i%!.1o ,o Se6#o 9o0$@#ito %o0 (e,i!,o T9NA. ...................................... 21
4.1.6 (o,i'i%!.1o ,o Se6#o 9o0$@#ito %o0 (e,i!,o )B-" ,e (eti"e6o. .................... 22
4.1.7 (o,i'i%!.1o ,o Se6#o 9o0$@#ito %o0 (e,i!,o 2t!"o%i!6i6! ,e 9ob!"to. .......... 22
4.1.; (o,i'i%!.1o ,o Se6#o 9o0$@#ito %o0 (e,i!,o (e",o"! B"-e. .......................... 22
5 RESUCT)DOS E DIS9USSDES ................................................................................................. 23
5.1 Si6!" Vo"t!0Eti%o ,o Se6#o 9o0$@#ito. ..................................................................... 24
5.2 Si6!" Vo"t!0Eti%o ,o Se6#o 9o0$@#ito (o,i'i%!,o %o0 T9NA................................... 2;
5.3 Si6!" Vo"t!0Eti%o ,o Se6#o 9o0$@#ito (o,i'i%!,o %o0 )B-" ,e (eti"e6o. ................ 32
5.4 Si6!" Vo"t!0Eti%o ,o Se6#o 9o0$@#ito (o,i'i%!,o %o0 (e",o"! B"-e. ...................... 35
5.5 Si6!" Vo"t!0Eti%o ,o Se6#o 9o0$@#ito (o,i'i%!,o %o0 2t!"o%i!6i6! ,e 9ob!"to. ...... 36
6 9ON9CUSDES. ...................................................................................................................... 3;
7 +RO+OST)S 2UTUR)S .......................................................................................................... 3=
; RE2ERFN9I)S ....................................................................................................................... 45

7

1 INTRODUO
A qumica analtica est presente por trs de quase tudo o que compe o cotidi-
ano atual. empregada em diversas reas, tais como medicina, geologia, biologia, enge-
nharia, fsica, agricultura, dentre outras. As medidas analticas vm sendo, ento, cada vez
mais estudadas, objetivando o aprimoramento das tcnicas j existentes ou a elaborao de
novos mtodos, mais prticos, precisos e se possvel, mais baratos. Entre esses mtodos
esto as tcnicas eletroanalticas, que relacionam parmetros qumicos com medidas eltri-
cas como potencial, carga e corrente. Tal tcnica tem como principal vantagem ante os m-
todos tradicionais o fato de no ser necessrio o pr-tratamento da amostra, ou seja, pode-se
realizar a direta determinao do analito (WANG, 1994).
Em prol do constante desenvolvimento nesta rea, surgiram os sensores eletro-
analticos. Estes so compostos por basicamente duas partes bem diferenciadas: o receptor,
que o elemento de reconhecimento molecular ou inico que interage seletivamente com
determinado componente da amostra e o elemento instrumental, que traduz a interao em
um sinal processvel (transdutor), sendo a conexo entre ambos realizada atravs de um
processo conhecido por imobilizao. Tais sensores vm ganhando crescente destaque de-
vido a sua boa sensibilidade, reprodutibilidade e seletividade, alm de seu baixo custo, fcil
construo e possibilidade de modificao de suas superfcies de trabalho (ALEGRET,
2009).
Estes ltimos so chamados eletrodos quimicamente modificados, EQMs. So
sensores que possuem espcies quimicamente ativas como resultado da imobilizao deli-
berada de um agente modificador (que geralmente eletroativo, agindo como uma soluo
mediadora entre a soluo e o eletrodo substrato na transferncia de eltrons) sobre a super-
fcie de um eletrodo base (substrato) com o objetivo de pr-estabelecer e controlar a nature-
za fsico-qumica da interface eletrodo/soluo. Esta modificao interessante porque, em
comparao aos eletrodos convencionais, os sensores modificados possuem melhoras em
suas caractersticas, como maior estabilidade, sensibilidade ou seletividade, que so deter-
minadas de acordo com a mudana realizada. Alm disso, os eletrodos quimicamente modi-
ficados geralmente originam sinais de corrente mais elevados do que na ausncia do modi-
ficador (PEREIRA, 2002).
;

Entre os EQMs esto inclusos os eletrodos compsitos, formados por duas ou
mais fases, tendo pelo menos uma fase isolante misturada a uma fase condutora, que podem
ser combinadas em escala macroscpica ou microscpica e tem como principal finalidade a
obteno de caractersticas que nenhum dos componentes sozinhos apresentaria. Uma das
opes mais utilizadas so os eletrodos compsitos base de grafite, em virtude do seu
baixo preo, possibilidade de incorporao de modificadores no corpo do eletrodo e no
apenas na superfcie, durabilidade, longevidade e fcil manuseio, podendo ser usadas as
mais diversas formas deste material, como fibras de carbono e p de grafite. A possibilida-
de de uso de resina base de Araldite

