CULTIVO DE

MICROORGANISMOS
UNIVERSIDAD
POLITCNICA DE
HUATUSCO
Pequeo tamao:
Micrmetros,
Poca informacin
Cultivos
Cultivos
un cultivo es un mtodo para la
multiplicacin de
microorganismos tales como
bacterias y hongos en el que se
prepara un medio ptimo para
favorecer el proceso deseado. Un
cultivo es empleado como un
mtodo fundamental para el
estudio de microorganismos.
La microbiologa en esencia
Aislamiento de
microorganismos
Cultivo
Los microorganismos son ubicuos, por lo que
la preparacin de un cultivo puro implica no
slo el aislamiento de un determinado
microorganismo a partir de una poblacin
microbiana natural mixta, sino tambin el
mantenimiento del individuo aislado
(descendencia) en un ambiente artificial en
el que se impide el acceso de otros
microorganismos.
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las
condiciones fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que
puedan multiplicarse de forma controlada.
Los medios de cultivo son las soluciones de nutrientes utilizadas
para cultivar microorganismos en el laboratorio.
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo consiste en un gel o una
solucin que cuenta con los nutrientes necesarios
para permitir (bajo condiciones favorables de pH y
temperatura) el crecimiento de microorganismos.
Generalmente se presentan desecados en forma de
polvo fino o granular antes de ser preparados, al
prepararse podemos encontrarlos en estado slido,
semislido y lquido.
Los nutrientes contenidos en un medio de cultivo son
las sustancias que requieren los microorganismos
para la sntesis de sus materiales celulares y para
efectuar sus actividades metablicas (de inters o no).
Los microorganismos necesitan diferentes tipos de
nutrientes y no todos se necesitan en la misma
cantidad.
MEDIOS DE CULTIVO
Macronutrientes
Micronutrientes
(elementos traza)
Factores de
crecimiento
En un nivel elemental, los requerimientos
nutricionales de bacterias como E. coli son revelados
por la composicin elemental de la clula, que
consiste en C, H, O, N, S. P, K, Mg, Fe, Ca, *Mn, y
trazas de Zn, Co, Cu, y Mo.
Los elementos se encuentran en forma de agua,
iones inorgnicos, pequeas molculas, y
macromolculas que sirven tanto al rol estructural
como funcional en las clulas.
MACRONUTRIENTES
Element
o
Fuente Funcin
C Componentes orgnicos o CO
2
Principal constituyente de
material celular
O
H
2
O, componentes orgnicos, CO
2
, y
O
2
constituyente de material
celular y agua celular; O
2
es
aceptor de electrones en la
respiracin aerbica
N
NH
3
, NO
3
, componentes orgnicos,
N
2
Constituyente de aminocidos,
nucletidos de cidos nucleicos,
H H
2
O, componentes orgnicos, H
2
Principal constituyente de
componentes orgnicos y agua
celular
P Fosfatos inorgnicos (PO
4
)
Constituyente de cidos
nucleicos,, fosfolpidos
S
SO
4
, H
2
S, So, componentes de azufre
orgnico
Constituyente de cistena,
metionina, varias coenzimas
K y Mg Sales de potasio y magnesio
Catin inorgnico celular
principal y cofactor para ciertas
enzimas
Ca Sales de calcio
Catin inorgnico celular,
cofactor para ciertas enzimas y
un componente de endosporos
Fe Sales de hierro
Componente de citocromos y
ciertas protenas del hierro
Los elementos en trazas son iones metlicos requeridos
por ciertas clulas en cantidades tan pequeas que es
difcil detectarlos y no es necesario agregarlos al medio de
cultivo como nutrientes.
Los elementos en trazas son requeridos en cantidades tan
pequeas que estn presentes como contaminantes del
agua u otros componentes del medio.
Como iones metlicos, los elementos en trazas
habitualmente actan como cofactores para reacciones
enzimticas esenciales en la clula.
Un elemento en traza de un organismo puede ser un
elemento requerido por otro y viceversa, pero los cationes
habituales calificados como elementos en trazas en la
nutricin bacteriana son Mn, Co, Zn, Cu, y Mo.
MICRONUTRIENTES
Los factores de crecimiento son compuestos orgnicos
que, como los micronutrientes , se necesitan en muy
pequeas cantidades y slo en el caso de algunas
clulas.
FACTORES DE CRECIMIENTO
Aminocidos
Constituyentes de
protenas
Purinas y
Pirimidinas
Constituyentes
de cidos
nucleicos
Vitaminas
Compuestos
orgnicos que
forman parte de
grupos prostticos
o centros activos
de enzimas
CULTIVO DE MICROORGANISMOS EN EL
LABORATORIO
Una vez que un medio de cultivo ha sido preparado y
se ha esterilizado para eliminar todos los
microorganismos, puede ser inoculado con los
microorganismos de nuestro inters.
