LAS BIOPELCULAS BACTERIANAS RESISTEN A LAS DEFENSAS CLAVES DEL HUSPED

Una vez en las biopelculas, las bacterias patgenas resisten a antibiticos y soportan una serie de medidas de defensa
del husped, incluyendo la fagocitosis.
Jeff G. Leid es Director Asociado y Profesor Asociado en el Centro de Gentica y Genmica Microbiana de la Universidad
del Norte de Arizona, Flagstaff.
Resumen
Muchos patgenos bacterianos forman comunidades complejas llamadas biopelculas (biofilms) que causan
infecciones crnicas y resisten a los tratamientos estndar.
En ambientes naturales, los biofilms probablemente sirven como un factor importante de supervivencia, haciendo
posible que los microorganismos puedan adaptarse a las condiciones cambiantes colectivamente en vez de como clulas
individuales.
El alginato exopolisacrido protege a la P. aeruginosa, en parte, a travs de un proceso llamado fagocitosis "frustrada",
en la que los macrfagos y neutrfilos la encuentran pero ya no pueden engullir este patgeno.
Las bacterias han intrigado mucho, aterrorizado y confundido a los humanos. Aunque la mayora de los microorganismos
no son patgenos para el ser humano, se tiene el pensamiento de que los microbios existentes en todas partes pueden
tener un efecto dramtico en la psique. Una vez que los trminos especializados y acrnimos, como estafilococos, por
Staphylococcus aureus, MRSA, por S. aureus resistentes a la meticilina y XDR, por extensivamente farmacorresistente
Mycobacterium tuberculosis, ahora son eslganes en los medios de comunicacin. En vista de esto y de varios brotes
recientes de enfermedades transmitidas por los alimentos, es fcil de rastrear el origen de algunos de los efectos
psicolgicos.
Sin embargo, a pesar de que los cientficos han estado estudiando estos patgenos durante casi dos siglos, cada vez ms,
los investigadores creen que se trata de cmo estas bacterias viven lo que puede realmente importar en trminos de las
enfermedades que causan. Una cuestin clave es si viven como "organismos planctnicos" unicelulares o como
comunidades complejas denominadas biofilms que causan infecciones crnicas por resistir los tratamientos antibiticos
estndar y escapar de las fuerzas destructivas del husped. Varios patgenos bacterianos forman biopelculas que
tienen complejas interacciones con los componentes del sistema de defensa innata del husped. Descifrar estas
interacciones podra conducir a nuevas terapias, biofilm especficas.
Definicin de biopelculas y Cmo resisten a las drogas y las defensas del husped
Figura 1

Representacin de la naturaleza
dinmica de una comunidad de biofilm.
La comunidad comienza a formarse
cuando las clulas individuales llamadas
bacterias planctnicas se adhieren a
una superficie animada o inanimada,
que normalmente est condicionada
para mejorar la fijacin. Como las
clulas individuales se adhieren fuertemente, y se amplan en nmero, se rodean por una matriz extracelular. A medida
que la comunidad madura, en parte por la comunicacin de clula a clula (sealizacin), partes de la biopelcula
pueden dispersarse, migrar, o la comunidad puede seguir para desarrollarse en una poblacin heterognea de clulas
que son metablicamente, fisiolgicamente y genticamente distintas unas de otras. Si los reservorios de fijacin
adecuados se encuentran disponibles por debajo del evento de dispersin, todo el ciclo puede comenzar de nuevo.
Las biopelculas se componen de las comunidades o grupos de microorganismos que se adhieren a las superficies de los
objetos animados, tales como las vlvulas del corazn, huesos o tejidos, o a objetos inanimados tales como vlvulas
cardacas artificiales, implantes protsicos, o catteres (Fig. 1). Uno de los mejores ejemplos de una biopelcula en un
tejido humano es la placa dental, que consiste en una comunidad de microorganismos que inicialmente se adhieren a las
superficies del diente. Si no se molesta, sus productos pueden penetrar en el esmalte de los dientes, causando caries, y
eventualmente progresar a enfermedad del tejido blando, tal como periodontitis.