na construo de sensores compsitos vem sendo

estudada na ltima dcada (CALIXTO, 2007).
A Araldite

composta pela resina epxi formulada e pelo endurecedor, que
so misturados em propores definidas, com tempo pr-estabelecido para secagem e cura.
A resina epxi largamente utilizada como isolante, encapsulador ou adesivo por ter alta
rigidez dieltrica, dureza e resistncia qumica, excelente aderncia e pode ser aplicada
temperatura ambiente ou curada em estufa. Depois de aplicada e curada, a resina extre-
mamente resistente e impermevel, ficando os componentes encapsulados totalmente invio-
lveis, pois qualquer mtodo mecnico, qumico ou trmico para remover a resina com cer-
teza ir destruir os componentes encapsulados antes. Ou seja, o material no pode ser reci-
clado (CALIXTO, 2007).
A partir dos sensores modificados podem-se confeccionar os biossensores, que
se diferenciam dos sensores qumicos comuns, os quimiossensores, pelo fato de seu recep-
tor no ser um reativo sinttico e sim de natureza biolgica, sendo chamado biorreceptor.
Este pode ser uma enzima, tecido animal ou vegetal, anticorpo, microorganismos, cidos
nucleicos, e muitos outros. Seu funcionamento dividido em trs etapas bsicas: a intera-
o especfica do analito da amostra com o material biolgico imobilizado sobre o transdu-
tor de maneira direta ou sobre um suporte em contato ntimo; a deteco, pelo transdutor,
da variao de alguma propriedade fsica ou qumica do sistema, provocada pela reao de
reconhecimento seletivo; e processamento do sinal e obteno de resultados (ALEGRET,
2009).
Entre as vrias vantagens dos biossensores destacam-se a sua extrema especifi-
cidade e seletividade, o seu curto tempo de resposta e o fato de possuir caractersticas ino-
=

vadoras, tal como ser especialmente indicado para as medidas realizadas in situ, fora do
mbito do laboratrio. Os biossensores so classificados conforme o transdutor e a bioca-
mada utilizada. Quanto ltima, podem ser dos tipos:
Enzimticos: usam enzimas como elementos biorreceptores.
Imunobiossensores: monitoram as interaes anticorpo-antgeno, sendo que
um ou outro imobilizado na superfcie.
Biossensores celulares: utilizam microorganismos, sendo especialmente di-
recionados para o monitoramento ambiental de poluentes.
Biossensores eletroqumicos: consistem de dois componentes - um elemento
biolgico que reconhece o analito alvo e o transdutor (eletrodo) que "traduz"
o evento de bio-reconhecimento em um sinal eltrico til.
Biossensores pticos: se baseiam em mudanas nas propriedades pticas das
substncias, com o fito de monitorar a concentrao do analito.
Biossensores acsticos: so baseados na propriedade da piezo-eletricidade
que os cristais anisotrpicos (quartzo, por exemplo) possuem. Quando
aplicada uma tenso alternada a este biossensor, o cristal oscila com uma de-
terminada frequncia, sendo tal frequncia associada massa e s constantes
elsticas do cristal.

Os biossensores enzimticos, objeto de estudo deste projeto de pesquisa, so
dispositivos analticos que incorporam um elemento de reconhecimento seletivo denomi-
nado biorreceptor em contato ntimo com um transdutor capaz de detectar o evento de
reconhecimento molecular entre o analito e a biomolcula e transform-lo em um sinal ana-
ltico, geralmente eltrico. A atividade enzimtica funo direta das estruturas terciria e
quaternria da enzima. Todo tratamento que modifique a conformao da enzima como
aquecimento, alterao do pH do meio e outros, modifica tambm a estrutura do stio ativo
das diferentes enzimas e consequentemente altera a atividade cataltica (MOREIRA et al,
2012).
Para cada tipo de biossensor construdo utilizado um tipo diferente de enzima,
uma vez que estas possuem seletividade muito alta, sendo usadas especificamente para um
determinado tipo de analito. Alis, estas altas seletividade e especificidade so apenas al-
15

gumas das vantagens que esta variao dos biossensores apresenta; ainda h a possibilidade
de deteco de baixssimas concentraes do analito, baixo custo se comparado aos equi-
pamentos de elevado preo ainda bastante empregados, alta sensibilidade, respostas rpi-
das, possibilidade de anlise em tempo real e a grande variedade de metodologias que po-
dem ser aplicadas na construo destes (LUQUE DE CASTRO, 2003).
Devido a essas caractersticas, sobretudo a alta especificidade e a enorme varie-
dade de enzimas disponveis no mercado, so feitos biossensores enzimticos para os mais
diversos fins, desde a deteco dos nveis de glicose no sangue e auxlio no conhecimento
da condio fsica dos atletas para melhora de suas performances at a aplicao na detec-
o de pesticidas nos mais variados produtos.
Dentre as enzimas mais utilizadas na confeco desses biossensores encontra-se
a acetilcolinesterase (AChE), extrada da enguia eltrica, por ser bastante sensvel e seletiva
classe dos inibidores de colinesterases. So sistemas de deteco rpidos seletivos, sens-
veis, de baixo custo, com tempo de resposta bastante curto e que necessitam de mnimo
tratamento da amostra, alm de possibilitar a efetuao de anlises qualitativas e quantitati-
vas em tempo real (MARQUES, 2009). A principal aplicao de biossensores AChE para
a deteco de pesticidas organofosforados e carbamatos baseada na inibio enzimtica
(MARQUES, 2008).
Os pesticidas so largamente empregados na agricutura por seu aprecivel
efeito na erradicao de insetos, apesar de geralmente possurem baixa resistncia sob as
condies de temperatura e umidade naturais. Contudo, a fim de suprir a demanda de
alimento mundial, este acabou sendo utilizado de maneira desenfreada. E afinal isto no
resolveu o problema, apenas comprometeu a segurana dos alimentos expostos, fato que
compreendeu vrias classes destes, inclusive o mel, no qual seu uso decorre da diminuio
de sua produo nas floradas silvestres e crescente por parte da cultura agrcola, que faz
larga utilizao de tais produtos. Os processos de deteco dos pesticidas no mel so cruci-
ais para a avaliao do possvel risco sade que esses produtos apresentam, assim como
fornece informaes de seu uso nos seus campos de colheita e arredores (LIU et al, 2006).
Seus resduos possuem elevada capacidade de prejudicar a sade humana,
podendo causar dor nos olhos, abdomn, falha respiratria, convulses, paralisia e at a
morte. Dentre os vrios tipos de pesticidas existentes esto os organofosforados, que
11

