PRCTICA N02

EVALUACIN DE PRODUCCIN DE
ALCOHOL POR LEVADURAS
INMOVILIZADAS Y LIBRES
PRCTICA DE BIOTECNOLOGA N 02
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INMOVILIZADAS Y LIBRES




INTRODUCCIN

La produccin de alcohol se puede obtener con levaduras inmovilizadas o libres. La
inmovilizacin es un proceso que restringe la libertad de movimiento de las levaduras,
ofreciendo de tal manera la reutilizacin y estabilidad de las levaduras, obteniendo
productos libres de clulas.

Uno de los mtodos de inmovilizacin de levaduras es el atrapamiento, proceso que
consiste en la retencin fsica de las clulas en una matriz polimrica (agar al 3 %) a
travs del cual difunden los sustratos y productos. Este mtodo es seguro, barato, suave,
no tan complicado y de larga duracin y actividad celular.

En esta prctica queremos obtener levaduras inmovilizadas para observar y discutir los
resultados obtenidos, as como tambin determinar la produccin de alcohol en
levaduras inmovilizadas y libres de Saccharomyces sp para compararlos y observar en
que fermentador hay una mejor produccin de alcohol.




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I. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:
- Obtener levaduras inmovilizadas.

OBJETIVO ESPECIFICO:
- Determinar la produccin de alcohol por levaduras inmovilizadas y libres
- Determinar los grados Brix por levaduras inmovilizadas y libres

II. PROCEDIMIENTO

1. Reactivacin del cultivo Saccahomyces sp.
Sembrar por estra en tubos de agar PDA + Cloranfenicol la cepa de levadura.
Incubar a temperatura ambiente por 48 72 hrs.

2. Proliferacin celular
A partir de la cepa reactivada sembrar por superficie en una placa de agar PDA
+ Cloranfenicol con la ayuda de un hisopo estril. Incubar a temperatura
ambiente por 48 72 hr.

3. Cosecha de clulas y obtencin de inculo

a) Colocar de 3 ml de caldo glucosado o caldo Sabouraud en la placa sembrada
y 5 perlas de vidrio estril, mover suavemente la placa hasta obtener la
suspensin celular, colocar la suspensin en un matraz estril de 100 ml.
enrazar a 50 ml. con caldo Sabouraud
b) Colocar en agitacin a 180 rpm por 18 horas a temperatura ambiente.
c) Realizar el recuento celular utilizando la cmara de newbauer (10
7
10

Cel/ml).

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4. Inmovilizacin de clulas

a) La suspensin celular se mezcla con 100 ml de agar agar al 3 % fundido a
42C, (concentracin final de levaduras inmovilizadas 10
8
cel/ml).
b) Con ayuda de pipetas estriles con puntas rotas se toma agra agar con
levaduras (mantenido en bao mara a 42C) se deja caer gota a gota en
forma rpida en aceite vegetal, contenido en un frasco de vidrio sumergido
en un recipiente con hielo en forma permanente.
c) Las perlas son lavadas con agua corriente estril y destilada estril en forma
sucesiva para desprender el aceite de su superficie.

5. Produccin de alcohol utilizando las clulas inmovilizadas

Preparar un mosto de fruta de 1200 1500 ml con una concentracin de
azucares reductores que oscile entre 20 y 25 Brix. Agregar las clulas de
levaduras inmovilizadas en agar agra y dejar fermentar por espacio de 10 das.
Realizar las evaluaciones diarias determinando consumo de sustrato (azucares
reductores) utilizando un refractmetro (realizar la curva de consumo de
sustrato/tiempo). Para la determinacin de alcohol se puede utilizar la tabla de
conversin de gravedad especfica Brix, alcohol o el vinmetro.








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III. RESULTADO

EVALUACIN DE PRODUCCIN DE ALCOHOL POR
LEVADURAS INMOVILIZADAS Y LIBRES



LEVADURA Cc
celular
Cel/ml
Volumen
Mosto ml
Mediciones Brix/Da Consumo
Brix
%
alcohol
1 3 4 5 6 7
Inmovilizada 10
8
2000 22 21 15.4 14.5 13.8 11 11 6.5
Libre 10
7
500 22 18.5 15 13 11.5 9 13 7.6









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IV. CONCLUSIN

Se obtuvo levaduras inmovilizadas
La produccin de alcohol en clulas inmovilizadas fue de 6.5 y en
clulas libres de 7.6.
Los grados Brix de las clulas inmovilizadas fue de 11 y en clulas
libres fue de 13

V. DISCUSIN

La inmovilizacin de las levaduras por el mtodo de atrapamiento es ms
recomendable debido a que es un mtodo seguro, barato, suave, no tan
complicado y de larga duracin.
El consumo de azcar para levaduras inmovilizadas es menor (11 Brix) en
comparacin de las levaduras libres (13 Brix), Debido a la diferencia entre
los volmenes de ambos fermentadores. la concentracin de agar no fue la
adecuada y esto evit que el sustrato este en contacto con las levaduras, la
temperatura que indica el procedimiento en bao mara es de 42 a 45C
para el agar y el inoculo pero por la concentracin muy densa del agar se
elev hasta 50C para que el agar este en forma lquida, en consecuencia
pudieron haber muerto cierta cantidad de levaduras lo que no hace efectivo el
consumo de azcar ya que debera haber un mayor consumo de azcar en
levaduras inmovilizadas porque estas son clulas estables. Sin embargo en las
clulas libres segn nuestros resultados mostr tener mayor consumo de
azcar, debido a que no se elev la temperatura, y que las levaduras no se
encontraban atrapadas en gel, sino libres.
El empleo de clulas libres no es lo ms recomendable ya que no son
reutilizables y en la recuperacin de los productos es mucho ms compleja
por no encontrarse puro.





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VI. REFERRENCIA


EDWIN BALDEON CH, VICTOR MEZA C, JULIO GIRALDO H.
Evaluacin de un fermentador conlevaduras (S. cerevisiae)
inmovilizadas en perlas de cermica. Anales Cientficos. UNALM. 2004.
Vol LVIII.

Diana Sossa-Urrego, Mara Anglica Navarro-Acevedo, Adriana
Matiz Villamil. Inmovilizacin de Bacillus licheniformis y
Saccharomyces cerevisiae para la produccin de etanol a partir de
almidn de papa. Catlogo de publicaciones en lnea. Pontificia
Universidad Javeriana - Bogot .Vol. 13 2008

Anna Puig 1, Eva Bertran 1, Margarita Vilavella 1, Teresa Garca-Martnez
2, Juan Carlos Mauricio. Levaduras Inmovilizadas: Evaluacin De Su
Potencial Enolgico Departamento de Microbiologa. Edificio Severo
Ochoa. Universidad de Crdoba. Campus Universitario de Rabanales. 14014
Crdoba. Spain
http://www20.gencat.cat/docs/DAR/OR_Organismes/OR01_INCAVI/O
R01_11_Documentacio_tecnica/Documents/2010/Fitxers_estatics/2010_l
evaduras_bioinmovilizadas_foro_logrono.pdf

















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MATERIALES
Material biolgico:
Cepa de Saccharomices Sp
Racimos de vid
Equipo :
Microscopio
Bao Maria
Refractometro
Incubadora
Materiales de vidrio:
Pipetas
Tubos
Placas Petri
Perlas de vidrio
Frasco Schott
Matraz
Cmara de New Bauer

Otros:
Isopo
Colador
Papel aluminio
Ligas
Embudo

Insumos y reactivos
Agar agar
PDA
Cloranfenicol
Caldo Sabouraud
Agua destilada
Azcar
Aceite
Hielo picado