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Biologia do Desenvolvimento das Plantas Mariana Gonalves Trigo
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I INTRODUO AO DESENVOLVIMENTO DAS PLANTAS

Desenvolvimento: uma nica clula forma um organismo complexo atravs de factores que
controlam o comportamento das clulas, diviso, crescimento, migrao, diferenciao e morte. D-
se desde o crescimento at especializao. Durante este h alterao da forma e funo.

Atributos de uma planta, comuns a muitas formas de vida:
1. Metabolismo e transferncia de Energia
2. Armazenamento e transmisso de informao gentica
3. Estrutura celular e compartimentao intracelular
4. Alteraes de forma e funo durante o perodo de vida

O desenvolvimento controlado pelo tempo e factores ambientais com uma certa
flexibilidade, limitada pelo patrimnio gentico, os limites de cada espcie. o somatrio das
alteraes de forma e funo. a passagem de A B com vrios passos/estados intermdios. O
desenvolvimento no pra em adulto, a senescncia comea gradualmente e limita a actividade at
morte. Os adultos reproduzem-se para manter a espcie. Assim o desenvolvimento cclico, no
linear, de acordo com o ciclo de vida da espcie.

Reproduo

Unicelulares: a clula responsvel pela reproduo;
Pluricelulares: tm tecidos/clulas/rgos especializados para a reproduo, clulas haplides (n)
que unindo-se formam uma estrutura diplide (2n). A meiose forma sempre esporos que vo
diferenciar-se em gmetas, meiose gamtica.

Assexuada: mitsporos, produzidos por mitose, so a unidade de propagao, podem formar-se
unidades mais complexas ou mesmo indivduos.
Sexuada: 2 indivduos de diferentes sexos numa mesma gerao (exclusiva dos eucariontes), 2
clulas de sexos opostos (gmetas) fundem-se (conjugao, singamia) originando o zigoto (2n). Na
ontogenia o zigoto d origem a um organismo 2n completo que mais tarde dar origem a novas
clulas sexuais atravs de uma meiose. Durante este processo ocorre troca de material gentico
entre os cromossomas homlogos paterno e materno (crossing-over) dando origem a novas
combinaes genticas mas mantendo a estrutura cromossmica tpica da espcie.

Ciclos de vida e Alternncia de Geraes

Zigotos mitose organismos diplides pluricelulares (esporfitos) meiose meisporos
mitose organismo haplide pluricelular (protalo/gametfito)

Haplontes: organismos onde o zigoto a nica clula diplide e portanto a meiose ocorre
imediatamente depois da formao do mesmo.
Diplontes: a meiose ocorre imediatamente antes da formao dos gmetas que por conjugao
formam o zigoto.

A maioria das plantas so haplodiplontes mas a contribuio de cada fase para o ciclo de
vida muito varivel. Organismos diplides formam sempre esporos haplides por meiose, que no
so gmetas, dividem-se por mitose dando origem a uma estrutura multicelular haplide, o
gametfito. Nestes ciclos de vida as 2 fases (com origem numa clula vegetativa/germinativa)

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envolvem uma ou mais divises mitticas e do origem a clulas germinativas apresentando
gerao gametfita (n) e esporfita (2n) alternadas. A gerao gametfita inicia-se por germinao
do meisporos num gametfito que produz gmetas. A gerao esporfita comea no embrio por
desenvolvimento do zigoto e forma meisporos.

A gerao que domina o ciclo no tempo ou n de clulas pode ser a gametfita (Brifitas, a
planta o gametfito) ou esporfita (Plantas Vasculares: Pteridfitas, em que o gametfito uma
estrutura reduzida ao protalo e Espermatfitas, gametfito reduzido no constituindo uma entidade
separada).

Ciclo de vida das Plantas Superiores/ Ciclo de Desenvolvimento

Estado/Fase Vegetativa Estado/ Fase Reprodutiva

Fase embrionria Formao de flores
Fase juvenil Formao de sementes
Fase adulta

H desenvolvimento embrionrio e ps-embrionrio. O termo gerao obriga a existncia
de estruturas pluricelulares (em esporo no h gerao) e o termo fases inclui haplide ou
diplide. Incluem coisas diferentes.


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II - COMPONENTES DO DESENVOLVIMENTO

Crescimento: so alteraes quantitativas por aumento de nmero de clulas, diviso celular, cada
clula tem o seu ciclo celular. A durao do mesmo e planos de diviso so fulcrais na forma final
do organismo. (Ex: o cmbio divide-se longitudinalmente). H um aumento de volume e biomassa
que no implica um aumento de substncias, d-se apenas por entrada de gua ocorrendo segundo
uma direco que vai decidir a estrutura. A raiz um excelente modelo para estudar o alongamento
uma vez que tem zonas separadas de diviso, crescimento e diferenciao.

So alteraes quantitativas devido ao aumento do n de clulas pela diviso celular. Cada
clula tem um ciclo especfico de desenvolvimento e a sua durao e orientao dos planos de
diviso tm uma enorme influncia sobre o desenvolvimento dos rgos e forma final do organismo.
H um aumento de biomassa e volume. O aumento da biomassa ocorre aps a mitose, quando o
volume das clulas filhas aumenta at atingir o volume inicial da clula me. O aumento do volume
das clulas filha aumenta at atingir o volume inicial da clula me. Este aumento de volume no
implica necessariamente um aumento geral de substancias orgnicas (frequentemente a quantidade
de citoplasma permanece constante ou diminui ligeiramente). O aumento de volume da clula
devido ao aumento vacuolar (com entrada de gua) acompanhado do estiramento e crescimento da
PC. O alargamento no omnidireccional, polarizado. Em alguns rgos (Ex: razes) as
actividades celulares de crescimento (por diviso ou adio de biomassa) esto espacialmente
separadas do alongamento celular.

Diferenciao: alteraes qualitativas, ocorre tambm a nvel intercelular, normalmente em grupos
de clulas pois quando ocorre isolada resulta geralmente em estruturas quiescentes. H tambm uma
diferenciao histolgica. Ocorre na embriognese e nas plantas adultas, h remoamento do
parnquima cortical, desdiferenciao. H estudos feitos em culturas in vitro que demonstram que
todas as clulas da planta podem regenerar uma planta completa em cultura, excepto as do xilema
que so clulas mortas. A diferenciao depende de sinais qumicos, elctricos, mecnicos e da
polaridade dos genes e sua expresso.

So alteraes qualitativas, morfolgicas e funcionais das clulas e tecidos. Pode
reconhecer-se a nvel de organelos (proplastdeos cloroplastos) mas esta diferenciao celular,
delimitada a uma clula que no seu desenvolvimento se distingue das circundantes, ocorrendo
normalmente em grupos de clulas ou regies especficas diferenciao de tecidos e rgos. A
diferenciao vai desde alteraes macroscpicas na forma, at alteraes microscpicas de
estruturas internas, at alteraes bioqumicas. Nestas alteraes intervm:

Sinais Qumicos: fito-hormonas;
Sinais elctricos: potenciais de membrana influenciados pelo meio;
Sinais Mecnicos: as clulas nos tecidos esto submetidas a presso das clulas vizinhas,
DESENVOLVIMENTO
Diferenciao: alterao da forma e funo das clulas,
forma novas estruturas
Morfognese: formao da forma, corpo,
organizao e simetria
Crescimento: quantitativo, de volume,
aumento do numero de clulas

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dependente do grau de vacuolizao e do tipo de PC;
Genes: expresso gnica diferencial
Polaridade celular

Clulas meristemticas clulas com funes especiais e que no se dividem
Clula diferenciada clula meristemtica rediferencia

Desdiferenciao o rejuvenescimento celular, formao de tecidos de novo, cicatrizao de
injrias por formao de clulas de calo (enxertia). Em culturas in vitro pode-se obter tecido caloso,
cultivar clulas isoladas, protoplastos, clulas isoladas podem ser induzidas a formar novas
estruturas ou levadas a regenerar plantas completas totipotncia celular.

Qualquer clula vegetal completamente diferenciada mas viva e nucleada, pode reter toda a
informao necessria para se desenvolver em qualquer tipo de clula especializada.

Genes e Expresso Gnica

Experincias Hammerling estudam a importncia dos genes na diferenciao celular em mutantes.
de notar o trabalho feito com Acetabularia, em que transplantando o rizide nucleado de B para o
segmento pedicular de A forma-se a estrutura gametangial tpica de A. Mas, se enxisarmos o pice
caulinar de A, j se forma a estrutura gamentangial de B. Ou seja, na enxertia, originada a planta
que corresponde ao ncleo, mas apenas se o pice caulinar for excisado porque l existe mRNA que
quando no retirado forma a planta correspondente a essa informao gentica e no do ncleo.
Os genes nucleares induzem assim o desenvolvimento da estrutura gametangial tpica da espcie.

Expresso Gnica Diferencial
(da sequencia de informao at s actividades celulares dependentes do tempo e local)

Podemos observar que clulas do mesmo tecido expressam genes diferentes por vrias
tcnicas de biologia molecular e tcnicas in situ, que nos permitem estudar os genes e seu produtos
gnicos e investigar o estado molecular de diferenciao de clulas nos tecidos de um organismo.
Mesmo havendo o mesmo patrimnio gentico igual h diferente expresso de genes.
O controlo da expresso gnica feito a imensos nveis. H uma hierarquia nos genes
reguladores envolvidos em processos de diferenciao (cascata de genes). Os genes reguladores
geralmente codificam factores de transcrio que controlam outros genes a jusante.

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Os genes quiescentes incluem os house-keeping genes esto em todas as clulas e fazem
parte do metabolismo bsico celular, tendo uma expresso constante. So responsveis pelas
enzimas do metabolismo celular bsico. Contm genes que no so influenciados durante a
transio de um estado de AB, mas que podem participar em vrias actividades de diferenciao
de AB e BC. O metabolismo no influenciado pelos estados de desenvolvimento mas pode
influenci-los. A expresso de um mesmo gene varia durante o desenvolvimento da planta.
Por outro lado o principal nvel de regulao da expresso gnica pode diferir de uma
situao para outra durante a formao dos produtos gnicos, pode ocorrer regulao ao nvel da
transcrio (durante o processamento de RNA) e ao nvel da traduo do mRNA.

A Diferenciao resulta da Expresso Gnica Diferencial

Os componentes especficos de uma dada clula contribuem para as suas caractersticas
especiais. Estes componentes so protenas ou so sintetizados por elas. Pela expresso de 2
subconjuntos de genes, 2 clulas contero 2 subconjuntos de produtos gnicos (protenas).

House Keeping Genes: A + B

Polaridade Celular

a diviso assimtrica da clula. Consiste na variao da composio e das caractersticas
do citoplasma ao longo de um eixo de polaridade de um polo ao outro e consequente distribuio de
estruturas. Dependendo desta h formao de estruturas e tecidos. Numa mesma camada
diferenciam-se diferentes estruturas devido polaridade que permite haver uma diviso diferencial,
sendo geralmente a clula mais pequena a originar a nova estrutura.
A diferenciao resulta da expresso gnica diferencial. A mitose resulta numa clula
diferente da anterior em que uma das clulas-filhas origina outra estrutura porque teriam ambientes
citoplasmticos diferentes. Estas divises celulares desiguais so muito importantes para o
desenvolvimento da maioria dos grupos de organismos divises formativas como a diviso do
zigoto, a formao do tubo polnico ou a formao de estomas e tricomas.

A polaridade pode ser permanente mas antes de ficar endogenamente estabelecida passa por
um perodo em que pode ser alterada por factores externos como a luz ou campos elctricos. Em
estudos investigativos utilizam-se organismos simples porque em plantas superiores seria
demasiado complicado.

Formao do eixo de polaridade na alga castanha Pelvetia compressa

Por exemplo, aps a fecundao ocorrer polaridade, sendo que no plo oposto ao da
incidncia de luz comeam a depositar-se substncias e F-actina e a crescer a PC, sendo a que
ocorrer a separao assimtrica, onde se formar o rizide. O zigoto pode ser rodado relativamente
luz, mas depois de se iniciar a deposio de substancia, mesmo que rode outra vez j no se altera
A B
A&B

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o local onde ocorrer a diviso.

Morfognese: modificaes da forma de um organismo associadas com modificaes funcionais
(alteraes complexas ao nvel de rgos).

Diferenciao das clulas tecidos rgos
o desenvolvimento da forma de um organismo completo. A diferenciao de clulas
e tecidos origina um organismo com um aspecto externo tpico e reconhecvel. Contudo, a forma
bsica do corpo no constantemente, alterando-se durante o processo de desenvolvimento.
Durante o desenvolvimento de uma planta pode encontrar-se todos os tipos de simetria:

Embrio globular inicial simetria radial
Embrio com cotildones simetria bilateral
Folhas simetria dorsiventral
Flores simetria radial/bilateral
Sucesso de elementos a distancia regular ao longo de um eixo - simetria metamrica

Qualquer combinao de formas com simetrias distintas origina novas simetrias muito
complexas. A morfognese traduz ento a expresso visvel de um numero elevado de processos
altamente complexos. Consiste na formao de novas estruturas (zigotoembrio) e em mudanas
na forma e funo (plntulaplanta adulta formao de flores, frutos e sementes senescncia)

Na embriognese das angiosprmicas h um padro previsvel de divises celulares,
um processo controlado e constante que conduz a sequncias de desenvolvimento especficas,
tpicas da espcie, mas quais, todo o passo em direco forma final controlado por reguladores
endgenos genes especficos. Na fase ps-embrionria h factores exgenos ambientais para
influenciar a planta a adaptar-se s condies a que est exposta.