tiveram sua utilizao proibida por serem um dos mais txicos existentes, podendo
favorecer a formao de tumores cancergenos e tambm a origem de diversos outros
problemas (GALI et al, 2006).
Em decorrncia da nocividade de tais compostos, muitos pesquisadores come-
aram a direcionar esforos para rea da deteco dos mesmos, com o objetivo de desen-
volver modos cada vez mais sensveis, rpidos e, de preferncia, que possam ser emprega-
dos in situ. Todas estas propriedades, conforme supracitado podem ser encontradas nos
biossensores. E no caso de pesticidas organofosforados, possvel aproveitar-se da eficin-
cia dos biossensores base de acetilcolinesterase, uma vez que estes, em contato com o
organismo reagem com esta enzima, que responsvel pela resposta dos impulsos
nervosos, inibindo sua atividade enzimtica. O mecanismo de inibio mostrado a seguir,
na Figura 1:


Figura 1. Mecanismo de inibio da enzima acetilcolinesterase pela ao de pesticidas organofos-
forados.


Estes mecanismos podem ser analisados por distintos mtodos, porm, tratan-
do-se de biossensores enzimticos, as tcnicas eletroanalticas so as mais utilizadas. A
voltametria e suas variaes, a potenciometria, a coulometria, entre outras, so utilizadas
desde a etapa de caracterizao at o monitoramento do sinal analtico e deteco final do
analito.
A voltametria cclica a tcnica mais comumente usada para adquirir informa-
es qualitativas sobre os processos eletroqumicos. A eficincia desta tcnica resulta de
sua habilidade de rapidamente fornecer informaes sobre a termodinmica de processos
redox, da cintica de reaes heterogneas de transferncia de eltrons e sobre reaes
qumicas acopladas a processos adsortivos. Inicia-se a aplicao do potencial de um valor
no qual nenhuma reduo ocorre, com o aumento do potencial para regies mais negativas
12

(catdica) ocorre a reduo do composto em soluo, gerando um pico de corrente propor-
cional concentrao deste composto, quando o potencial j tiver atingido um valor no
qual nenhuma reao de reduo ocorre, o potencial varrido no sentido inverso, at o va-
lor inicial, e no caso de uma reao reversvel, os produtos que tiverem sido gerados no
sentido direto (e se localizam ainda prximos superfcie do eletrodo) sero oxidados, ge-
rando um pico simtrico ao pico da reduo. O tipo de voltamograma gerado depende do
tipo de mecanismo redox que o composto em questo sofre no eletrodo, o que faz da vol-
tametria cclica uma ferramenta valiosa para estudos mecansticos (ALEIXO, 2012).
Este mtodo constitui uma tcnica eficaz e verstil no estudo de mecanismos de
sistemas mediadores, permitindo a sua caracterizao a partir dos potenciais dos picos de
intensidade registrados e das modificaes provocadas por alterao da velocidade de var-
rimento. Por outro lado, permite o estudo comparativo de materiais de eletrodo e do estado
da superfcie do mesmo (KISSINGER e HEINENAM, 1994).
Os mediadores eletroqumicos so de grande importncia na construo dos bi-
ossensores, pois aqueles que o contm so menos susceptveis a interferncias tanto eletro-
qumicas quanto da composio da amostra, pois o potencial de oxidao aplicado menor.
Eles so imobilizados na superfcie do eletrodo, na mesma matriz ou no, com o intuito de
se obter um a rpida transferncia de eltrons.
Um dos mais usados e estudados o 7,7,8,8-tetracianoquinodimetano (TCNQ),
mostrado na Figura 2. Este se destaca por ser um bom receptor de eltrons e porque sais do
nion radical resultante apresentam vrias propriedades de grande interesse, que vo desde
uma alta condutividade eltrica at o fato de mostrar comportamento ferromagntico (AC-
KER e HERTLER, 1962).

NC
CN
CN
NC

Figura 2. Frmula molecular do composto 7,7,8,8-tetracianoquinodimetano (TCNQ).
Quanto sua aplicao nos biossensores, sua grande vantagem possibilitar o
trabalho de anlise em baixos potenciais, ou seja, o TCNQ aumenta a transferncia de el-
13

trons atravs da modificao da superfcie de trabalho, proporcionando um potencial baixo
e reduzindo a perda de atividade enzimtica, obtendo sensores de elevada sensibilidade
(MARQUES, 2004).
O presente trabalho se justifica na perspectiva de construo de um sensor
desenvolvido no prprio laboratrio, que substitua a necessidade de compra de sensores
comerciais na construo de biossensores no Laboratrio NARP-UFMA, uma vez que faz
uso de material alternativo e pode ser utilizado como paltaforma eletrdica para disintas
modificaes e anlises.




























14

2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo Geral.
O presente projeto de pesquisa visa dar seguimento a pesquisa de construo de bios-
sensores a partir de compsitos rgidos, estudando diferentes composies de mediadores
eletroanalticos na pasta componente do sensor, objetivando melhorar os processos de me-
diao eletrnica de biossensores amperomtricos.

2.2 Objetivos Especficos.
Avaliar a construo de eletrodos compsitos de grafite com os seguintes mediadores
eletroanalticos: azul de meldola, azul de metileno, ftalocianina de cobalto e sal de
Reinecke;
Desenvolver e avaliar as caractersticas particulares de cada sistema compsito medi-
ado, como quantidade em massa na composio, possveis processos de lixiviao,
potencial de oxidao e capacidade de mediao;
Otimizar os processos de imobilizao da enzima AChE a partir dos distintos mto-
dos estudados;
Estabelecer os parmetros de inibio do biossensor com pesticida;
Efetuar estudos de recuperao em guas naturais fortificadas;
Avaliar amostras reais de guas naturais.