Las comunidades biofilm de microbios son diferentes de sus homlogos planctnicas de maneras muy importantes. En
primer lugar, cuando los microbios viven como una comunidad, se vuelven mucho menos susceptibles a los antibiticos,
incluso si son altamente susceptibles como clulas individuales. Por lo tanto, cuando los microorganismos forman una
comunidad, se encuentran protegidos contra una variedad de antibiticos que los mdicos prescriben comnmente
para sus pacientes. En segundo lugar, y ms el foco de esta perspectiva, estas comunidades de microorganismos resisten
el ataque y la destruccin por el sistema inmune del husped.
Las comunidades biofilm se encuentran en prcticamente todos los hbitats. En ambientes naturales, probablemente
constituyen un factor importante de la supervivencia, permitindole a los organismos adaptarse a las condiciones
cambiantes colectivamente en vez de como clulas individuales. Sin duda, el papel de las biopelculas en diversos
entornos ambientales se ha establecido en los ltimos cuatro decenios por numerosos estudios.
Establecer el papel de los biofilms en la medicina ha avanzado mucho ms lentamente, por una variedad de razones. En
primer lugar, las herramientas moleculares necesarias para la investigacin de las infecciones de biopelculas-de
secuenciacin de alto rendimiento, hibridacin fluorescente in situ, y el anlisis global de genes-slo ahora estn
llegando a ser ampliamente disponibles. A medida que estas herramientas se vuelven ms comunes en la medicina,
tambin lo hace nuestra comprensin del papel de los biofilms en las enfermedades infecciosas. Otros factores que
probablemente juegan un papel, incluyen los recursos limitados de biofilm especficos, el conocimiento cientfico en
general limitado sobre los microorganismos vivientes como comunidades, y la renuencia a hacerse de lado 160 aos de
conocimientos cientficos y mdicos de los microbios, como organismos planctnicos unicelulares que viven un estilo de
vida individualista.
Mecanismos de resistencia de los biofilm a las defensas del husped
Penetracin limitada de leucocitos y sus productos en el biofilm
Reguladores de respuesta global y la Percepcin de qurum que protegen a las bacterias del biofilm
Capacidad fagocitica disminuida de las clulas anfitrionas contra las bacterias del biofilm
Interruptores genticos que incrementan la resistencia de las bacterias del biofilm
Supresin de la funcin efectora leucocitaria, incluyendo magnitud de la explosin respiratoria
Algunos atributos estructurales se consideran universales para las biopelculas. Por ejemplo, que contienen macro-y / o
microcolonias de clulas bacterianas que estn separadas de otras microcolonias por espacios intersticiales. El flujo de
lquido dentro de estos espacios, o canales, permite que los nutrientes, gases, y agentes antimicrobianos difundan a lo
largo de la biopelcula. Mientras que las biopelculas tienen caractersticas estructurales comunes, su arquitectura est
cambiando constantemente en respuesta a los procesos internos y externos. Por otra parte, los organismos individuales
en s son heterogneos dentro de cada comunidad biofilm. La proximidad de las clulas dentro o entre las microcolonias
es ideal para el intercambio de plsmidos extracromosmicos, nutrientes, y las molculas de Percepcin de qurum
(molculas de comunicacin). Los microorganismos asociados a los Biofilm han reducido dramticamente la
susceptibilidad a los agentes antimicrobianos y a las defensas inmunitarias del husped. Uno de los mecanismos
caractersticos de la resistencia dentro de las biopelculas es que las bacterias en dichas comunidades regulan la
expresin gnica de una manera coordinada que est mediada por la comunicacin bacteriana.