Regulao do Desenvolvimento nos Organismos Pluricelulares

A diferenciao e a morfognese tm componentes espaciais e temporais. As
alteraes seguem um plano pr-determinado. A expresso de um padro no ocorre ao acaso.

Padro: distribuio no aleatria, organizada, de estruturas pelo organismo, de modo a que as
partes em diferenciao atinjam um nvel superior de organizao espacial;
Determinao: destino, as clulas esto pr-destinadas, de uma maneira praticamente irreversvel,
a seguir um certo tipo de diferenciao antes de ser visvel externamente
Competncia: capacidade de uma clula ou de um organismo para iniciar um determinado trajecto
de diferenciao. Para ocorrer diferenciao necessria uma fase de competncia;

Controlo do Desenvolvimento

Uma clula isolada tem potencial para criar um organismo completo atravs da
diviso e diferenciao. Mas dentro de um organismo no se desenvolve de qualquer maneira, o
prprio organismo controla o desenvolvimento e direco de diferenciao celular da clula. H um
controlo muito fino que permite o desenvolvimento do corpo da planta de acordo com o que tpico
da sua espcie e conseguido por limitao do crescimento da clula vegetal em determinadas
direces.


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Formao de um Padro

As clulas dividem-se podendo seguir caminhos simultneos ou diferentes, o
que vai provocar diferenas morfolgicas e fisiolgicas neste ltimo caso. A formao do padro o
posicionamento celular. Depende de interligaes e comunicaes, nomeadamente de factores
inibitrios.

Padres Celulares: Ex: estomas na epiderme foliar tm um padro tpico para cada famlia, ou s
aparecem em cima, s em baixo, ou em ambas as faces. As folhas crescem pela base atravs de
tecido meristemtico havendo uma gradao, espao diviso clula + pequena diviso com
participao das clulas adjacentes clula do meio divide-se para dar as clulas de guarda.

Padres nos rgos: Ex: filotaxia ou distribuio de ramos, depende da maneira como os primrdios
foliares aparecem. Na axila h um gomo ramelar e quando a folha se destaca surge um ramo. No
pice caulinar por exemplo, se houver ferimento a posio das folhas alterada dependendo da fase
da planta.

A formao de um padro diz respeito aos processos pelos quais as clulas
adquirem informao posicional e depende de inter-ligaes e comunizaes entre os diversos
componentes, nomeadamente atravs de factores inibitrios. Este tipo de controlo pode demonstrar-
se nos primrdios foliares, quando se danifica ou remove um primrdio foliar altera-se a posio
das folhas restantes.

Contacto intercelular

A formao de um padro est intimamente dependente da comunicao entre
clulas, do tipo de clulas adjacentes e do ambiente circundante. As clulas animais formam
conexes mas as vegetais, como tm PC tm de arranjar outra forma de comunicar os
plasmodsmios, que permitem haver um espao intracelular contnuo, simplasto, atravs de tecidos.
durante a diviso celular da placa celular que estes se formam. O contacto entre clulas diferentes
raro mas ocorre, na fecundao por exemplo.
Nas clulas vegetais podem ocorrer inter-aces especficas entre as
superfcies das clulas, no s na mesma planta como tambm entre clulas de plantas distintas
(fecundao) e frequentemente entre clulas vegetais e outros
organismos (bactrias, fungos).

A comunicao entre as clulas via plasmodsmios pode ocorrer
por:

Via citoplasmtica, entre o plasmalema e o desmotbulo
Via Membrana Citoplasmtica (plasmalema)
Via desmotbulo que interliga o lmen de um RE para o outro

Plasmodsmios

Tm pores de RE estrangulado. Podem ser ramificados, nos complexos
clulas de companhia-elementos do tubo crivoso por exemplo.


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Informao Posicional

Admite-se que as clulas sintetizam substncias morfologicamente activas, que
estimulam ou inibem, sendo libertadas no ambiente circundante. Se as substncias se distriburem
segundo um gradiente de concentrao atravs do tecido podem ser eficazes na formao de um
padro. Deste modo, as clulas reconhecendo a sua posio no gradiente morfognico, seguem um
trajecto especfico de diferenciao, de acordo com a sua posio nesse gradiente. assim que a
clula mantm a sua identidade no tecido e que as clulas vizinhas se influenciam durante a
diferenciao.

Gradiente de Substncia Morfognica

Este modelo pressupe a produo e libertao de um sinal qumico difusvel
morfognico. A substancia difunde-se radialmente e cria um gradiente de concentrao com []
elevada perto da fonte e baixa distantemente. Qualquer perturbao do gradiente provoca ajustes ma
diferenciao das clulas envolvidas. Este gradiente pode estar presente desde o incio ou emergir
espontaneamente. possvel que um novo gradiente surja de padres pr-existentes. A exposio a
diferentes nveis de substncia (morfognio) conduz a diferentes destinos celulares. H um certo
intervalo alm do qual j no reposto aquilo que foi perturbado/alterado.

Diferentes quantidades de sinal qumico podem criar um padro complexo, a diferenciao
das clulas varia consoante a [] de morfognio. O mesmo sinal pode dar origem a diferentes
padres tambm.


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III - EFEITOS A LONGA DISTNCIA

Uma questo central saber como que as actividades das clulas e tecidos
funcionam de uma forma integrada ao nvel de um organismo. Nas plantas, as actividades das
substncias semelhantes a hormonas esto bem caracterizadas mas no parece que tenham evoludo
para crebros nem clulas nervosas morfolgica e anatomicamente. Mas podemos dizer que a zona
de transio do pice radicular, as zonas de actividades hormonal e inica e os tecidos vasculares
que estabelecem ligaes com todas as partes das plantas superiores so comparveis ao sistema
nervoso dos animais. O pice radicular e caulinar tm hormonas que libertadas nos tecidos
vasculares funcionam como um sistema neuro-hormonal.

O Desenvolvimento vegetal difere do animal, comeando logo na estrutura do embrio em
que o animal uma miniatura do organismo adulta, o que no acontece nas plantas. O
desenvolvimento ps- embrionrio consiste no crescimento de rgos pr-formados, h uma
separao da linhagem somtica e germinativa e as germinais mantm a capacidade de
desenvolvimento originando gmetas e gnadas. Nas somticas a diferenciao geralmente
irreversvel. Em virtude da diferenciao irreversvel admite-se que as clulas perdem genes na
diferenciao mas na realidade mantem todo o seu patrimnio gentico mas h um controlo muito
grande e as clulas s expressam determinada forma.

Nos vegetais, h alternncia de geraes, as linhagens de clulas germinativas diferenciam-
se j na vida adulta e diferenciam-se a partir das somticas. Todas as clulas tem potencialidade de
diferenciao e mantem a totalidade do genoma. Comparando o embrio das plantas, uma
estrutura muito simples, s em alguns casos consegue ter um grau de organizao elevada
(embries das Monocotiledneas) mas geralmente apenas tem um eixo de polaridade mal definido,
nada a ver com o embrio dos animais. uma estrutura muito rudimentar. durante a germinao
que se vo constituir os rgos. No decurso da vida das plantas sofrem alteraes de forma
profundas, formam novos rgos, tecidos, porque tm meristemas.

Os animais tm um crescimento fechado e as plantas aberto, crescem pelas extremidades.
Localizao dos meristemas: Apicais, que fazem o alongamento (pice caulinar, radicular e
ramelar), constituem a manuteno das clulas das extremidades; Laterais, crescimento secundrio,
surgem de novo, no so uma perpetuao das clulas meristemticas, so o remoamento em
determinados locais que eram definitivos, so o felognio e o cmbio interfascicular. No
Desenvolvimento importante a diviso celular, e aqui importa a direco, a orientao da diviso.

As plantas tm de coordenar processos de desenvolvimento entre rgos
afastados. Como a transmisso de sinais clula a clula seria lenta e ineficaz, desenvolveram
comunicaes a longa distncia entre rgos, o sistema vascular, que faz o transporte a longa
distncia de nutrientes, reguladores de crescimento, etc. A translocao de substncias orgnicas
ocorre fundamentalmente via tubos crivosos (clulas do tubo crivoso e clulas de companhia como
unidade funcional). Todas as substancias orgnicas circulam por estas estruturas desde os locais de
sntese (fonte), ate aos locais de utilizao (recebedor). A direco de translocao pode ser
descendente (folhasrazes) ou ascendente (razes/rgos de armazenamentoflores, meristemas).

A transmisso de sinal de clula para clula rpida, o mesmo j no se diz a
longa distncia. A soluo o sistema vascular: o xilema carrega gua da raiz at aos rgos areos
e o floema carrega foto-assimilados em sentido descendente/ascendente, conectando ambos toda a

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estrutura da planta.
Nas Angiosprmicas o floema inclui os elementos do tudo crivoso e
respectivas clulas de companhia, vivas mas sem ncleo. Os foto-assimilados passam segundo um
gradiente de concentrao, o transporte feito das folhas para as razes, frutos ou novas folhas.
Pode ser ascendente ou descendente assim sendo. No Outono h a reabsoro das substncias das
folhas que sero armazenadas no caule.

Os processos de desenvolvimento podem ser estimulados ou inibidos pelas interaces entre os
rgos:

Estmulos: Auxina, gradiente do pice raiz, estimula a produo de auxina e h a reactivao
cambial que forma xilema e floema dependendo de sinais ambientais (se houver muito gua ocorre
mais produo de xilema e se houver muitos HC ocorre maior produo de floema).
Inibio: Auxina, provoca dominncia apical, o gomo inibe a formao de outros gomos na
proximidade.

H um equilbrio delicado entre sinais parcialmente inibidores e parcialmente
estimuladores.
A polaridade nos pluricelulares conduz frequentemente a um transporte unidireccional de
fito-hormonas nos rgos e tecidos. a actividade destas substncias, envolvidas no efeito a longa
distancia, que define a polaridade. Nas clulas de floema, h transportadores nas membranas basais
para o transporte de auxina, h polaridade interna na disposio dos transportadores. H
reorientao dos transportadores quando necessrio para redireccionar o fluxo.

Experincia do abrolhamento de ramos em salgueiro

Num ramo invertido continua a haver crescimento de razes e folhas dos lados correctos,
mas se interrompermos o floema isso j no vai acontecer porque interrompemos o fluxo de auxinas.
As fito-hormonas transmitem a informao a longa distncia atravs do floema.

Na polaridade de rgos esto envolvidas interaces dependentes do transporte a longa
distncia. Os efeitos a longa distancia no so fundamentalmente diferentes dos mecanismos que
controlam o desenvolvimento a curta escala por interaces celulares directas (foras mecnicas ou
comunicao via plasmodsmios) ou gradientes de morfognicos. So sim dependentes dos
acontecimentos a curta distncia e da fora de comunicao entre os plasmodsmios.
Todos estes mecanismos so necessrios para a regulao da diferenciao celular.


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IV - CICLO CELULAR, POLARIDADE E EXPANSO CELULAR

Diviso celular Crescimento Desenvolvimento

H um aumento de clulas que leva a um aumento irreversvel de volume pelo alongamento
e alargamento celular. O aumento de volume das clulas vegetais ocorre por expanso e
remodelao da PC devido ao aumento de presso de turgescncia com a entrada de gua e aumento
do volume do vacolo. Nos tecidos em crescimento a expanso celular polarizada, as clulas
alongam, quer dizer que num determinado momento antes do alongamento as clulas em
crescimento ficaram polarizadas. Este aumento de volume permite ento novos fenmenos de
diferenciao e diviso.

A diviso celular desempenha um papel vital, ainda que indirecto, no crescimento, e um
papel vital no desenvolvimento vegetal.

No crescimento, aumento o potencial de crescimento de um tecido/rgo havendo um limite
para o tamanho que uma clula pode atingir por alargamento. Este limite imposto pela capacidade
que o ncleo tem de fornecer mRNA suficiente para manter as protenas necessrias ao
funcionamento de uma clula volumosa.
No desenvolvimento, durante a diviso celular que pode ficar definido o destino de uma
clula porque o plano de diviso determina o papel funcional das clulas derivadas diferenciao.
As clulas no alargam omnidireccionalmente, vo alongar, esto inseridas no tecido e
acompanham a sua polaridade ou criam uma nova. Esto comprimidas com determinada polaridade.
As clulas cambiais dividem-se pelo eixo maior, o que raro. A diviso leva diferenciao de
novos tecidos porque quando se dividem assimetricamente do origem a novas estruturas. As
clulas para se dividirem tem de sofrer fenmenos de duplicao (S) e depois dividem se por mitose,
h tipicamente um ciclo celular em que antes da fase S passam por G1 e G2 que antecede a mitose.
Todas as clulas tm um ciclo celular, que pode ser mais ou menos curto dependendo se ficam
quiescentes ou no. Mas podem sair do ciclo celular antes de se dividirem, depois de S, como as
clulas do xilema, que tm vida muito curta e tem de viver activamente, por isso, h endoreplicaao,
replicaram ou triplicaram o DNA e no se dividem.

