Instituto de Ciencias Biolgicas

UNIVERSIDAD DE TALCA





Bases Biolgicas y Bioqumicas
Laboratorio 4, 17 de Junio de 2014
Odontologa

OBSERVACION Y FUNCIN DE ORGANELOS CELULARES
I. Mitocondrias.
La respiracin celular es el conjunto de reacciones bioqumicas por las
cuales determinados compuestos orgnicos son degradados completamente, por
oxidacin, hasta convertirse en sustancias inorgnicas, proceso que rinde energa
(en forma de ATP) aprovechable por la clula. En eucariotes, el proceso completo
puede ser dividido en tres etapas, tres de las cuales se realizan en la mitocondria.

La primera etapa ocurre en el citoplasma y concluye con la formacin de 2
molculas de cido Pirvico, si el sustrato es glucosa. Estas ingresan a la matriz
mitocondrial para ser metabolizadas completamente en el ciclo de Krebs, dando
como producto CO
2
y electrones o equivalentes reductores (NADH
2
, FADH
2
). Los
equivalentes reductores pasan a la cadena respiratoria (tambin llamada cadena
de transporte de electrones) ubicada en la membrana interna mitocondrial, donde
se utiliza oxgeno como ltimo aceptor de electrones, formndose agua y
generndose un gradiente de protones entre el espacio intermembrana y la matriz
mitocondrial que, finalmente, permite la formacin del nucletido adenosin-
trifosfato (ATP), lo cual es mediado por el complejo Fo-F1 de la ATP sintetasa, en
una etapa llamada fosforilacin oxidativa.

Estas tres ltimas fases (el cclo de Krebs, la cadena respiratoria y la
fosforilacin oxidativa) se producen solo si el medio es aerbico y las clulas
poseen mitocondrias. En todo el proceso participa gran cantidad de enzimas y se
verifican muchas reacciones de xido reduccin.


MATERIALES.

! Solucin de glucosa al 5%
! Microscopio compuesto
! Porta y cubre objetos
! Verde de Janus al 0.001 P/V
! Aceite de inmersin
! Agua destilada
! Caja de Petr
! 24 horas antes de la prctica, agregar 10 granos de levadura a 5 cc de
solucin de glucosa al 5%. La suspensin se incuba a temperatura ambiente y
sin cubrir el envase (ambiente aerbico). Transportarla de igual manera.








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Laboratorio 4, 17 de Junio de 2014
Odontologa

PROCEDIMIENTO.

A. Observacin Microscpica de Levaduras:

Coloque sobre un portaobjetos bien limpio dos gotas de agua y agregue un
granito de levadura. Agite suavemente la suspensin hasta que la levadura est
bien repartida en toda el agua.

Observe al microscopio, primero con lente de aumento menor, luego con
aumento mayor y finalmente con objetivo de inmersin. Construya esquemas de lo
observado y complete su informe de laboratorio.

B. Observacin de Mitocondrias:

Coloque en una caja de Petr 5 gotas de levadura en incubacin, agregue
una gota de colorante verde de Janus y deje actuar durante 2 minutos. Luego de
hacer una preparacin microscpica, obsrvela con el objetivo de inmersin.
Seleccione levaduras grandes donde pueda observar las mitocondrias y el ncleo
de las clulas. Haga esquemas de lo observado y complete su informe de
laboratorio.

2. Actividad Catalasa

El trmino peroxisoma fue introducido por De Duve para identificar cualquier
microcuerpo que presente la secuencia flavn oxidasa-catalasa. Los peroxisomas
son cuerpos delimitados por una membrana y contienen algunas enzimas. Son
abundantes en las clulas hepticas y en la de los tbulos renales, pero muy
escasos o ausentes en otros tipos de clulas.

Los peroxisomas contienen enzimas que actan catalizando reacciones
utilizando oxgeno molecular con formacin de agua oxigenada:




El agua oxigenada es un producto txico, que se degrada rpidamente
dentro del propio peroxisoma por la enzima oxidativa CATALASA, en agua y
oxgeno. Esta enzima constituye alrededor de 40% del total de protenas del
peroxisoma.





Los peroxisomas adems de compartir con las mitocondrias la utilizacin de
oxgeno molecular en la clula, tambin realizan !-oxidacin de cidos grasos, en
especial aquellos de cadena larga, para su completa oxidacin en las mitocondrias.
RH
2
+ O
2
R + H
2
O
2

Flavin-Oxidasa
2H
2
O
2
2H
2
O + O
2
(gas)


Catalasa

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Odontologa

MATERIALES.

! Cpsula petri
! Papa y rbano*
! Agua oxigenada (Perxido de hidrgeno)
! Trozo de hgado y rin de cerdo o ave.
! Hojas de afeitar (dos)
El material marcado con asterisco lo aporta el estudiante por grupo.

PROCEDIMIENTO:
Para poder estimar la velocidad de reaccin considere una escala entre 0 y 5 (0 = no
hay reaccin; 1 = muy lento; 5 = muy rpido). Registre los datos en una tabla.

A. Actividad de la Catalasa de Tejido Vegetal sobre Agua Oxigenada.

Haga un corte fino de rbano y uno de papa, cuyas dimensiones sean iguales.
Coloque cada uno en diferente cajas Petri. Agregue sobre cada trozo tres gotas de
H
2
O
2
. Qu observa?.

B. Actividad de la Catalasa de tejidos animales sobre Agua Oxigenada.
Hacer un corte fino de tejido heptico y renal, cuyas dimensiones sean iguales.
Colquelos sobre diferentes placas Petri y agregue tres gotas de agua oxigenada.

Tejido/Escala 0 1 2 3 4 5
Papa
Rbano
Hgado
Rin

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Cul es el tejido con mayor actividad y cul el que tiene menor actividad?
Qu tienen en comn y en qu se diferencian?.
Mencione algunos procesos metablicos de la clula que producen H
2
O
2
.
El H
2
O
2
se usa frecuentemente, como antisptico. Por qu? .
Cuando es agregado a heridas produce burbujas. Qu indica esto?.