15

3 MATERIAIS E MTODOS.

As medidas eletroanalticas foram realizadas com o auxlio de um potenciosta-
to/galvanostato da marca Autolab tipo III, interfaciado a um computador. O sistema ele-
troqumico foi composto de trs eletrodos, sendo: eletrodo de trabalho compsito a base de
resina e grafite, eletrodo de referncia prata, cloreto de prata (Ag/AgCl em KCl) e eletrodo
auxiliar fio de platina. Como eletrlito, foi utilizado meio de tampo fosfato pH 7,2 e as
medidas foram efetuadas em bquer de 10 mL, contendo 7 mL de soluo trabalho.
Para preparo das solues foi utilizada gua deionizada e balana analtica da
marca Bel Engineering. Foi utilizado o medidor de pH da marca Hanna, para medir o valor
de pH da soluo tampo. As solues foram preparadas segundo protocolo do laboratrio
e armazenadas em geladeira, a 4 C, por no mximo, 30 dias.


3.1 Preparo das Solues.
3.1.1 3.1.1 Tampo Fosfato pH 7,2.

Para obteno desta soluo foi necessrio antes preparar duas outras solues
de trabalho, sendo a primeira de fosfato monobsico de sdio e a segunda, de fosfato dib-
sico de sdio, ambas de concentrao 0,2 Mol L
-1
. A seguir se descreve o procedimento.

a) Soluo 0,2 Mol L
-1
de Na2HPO4.2H2O.

Massa molar: 178 g/mol.
Clculo da massa a ser pesada:
H =
m
MM v
0,2 =
m
178 0,1
m = 3,56 g

Com o auxlio da balana analtica, pesou-se a massa em um bquer e adicio-
nou-se gua a fim de realizar a dissoluo do reagente, agitando a mistura com um basto
de vidro. Porm, devido dificuldade encontrada nesse ponto para tal reagente, este con-
16

junto foi exposto ao ultrassom, por dois minutos. Posteriormente a soluo foi transferida
para um balo volumtrico e completou-se o volume at 100 mL, com gua deionizada.

b) Soluo 0,2 Mol L
-1
de NaH2PO4.H2O.

Massa molar: 138 g/mol.
Clculo da massa a ser pesada:
H =
m
MM v
0,2 =
m
138 0,05
m = 1,38 g

Novamente, com o auxlio da balana analtica, pesou-se a massa indicada pelo
clculo acima em um bquer e adicionou-se gua a fim de realizar a dissoluo do reagente,
agitando a mistura com um basto de vidro. Posteriormente a soluo foi transferida para
um balo volumtrico e completou-se o volume at 50 mL, com gua deionizada.
Em seguida, utilizando uma pipeta volumtrica, retirou-se de cada uma das du-
as solues, 90 e 35 mL, respectivamente. Misturaram-se os dois volumes em um terceiro
balo volumtrico e completou-se o volume at 250 mL, com gua deionizada.
A soluo tampo fosfato foi levada ao medidor de pH para o avaliar de pH da
soluo obtida. O pH ideal para a soluo tampo a ser trabalhada neste projeto de 7,2,
que o pH semelhante ao fisiolgico, visto que o objetivo fianl do trabalho montar um
biossensor enzimtico. Quando a soluo no apresentava o valor de pH esperado, este foi
corrigido com adio de cido ou base.

3.1.2 3.1.2 Soluo 0,01 M de Ferricianeto de Potssio.

Massa molar: 329,25 g/mol
Clculo da massa a ser pesada:
H =
m
MM v
0,01 =
m
329,25 0,025
m = 0,0823125 g

Com o auxlio da balana analtica, pesou-se a massa indicada pelo clculo em
um bquer e adicionou-se soluo de tampo fosfato pH 7,2, a fim de realizar a dissoluo
17

do reagente, agitando a mistura com um basto de vidro. Posteriormente a soluo foi trans-
ferida para um balo volumtrico e completou-se o volume at 25 mL, com tampo fosfato
pH 7,2.

3.2 Reagentes.

Sulfato monobsico de sdio dihidratado (Na2HPO4.2H2O) e sulfato dibsico
de sdio monohidratado (NaH2PO4.H2O) da Merck, ferricianeto de potssio (K3Fe(CN)6)
da Sigma, 7,7,8,8-tetracianoquinodimetano (TCNQ) da Sigma-Aldrich, azul de metileno (AL-
drich), ftalocianina de cobalto (Aldrich), meldola blue (Sigma-aldrich) p de grafite (granu-
lometria 1 a 2 m) da Aldrich.

3.3 Vidrarias e Materiais.

Bales volumtricos (50, 100 e 250 mL), bqueres (10, 20, 50 e 80 mL), bas-
tes de vidro, pipetas graduadas (10 e 15 mL), esptulas de ao, pirex, Araldite
@
profissio-
nal da marca Brascola, e lixas (500, 1200 e 2000) das marcas Bosch, Carborundum e Nor-
ton.