Ciclo celular

Uma clula eucaritica s se
pode dividir em 248 se
ocorrerem alternadamente a
duplicao do seu genoma (fase S
sntese) e a diviso a meio do mesmo
na mitose (fase M). Aps a mitose
ocorre geralmente a citocinese.
O ciclo de uma clula
eucaritica tpica pode ser dividido
em mitose e interfase (com G1, S e
G2).


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G1: intervalo entre M e S onde se d o crescimento da clula e preparao dos cromossomas para a
duplicao;
S: d-se a sntese de DNA e centrolos com os microtbulos organizados ao centro;
G2: intervalo entre S e M onde se d a preparao para a M

Controlo do Ciclo Celular

No passado foram detectadas protenas que aumentavam e diminuam de concentrao com
o ciclo celular, as ciclinas, de comportamento cclico. Aumentam no incio da mitose (a partir de 0,
no inicio de G1) em resultado da sntese proteica a uma velocidade constante, atingindo um pico no
incio da mitose. E caem abruptamente (para 0) num ponto da mitose e cada clula filha inicia o
ciclo essencialmente sem ciclinas, sendo produzidas de novo.

A progresso do ciclo celular ento controlada por protenas citoplasmticas:

Ciclinas: ciclinas G1; ciclinas da fase S; ciclinas da fase M (os seus nveis na clula aumentam e
diminuem durante o ciclo celular)
Cinases dependentes de ciclinas (CDKs): CDKs G1; CDKs da fase S; CDKs da fase M (os seus
nveis na clula permanecem relativamente estveis mas cada uma tem de se ligar ciclina
apropriada para ficar activa. Adicionam grupos fosfato a uma gama de protenas que controlam os
processos do ciclo celular)
Complexo promotor da anfase (APC) e outras enzimas proteolticas: desencadeia os processos
que levam destruio das coesinas permitindo que as cromtides irms se separem, degradam as
ciclinas mitticas (ciclinas da fase M).


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Pontos de Controlo do Ciclo celular

1. Na fase inicial h um aumento das ciclinas em G1, no ponto START, e a clula fica
determinada para iniciar o ciclo celular e duplicar o DNA. Antes deste ponto a clula pode
abandonar o ciclo celular e diferenciar-se.
2. Um aumento do Factor Promotor da fase S (SPF), complexo Ciclina-CDK prepara a
clula para entrar na fase S e duplicar o DNA. A partir do momento em que se d a replicao, h
destruio do complexo aumentando o nvel das ciclinas mitticas em G2.
3. Aqui h o Factor promotor da fase M (MPF) que inicia a organizao do fuso
mittico, a ruptura do invlucro nuclear e a condensao dos cromossomas. Estes passos conduzem
a clula para metfase. N
4. Este ponto o MPF activa o Complexo Promotor da Anfase (APC) que permite que
as cromtides irms se separem na placa metafsica e migrem para os plos completando a mitose.
As ciclinas M so destrudas conjugando-as com a protena ubiquitina.
5. H activao das ciclinas G1 para o prximo ciclo. H tambm degradao da
protena geminin, que impede que o DNA recm-sintetizado seja duplicado antes da mitose. na
fase M que podem ocorrer endoreplicaoes, iniciando outro ciclo sem as clulas se dividirem.

Este um mecanismo pelo qual a clula assegura que cada poro do seu DNA copiado
uma e s uma vez durante a fase S. Algumas clulas permitem fases S repetidas sem mitose
ou/e citocinese provocando endoreduplicao.

Controlo da qualidade do Ciclo Celular

A clula tem vrios sistemas que interrompem o ciclo se algo ocorrer errado. H um ponto
de controlo (checkpoint) no fim da fase S que monitoriza a presena de fragmentos de Okazaki na
fiada de DNA secundria (retardada) durante a duplicao. A clula no progride no ciclo celular at
terem sido ligados. Existem tambm pontos de controlo dos danos no DNA antes de a clula entrar

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na fase S (checkpoint GG1), durante a fase S e depois da duplicao do DNA (checkpoint G2). Os
pontos de controle do fuso detectam qualquer falha na ligao das fibras aos cinetocoros e param a
clula em metfase (checkpoint M), detectando o alinhamento imprprio do fuso e bloqueando a
citocinese podendo desencadear a PCD se os danos forem irreparveis. Todos os checkpoints
requerem complexos proteicos. As mutaes nos genes que que codificam algumas destas protenas
esto associadas com o cancro nas clulas animais oncogenes.

Dentro do ciclo celular temos um ciclo do citoesqueleto, um ciclo de duplicao de DNA e
um ciclo de citocinese e para a diviso funcionar estes 3 ciclos tm de se encaixar e estar funcionais.
Os modelos de estudo dos mecanismos moleculares e genticos de controlo celular so as leveduras.
Espcies diferentes tm diferentes maneiras de se reproduzir e o prprio ciclo celular diferente de
fase em fase. Por exemplo, em S.cerevisiae o crescimento vegetativo acontece como organismo 2n
enquanto que na S.pombe acontece como organismo n, mas em ambas a reproduo induzida por
condies de depleo de nutrientes.

Mutantes condicionais

Para identificar componentes do ciclo celular utilizam-se mutantes, que, para serem viveis,
devem ser mutantes condicionais, ou seja, o fentipo s se expressa em determinadas condies. Se
as condies foram favorveis o produto gnico funciona, se no, no se manifesta/funciona o
produto gnico.
Descobriram-se mutaes que afectam especificamente os componentes da maquinaria do
ciclo celular, mutaes cdc que provocam o bloqueiam ou alterao do ciclo a determinada
temperatura, temperatura restritiva. Assim, os mutantes interrompem o ciclo celular num ponto
especfico onde o produto gnico necessrio para que o ciclo continue. Isto permite-nos estabilizar
o n de clulas, porque pra a diviso.

Ciclos coordenados

Ciclo do centrossoma: h duplicao e migrao do SPB
Ciclo dos Cromossomas: d-se a duplicao do DNA e a mitose;
Ciclo Citoplasmtico: migrao nuclear e gemulao (citocinese), sendo possvel haver
duplicao de DNA e gemulao, mas como a organizao do fuso mittico no se forma no
haver segregao dos cromossomas, ou pode haver fuso mittico e no haver gemulao;

Foram identificados dezenas de genes cdc e atravs de estudos bioqumicos revelaram ter a
funo exacta de alguns produtos gnicos como as DNA ligases. Por tecnologia de DNA
recombinante foi possvel isolar clones dos genes cdc. O DNA clonado tem a capacidade de, uma
vez introduzido no organismo, complementar os mutantes respectivos, conduzindo ao fentipo
normal.
Genes que codifiquem protenas semelhantes esto presentes em diferentes organismos,
talvez em todos os eucariontes.

Ciclo Celular Kinases dependentes de Ciclinas (CDKs) e Ciclinas

A diviso celular apresenta elementos de controlo comuns a Procariontes e Eucariontes, os
mecanismos esto conservados ao longo da escala evolutiva. Nos Eucariontes a conservao
evolutiva evidente porque em espcies to diversas como leveduras e o Homem, a progresso das
fases celulares controlada por kinases heterodimricas.

15

Complexos kinase: Subunidade cataltica: kinase dependente de ciclina (CDK)
Subunidade activadora: ciclina (CYC)

Estes complexos so activados mediante fosforilao por uma kinase activadora de CDK (CAK).

Regulao da Actividade dos Complexos CDK-CYC

A actividade dos complexos CDK-CYC regulada a diversos nveis: h regulao, pela
abundncia dos componentes CDK ou CYC, logo a nvel da transcrio, traduo, distribuio nos
compartimentos e degradao. Ou pela regulao da actividade de fosforilao de uma kinase
activadora de CDKs (CAK), que activa os complexos CDK-CYC fosforilando-os. Um complexo
depende de muitos nveis de regulao, no s pela maior ou menor abundancia dos componentes
mas tambm pela regulao da prpria actividade. H uma cinase activadora que o vai fosforilar
passando-o a activo. Isto est associado a eventos inibitrios, por fosforilao tambm, que vo
inibir a actividade impedindo a dimerizao ou ligando-se a protenas inibidoras, KRP, ao local
activo.

Diversidade de CDKs e Ciclinas nas Plantas

CDKs: H centenas, agrupadas por afinidade e semelhana:

Tipo A: so as melhores caracterizadas e tm semelhanas com CDKs de leveduras e algumas de
animais porque tm domnios de aminocidos constantes, conservados nos locais de ligao s
ciclinas, h ali uma sequencia aminoacdica conservada - PSTAIRE;

Tipo B: tm pequenas variaes. H muitas CDKs que no esto directamente relacionadas com o
ciclo celular. So No-PSTAIRE;

H ainda CDKs tipo C, D, E, F e G
H ainda outras no includas nestas classes que esto includas nas CDK like kinases (CKLs).
Existe ainda a possibilidade de algumas espcies terem mais que uma representante de um
determinado tipo de CDK.


16

Ciclinas

Compreendem muitas classes (A, B, D, H e L - homlogas das dos mamferos e plantas, E, F,
G, I sem homlogos em plantas) que tm por base anlises de sequncias de um motivo
conservado cyclin box.

Algumas ciclinas e CDKs no tem relao com o controlo do ciclo, s em fenmenos de
fosforilao ou desfosforilao em outras etapas do ciclo da planta. Estes cdks e ciclinas so
capazes de completar e recuperar mutaes genes complementares. Nas plantas foram
identificadas diversas CDKs e respectivas ciclinas que incluem as que actuam no ciclo celular.
Destas protenas algumas so capazes de substituir as funes das suas homlogas em leveduras e
animais.

Localizao intracelular de CDKs e Ciclinas nas Plantas

As Ciclinas so abundantes na fase G2 e M e as CDKs no incio da mitose

Em cima temos as cinases (CDKs, cdcs) mostrando que h um aumento a nvel da transcrio
medido pela quantidade de mRNA, protena, actividade da mesma mRNAproteinaactividade;
ou podem ter um nvel de expresso constante. Para o mesmo nvel de protena o que varia a
actividade (G-S) e (G2-M), ou seja, h varias maneiras de regul-las.

Em baixo a vermelho, as ciclinas (cyc) mostram a produo de mRNA.

Controlo de Ciclo Celular

A progresso do ciclo celular mittico envolve sucessivamente a formao, activao e
subsequente inactivao de CDKs (Kinases dependentes de ciclinas). Numa fase inicial ligam-se
sequencialmente s ciclinas (responsveis pela sua activao diferencial).
A transio G1 S controlada por complexos activos CDKs-Cyc que fosforilam a
protena retinoblastoma (rb) que liberta o factor E2F, factor de transcrio de genes necessrios

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produo do gene celular de G1S.
A transio G2M desencadeada por CDKs-CycA ou CycB. Os complexos CDKs so
mantidos inactivos atravs de fosforilao por uma kinase WEE e de interaco com protenas
inibidoras (CDIs). Aqui a kinase activada pela libertao da CKI por desfosforilao por uma
fosfatase e por fosforilao pela CAK.

H muitos pontos de bloqueio pelo meio das CDKs que so inibitrios e tendo na transio
para a Mitose um controlo muito fino por fosforilao inibitria da continuao do ciclo celular que
depois desfosforilada e activada por complexos CDC-cinase.

Modelo nas Plantas

Aps um estmulo mitognico (fito-hormonas) so sintetizadas ciclinas do tipo D (CycD)
que se associam com CDKs do tipo A. o complexo resultante activo fosforila a protena
retinoblastoma (Rb), tal como acontece nos animais, libertando o complexo E2F, das protenas RIP.
libertado o factor de transcrio RIP que codifica genes de transcrio desencadeando a fase S. As
CycD tm um tempo de vida curto devido presena de sequncias PEST que as marcam para
degradao. Durante a fase S so degradadas ciclinas do tipo D e sintetizadas do tipo A que se ligam
a CDKs do tipo A activando-as e medida que progride a fase S a actividade das CDKs inibida
por fosforilao da tirosina. Os CDKs mitticos so controlados por fosforilao da tirosina que os
torna inactivo, sendo activados por uma fosfatase da tirosina que retira o fosfato inibidor.
removido o fosfato e ligado o factor de acoplamento Cks1 e s ai ficam activos e funcionais. Este
processo final dependente de citocininas. As Cyc A/B so destrudas durante a fase M atravs de
motivos especficos de degradao. H mltiplos pontos de controlo por ciclinas inibitrias (CKI
a rosa no esquema anterior)

As Auxinas, Citocininas e cido Giberlico promovem a mitose estando envolvidas em 2
passos fundamentais em G1 e G2:

Durante G1fito-hormonas como a auxina, citocininas, ABA, giberelinas, BR e H.C. regulam
a expresso de CycD e sua unidade cataltica CDK-A. A activao do complexo CDK-A/CycD

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requer a dissociao da protena inibidora do CDK (ICK) cuja transcrio induzida pela hormona
sensvel ao stress, ABA, e requer tambm fosforilao de Thr160 na CDK-A pela kinase activadora
de CDK (CDKD;1) que regulada positivamente pelo GA. O complexo CDK-A/CycD activo
fosforila a protena Retinoblastoma (RB) no final da fase G1, libertando o complexo E2E-DP (RIP)
que promove a transcrio gnica necessria para a progresso para a fase S.
As auxinas, citocininas e GAs, como activadores mitticos, regulam tambm a actividade
kinase de CDKs-A e B. A transio G2-M est associada com a activao da CDK, por fosforilao
da Thr160 pela kinase activadora de CDK (CAK) e pela desfosforilao (por uma fosfatase, cdc25)
dos locais (Thr14 e Tyr15) de fosforilao inibitria, induzidas pela citocinina. Uma via de
degradao dependente da ubiquitina marca a Cyc-B para protelise pelo Complexo Promotor da
Anfase (APC), na transio metfase-anfase, activando assim a sada da mitose.