Las bacterias en las biopelculas se resisten a los antibiticos a travs de varios mecanismos, incluyendo (i) la
penetracin reducida o difusin de agentes antimicrobianos en los biofilms, (ii) aumento de la actividad de bombas de
flujo multifrmacos, (iii) la participacin de los sistemas de Percepcin de qurum, (iv) respuestas a la inanicin o estrs,
y (v) los interruptores genticos que transforman las clulas planctnicas susceptibles en persisters resistentes a los
antibiticos. Mientras tanto, los mecanismos que permiten que las bacterias en las biopelculas resistan a las defensas
del husped son menos bien caracterizado, pero incluyen (i) la penetracin limitada de los leucocitos y sus productos
bactericidas en la biopelcula, (ii) reguladores de respuesta global y las actividades de Percepcin de qurum que
aumentan la resistencia a los leucocitos , (iii) disminucin de la capacidad de los leucocitos a fagocitar bacterias del
biofilm, (iv) interruptores genticos que aumentan la resistencia de las clulas bacterianas en las biopelculas al sistema
inmune, y (v) la supresin de la actividad de los leucocitos a travs de la regulacin efector (vase la tabla). Las opciones
de tratamiento para los mdicos que luchan con infecciones por biofilm son limitadas. Una de las nicas herramientas
eficaces es la extirpacin o extraccin de los tejidos infectados. Esta estrategia tiene xito slo si se elimina todo el
tejido infectado y el tejido circundante se mantiene saludable mientras se regenera. La recolonizacin de este nuevo
tejido por la flora comensal de biopelculas es probablemente un atributo importante que facilita el proceso de curacin.
Adems del desarrollo de nuevos antimicrobianos biofilm especficos, una mejor comprensin de cmo las comunidades
del biofilm evaden las respuestas inmunes del huesped es fundamental.
Ejemplos clsicos de Infecciones por Biofilm
Un ejemplo clsico de infecciones por biofilm en los seres humanos es P. aeruginosa asociada con los pulmones de
pacientes con fibrosis qustica (FQ). Por el perodo en que los pacientes tienen 16-20 aos de edad, este patgeno (entre
otros) habr colonizado los pulmones del 90% de ellos, lo que representa la morbilidad crnica y un aumento del riesgo
de mortalidad temprana. Hace ms de cuatro dcadas, J. William (Bill) Costerton, que ahora trabaja en el Instituto de
Allegheny-Singer Research in Pittsburgh, Pensilvania, inform que biofilms de P. aeruginosa se forman en los pulmones
de estos pacientes. Estudios recientes realizados por Pradeep Singh y sus colegas de la Universidad de Washington
Escuela de Medicina han cimentado esta observacin inicial, demostrando las firmas moleculares de comunicacin
bacteriana en los pulmones de pacientes con fibrosis qustica. Tambin sealan que la lactoferrina, una protena con
gran afinidad por iones hierro, puede prevenir el desarrollo del biofilm de P. aeruginosa en modelos de laboratorio de la
infeccin.
Los biofilms de P. aeruginosa tambin se forman cuando este patgeno infecta a la crnea, la piel de pacientes con
quemaduras o dispositivos mdicos implantados, y en los que tambin estn infectados con VIH. En todos estos casos, el
sistema inmune del husped esta marginalmente o gravemente comprometido. Uno de los mecanismos clave
antibacteriano dentro del sistema inmune innato depende de los fagocitos, incluyendo los neutrfilos y los macrfagos,
que envuelven y matar a los microorganismos. Este mecanismo de defensa es muy eficaz contra muchos tipos de
patgenos cuando viven como organismos individuales, planctonicos.