1;

4 PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS
4.1 Construo do Sensor
4.1.1 Desenvolvimento do corpo do sensor
A proposta da construo de eletrodo de trabalho compsito evidencia a definio
de um invlucro especfico que possa abrigar a pasta resina/endurecedor/material eletrdico
e um contato eltrico que possa transferir a corrente eltrica gerada a partir da diferena de
potencial aplicada no eletrodo, para o potenciostato. Esta corrente se relaciona proporcio-
nalmente com a concentrao do analito que se quer detectar.
Para definio do invlucro, dois materiais foram propostos: seringas e tubos de ca-
neta Bic

. Escolheu-se por fim o primeiro, devido ao seu menor dimetro interno, maior
facilidade de manuseio e corte do material e melhor encaixe do contato eltrico.
Estas seringas selecionadas so comumente comercializadas para aplicao de insu-
lina em portadores de diabete Mellitus. Tais seringas apresentam as seguintes medidas:
volume de 30 mL, tamanho de 7 centmetros e dimetro de raio interno de 5 milmetros.
Todas as seringas foram obtidas aps uso caseiro, tiveram retiradas as agulhas e, posterior-
mente, deixadas em frasco apropriado contendo detergente Extran

, no mnimo por 24 ho-

ras. Estas foram ento lavadas em gua corrente e depois rinsadas com gua destilada. De-
pois de limpas, foram secas em bandeja de plstico, ao ar livre. As seringas foram, ento,
submetidas etapa de corte. Todas tiveram suas extremidades retiradas e depois foram cor-
tadas com lmina de faca comum, em peas de aproximadamente 3 cm, ou seja, cada serin-
ga foi dividida em dois invlucros.
Para o contato eltrico foram obtidos fios de cobre de espessuras especficas, res-
ponsveis por conduzir a corrente da soluo para o potenciostato. Estes foram cortados,
com auxlio de alicate, em comprimentos aproximados de 5 cm, e desencapados em uma
das extremidades (aproximadamente 1 cm). Esta extremidade foi, ento, inserida no invlu-
cro da seringa at aproximadamente 2 cm, deixando livre um espao de 1 cm para a adio
posterior do material compsito eletrdico. A outra extremidade foi desencapada para o
contato eltrico. A Figura 3 apresenta os materiais utilizados bem como um corpo de inv-
lucro pronto para uso.
1=


Figura 3. Estrutura do invlucro utilizado na construo do sensor. Seringa de insulina e fio de
cobre.


4.1.2 Estudo de Preparo e Tempo de Cura da Mistura Resina/Endurecedor/Grafite.

O material compsito foi desenvolvido a partir de mistura de resina epxi Araldite

e grafite, que foram misturados em propores definidas e inseridos no invlucro at alcan-
ar o contato eltrico. Depois o sensor assim construdo foi deixado em repouso. A propor-
o de resina + endurecedor foi mantida como especificada pelo fabricante para melhor
aproveitamento das propriedades da resina, que foi de 1:1 (m/m). A proporo entre resi-
na/endurecedor e a grafite foi 3:7 (m/m). Para esta proporo, pesou-se 0,707g de grafite,
0,166g de resina e 0,175g de endurecedor.
Aps serem pesados, os componentes foram transferidos para um pirex de porcela-
na, onde foram misturados e homogeneizados com auxlio de uma esptula, por aproxima-
damente 15 minutos, at a mistura adquirir um aspecto laminado. Esta foi posteriormente
inserida no corpo do invlucro, onde permaneceu por 24 horas a temperatura ambiente,
tempo de cura da mistura, como recomendado pelo fabricante. A Figura 4 apresenta a foto
do sensor assim preparado.
25


Figura 4. Sensores preparados em processo de cura por 24 h.


4.1.3 Preparo da Superfcie de Trabalho.
Passadas as 24 h, os eletrodos foram ento para etapa de limpeza mecnica da rea
eletrdica de trabalho. Para isso, foi necessrio inicialmente retirar a camada em excesso
depositada na superfcie, fazendo uso de uma lixa mais grossa (500), at que se atingisse a
camada da seringa. Retirado todo o excesso, prosseguiu-se a etapa de polimento do sensor,
utilizando-se ento uma lixa mais fina (1200), at a superfcie do eletrodo de trabalho apre-
sentar um aspecto uniforme e espelhado. O sensor foi rinsado com gua destilada, para reti-
rada de excesso de material polido, estando finalmente pronto para uso, como mostrado na
Figura 5.

21


Figura 5. Sensores compsitos prontos para uso.


4.1.4 Avaliao Eletroqumica.

Depois de preparados os sensores e as solues deu-se incio ao processo de
avaliao eletroqumica da superfcie do eletrodo de trabalho. Primeiramente o sinal de
base foi tomado em meio de tampo fosfato pH 7,2 e posteriormente foram se analisados os
processos padro de oxidao e reduo do composto ferricianeto de potssio. Para tanto
foi utilizado o mtodo analtico de voltametria cclica. Foram efetuadas medidas compara-
tivas entre eletrodo polido no dia anterior e no mesmo dia de anlise, para investigar a in-
fluncia do processo de limpeza mecnica no sinal eletroqumico. Medidas de repetibilida-
de e reprodutibilidade de sinal tambm foram efetuadas.

4.1.5 Modificao do Sensor Compsito com Mediador TCNQ.

Para esta etapa, o sensor foi construdo como descrito anteriormente. O TCNQ
foi misturado grafite, na quantidade de 1,7% (m/m). O eletrodo compsito foi ento traba-
lho como nas etapas anteriores e depois foi avaliado pela tcnica de voltametria cclica.

22

4.1.6 Modificao do Sensor Compsito com Mediador Azul de Metileno.

Para esta etapa, o sensor foi construdo como descrito anteriormente. O azul de
metileno foi misturado grafite, na quantidade de 1,5% (m/m). O eletrodo compsito foi
ento trabalho como nas etapas anteriores e depois foi avaliado pela tcnica de voltametria
cclica.

4.1.7 Modificao do Sensor Compsito com Mediador Ftalocianina de Cobalto.

Para esta etapa, o sensor foi construdo como descrito anteriormente. A ftalocianina
de cobalto foi misturada grafite, na quantidade de 1,5% (m/m). O eletrodo compsito foi
ento trabalho como nas etapas anteriores e depois foi avaliado pela tcnica de voltametria
cclica.


4.1.8 Modificao do Sensor Compsito com Mediador Meldola Blue.

Para esta etapa, o sensor foi construdo como descrito anteriormente. O mediador
meldola blue foi misturado grafite, na quantidade de 1,5% (m/m). O eletrodo compsito
foi ento trabalho como nas etapas anteriores e depois foi avaliado pela tcnica de voltame-
tria cclica.