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V - CITOESQUELETO

O citoesqueleto um conjunto de microtbulos, filamentos intermdios e mdios que
desempenham um papel estrutural e dinmico na clula. So responsveis pela organizao,
manuteno e forma da clula e pelas ligaes entre elas no trnsito intracelular.

Ciclo Celular/ Citoesqueleto

O citoesqueleto uma estrutura tridimensional dinmica no citoplasma que actua como
msculo e esqueleto no movimento interno e na estabilidade celular. Os principais tipos de fibras
que constituem o citoesqueleto so microtbulos, filamentos intermdios e microfilamentos. O
citoesqueleto cora-se com anticorpos porque constitudo por protenas. Depois vamos corar o
DNA com DAPI que se liga especificamente ao DNA fluorescendo num comprimento de onda. O
pice radicular o modelo ideal p estudar a diviso porque tem mitose, alongamento e
diferenciao por zonas separadas.

Fluorescncia

a capacidade de determinados objectos tm de emitir luz quando excitados com luz de
maior energia. Cada comprimento de onda est associado a uma cor. Actualmente, nos microscpios,
a iluminao no vem de baixo, vem de lado e a radiao reflectida pela preparao por um
espelho. a objectiva que ilumina a preparao, s num pequeno campo. Os fluorocromos brilham
e a luz vem para cima e reflectida por espelhos dicricos que funcionam para determinados
comprimentos de onda. um sistema complexo de vrios filtros de acordo com o comprimento de
onda e dos fluorocromos que usamos. H comprimentos de onda capazes de excitar determinadas
molculas que vo fluorescer emitindo luz, so os comprimentos de excitao.

Os tecidos vegetais so observveis por microscopia de fluorescncia porque tm elementos
que fluorescem. A prpria clorofila tem auto-fluorescncia. Trabalhar com estas tcnicas em plantas
complicado porque tudo brilha. Para localizar protenas h que escolher bem o comprimento de
onde de excitao e emisso.

Neste caso da cromatina, na anfase, os
cromossomas esto corados com DAPI. Os
filamentos de actina e microtbulos intervm
aqui. Como so constitudos por proteinas e os
anticorpos so capazes de as reconhecer vamos
utiliza-los. A imagem verde o fuso mittico
identificado com anticorpos dirigidos contra as
proteinas que o constituem, alfa e beta tubulina e o que temos de fazer criar anticorpos capazes de
reconhecer as proteinas que constituem os microtbulos. Os anticorpos esto conjugados com uma
enzima que quando se fornece o substrato fica corada. Os microtbulos so estruturas dinmicas.
Tm polos de polimerizao e despolimerizao e esto constantemente a s-lo. Permitem a
ascenso dos cromossomas tendo um papel importante na citocinese. Tudo despolimeriza e volta o
polimerizar aquando da citocinese. Nas plantas h formao de uma placa celular, o fragmoplasto.
Esta nova estrutura permite o crescimento da placa celular formando uma nova PC que separa as 2
clulas filhas. Os microtbulos so constitudos por tubulina, alfa e beta tendo um papel na
motricidade dos cromossomas e forma da prpria clula.


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Anticorpos como ferramentas em tcnicas histo-citolgicas de imunolocalizao
(imunocitoqumica)

O citoesqueleto constitudo por proteinas que se ligam e so reconhecidas por anticorpos.
Os que reconhecem a tubulina so usados como reagentes de identificao. A sua estrutura bsica
uma protena constituda por cadeias maiores e menores, tem uma estrutura tpica inicial comum
espcie e o que varia o local de ligao aos antignios, a regio especifica.
Se quisermos localizar uma determinada protena, temos de a isolar. Depois injectamo-la no
ratinho para ele produzir anticorpos para a protena, que uma substancia estranha para o seu
organismo. Hoje em dia s se insere um segmento da protena. Uns reconhecem mais outros menos
e depois podemos purificar um soro mais ou menos homogneo de anticorpos policlonais que
reconhecem vrias partes da protena. Para garantir uma maior especificidade h uma produo de
anticorpos todos iguais contra uma determinada regio. H um pptido que injectado, tira se as
clulas do bao e cultivam.se com clulas tumorais de onde resultam hibridomas e os que no
hibridam so eliminados. As sobreviventes produzem anticorpos e os mais eficazes so mantidos.
Obtemos anticorpos todos iguais e que identificam a mesma poro de protena.
Tanto os monoclonais como os policlonais reconhecem a protena, mas so anticorpos primrios,
ainda no nos permitem ver nada.

.

Na clula preciso que o anticorpo seja visvel. Temo apenas o anticorpo primrio que reconhece a
protena que estamos a estudar e liga-se a ela. Precisamos de ter um anticorpo secundrio conjugado
com um fluorocromo ou com um complexo enzimtico que pode ser produzido pela:

Tcnica de Sandwiche: o anticorpo II tem de reconhecer o I, atravs da estrutura tpica da
espcie. Se pegarmos no soro do ratinho rico em anticorpos e injectarmos em cabra, esta vai
produzir anticorpos contra os anticorpos do coelho e vo ser estes, agora purificados no soro

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da cabra, os anticorpos que so capazes de reconhecer os anticorpos do ratinho (a parte
especifica comum da espcie). Temos assim um anticorpo secundrio capaz de reconhecer e
tornar visveis os anticorpos de uma espcie.

Pr-Prfase

Em prfase surge uma estrutura do citoesqueleto que tem
o nome de Banda Pr-Profsica, Surge s num determinado
momento. Na imagem a verde v-se um gnero de um cinto
brilhante de microtbulos que a Banda Profsica.

Prfase

D-se a condensao dos cromossomas (esquerda) e comea a organizao do fuso mittico
e despolimerizao da Banda Pr-Profsica (direita).

Metfase

D-se a disposio do fuso
mittico e o alinhamento dos
cromossomas.

Anfase

.

Aspecto do fuso mittico


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Telfase

O fuso mittico despolimeriza e forma-se uma
nova estrutura microtubular entre os 2 ncleos em
formao. O invlucro e a membrana despolimerizam e
forma-se uma estrutura que vai suportar a placa celular.
O aspecto do fragmoplasto tem um aspecto distinto da
banda Pr -Profsica, esta tem um padro totalmente
distinto tipo cinto e est na periferia. O fragmoplasto est
no centro.

Interfase
Numa clula que tem de alongar, h uma nova
polimerizao de microtbulos, adjacente MC, que vo
dispor-se volta do sentido de alongamento,
perpendicularmente ao eixo de alongamento. Estes
microtbulos determinam os locais de deposio dos
complexos de sintase. Vo decidir onde ficam as
protenas q sintetizam a celulose. Estes complexos de
sintase de celulose ficam com a disposio dos
microtbulos, na PC que est a ser reforada, no permitindo que a clula alongue no sentido errado.

Microtbulos Edificao da PC

Se uma clula d origem a PC, os
microtbulos depositam uma parede
adicional para o interior, inteira ou parcial.
Esta sndrome chama-se associao dos
microtbulos da PC. A disposio dos
Complexos Sintase Celulose deixam
perceber como ser o alongamento da
clula. Os microtbulos no se mudam,
polimerizam e despolimerizam.


23

CITOESQUELETO: COMPOSIAO, ORGANIZAO E FUNO

um conjunto de protenas que compe e constitui o esqueleto bsico da clula existindo
nos procariontes e eucariontes, animais e plantas.
H uma rede intrincada de protenas que so essencialmente 3 tipos de molculas
(microtbulos, filamentos intermdios e os microfilamentos).

Composio

Basicamente os filamentos esto organizados numa rede, seja animal ou vegetal. Na vegetal
a maior parte esto compressos contra a MC ou ao longo do citoplasma devido ao vacolo. uma
estrutura altamente dinmica, as proteinas polimerizam e despolimerizam muito rapidamente. A
capacidade dos organelos se movimentarem depende desta dinmica pois so transportadas pelos
filamentos.

Microfilamentos: constitudos quase somente por F-actina, so os mais pequenos e mais finos.
So monmeros de G-actina que se associam uns aos outros numa estrutura tubular formando um
filamento. F-actina a actina em filamento e a G-actina em monmero, monomrica. Temos uma
zona de polimerizao e despolimerizao que acontece com gasto de energia. O terminal +
polimerizado com adio de novas unidades e no terminal - h despolimerizao, libertao de
molculas, formando ADP. Estes locais so sempre os mesmos, no invertem.
H receptores na MC que recebem sinais activando molculas e formando uma cascata de
sinais que culmina na alterao da organizao do citoesqueleto.
As actin binding proteins so reguladoras desta polimerizao. Removem e adicionam
subunidades. H tambm proteinas que clivam o filamento de actina, para acelerar o processo de
quebra do filamento. H proteinas que se colocam no trmino end para impedir a despolimerizao
das proteinas, ou que se ligam ao inicial para no permitir a polimerizao. H outras ainda que
permitem a formao de microfibras de actina.


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Cofilina: remoo dos monmeros de actina, s se liga actina ADP, tambm provoca severing
clivagem.
Profilina: adiciona monmeros de actina, s se liga actina ATP.
CAP: funo tamponante, impede que continue a crescer o filamento, bloqueio da despolimerizao
da actina.
Filamina: permite que os filamentos de actina se liguem e se sobreponham, formando uma rede.
Complexo ARP 2/3: a protena arp 2 e arp 3 foram as primeiras a ser identificas mas h mais,
quando se liga actina faz como ponto de ligao com o outro monmero de actina formando outro
filamento que vai crescer, vamos ter ramificaes de actina.

Funes dos microfilamentos:

- Nas clulas intestinais s h microvilosidades porque nas clulas h microfilamentos que mantem
a estrutura.
- Contraco muscular mediada pela relao entre a actina e a miosina. O filamento de actina
desliza por cima do filamento de miosina.
- Em infeces, h bactrias que se conseguem movimentar dentro da clula atravs da actina da
clula que passa a ser desvirtualizada e liga-se ao termino da bactria, permitindo-lhe o movimento
custa da actina da clula hospedeira.
- Formao de tricomas, o interior da membrana est todo revestido por filamentos de actina, a
forma como se entrecruzam condiciona a forma e estrutura do mesmo.
- Parece celular e comunicao atravs de plasmodsmios, comunicao atravs dos filamentos de
actina que atravessam os plasmodsmios e estabelecem a comunicao entre clulas levando
pequenas molculas de clula em clula
- Migrao celular, a clula est includa numa matriz havendo pontos de ligao matriz, estes
pontos sao integrinas, fazem a integrao do citoesqueleto da clula com a matriz, de um lado
ligam-se aos componentes celulares e do outro lado aos filamentos de actina. Isto faz com que uma
clula tenha os filamentos organizados de igual forma fora e dentro. A clula vai ter um movimento
tipo lesma, a clula em migrao est polarizada, tem um plo basal e um plo apical e plos
laterais, h uma repartio dos componentes da membrana. A adeso da clula matriz importante
porque elas no sobrevivem a flutuar, excepto os nossos leuccitos. Ento a clula forma as zonas
de adeso, estende-se, adere e o citoesqueleto vem atrs fazendo com que o corpo celular contraia e
se percam as ligaes atrs reciclando-se parte dos receptores.

a) Colectivo

b) Mesenquimal

c) Amebide


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H ento estruturas importantes no movimento da clula. Os filopdia so filamentos muito
finos tipo projeco que projectam a membrana actuando fundamental como sensores e para
permitir o movimento da clula (s h actina a ajudar). Os lamelipdia, so estruturas dinmicas
que se movimentam graas estrutura, a clula vai migrando em lenol. A tubulina ajuda a actina.
As fibras de stress so zonas de adeso muito forte ao substrato, ao longo das fibras esto as
integrinas. As integrinas so receptores transmembranares de cadeia longa que fazem com que a
clula adira ao substrato e altere a sua forma e movimento em funo da matriz, tm assim um
papel crucial na sinalizao celular.

Microtbulos: conjuntos de e tubulina que se organizam na formao de dmeros e tbulos,
so os maiores em espessura. So estruturas muito grandes com uma funo indispensvel na
formao do fuso mittico. So formados por subunidades de e tubulina que se ligam e dispem
formando um tubo cilndrico. H uma zona de adio e uma zona de
polimerizao/despolimerizao. Tem tambm ligao de protenas capping que impedem o
crescimento. So dinmicos para que a formao da estrutura seja rpida e eficiente. H frmacos
utilizados na despolimerizao/polimerizao da actina para bloquear a mitose, em tumores, no
controlo de clulas tumorais. Impedem a formao do fuso mittico mas tambm diminuem a
diviso das nossas clulas normais, das linhagens germinativas (afectam a esterilidade, as unhas, o
cabelo). Frmacos como a vinoblastina ou o pacitaxol impedem a nova adio de e tubulina
facilitando a despolimerizao.