Figura 2

Esquema animado de la fagocitosis frustrada que se
produce como respuesta de los fagocitos a
microorganismos que forman biopelculas. (A)
Representacin de un fagocito humano que responde a
una infeccin planctnicas (bacterias rojas). Los
Anticuerpos del husped, los antibiticos, y la clula
fagoctica estn bien equipados para matar a estos tipos
de clulas. A medida que una biopelcula se desarrolla
(B-D), anticuerpos, antibiticos e incluso fagocitos del
husped podrn tener acceso a las bacterias dentro de
estas comunidades, pero los fagocitos anfitriones no
pueden engullir y matar a las bacterias. Sin embargo, los
agentes patgenos del biofilm son reconocidos por el
fagocito, que induce la liberacin de enzimas y otros
compuestos txicos, causando la muerte de las clulas
del husped sanas (C-D). Los desechos necrticos a
continuacin, pueden convertirse en sustrato adicional
para que la comunidad de la biopelcula se expanda.
Sin embargo, este proceso es menos eficaz cuando los fagocitos encuentran bacterias en las biopelculas-un fenmeno
llamado fagocitosis frustrada (fig. 2). Cuando tales macrfagos "frustrados" y neutrfilos las encuentran, pero no pueden
engullir las bacterias en las biopelculas, ellos se activan y secretan compuestos txicos que daan los tejidos sanos
cercanos del husped.
En algunos casos, las biopelculas modulan la eficacia de dichas molculas efectoras. Cuando los neutrfilos se
encuentran con biofilms de P. aeruginosa, producen menos de superxido en comparacin a cuando se encuentran con
la forma planctnica de este patgeno. Otros respuestas de neutrfilos anfitriones tanto dependientes de oxgeno
(xido ntrico) y oxgeno independientes (lisozima, lactoferrina) tambin se reducen en magnitud en respuesta a
biopelculas de P. aeruginosa. Aunque los mecanismos detrs de estas reducciones no se entienden completamente, los
microorganismos que forman biopelculas en general modulan la respuesta del husped de modo que o bien se reduce
en magnitud o no se producen en contra de la comunidad bacteriana.
El alginato es un determinante clave en la virulencia de Biofilms P. aeruginosa
Uno de los determinantes de virulencia ms estudiado intensamente de P. aeruginosa es el alginato de exopolisacrido
viscoso, que muchas, pero no todas, las cepas productoras de biofilm generan. Este importante componente
extracelular de cepas mucoides de P. aeruginosa expele el hipoclorito, reduce la quimiotaxis de polimorfonucleares,
inhibe la activacin del complemento, y disminuye la fagocitosis por los neutrfilos y los macrfagos. Cuando se produce
en niveles altos, el alginato, incluso puede proteger este patgeno contra protozoos del suelo.



Figure 3
En los biofims de Pseudomonas aeruginosa, el alginato de
exopolisacrido protege a las bacterias del biofilm del
engullimiento y eliminacin por macrfagos. Cuando los
macrfagos se encuentran con bacterias P. aeruginosa de las
biopelculas que carecen de alginato, pueden ser engullidos y
destruidos. Sin embargo, si las bacterias de biopelcula se
transforman a un fenotipo mucoide, donde el alginato est
presente, los macrfagos todava responden a la presencia de
la comunidad patgena, pero que ya no son capaces de
envolver y matar a estos organismos.



La expresin de alginato es un proceso gentico estrechamente regulado. Aunque los anticuerpos que se dirigen contra
el alginato ayudan en la destruccin celular de biofilms de P. aeruginosa, comparado con los anticuerpos de los
pacientes con FQ fallan al hacerlo. Posteriormente, se encontr que la red de polisacrido alginato protege bacterias de
las biopelculas contra la fagocitosis y destruccin por los macrfagos humanos (Fig. 3). Mientras tanto, George O'Toole
y sus colaboradores en la Escuela de Medicina de Dartmouth, Hanover, NH, y en el Centro de Biofilm Engineering de la
Universidad Estatal de Montana en Bozeman mostraron una relacin directa entre la resistencia a los antibiticos en las
bacterias del biofilm y la regulacin gentica biofilm especfica.