23

5 RESULTADOS E DISCUSSES
O material utilizado para construo do corpo sensor foi bastante verstil e de
fcil manuseio, sendo basicamente composto por materiais reciclados, o que garante um
eletrodo construdo no prprio laboratrio, diminuindo os custos de preparo. A seringa de
insulina foi bastante resistente e envolveu toda a pasta do compsito, sendo este curado de
forma visual bastante uniforme. O processo de cura da resina, de acordo com o fornecedor
foi eficiente para um compsito rgido, no tempo de 24h (Figura 6).


Figura 6. Eletrodo compsito desmontado aps preparo e processo de cura por 24 h.


A limpeza mecnica com lixa dura foi eficiente para retirada do excesso de ma-
terial. O polimento, limpeza mecnica da rea de trabalho, foi efetuado com lixa mole de
modo satisfatrio. A composio de resina/endurecedor e grafite no apresentou muita du-
reza e resistncia na etapa de polimento, o que torna o processo de limpeza mecnica razo-
avelmente fcil. O contato fsico entre o fio de cobre e a seringa foi reforado plstico ter-
mo retrtil, que foi aquecido, aderindo fortemente ao invlucro, a fim de manter o contato
eltrico mais firmemente preso ao eletrodo.


24

5.1 Sinal Voltamtrico do Sensor Compsito.
O sensor preparado para uso foi colocado no sistema eletroanaltico de trs ele-
trodos acoplados ao potenciostato e as medidas foram tomadas. Na Figura 7 apresenta-se o
voltamograma cclico em meio de tampo.
Observa-se um sinal bsico caracterstico do eletrlito tampo fosfato, mas o
voltamograma apresenta um sinal com um pouco de rudo, indicando que o contato eltrico
pode no ter sido efetuado de maneira satisfatria, ou pode ser que a prpria composio do
material eletrdico esteja necessitando de uma maior homogeneizao e compactao.
0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
-2,0x10
-6
-1,0x10
-6
0,0
1,0x10
-6
2,0x10
-6
3,0x10
-6
I

/

A
E / v



Figura 7. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo tampo
fosfato pH = 7,2.

O sinal analtico do ferricianeto 0,01 mol L
-1
em meio de tampo fosfato foi en-
to avaliado pela voltametria cclica, obtendo-se um voltamograma semelhante ao que seria
esperado, porm, com picos alargados e muito distantes entre si, o que descreve um com-
portamento pouco reversvel do sistema (Figura 10).

25

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
-2,0x10
-4
-1,5x10
-4
-1,0x10
-4
-5,0x10
-5
0,0
5,0x10
-5
1,0x10
-4
1,5x10
-4
i

/

A
E / V



Figura 8. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo de ferrici-
aneto de potssio 0,01 mol L
-1
.

O eletrodo foi novamente polido, de maneira mais apurada, em lixa 2000 e o
sinal foi novamente medido em presena de ferricianeto de potssio. O voltamograma obti-
do demonstra que o polimento uma etapa importante, devendo ser efetuado sempre antes
de uma medida eletroanaltica, ou modificao do sensor, pois o voltamograma do ferricia-
neto se apresentou melhor que o obtido anteriormente, com picos mais definidos e uma
distncia entre os picos tambm melhor, o que indica uma melhora nos processos de trans-
ferncia eletrnica, propiciando processos reversveis sob a superfcie do eletrodo (Figura
9). O pico andico foi denotado em valor de potencial + 250 mV e o pico catdico, + 167
mV, sendo que E= 80 mV.
26

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
-1,5x10
-5
-1,0x10
-5
-5,0x10
-6
0,0
5,0x10
-6
1,0x10
-5
1,5x10
-5
I

/

A
E / v



Figura 9. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo de ferrici-
aneto de potssio 0,001 mol L
-1
, aps polimento.


A repetitividade deste sinal foi avaliada efetuando-se dez voltamogramas ccli-
cos sequenciais, como demonstrados na Figura 10. O comportamento do conjunto eviden-
ciou que no houve perda significativa de sinal, indicando que os compostos oxidados no
esto envenenando a superfcie do eletrodo de trabalho.

27

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
-1,5x10
-5
-1,0x10
-5
-5,0x10
-6
0,0
5,0x10
-6
1,0x10
-5
1,5x10
-5
I

/

A
E / v



Figura 10. Teste de estabilidade do sistema de eletrodo compsito de grafite em soluo de ferrici-
aneto de potssio 0,01 mol L
-1
, aps polimento, contendo 10 voltamogramas.



O prximo passo na avaliao do comportamento do eletrodo foi o estudo de
velocidade de varredura. Tal estudo uma outra maneira de se avaliar a estabilidade do
sinal, desta vez analisando a ocorrncia deste com a mudana na velocidade. O teste foi
realizado nas seguintes velocidades: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 140,
160, 180 e 200 mV/s em meio ferricianeto de potssio 0,001 M. A velocidade um compor-
tamento linear, no indicando complicaes cinticas no processo oxidativo do ferricianeto
(Figura 11).

2;

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
-8,0x10
-5
-6,0x10
-5
-4,0x10
-5
-2,0x10
-5
0,0
2,0x10
-5
4,0x10
-5
6,0x10
-5
i

/

A
E / v



Figura 11. Estudo de velocidade de varredura do eletrodo compsito de grafite em soluo de ferri-
cianeto de potssio 0,001 mol L
-1
.