Funes: Os microtbulos so importantes no transporte de organelos, na formao de clios e
flagelos e na organizao do vacolo, o citoesqueleto organiza os organelos e permite o seu
movimento atravs do mesmo.

Microfilamentos e microtbulos: importantes na formao e regulao do fuso mittico. Os
filamentos de actina so importantes na regulao do fuso mittico, esto nos trminos finais e
laterais ajudando a formar as foras de tenso que levam extenso dos microtbulos e separao
das cromtides. Tm como funes a mitose da clula vegetal.

Filamentos intermdios: composiao variada com 3 principais protenas: vimentina, desmina e
queratina, tm um tamanho intermdio. So diferentes proteinas, so monmeros com n terminal e c
terminal associados em dmeros que formam filamentos intermdios.


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Funes: Tm um papel importante na relao entre a actina e a tubulina na organizao dos
organelos, disposio de mitocndrias, formao e disponibilizao dos lizossomas, na
disponibilidade do golgi (que caso contrrio fica fragmentado), organizao do ncleo e dissoluo
do invlucro nuclear. So relevantes na adeso clula-matriz e clula-clula. O desmossoma de uma
clula ao ligar-se ao desmossoma de outra tem muitos filamentos intermdios no meio que
permitem a ligao.


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VI - EMBRIOGNESE NAS PLANTAS VASCULARES

O zigoto desenvolve-se sempre de uma oosfera, fecundada, encerrada no corpo do protalo.
O zigoto nunca livre, nunca se encontra em contacto com o meio exterior. Contudo, o meio
exterior pode afectar indirectamente o zigoto ou embrio dependendo da proteco assegurada pelo
protalo, gametfito.

O ambiente do Zigoto

Protalo livre (Pteridfitas): independente, os meisporos germinam no solo originando um
gametfito protalo livre frequentemente autotrfico mas por vezes simbitico com fungos. O
protalo pode ser de vida longa, protege e essencial na nutrio do embrio. Os embries so
organismos frgeis, sensveis secura e excesso de luz, sendo os simbiticos mais resistentes. Os
arquegnios vo ficar mais enterrados no tecido protalar e o gametfito nutre o embrio.

Protalo incluso (Espermatfitas): aprisionado, os esporos e protalos femininos,
gametfitos femininos, ficam encerrados no vulo. O macrsporo desenvolve-se
dentro do esporngio que semelhante ao ncleo. Aqui os macrsporos ficam
dentro do ncleo germinando num protalo formando arquegnios. O protalo
pode:

- Formar o Endosperma (Gimnosprmicas): vemos que o tecido protalar
constitudo por 3 geraes, os iniciais, os da outra gerao e o novo esporfito.
Acontece nas Pteridosprmicas, Cycadales, Ginkgoales e Coniferales.

- Ser reabsorvido (Angiosprmicas): h o fenmeno da dupla fecundao, um gmeta com a
oosfera e outro com 2 ncleos polares fundidos, ou no, o mesocisto, sendo uma estrutura triplide
no mnimo. Aqui o tecido protalar reabsorvido, no h vestgios dele.


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Desenvolvimento do Embrio

NAS PTERIDFITAS (SEM SEMENTE)

O desenvolvimento embrionrio uma vez iniciado no
pra nem entra em dormncia e culmina na formao de um
esporfito. Vai formar muito rapidamente organismos
autotrficos aps a vida inicial heterotrfica dependente da vida
inicial que dependente do gametfito. Se as condies so
favorveis vive, se no, morre. A fecundao est dependente do
meio aqutico para os gmetas nadarem. Os anterozides livres
deslocam-se na gua que cobre o protalo e sendo atrados por
quimiotaxismo, atingem o canal do arquegnio. O zigoto
resultante divide-se geralmente perpendicularmente ao eixo do arquegnio. De uma vida
heterotrfica passam a autotrfica.

Embrio endoscpico: forma-se um suspensor a partir da clula do lado do canal do arquegnio que
mergulha o embrio no corpo do protalo.

Exemplos: algumas Ophiglossales e Maratialles

Lycopodiales Lycopodium: so isospricas tendo o protalo subterrneo ou superfcie. O
embrio endoscpico, aps mitose do zigoto a derivada do lado do canal do arquegnio origina o
suspensor. No inicio do desenvolvimento o embrio passa por uma fase com 3 camadas de clulas:
o suspensor num plo, uma camada mediana chamada haustrio e o esporfito propriamente dito no
plo oposto. O protalo cnico e achatado.

Selaginellales Selaginella: importante porque mostra o fenmeno da heterosporia.
Produz micrsporos que germinam em protalos microprotalos/protalos masculinos/gametfitos
masculinos porque produzem anterdeos e anterozides. Os macrsporos originam
macrogametfitos/gametfitos femininos, porque tm arquegnios. O embrio endoscpico,
divide-se transversalmente e a clula do lado do canal divide-se intensamente formando um
suspensor que empurra a outra clula no tecido do protalo, esta clula interna que origina o
embrio.

Embrio exoscpico: no se forma suspensor e ambas as clulas resultantes da 1 mitose contribuem
para o embrio e a clula do lado do canal origina o pice caulinar e as primeiras folhas.

Exemplos: Brifitas e algumas Ophioglossales

Psilotales Psilotum: so semelhantes s primeiras plantas que colonizaram os continentes.
Tm ramificao dicotmica, no tm folhas e produzem esporngios nos ramos. Os esporos,
produzidos por meiose, do origem a um gametfito haplide que subterrneo e simbitico com
fungos, tm anterdeos e arquegnios. Na embriognese o embrio exoscpico e aps a mitose do
zigoto a derivada do lado do canal do arquegnio origina o pice caulinar, cresce um rizoma, sem
folhas ou razes. Aps um perodo de crescimento subterrneo, o rizoma, que no tem razes, produz
caules normais onde se formam esporngios.

Isoetales Isoetes: tm uma massa, o corno, uma estrutura central, e depois volta formam-se
Arquegnios

29

numerosas folhas. O processo de desenvolvimento por heterosporia formando micro e
macrogametfitos. E se no h suspensor, a clula vai dar origem ao pice.

Equisetales Equisetum: a primeira diviso origina no lado do canal uma clula de onde se
forma o pice caulinar e entra a clula de onde se forma o haustrio e a primeira raiz. O embrio
no forma suspensor, exoscpico. A clula superior divide-se sagitalmente originando 4
quadrantes em forma de coroa onde se diferencia a clula inicial apical caulinar. A clula inferior
tambm se divide sagitalmente e origina posteriormente uma estrutura globosa onde se forma o
haustrio e se diferencia a clula inicial apical radicular.

Em ambos os casos forma-se um organismo heterotrfico (pr-embrio) a partir do qual se formam
os rgos que permitem ao jovem esporfito passar a uma vida autotrfica.

A Selaginella e o Isoetes so muito diferentes mas esto associados atravs de estudos de
Paleobotnica. A embriognese das pteridfitas apresenta:

Formas primitivas - embrio compacto, volumoso, de crescimento lento no qual a formao
dos primeiros rgos tardia. As divises celulares so aparentemente aleatrias, os
embries so volumosos sem organizao prvia de rgos. A proliferao lenta, contnua
e no localizada.

Psilotum: rizoma simbitico heterotrfico indiferenciado
Lycopodium: protocormo
Ophyglossum: estrutura embrionria praticamente s com uma raiz

Formas mais evoludas - leptoesporangiadas, embries pequenos com rgos que comeam
logo a diferenciar-se nas fases iniciais do desenvolvimento. H um crescimento ordenado
sendo os rgos bem definidos. A proliferao celular bem organizada, depois de auto-
ajustada, desenvolvendo-se a primeira folha, a primeira raiz e na base das primeiras folhas o
pice caulinar. As clulas cedo ficam diferentes de acordo com a sua localizao no embrio.

No h pr-determinao.

Filicineae Fetos: h esporngios organizados em esporos ou no. Os esporos do origem
a protalos. Nestas plantas h grupos mais primitivos e outros mais evoludos, com base na formao
dos esporngios:

Eusporangiate: Eusporngio (embriognese muito diversa): formam-se na camada
superficial dividindo-se periclinalmente proliferando as camadas interiores e a perifrica
constitui o revestimento. (Ex: Ophioglossum: embrio sem suspensor (exoscpico) em que
a 1 diviso perpendicular ao eixo do arquegnio. O prolato simbintico. A clula interna
origina o haustrio pouco desenvolvido e a raiz desenvolve-se cedo. O pice desenvolve-se
lentamente a partir da outra clula por vezes at s alguns anos depois da emergncia da raiz.
Neste perodo o jovem esporfito vive associado a fungos endocelulares.)

Leptosporangiate. Leptoesporngios (embriognese uniforme): h uma clula que se
divide para o exterior e por proliferao sucessiva e produz uma estrutura que continua a
proliferar e vai originar o tecido esporognico. H uma aquisio rpida da vida autotrfica
e as divises celulares so regulares. Os protalos desenvolvem-se superfcie do solo, sendo

30

a 1 diviso segundo o eixo do arquegnio. A clula do lado apical do protalo origina a
primeira folha e o pice do embrio. A clula do lado basal do protalo origina o p haustorial
e a primeira raiz. Cada uma das 2 clulas iniciais divide-se em 4 quadrantes e as divises
subsequentes evidenciam a folha cotiledonar, o pice radicular e caulinar. O jovem
esporfito rompe o protalo e cedo atinge a vida autotrfica enquanto o protalo degenera.

NAS ESPERMATFITAS (COM SEMENTE)

Vamos assistir a um fenmeno que permite a colonizao dos continentes, que a
capacidade de formar semente, capaz de resistir a condies desfavorveis e germinar apenas nas
favorveis, h um perodo de latncia. O desenvolvimento do embrio dentro da semente podendo
ficar assim por vrios anos e quando encontra condies favorveis germina, Isto permite um
grande sucesso destas plantas e a colonizao dos continentes por deixarem de ser dependentes da
gua. H um desenvolvimento embrionrio intraseminal. No decurso da evoluo assistimos a uma
diminuio do tempo de vida do gametfito. Nas espermatfitas o desenvolvimento do esporfito
apresenta 2 estados separados por um perodo de latncia: o desenvolvimento embrionrio intra-
seminal e o desenvolvimento ps-seminal, aps germinao da semente.

GIMNOSPRMICAS: vamos ter um protalo aprisionado que origina o endosperma, que funciona
como substncia de reserva. As gimnosprmicas so um grupo muito diverso, as cykas produzem
vulos a partir de folhas modificas, o ginko a partir de braquiblastos produz vulos, as conferas
tm lenho com caractersticas primitivas constitudo apenas por tracides e as gnephyte apresentam
caractersticas comuns s angiosprmicas mas no estabelecem comunicao entre uma e outra.

Cycadophyta

Nas Cycas vamos ter vulos grandes produzidos em folhas modificados. Tem uma
caracterstica primitiva que terem os anterozides flagelados que nadam, um anterozide penetra
no arquegnio e conjuga-se com a osfera.
A segmentao do zigoto por divises nucleares livres comeando a aparecer a PC mais
tarde. O zigoto uma clula elipsoidal rica em substncias nutritivas. No plo oposto ao micrpilo
forma-se o pr-embrio com regio de absoro, suspensor e regio apical que por proliferao
origina o embrio propriamente dito. A edificao do embrio feita com um nmero muito grande
de clulas a partir da regio apical indiferenciada e a organognese comea com a formao dos
cotildones e esboo do pice caulinar, com muitas clulas. Temos ento embries enormes dentro
da semente.

Ginkgophyta

As divises nucleares so livres havendo numerosos ncleos no citoplasma do zigoto. A

31

formao de PC estende-se a todas as clulas. Vai comear no plo mais interno a formar-se o
embrio compacto e so edificados a custa de um grande n de clulas. So embries compactos no
se formando suspensor e alongando pouco a parte mdia. a regio apical do pr-embrio que
origina o embrio.

Coniferophyta

A fase nuclear livre muito reduzida ou
inexistente. A embriognese inicial (formao do pr-
embrio) muito diversa:

Taxodium: um embrio formado se as 4
clulas permanecerem unidas. Caso contrrio forma- se
um nmero varivel de embries.
Thuja: quatro clulas apicais organizadas em
tetraedro e no em camada, h formao de um
embrio.

Araucaria: a segunda camada de clulas do pr-embrio que forma o embrio.

A proliferao celular que conduz formao de rgos ocorre mais cedo do que nas
Cicadales. H uma fase inicial de mitoses em que h poliembrionia, desenvolvem-se vrias oosferas
e formam-se vrios embries a partir de um mesmo pr-embrio. Vo competir no endosperma
sendo que tudo absorvido subsistindo um apenas. H uma proliferao muito macia de clulas.
No inicio da embriognese ocorre um processo de desdiferenciao clulas, as clulas da
extremidade podem separar-se originando um embrio cada. As clulas dos embries globulares so
uniformemente meristemticas. Posteriormente s as regies organognicas permanecem
meristemticas: cotildones, hipoctilo e capa embrionria que cobre o centro radicular. Aqui o
processo de fecundao no inclui gmetas que nadam, aqui e nas angiosprmicas j est
dependente da formao do tubo polnico, um tubo vector que direcciona e posiciona os gmetas.