El cultivo es incubado en condiciones que favorezcan
al crecimiento microbiano.
pH Temperatura Oxgeno
*Luz
CULTIVO DE MICROORGANISMOS EN EL
LABORATORIO
Para crecer en la naturaleza o en el
laboratorio, un microorganismo debe
tener un rango permisivo de
condiciones fsicas como concentracin
de O
2
, temperatura, y pH.
A veces las bacterias son referidas
individualmente o en grupos basados
en sus patrones de crecimiento bajo
varias condiciones qumicas
(nutricionales) o fsicas. Por ejemplo,
los fottrofos son organismos que
utilizan la luz como fuente de energa;
los anaerobios son organismos que
crecen sin oxgeno; los termoflicos son
organismos que crecen a altas
temperaturas.
CULTIVO DE MICROORGANISMOS EN EL
LABORATORIO
La inoculacin de un medio de cultivo procede, casi siempre, de
un cultivo puro.
Se desarrolla a partir de una clula nica y que pertenece a la
misma especie y cepa.
Los organismos no deseados, llamados contaminantes, son muy
ubicuos, por lo que se han diseado tcnicas microbiolgicas para
evitarlos
Las tcnicas de cultivo en medio slido inmovilizan
las clulas permitindolas crecer y formar masas
aisladas visibles llamadas colonias.
Las colonias bacterianas pueden ser de forma y
tamao variable dependiendo del organismo, de las
condiciones del cultivo, suministro de nutrientes, etc.
Algunas bacterias producen pigmentos que colorean
las colonias.
Las placas que contengan mas de un tipo de colonia
indican cultivo contaminado.
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS SLIDOS)
(a) esterilizar un asa de siembra por flameado (b) introducirla en la suspensin bacteriana para
recoger una muestra, (c) sembrar haciendo estras sobre la superficie de un medio slido en una
placa Petri, y (d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un
segundo grupo de estras en una regin nueva de la placa. Repetir el proceso una tercera y una
cuarta vez, hasta que los grupos de clulas se diluyan y se separen clulas aisladas. Para estar
seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia aislada y
sembrar por estras una segunda placa.
METODO DE SIEMBRA EN ESTRA
METODO DE VERTIDO EN PLACA
(a) hacer diluciones seriadas de la suspensin bacteriana hasta obtener una
muestra con slo unos pocos cientos de bacterias, (b) verter la muestra en un tubo
con agar a sobrefusin, mezclar y verter el contenido en una placa Petri. (c)
Despus de la incubacin, se desarrollan colonias en el agar (ms pequeas) y en
su superficie (ms grandes).
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS SLIDOS)
Antibiticos
Las bacterias varan su sensibilidad a la penicilina
A concentraciones elevadas la penicilina es txica para los procariotas
Purificacin de protozoos, hongos, etc., contaminados con procariotas
Procariotas son insensibles a antibiticos polinicos
Nistatina para la purificacin de cultivos bacterianos
contaminados con clulas eucariticas
SUSTANCIAS SELECTIVAMENTE INHIBITORIAS
MEDIOS INCLINADOS
Es empleado para
resembrar cepas aisladas,
ya sea para su
identificacin posterior o
para base de cultivo.
Siempre debe hacerse cerca
el mechero, y flameando la
entrada del tubo.
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS SLIDOS)
SIEMBRA EN MEDIOS INCLINADOS
Se pueden usas para identificar cada tipo de bacteria, a travs de
caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo
especiales.
As el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales
que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se
aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los
nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos.
Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan
gases que pueden ser detectados cuando el cultivo se realiza en un
tubo cerrado.
Cultivo de microorganismos en el laboratorio
(MEDIOS SLIDOS)
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS SLIDOS)
TUBO INCLINADO VS SIEMBRA EN PLACA
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS SLIDOS)
CULTIVO POR PICADURA
En este mtodo el material para
la investigacin es colocado en un
alambre recto e introducido al
medio.
Debe cuidarse que el trayecto sea
mismo el de entrada que el de
salida
Puede ser empleado para
conservar cultivos patrn.
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS SLIDOS)
Si el microorganismo crece en un medio
lquido, en la mayora de los casos las
clulas que se producen en cada divisin
continan su vida independientemente
formndose una suspensin de clulas
libres.
Se pueden diferenciar cuatro fases en la
evolucin de los parmetros que miden el
crecimiento microbiano:
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS LQUIDOS)
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS LQUIDOS)
1.- Fase lag o de adaptacin microorganismos adaptan su
metabolismo a las nuevas condiciones ambientales para iniciar
la fase de crecimiento exponencial.
2.- Fase exponencial o logartmica: la velocidad de
crecimiento es mxima y el tiempo de generacin es mnimo.
Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad mxima
los nutrientes del medio.
3.- Fase estacionaria: no se incrementa el nmero de
bacterias. Se produce una acumulacin y liberacin de
metabolitos secundarios. Entran en esta fase porque se agota
algn nutriente o porque los productos de desecho durante la
fase exponencial hacen al medio inhspito
4.- Fase de muerte: se produce una reduccin del nmero de
clulas viables del cultivo.
Cultivo de microorganismos en el
laboratorio (MEDIOS LQUIDOS)