5.2 Sinal Voltamtrico do Sensor Compsito Modificado com TCNQ.

Tal qual descrito anteriormente, o mediador foi incorporado a grafite, na etapa
inicial de construo do sensor, na proporo aproximada de 1,7%. A composio final do
eletrodo compsito de grafite modificado com TCNQ foi a seguinte: 70% de grafite +
TCNQ na proporo de 6:1 e 30% de resina/endurecedor. Para a preparao desta mistura
as massas pesadas foram: 0,707g de grafite, 0,018 g de TCNQ, 0,165 g de resina e 0,164 de
endurecedor.
Aps o tratamento especfico, o eletrodo foi avaliado em meio eletrlito tampo
fosfato pH 7,2, primeiramente por voltametria cclica. A Figura 12 apresenta o voltamo-
grama cclico para o conjunto.

2=

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
-1,0x10
-5
-5,0x10
-6
0,0
5,0x10
-6
1,0x10
-5
i

/

A
E / V



Figura 12. Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador
TCNQ, em soluo tampo fosfato pH 7,2.


A partir do voltamograma cclico possvel observar que o valor de corrente de
pico andico foi registrado em potencial de + 220 mV. Isto confirma o fato a quantidade do
mediador utilizado na composio do sensor foi satisfatria. Realizados os testes na volta-
metria cclica, passou-se ento voltametria de pulso diferencial. O grfico correspondente
mostrado na Figura 13.
O voltamograma de pulso diferencial apresentou um potencial de pico andico
de +210 mV, o que ajuda a confirmar a modificao, bem como confirma que a quantidade
de mediador utilizado deu sinal analtico. Realizou-se ento um segundo estudo por volta-
mograma de pulso, aps novo polimento do eletrodo, cujo grfico mostrado na Figura 14.

35

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
2,0x10
-6
4,0x10
-6
6,0x10
-6
8,0x10
-6
1,0x10
-5
1,2x10
-5
i

/

A
E / V



Figura 13. Pulso diferencial do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador TCNQ, em
soluo tampo fosfato pH 7,3.

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
2,0x10
-6
4,0x10
-6
6,0x10
-6
8,0x10
-6
1,0x10
-5
1,2x10
-5
1,4x10
-5
i

/

A
E / V



Figura 14. Pulso diferencial do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador TCNQ, em
soluo tampo fosfato pH 7,3, aps polimento.

31

Neste grfico observou-se um potencial de pico andico de +200 mV, o que
mais uma vez comprova a importncia de um bom polimento, pois alm da diminuio do
sinal este proporcionou tambm uma reduo no rudo. A fim de se comparar a diferena
entre os sinais obtidos nos eletrodos com e sem mediador TCNQ, tanto na voltametria c-
clica quanto no pulso diferencial, prepararam-se os grficos retratados nas Figuras 15 e 16.
-0,1 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
-1,0x10
-5
-5,0x10
-6
0,0
5,0x10
-6
1,0x10
-5
1,5x10
-5
Grafite/TCNQ 1,7%
Grafite
I

/

A
E / V



Figura 15. Grfico comparativo para o comportamento dos eletrodos com e sem TCNQ utilizando
voltametria cclica.
32


Figura 16. Grfico comparativo para os sinais obtidos utilizando os eletrodos com e sem TCNQ por
mtodo pulso diferencial.


5.3 Sinal Voltamtrico do Sensor Compsito Modificado com Azul de
Metileno.

Aps o tratamento especfico, o eletrodo foi avaliado em meio eletrlito tampo
fosfato pH 7,2, primeiramente por voltametria cclica. A Figura 17 apresenta o voltamo-
grama cclico para o conjunto. O voltamograma apresentou dois picos caractersticos do
azul de metileno em meio de tampo fosfato pH 7,2. O pico andico foi confirmado em
potencial de - 102 mV, sendo que o pico catdico em -236 mV. Estes picos confirmaram a
modificao do eletrodo compsito com o azul de metileno incorporado na pasta enrijecida.
A repetitividade deste sinal foi avaliada efetuando-se dez voltamogramas cclicos sequen-
ciais no eletrlito, como demonstrados na Figura 18.

33

-0,6 -0,4 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6
-3,0x10
-4
-2,0x10
-4
-1,0x10
-4
0,0
1,0x10
-4
2,0x10
-4
3,0x10
-4
i

/

A
E / V



Figura 17: Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite e mediador azul de
metileno em soluo tampo fosfato pH 7,2.
-0,6 -0,4 -0,2 0,0 0,2 0,4 0,6
-8,0x10
-5
-6,0x10
-5
-4,0x10
-5
-2,0x10
-5
0,0
2,0x10
-5
4,0x10
-5
6,0x10
-5
i

/

A
E / V



Figura 178: Teste de estabilidade do sistema de eletrodo compsito de grafite e azul de metileno
em soluo tampo fosfato pH 7,2, aps polimento, contendo 10 voltamogramas.
34

O comportamento voltamtrico apresentado evidenciou que houve perda de si-
nal de corrente a cada nova varredura, o que pode ser observado pela diminuio de corren-
te de pico a cada nova varredura. Isso devido provavelmente ao fato do mediador no ter
tido uma boa aderncia ao eletrodo, sendo rapidamente lixiviado da massa do compsito e
transferido para o tampo, o que pde ser observado devido ao gradual aumento da colora-
o azulada na soluo tampo de trabalho. A voltametria de pulso diferencial foi ento
efetuada para avaliar o sinal do mediador incorporado. A Figura 19 apresenta o voltamo-
grama em questo. Observa-se um pico bem definido em torno do potencial de -250 mV,
porm, novamente houve perda de mediador observado pela colorao azulada na soluo.

-0,5 -0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0,0 0,1 0,2
1,0x10
-5
2,0x10
-5
3,0x10
-5
4,0x10
-5
5,0x10
-5
6,0x10
-5
i

/

A
E / V



Figura 18: Voltametria de pulso diferencial para eletrodo de carbono modificado com mediador
azul de metileno.