Podem-se distinguir no entanto duas etapas:

a) Fase inicial da formao do pr-embrio

Pinacea e Abitaceae (Fecundao-Tubo vector: sifonogmica)

Oosfera uma clula volumosa que sofre mitoses iniciais dando origem a 4 ncleos livres
que vo migrar para o plo interno e sofrer mitoses originando 8 ncleos com 2 camadas cada um.
So as camadas pr-embrionrias que vo formar o pr-embrio. Forma-se ento a camada roseta
(clulas abertas), o suspensor alonga e forma-se o embrio.

Taxodiaceae e Cupressaceae

Da segmentao do zigoto surge o pr-embrio constitudo por 3 camadas e sem roseta. Na
extremidade as clulas embrionrias no de dispem em camada, formam um tetraedro. Apenas se
origina um embrio.

Taxaceae

32

O zigoto pequeno e fica dividido pela formao de paredes celulares. No h camada
nutritiva (clulas de roseta). A roseta terminal origina o embrio propriamente dito.

Araucariaceae

O pr-embrio constitudo por 3 camadas, sendo que no a da extremidade que origina o
embrio mas sim a regio mediana.

b) Formao do suspensor e embrio

Pinaceae, Pinus

As clulas do suspensor crescem sem se dividir, mergulhando as clulas apicais no
endosperma. Cada clula apical divide-se transversalmente e obliquamente dando origem a um
embrio compacto onde posteriormente se forma a radcula e 3 a 10 cotildones. Os suspensores
alongam muito, fragmentam-se e originam uma multiplicidade de suspensores. Alm disso cada
uma das 4 clulas da extremidade podem dividir-se e cada uma delas originar um embrio (4
embries) mas apenas um se desenvolve. Cada zigoto pode originar 4 embries, poliembrionia.

Taxodiaceae, sequia

H sries sucessivas de clulas da base do embrio (tubos embrinicos) que crescem como
as clulas do suspensor. No h uma determinao de crescimento.

Taxaceae

A partir do alargamento das clulas pr-embrionrias podem formar-se pr-suspensores que
originam pequenos embries supranumerrios, no fim s um sobrevive. Os embries maiores
formam-se a partir de suspensores secundrios.

Gnetophyta

Est nas gimnosprmicas porque tem vulos isolados e no dentro de um ovrio como nas
angiosprmicas. Os vulos tm 2 tegumentos, caracterstica das angiosprmicas, em que o interno
pode prolongar-se formando o tubo polnico. Tem ento caractersticas das gimnosprmicas e das
angiosprmicas. Nas Gnetales a conjugao d-se atravs do tubo polnico que tem, geralmente,
mais clulas (ncleos) do que nas Conferas. Na extremidade do tubo polnico formam-se 2 ncleos
gamticos.
Quando o zigoto inicia o desenvolvimento ocorrem divises nucleares livres.

Ephedra: tem frequentemente 8 ncleos que no se desenvolvem diretamente em clulas
embrionrias mas sim em suspensores secundrios;

Gnetum: tem 2 fases de divises nucleares livres: uma no zigoto, que se ramifica em
suspensores e na extremidade de cada suspensor forma-se uma clula embrionria e outra quando
esta clula inicia as divises no inicio o jovem embrio cenoctico.

Welwitschia: tem 2 ncleos livres que do origem clula basal e apical, que por sua vez

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do origem ao embrio.

Estas caractersticas (divises nucleares livres) mostram que no inicio do desenvolvimento
no h pr-determinao. A poliembrionia em Ephedra e Gnetum mostra tambm que no h pr-
determinao.
O embrio indiferenciado surge tardiamente sem segmentao organizada, a organognese
surge lentamente.

Ephedra

O macropotalo tecidulas (endosperma) com 2/3 arquegnios.
Quanto conjugao, s se conjuga com a oosfera formando
um zigoto/ arquegnio, mas todos os arquegnios podem ser
fecundados.
Quanto embriognese, o ncleo do zigoto divide-se sem
ocorrer formao de paredes celulares. Posteriormente cada clula
alonga (suspensor) penetrando no endosperma. Na extremidade
forma-se uma clula apical. Com o alongamento da clula suspensor, a
clula apical penetra no endosperma. Por proliferao celular da clula
apical forma-se uma estrutura ovide a partir da qual se organiza o embrio. As clulas basais deste
embrio originam um suspensor pluricelular secundrio. A raiz primordial que se forma penetra
neste suspensor.

Gnetum

O macroprotalo cenoctico sem arquegnios, equivalente a um saco embrionrio das
angiosprmicas sendo que qualquer ncleo pode ser fecundado. No h uma proliferao celular,
no h formao de PC a separar as clulas. Qualquer um destes ncleos pode funcionar como
gmetas.
Quanto conjugao cada tubo liberta 2 ncleos, cada um pode conjugar-se com um ncleo
do saco embrionrio formando 2 zigotos equivalentes.
Quanto embriognese o zigoto bifurca-se em vrios suspensores primrios
que se alongam e ramificam formando suspensores secundrios que na sua extremidade formam
vrios embries. Primeiro forma-se um corpo no organizado de pequenas clulas. As clulas da
base alongam (tubos embrionrios) e as da extremidade organizam-se originando 2 delicados
cotildones, um hipoctilo longo e a radcula. Forma-se ainda um longo escutelo entre a radcula
e o hipoctilo.

Suspensor pluricelular secundrio

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Welwitschia

O macroprotalo (endosperma) tem clulas plurinucleadas com
paredes finas e no possui arquegnios. Na parte superior as clulas emitem
tubos protalares para o nucelo
ao encontro dos tubos polnicos.
Na parte inferior os ncleos das
clulas plurinucleares fundem-se
dando origem a clulas diplides.
Todos os ncleos podem fundir-
se e podem formar-se PC
envolvendo 2 ncleos.
Quanto conjugao,
ocorre anastomose entre os tubos polnicos e os tubos
protalares. Podem ocorrer tambm 2 conjugaes
formando-se 2 zigotos equivalentes. A conjugao ocorre
ento no tubo protalar emitido pelo nucelo.
Quanto embriognese, aps a diviso do zigoto
a clula basal alonga consideravelmente formando o
suspensor primrio e da clula apical forma-se o
embrio. H formao de um embrio cnico, cujas
clulas basais originam tubos embrionrios que rodeiam
a extremidade do suspensor. O embrio emite umas
clulas na periferia que rodeia a extremidade do
suspensor e h uma proliferao considervel, uma
massa extraordinria de clulas que s tardiamente se
identificam como os cotildones, e a raiz e radicula, que
esto ligadas ao suspensor. Com a germinao o embrio
rompe pelo suspensor. Tem 2 cotildones que esto na
base das 2 folhas com crescimento constante na vida
desta planta.

Suspensores primrios
Vrios embries

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Clula basal Tubos embrionrios


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ANGIOSPRMICAS: temos agora um protalo incluso no nucelo do ovulo que por sua vez j no
surge livre, forma-se dentro de uma estrutura, o carpelo e reabsorvido. H reduo do protalo a
algumas clulas que constituem o caso embrionrio. H formao de esporos por meiose e h
muitos processos de formao das estruturas subsequentes. O que acontece de uma maneira geral
3 esporos degenerarem e um proliferar dando origem a um saco embrionrio, um protalo. J no
forma arquegnios, forma ncleos que funcionam de gmetas unindo-se e originando um ncleo
central. Ocorre dupla fecundao, o tubo vector lana 2 gmetas, fundindo-se um com a oosfera e o
outro com a estrutura dos 2 ncleos polares/mesocisto formando uma estrutura triplide que d
origem ao endosperma secundrio que reveste o embrio.

Os embries so pequenos e a organognese precoce, os primeiros rgos so edificados
com um nmero reduzido de clulas. A segmentao, multiplicao celular ordenada, segue padres
geomtricos regulares nas fases iniciais do desenvolvimento.

Durante a embriognese estabelece-se o eixo da planta, com o pice radicular num polo e o
pice caulinar no outro, estabelecendo-se o padro bsico de tecidos nesse eixo (sistema drmico,
fundamental e vascular). aqui que se define o padro radial e longitudinal. O pr-embrio muito
uniforme na maioria das angiosprmicas e o embrio varia conforme os taxa. A embriognese
ento um processo organizado em que o embrio edificado cedo com um pequeno nmero de
clulas. A organognese cedo comea, na fase inicial j h rgos identificveis. As mitoses tm
padres muito regulares, h segmentao ordenada
originando tecidos facilmente identificveis e cedo.
A clula basal sofre mitoses segundo um mesmo
plano, originando o suspensor. O conjunto superior origina
4 clulas, depois 8 e depois essas 8 sofrem mitose para
originarem a estrutura central e a camada perifrica.

H uma fase inicial constante em todos os grupos
das angiosprmicas, dai para a frente j varia.


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Oosfera e zigoto de Arabidopsis thaliana

A oosfera polarizada, tem
distribuio assimtrica dos constituintes.
Tem um grande vacolo do lado micropilar,
um ncleo e a maior parte do citoplasma do
outro lado. O zigoto mantm esta polaridade
aps a conjugao. O ncleo e o citoplasma
vo ento ficar num polo e o vacolo e
algum citoplasma no outro.

FASES INICIAIS DA EMBRIOGNESE

A 1 diviso assimtrica, a clula mais pequena
recebe a maior parte do citoplasma e a outra recebe a maior
parte do vacolo. A clula vacuolizada divide-se mais
algumas vezes sempre no mesmo plano. De inicio origina a
clula basal e o suspensor que liga o embrio ao saco
embrionrio. A clula com a maior parte do citoplasma
origina o embrio propriamente dito, com padro axial. Este
embrio na fase inicial vai dar origem a uma estrutura que
por mitoses sucessivas e organizadas fica revestida por 8
clulas, 32, etc. formando uma estrutura esfrica.

Embrio Globular

A clula embrionria apical divide-se
longitudinalmente originando uma estrutura esfrica
constituda por 2 clulas. A clula do suspensor divide-se
transversalmente. As divises seguintes do embrio so
sncronas e espacialmente ordenadas: 2longitudinalmente
4 transversalmente 8. Estas 8 clulas do origem
camada perifrica que cobre 8 clulas internas, estado de
formao da protoderme (dermatognio). As divises
subsequentes continuam a ser organizadas no espao mas
no sncronas, originado 16 32 clulas centrais rodeadas
por 32 clulas perifricas protodrmicas. durante a fase do
embrio globular que surge o primeiro sinal de diferenciao
histolgica.

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Embrio Cordiforme (em forma de corao) e Embrio Torpedo

Cordiforme Torpedo

A fase globular termina com divises celulares localizadas que do origem aos primrdios
dos cotildones. Durante o estado cordiforme definem-se os pices caulinar e radicular, restabelece-
se a polaridade axial e evidencia-se a diferenciao histolgica distinguindo-se o procmbio no fim
da fase cordiforme. Com o alongamento da estrutura pelo eixo axial inicia-se o estado torpedo da
embriognese distinguindo-se o hipoctilo e radcula e podendo levar o crescimento dos cotildones,
que depende do transporte de substncias, dobra dos mesmos. A diferenciao histolgica
continua, diferencia-se o procmbio, o meristema fundamental e a rodear, a protoderme.

Embriognese em DICOTILEDNEAS


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Embriognese em MONOCOTILEDNEAS

H segmentao inicial. Em posio adventcia, lateral, comeam a surgir 2 protuberncias
no centro (camadas intermdias) das quais aparece o pice caulinar e o hipoctilo, com origem
adventcia relativamente ao eixo inicial.

As camadas inferiores so os locais de edificao da radcula e da coifa. O endosperma
abundante, com escutelo/cotildone. regio de bifurcao d-se o nome de mesoctilo.

Embrio de monocotilednea:

2 octantes superiores

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Endosperma

Forma-se sempre mas pode persistir ou ser absorvido. Forma-se da dupla fecundao com a
conjugao do ncleo masculino com 2 ncleos polares ou com o mesocisto.
Em algumas dicotiledneas (leguminosas) o endosperma envolve o embrio durante as fases
iniciais da embriognese mas desaparece durante a maturao da semente tornando-se os
cotildones os rgos de armazenamento.
Noutras dicotiledneas (Ruscus), o endosperma persiste durante a formao da semente.
Em monocotiledneas (gramneas), o endosperma pode constituir 70% da semente.

O endosperma contribui para o desenvolvimento do embrio no s fornecendo nutrientes
mas tambm providenciando o ambiente e sintetizando as substncias necessrias ao seu
desenvolvimento nas fases iniciais, enquanto imaturos. Os embries imaturos isolados, ao contrrio
de embries maduros, necessitam de sacarose, aminocidos e fito-hormonas para completarem o
desenvolvimento, tm de ser suplementados quando se tira o endosperma.