El Alginato tambin puede influir en las citocinas humanas que ayudan a dirigir la respuesta del sistema inmune. Para
mayor claridad, los cientficos han dividido citoquinas en una variedad de categoras. Las Citoquinas Th1 dirigen
respuestas mediadas por clulas, mientras que las Th2 dirigen respuestas humorales o mediadas por anticuerpos. Los
microorganismos a menudo son capaces de regular esta respuesta del husped a su favor. Por ejemplo, alginato regula
al elevar dos citocinas de tipo Th1, la interleucina-12 (IL-12) y factor de necrosis tumoral-a (TNF-a). Sin embargo, a pesar
de que el alginato suscita en el husped producir niveles ms altos de estas citoquinas Th1, las bacterias de las
biopelculas tienen mecanismos que bloquean o inhiben la muerte celular mediada. La comprensin de estos
mecanismos de resistencia es una de las claves para el desarrollo de terapias antibiofilm.
Otros mecanismos resistencia al husped en Biofilms P. aeruginosa
La expresin de Flagelos se regula cuando las clulas de P. aeruginosa individuales se adhieren a las superficies,
mientras se da la formacin de biopelculas. A medida que se comienzan a adjuntar, estas bacterias expresan flagelos, lo
que puede ayudar a las clulas en una variedad de formas. Ms tarde, cuando la biopelcula madura y la comunidad es
cada vez ms heterognea, la expresin de flagelos es dramticamente regulada disminuyndose. Sin embargo, cuando
las bacterias dentro de un biofilm se preparan para dispersarse, la produccin de flagelos es una vez elevada,
presumiblemente para mejorar la motilidad de las clulas individuales, as como su capacidad para evadir las defensas
inmunitarias del husped. Los experimentos sugieren que los flagelos tambin regulan la susceptibilidad de los
microorganismos que forman biopelculas a las defensas del husped. En las clulas del biofilm de P. aeruginosa que
carecen de flagelos, la lactoferrina secretada por los neutrfilos mata estas bacterias.
Otros estudios sugirieron que las clulas mononucleares (linfocitos y monocitos) y los neutrfilos fueron requeridos para
la destruccin de estas bacterias de las biopelculas y que las citoquinas de estas clulas eran importantes en la
produccin de lactoferrina bactericida. A pesar de la eliminacin de los biofilms bacterianos no entra la fagocitosis, las
citoquinas apropiadas son vitales para generar una respuesta letal. Tanto el interfern-a (IFN-a) y TNF-a se requiere para
la destruccin ptima, con esta ltima citoquina especialmente importante para la obtencin de la muerte mediada por
neutrfilos mediante la induccin de la liberacin de lactoferrina. Este compuesto antibacteriano no slo puede prevenir
la formacin de biopelculas, sino que tambin es directamente bactericida-pero slo en clulas que carecen de flagelos.
El sistema inmune innato humano es complejo pero maravillosamente simple. Dos de los principales componentes
celulares, neutrfilos y macrfagos, muestran tanto medios qumicos y fsicos para la defensa del organismo contra los
patgenos. En el lado fsico, estas clulas se tragan y matan las bacterias. En el lado qumico, estas clulas secretan
agentes oxigeno-dependientes tales como superxido u otras enzimas de oxgeno-independientes, tales como la
lisozima y lactoferrina. El objetivo de estos productos es la destruccin de los invasores extraos, mientras que
mantienen el cuerpo libre de la carga de patgenos.
Varias de estas defensas son extremadamente letales contra planctnicos, microbios unicelulares, y mantienen
eficazmente a un husped sano, sin confianza en el sistema inmune adaptativo. Sin embargo, cuando los microbios
evaden estos componentes del sistema de defensa del husped y luego se adhieren a las superficies para formar
comunidades heterogneas, esas defensas ya no son eficaces. Estas comunidades persistentes pueden llevar a
infecciones crnicas debilitantes en los seres humanos y en ocasiones la muerte. Con el fin de mejorar la salud del
paciente y la supervivencia, la comprensin de las complejas interacciones entre las comunidades biofilm y las defensas
del husped es esencial.