35

5.4 Sinal Voltamtrico do Sensor Compsito Modificado com Meldola
Blue.

Aps o tratamento especfico, o eletrodo foi avaliado em meio eletrlito tampo
fosfato pH 7,2, primeiramente por voltametria cclica. A Figura 20 apresenta o voltamo-
grama cclico para o conjunto compsito meldola blue. A partir deste voltamograma obser-
vam-se os dois picos, de oxidao e reduo, para o mediador meldola, que correspondem
respectivamente, -20 e -162mV. Os picos encontram-se sem muita definio, largos e afas-
tados, porm, com perfil semelhante ao meldola blue em soluo..
-0,3 -0,2 -0,1 0,0 0,1 0,2 0,3
-2,0x10
-5
-1,5x10
-5
-1,0x10
-5
-5,0x10
-6
0,0
5,0x10
-6
1,0x10
-5
1,5x10
-5
2,0x10
-5
i

/

A
E / V


Figura 190: Voltamograma cclico do sistema de eletrodo compsito de grafite com mediador mel-
dola blue, em soluo tampo fosfato pH 7,2.


A seguir o eletrodo foi avaliado por voltametria de pulso diferencial, em tam-
po fosfato. A Figura 21 apresenta o voltamograma. Neste voltamograma possvel obser-
var o pico referente ao mediador, no valor -120 mV. Esse pico deve ser relativo ao primeiro
estgio de oxidao do composto, que j pode ser observado no voltamograma cclico ante-
rior (Figura 20), como um pequeno ombro na regio de potencial prxima de -100mV. A
modificao com o meldola blue tambm foi eficiente, no tendo sinal de perda de material
para a soluo, visto que no ocorreu mudana na soluo do eletrlito.
36

-0,4 -0,3 -0,2 -0,1 0,0 0,1 0,2
4,0x10
-6
8,0x10
-6
1,2x10
-5
1,6x10
-5
2,0x10
-5
2,4x10
-5
i

/

A
E / V



Figura 201: Voltametria de pulso diferencial para eletrodo de carbono modificado com mediador
meldola blue.


5.5 Sinal Voltamtrico do Sensor Compsito Modificado com Ftalocia-
nina de Cobalto.

Aps o tratamento especfico, o eletrodo foi avaliado em meio eletrlito tampo
fosfato pH 7,2, primeiramente por voltametria cclica. A Figura 22 apresenta o voltamo-
grama cclico para o compsito modificado com ftalocianina de cobalto. A partir do volta-
mograma nota-se que este eletrodo forneceu o sinal bsico caracterstico do tampo fosfato.
Os estudos de voltametria de pulso diferencial tambm no evidenciaram sinal de pico no
voltamograma O sinal deste mediador eletroqumico no tem sido evidenciado fortemente
em meio de tampo fosfato pela literatura.

37

0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
-4,0x10
-6
-2,0x10
-6
0,0
2,0x10
-6
4,0x10
-6
6,0x10
-6
8,0x10
-6
1,0x10
-5
1,2x10
-5
i

/

A
E / V



Figura 212: Voltametria cclica para o eletrodo de carbono modificado com mediador ftalocianina
de cobalto em PBS 7,2.

.














3;

6 CONCLUSES.

O sensor compsito obteve resultados satisfatrios, com sinais caractersticos
do composto ferricianeto em meio de tampo fosfato, o que evidencia que a composio
proposta de grafite/resina satisfatria. Os estudos de estabilidade de sinal tambm confir-
maram essa proposta inicial.
Este eletrodo foi modificado primeiramente com TCNQ, modificao esta que
foi detectada pela tcnica de voltametria cclica, com sinal eletroanaltico dentro do espera-
do, de acordo com a literatura, indicando que a porcentagem em massa de TCNQ no com-
psito adequada.
A modificao com azul de metileno foi a que apresentou o resultado menos sa-
tisfatrios, pois o teste de estabilidade revelou uma perda significativa do sinal, que ocorreu
em funo da perda do mediador pelo eletrodo para a soluo. Este fato ainda constitui um
problema a ser solucionado. No caso do meldola blue os resultados foram satisfatrios,
porm os valores de potenciais de pico diferiram bastante entre si quando relatados pela
voltametria cclica e de pulso diferencial. Os picos relativos aos processos redox obtido na
voltametria cclica no se apresentaram de forma bem definida, evidenciando problemas na
cintica do processo.
A modificao com ftalocianina de cobalto no demonstrou picos caractersti-
cos, o que no inviabiliza avaliao futura de processos de mediao, uma vez que estes
nem sempre tem sido relatados na literatura, porm, a mediao enzimtica tem sido apre-
sentada de forma eficiente com este mediador.
Comparando-se os sistemas modificados com os mediadores, o TCNQ seria o
mais apropriado para construo de biossensores com processo de transferncia eletrnica
mediada, visto que apresentou melhores sinais eletroanalticos de caracterizao.
O presente trabalho demonstrou que vivel a construo de eletrodos comp-
sitos baseados em grafite e resina, montados com material alternativo em laboratrio, o que
barateia os custos e coloca uma nova base para construo de sensores na UFMA. Estes
podem ser rapidamente modificados com material mediador, o que viabiliza a construo
futura de biossensores eletroanalticos de segunda gerao.


3=

7 PROPOSTAS FUTURAS
1. Estudo do comportamento de sensores modificados com mais de um mediador no
mesmo invlucro.

2. Aplicao dos eletrodos modificados em processos enzimticos para comparao de
melhor mediao cataltica.

3. Construo e aplicao de biossensores mediados.





















45

8 REFERNCIAS

ALEGRET, Salvador; Biosensores: una convergencia de tecnologias avanzadas In: Bios-
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