Embriognese e desenvolvimento da semente
(caracterizao molecular e morfolgica do desenvolvimento do embrio e da semente)

Estados:

I - Globular
II - Cordiforme
III Torpedo (todos os rgos esto
formados mas ainda no atingiram o
tamanho e peso final)
IV Crescimento ( aumento
extraordinrio da semente com grande
incorporao de substncias de reserva,
diviso celular intensa, grande
actividade metablica com sntese e
acumulao de substncias de reserva,
h portanto um aumento do peso seco
havendo diminuio da gua)
V- Dormncia (pra a sntese proteica e
acima de tudo o embrio perde gua)

Expresso de genes durante a embriognese e desenvolvimento da semente

Durante as fases de embriognese e formao da semente surgem diversos conjuntos de
mRNAs como resultado de variaes qualitativas e quantitativas da expresso gnica. O numero de
genes que se expressa na fase III (cotildones) semelhante ao nmero de genes que se expressa na
fase de maturao (IV) e equivalente ao numero de genes que se expressa num caule ou folha
desenvolvida.
H ento uma populao constante de mRNAs, comum a todas as clulas, que faz parte do
metabolismo celular bsico. Mas depois h mRNAs especficos que aparecem e desaparecem,

41

associados a fenmenos de protenas de armazenamento, codificao de protenas metablicas,
perda de gua. H milhares de mRNAs diferentes durante a fase intermdia de maturao, a maioria
dos quais est presente no estado de formao de cotildones e de embrio maduro. Alguns genes
so expressos exclusivamente nos embries e destes h genes especficos de determinao do
estado:

- um grupo expressa-se na embriognese inicial;
- outro na fase intermdia de maturao (codificam protenas de armazenamento)
- outro expressa-se na fase final da embriognese e desenvolvimento da semente (desidratao da
semente)

Complexidade da expresso gnica no embrio

Os embries das plantas so morfologicamente simples mas muito complexos em termos de
biologia molecular, h um grande nmero de genes expressados.

Identificao de genes do desenvolvimento atravs de fentipos mutantes

Modelo: Arabidopsis thaliana

Induo de mutaes por:

1. Tratamento da semente com uma substncia qumica mutagnica
2. Insero aleatria, nos genes, de T-DNA do plasmdeo ti de Agrobacterium tumefaciens. As
sementes so tratadas com Agrobacterium contendo plasmdeo de ti modificado, os genes
indutores do tumor sero suprimidos e ocorrer a insero do gene de resistncia a antibitico
(canamicina). Algumas clulas, dos embries das sementes tratadas, sero transformadas por
insero do T-DNA (contendo o gene de resistncia) em alguns dos seus genes.
1.
2.
3.

42

Em ambos os casos, para que a mutao passe gerao seguinte necessrio que ocorra numa
clula que contribua para a formao de gmetas, ou seja, numa clula do meristema apical caulinar
cujas clulas-filhas participem na formao de flores. Isto tem uma baixa probabilidade de
acontecer mas caso acontea, o sector da planta proveniente dessa inicial apical com o gene mutado
ter a mutao.

Resultado das sementes maduras tratadas com o agente mutagnico:

Tm uma frequncia muito baixa pois um gene necessrio ao desenvolvimento normal da
plntula surgir mutado numa das clulas que originar os gmetas da planta adulta. Formar-se-
um sector mutante heterozigtico na camada L2 do pice caulinar que contribuir para a formao
de gmetas em algumas flores. Aps a autofecundao, dos gmetas mutados surgiro plntulas
mutantes homozigticas na gerao F1, sero normais (2/4 heterozigticas e silvestres). As
heterozigticas aps autofecundao originam novamente mutantes na F2.

A organizao do embrio de Arabidopsis evidencia 2 padres de segmentao sobrepostos:

Padro axial (ao longo do eixo apical-basal): 5
segmentos: SAM (shot apical meristema),
cotildones, hipoctilo, radcula e RAM (root
apical meristema)

Padro radial (ao longo do eixo radial): 3
camadas de tecidos: Protoderme, Meristema
fundamental, Procmbio

Formao do plano bsico do corpo das plantas nas fases iniciais da embriognese

Durante a embriognese inicial no se formam os tecidos e os rgos da planta adulta,
organiza-se somente um corpo muito simples com primeiramente um padro radial que se inicia

43

como embrio globular e depois um padro axial que se estabelece como embrio cordiforme.
Aps a embriognese inicial, em estado cordiforme, a maioria das estruturas que constituiu o
corpo de uma planta adulta resulta da actividade de meristemas.

Durante a embriognese que se estabelecem os 3 padres bsicos de desenvolvimento que
persistem na planta adulta: o padro radial de disposio dos tecidos nos rgos, o padro de
desenvolvimento axial apical-basal e os meristemas primrios que apos a germinao da semente
originam a maioria do corpo das plantas.

Nas fases iniciais da embriognese possvel identificar clulas que originaro os diferentes
tecidos e rgos da jovem planta. No estado de embrio globular, como decorrncia de as divises
celulares ocorrerem segundo planos precisos, possvel reconhecer clulas ou grupos de clulas que
originam os 3 sistemas de tecidos drmico, fundamental e vascular.
Do mesmo modo no estado cordiforme identificam-se as regies que originam cotildones,
hipoctilo e radcula da jovem planta.
Contudo, isto no significa que o destino de qualquer clula fica irremediavelmente
determinado durante as fases iniciais da embriognese. No h uma pr-destinao, mas o seu
destino resulta da sua posio.


44


45

VII - BIOLOGIA MOLECULAR DA EMBRIOGNESE

Anlise gentica da embriognese

No desenvolvimento embrionrio a formao de padres um paradigma dominante.
Todos os estudos que se fazem para tentar compreender a formao de padres desconstroem a
biologia, introduzimos anomalias nos organismos para perceber o que faz falta para um
desenvolvimento normal.

Existem 2 tipos de mutantes:

1. Embries com mutaes letais: no se chega a saber se estes mutantes apresentam
deficincias em importantes genes reguladores do desenvolvimento ou em simples funes
metablicas de protenas bsicas.

Raspberry (rasp): no passa do estado de embrio globular.
Interrompem o desenvolvimento no estado de embrio globular,
antes da formao dos primrdios dos rgos. No entanto
parecem mostrar histognese normal, diferenciao celular
especifica, mesmo na ausncia de morfognese.
(A silvestre B mutante)

Twin: ao interromper o desenvolvimento o suspensor
alarga e as clulas do mesmo formam um embrio
adicional formando 2 embries em Tandem. Admite-se que
uma mutao que interfere com o efeito repressor normal
do embrio sobre o suspensor.
( A e B mutantes)

Sus: desenvolvimento pra ainda mais cedo provocando o alargamento do suspensor que
formar embries adicionais que no se desenvolvero. A actividade do produto do gene
SUS impede o desenvolvimento embrionrio do suspensor.
( A silvestre B mutante sus com o suspensor a desenvolver-se como um embrio na
setinha)


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Sus + twin: os produtos do gene SUS e TWIN iniciam trajectos de sinalizao necessrios
ao desenvolvimento normal do embrio e actividade do suspensor, so dois modelos na
especificao do suspensor que podem:

a) Activar um programa especifico para o suspensor (suspensor anormal deve-se a um
defeito na produo de sinal no embrio)
b) Reprimir um programa embriognico no suspensor (o suspensor anormal deve-se a
defeito na percepo do sinal pelo suspensor)

Assim, mutaes que originam defeitos
no desenvolvimento do pr-embrio permitem
que o suspensor adquira caractersticas de pr-
embrio (ex: raspberry e sus) e, no extremo,
origine um novo embrio (ex: twin).
Estas observaes indicam que o
suspensor tem potencial para seguir um trajecto
de pr-embrio e que o pr-embrio envia um
sinal inibidor ao suspensor para o manter no
estado diferenciado.
Em alternativa, tambm possvel que
haja um equilbrio delicado de reguladores de
crescimento em todo o embrio de modo a
manter o desenvolvimento do suspensor e do
pr-embrio.
A importncia do suspensor foi detectada em culturas in vitro de embries com e sem
suspensores em que foi demonstrado que para o completo desenvolvimento embrionrio o
suspensor essencial no estado cordiforme mas no nos estados seguintes.
H uma grande diversidade de suspensores. Percorrendo a escala evolutiva, surgem nas
Pteridfitas. Na Gimnosprmicas h numerosos suspensores que proliferam extraordinariamente.
Nas monocotiledneas h desde volumosos at estreitos e constitudos por poucas clulas porque os
embries so muito pequenos. Nas dicotiledneas podem ser complexos, no haver ou serem
volumoso, entre outros. O que todos tm em comum que no incio a clula basal muito activa
metabolicamente.


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2. Embries com mutaes na formao de padres: mutao em alguns genes, em reduzido
nmero, que so fundamentais para a formao de um padro sendo reguladores primordiais
situados no topo da pirmide reguladora controlando aspectos fundamentais da organizao do
corpo do embrio. Estas mutaes no interferem com o desenvolvimento do embrio mas
produzem plntulas com um fentipo reconhecvel que reflecte o defeito do embrio.

2.a) Mutantes sem eixo de polaridade

Short integument (Sin 1): gene materno, vulos com mutao a
nvel do tegumento que afecta o gametfito. Depende do gentipo do
tecido materno e no do gentipo do zigoto. Os embries apresentam
massas tecidulares desorganizadas ou cotildones fundidos em forma de
funil.

Gnom: actua nas fases iniciais do desenvolvimento, h uma
deficincia com vrios graus de severidade, no h edificao de um eixo de
polaridade, podem ficar esfricos ou ter alguma polaridade com a parte
superior globosa. Sabe-se que a primeira diviso em vez de ser assimtrica
simtrica, originando 2 clulas iguais e no uma com mais contedo que a
outra. O GNOM est envolvido em mecanismos de trnsito celular entre
protenas e um gene que actua na fase inicial do desenvolvimento e que
est a montante de todos os prximos, episttico.

As vesculas de transporte localizam as protenas, para que sejam
acopladas a outras protenas envolvidas. O GNOM uma protena que
medeia a fosforilao de um factor de resposta auxina, vo recrutar uma
protena que transporta PIN para a membrana basal. s vezes h mutaes
em produtos gnicos diferentes com resultados semelhantes, porque isto
funciona como um sistema.

A protena GNOM est associada face citoslica dos
endossomas e medeia, em ARF, a substituio de GDP por GTP.
Por sua vez, ARF-GTP recruta para a membrana uma coat
protein que eleva a concentrao de PIN1 nos locais de
formao de vesculas de transporte. As vesculas que
transportam PIN1 so endereadas para o domnio basal da
membrana citoplasmtica. PIN1 subsequentemente
internalizada e reciclada para os endossomas.

GNOM necessria para a reciclagem de componentes
de transporte de auxina e as ARF-GEFs regulam trajectos
especficos de trnsito de endossomas.


48

2.b) Mutantes por supresso de segmentos do eixo de polaridade

So mutantes sem determinados segmentos ao longo do eixo apical-basal.

Monopteros: um factor de transcrio nos
complexos de resposta auxina. H supresso do
segmento basal, no forma hipoctilo nem pice radicular
mas pode formar cotildones. um fentipo que surge no
inicio do desenvolvimento. Todas as clulas do pr-
embrio se comportam como se fossem da camada superior.
As clulas da camada inferior permanecem isodiamtricas
no formando fiadas de clulas. No h hipfise (clula
que medeia a ligao entre o suspensor e o embrio). H
uma mutao que est relacionada com o deficiente
transporte de auxina no sentido longitudinal, no h eixo
longitudinal.
(A a C silvestre D a E mutantes monptero)

Gurke: regio apical anormal, sem pice caulinar e cotildones mas forma hipoctilo e raiz
com estrutura radial normal.

Fackel: embrio globular com deleo da regio central, apresenta a raiz diretamente ligada
aos cotildones.

Gurke regio apical anormal

Fackel regio central anormal
Monoptero regio basal anormal
Gnom desenvolvimento apical-basal
afectado

O desenvolvimento axial requer a expresso de genes especficos.
Considerando que os fentipos mutantes definem 3 regies ao longo do eixo apical, central e
basal, assume-se que as 3 regies so essenciais para a formao do padro apical-basal.
Os genes GURKE, FACKEL, MONOPTEROS e GNOM so necessrios para o

49

estabelecimento do padro axial do embrio mas no esto envolvidos na determinao dos tipos
fundamentais de tecidos nem no controlo da diferenciao celular.
A participao do gene GNOM um pr-requisito para que se manifestem os efeitos dos
outros genes uma vez que episttico relativamente a MONOPTERO e quando est inactivo este
no se manifesta.

Transporte de auxina durante a Embriognese inicial

Na embriognese comeam a localizar-se nas membranas basais transportadores de auxinas,
comeam a ficar definidos trajectos de transporte de auxina e ao longo desses corredores que se
diferenciam os feixes de procmbio que do origem aos feixes vasculares. Esse trajecto vai marcar
os locais de edificao da vasculatura.

Protenas PIN e Transporte Polar de Auxina

H localizao preferencial de protenas para o transporte de auxina das partes apicais raiz.
Estes transportadores vo num determinado momento para a parede lateral promovendo a
proliferao celular que leva s radculas laterais.

Quadro Mutantes:
Mutaes letais: Raspberry
Twin
Sus
Sus e Twin
Mutaes na formao de padres:
Mutantes sem eixo de Polaridade: Gnom

Mutantes por supresso de
segmentos de eixo de polaridade:
Monopteros
Gurke
Fackel
(Gnom supresso total)


50

VIII - FORMAO DO PADRO RADIAL

51

(Histognese da endoderme e especificao do centro quiescente e clulas-me)

Mapa da origem embrionria do pice radicular

O promeristema constitudo por clulas provenientes de cada um das 2 clulas (apical e
basal), resultantes da 1 diviso do zigoto. A clula basal forma o centro quiescente, a regio da
columela e a coifa. A clula apical forma o resto do promeristema e o corpo da planta.

Padro radial

Distingue-se a partir do estado de embrio globular. H uma massa protodrmica e um
conjunto interno de clulas grandes que se diferencia num tecido fundamental e vascular. H uma
disposio concntrica dos tecidos. Durante a embriognese as clulas que originam os 3 tecidos
bsicos so separadas por barreiras clonais distintas e a arquitectura do promeristema forma-se no
estado cordiforme.
Durante o desenvolvimento embrionrio e ps-embrionrio o eixo radial, em todas as partes
da planta, est sob o mesmo mecanismo de controlo. Mutaes em determinados genes tm efeitos
semelhantes no desenvolvimento do padro radial da radcula, hipoctilo, raiz e caule. O padro
radial da radcula mantm-se nas razes ps-embrionrias.

Sinais Intercelulares

A comunicao intercelular feita atravs dos plasmodsmios. Interferem com os processos
de diviso assimtrica das clulas. O crtex e a endoderme dividem-se numa fase inicial
assimetricamente para dar origem endoderme. Quando isso no acontece, formam-se camadas de
tecido fundamental que apresentam caractersticas comuns ao crtex e endoderme. O que falha aqui
que no h a duplicao de fiada e vamos ter mutantes:

Scarecrow (SCR): uma camada com carateristicas mistas crtex endoderme
Short root (SHR): uma camada com caracterstica de crtex
Wooden leg: tecidos vasculares alterados

Todos tm fentipo comum.

O gene SHR controla a diferenciao da endoderme, camada onde no transcrito,
expressando-se no procmbio do embrio globular e induzindo a expresso de SCR no meristema
fundamental do embrio cordiforme. SCR necessrio para a diviso periclinal do meristema
fundamental em crtex e endoderme. O gene SHR transcrito em todo o estele e pelo contrrio,
SCR transcrito na endoderme, iniciais do crtex-endoderme e suas derivadas assim como no

52

centro quiescente.

Nos mutantes scr falta uma camada de tecido fundamental por no ocorrer uma diviso
assimtrica chave no meristema fundamental que originaria a camada cortical e a endoderme. A
clula derivada continua a dividir-se transversalmente em vez de periclinalmente de modo que os
mutantes ficam com uma camada de tecido fundamental com caractersticas de crtex e endoderme.

2. Sinalizao Radial

Normalmente cada inicial cortical (meristema fundamental) divide-se transversalmente
mantendo uma clula inicial cortical e originando uma clula derivada que se divide
assimetricamente no plano periclinal, originando uma clula cortical externa e uma clula
endodrmica interna. embrionria
O centro quiescente ser um reservatrio de clulas que podem crescer intensamente
levando as clulas a promover o crescimento em situaes particulares. H assim um nicho de
clulas que so mantidas no estado totipotente e indiferenciado pela interaco dos mecanismos de
regulao.
O trajecto SHR essencial para o padro radial da raiz e especificao das clulas-me no
centro quiescente. Este forma-se numa posio definida por sinais SHR/SCR e Auxina/PLT
relacionando as coordenadas radiais com as apicais-basais. Os genes PLETHORA intervm na
formao do padro radicular e manuteno das clulas-me.
O centro quiescente fundamental para manter as clulas meristemticas do RAM. A
transcrio de genes PLETHORA ocorre em resposta acumulao de auxinas. Esta expresso
longitudinal de PLT sobrepe-se com a expresso radial de SHT e SCR, ambas fornecendo a
informao necessria para o estabelecimento do centro quiescente.

O padro radial dos tecidos estabelecido mediante a expresso de genes de identidade

53

celular ou histolgica (territrios celulares marcados por genes), que marcam territrios de
expresso permitindo ou inibindo a actividade de outros genes cujos produtos so necessrios para o
desenvolvimento e funcionamento daqueles tipos de clulas e tecidos.
Aps a ablao (destruio das clulas), o curso de desenvolvimento das clulas foi
analisado atravs da expresso de genes marcadores especficos de determinados tecidos. Por
destruio de uma clula inicial cortical, a clula adjacente de periciclo divide-se e a derivada ocupa
o espao e adquire caractersticas de inicial cortical.

Um mutante, fass(ton), tem camadas celulares supranumerrias. H uma proliferao
anormal de clulas e aparentemente desordenadas. H um core central de tecidos vasculares,
protoderme, etc mas com um padro muito peculiar.

Advm de defeitos nos estados iniciais da embriognese. Temos plantas pequenas completas
mas estreis. Tm um padro axial e radial normal. So mutantes e surgem com padres aberrantes
das clulas porque a mutao no deixa que se forme banda pr-profsica. As divises celulares no
so nucleares, sao aberrantes. H irregularidade na distribuio das clulas porque um requisito
muito importante o aparecimento da banda pr-profsica. Como no h marcao de ligao da
placa celular, marcados pela banda, liga-se a qualquer lado.
Sabe-se que os mutantes tm nveis elevados de IAA que pode originar o crescimento
anormal.
Mas estas mutaes no impedem completamente o estabelecimento do padro radial
podendo inferir-se que o controle preciso e ordenado do plano de diviso celular no essencial
para o estabelecimento do padro radial de diferenciao histolgica.

As citocineses so regulares mas incompletas devido inactivao de um gene importante
na fuso de vesculas. A placa celular no vai para lado nenhum, no atinge a parede da clula-me
havendo uma citocinese deficiente. Falta uma protena de reconhecimento que faz parte da
membrana. H edificao de um eixo longitudinal, a embriognese completa-se mas nos mutantes
homozigticos a disposio dos tecidos severamente alterada porque no h protoderme e as
plantas morrem aps a germinao.
As plantas no tm meristemas funcionais e morrem aps a germinao.

Resumindo: As mutaes knolle e ton (fass) alteram o padro normal de diviso celular no
desenvolvimento embrionrio e ps-embrionrio. Contudo, ton diferente de knolle pois os
mutantes de ton estabelecem o padro radial e a mutao knolle impede-o ao no permitir a
separao das clulas filhas na citocinese porque a placa celular fica incompleta.

3. Sinais Longitudinais
(estudos de ablao por laser)

Destruio do centro quiescente, o espao ento ocupado por clulas que se originaram a
partir de clulas iniciais procambiais e que adquirem caractersticas tpicas de clulas do centro
quiescente.

Experincia:

a) Se a derivada de uma clula inicial crtex-endoderme for destruda, o desenvolvimento da
raiz no afectado. A inicial por baixo da clula destruda forma uma nova clula-filha que
se divide assimetricamente para formar endoderme e crtex.

54

b) Contudo, se 3 clulas adjacentes, filhas de derivadas corticais forem destrudas, a inicial
cortical forma clulas-filhas que no se dividem assimetricamente (mutao scr). O
segmento acima da inicial cortical mdia desenvolve somente uma coluna de tecido
fundamental sugerindo que a ablao priva aquela seco do meristema apical da
informao posicional necessria diviso assimtrica em endoderme e crtex. Alguma
informao determinante do padro radial gerada pelo meristema parece originar-se em
segmentos mais velhos da raiz.
c) O efeito de destruir 3 clulas adjacentes no sentido radial diferente. Se uma clula derivada
da cortical inicial for destruda juntamente com a clula do periciclo adjacente do lado de
dentro, e a clula epidrmica no exterior, o desenvolvimento da raiz no afectado. A inicial
cortical por baixo da clula destruda forma uma nova derivada que se divide
assimetricamente.

Estes trabalhos sugerem que a informao do posicionamento transmitida dos tecidos mais
velhos para o pice da raiz. o destino

As clulas no mudam de camadas, durante o processo de desenvolvimento do origem a
clulas que so integradas em outras camadas que se comportam como se j ai tivessem surgido. a
informao posicional que controla a aquisio de funes. O padro histolgico da raiz a partir da
fase inicial embriognica resulta em parte da especificao histolgica de clulas em
desenvolvimento provenientes de sinais de clulas mais adultas.

Concluses: a informao posicional desempenha um papel fundamental no controlo da identidade
das clulas e tecidos. Na determinao do destino de desenvolvimento de uma clula ou tecido a
posio mais importante que a linhagem, origem. A estrita correlao entre linhagens celulares e
determinados padres celulares, em certas razes (Arabidopsis), resulta simplesmente de divises
celulares regulares em fiadas e camadas definidas.

IX- RAM E EDIFICAO DA RAIZ

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(Meristemas apicais e formao do corpo das plantas: pice radicular (RAM) e edificao da raiz)

Organizao da raiz embrionria

A arquitectura do RAM forma-se no estado de embrio cordiforme. H sinalizao da
auxina que contribui para a edificao do eixo de polaridade e expresso de genes que actuam no
pice radicular levando diferenciao.

Meristema: um tecido, uma populao de clulas que mantm as caractersticas embrionrias,
nomeadamente a capacidade de se dividir. H manuteno do prprio meristema, algumas retm a
capacidade meristemtica, so as clulas iniciais que podem manter estas caractersticas
indefinidamente sendo as derivadas que iro diferenciar-se.

Classificao: Posio: Apicais ou Laterais (engrossamento II)
Origem: Primrios (laterais) ou Secundrios (apicais)

Posicionamento dos meristemas apicais

Um embrio uma estrutura axial com um pice caulinar e radicular ao longo de um eixo
que estabelece a comunicao entre os dois plos. Este posicionamento do pice radicular na
extremidade depende do fluxo de fito-hormonas nomeadamente de auxina, de cima para a base. O
gradiente vai induzir e modelar o desenvolvimento do pice radicular. Admite-se que este gradiente
provoca uma elevada [] de auxina na futura raiz e baixa no futuro pice.

aps a embriognese que se formam as estruturas, todos os anos. Durante a embriognese
uma estrutura axial rudimentar. Os meristemas dos pices entram em atividade depois da
embriognese dando origem a uma estrutura mais organizada no pice caulinar. H iniciao de
estruturas laterais, folhas e depois ramos. H sobreposio de diversas simetrias.
Os meristemas apicais so constitudos por clulas com capacidade de se dividir tanto
quanto durar o crescimento, durante toda a vida teoricamente, contribuindo para o alongamento dos
rgos.

pice radicular

1. Pteridfitas: H algumas em que o pice edificado a partir de uma nica clula, noutras
h mais que uma (clulas iniciais apicais = clula piramidal). Esta clula no se divide, so as
derivadas laterais da mesma que se dividem. A celula apical divide-se ento apenas uma vez para
dar as primeiras derivadas passando a ser essas a dividir-se.

Azolla

Atravs de padres regulares formam-se sectores derivados. O que interessa que o tipo de
divises podem ser proliferativas, que em determinado local contribuem para aumentar clulas do
mesmo tecido e as formativas, as que esto na base da formao de novos tecidos, da duplicao
das fiadas por exemplo e formao da endoderme consequentemente.
Ao fim de um determinado perodo de crescimento pra, a capacidade meristemtica acaba,
todas as clulas se diferenciam.

Divises proliferativas: clulas-filhas com igual destino, aumentam o n de clulas nas fiadas

56

celulares;
Divises Formativas: clulas-filhas com destinos diferentes, estabelecem fiadas que originam os
diversos tecidos. As divises formativas num merfito originam clulas que vo formar novas
fiadas celulares;

2. Espermatfitas: Vamos ter um pice radicular com vrias iniciais apicais, organizadas em
camadas de tal maneira que resultam unicamente do padro de organizao. H um equilbrio entre
mitose e diferenciao. O promeristema contm um pequeno conjunto de clulas iniciais perto do
centro quiescente com organizao histolgica fechada, a partir das quais se vo formar as clulas
da epiderme, crtex e endoderme e vo dar origem ao estele (tecidos vasculares).
As camadas esto na gnese de tecidos ou os diferentes sistemas de tecidos no se
distinguem em termos de origem. Temos 2 modelos de organizao dos pices radiculares:

Centro Quiescente

Aqui as clulas dividem-se com pouca frequncia constituindo uma fonte primordial de
clulas. Esto totalmente indiferenciadas. O tamanho do centro quiescente varia com a poca do ano
e com a necessidade de crescimento.

Edificao da Raiz

D-se a partir do momento em que as derivadas alongam e se afastam do pice deixando
para trs as fiadas de clulas, linhagens celulares resultantes das divises proliferativas. H um
arranjo regular dos tecidos podendo seguir-se os percursos de diferenciao. Os padres de
segmentao so regulares. So as informaes posicionais que guiam a edificao do padro,
estabelecidas durante a embriognese, a posio que determina o trajecto de diferenciao das
clulas.

Perspectiva histrica: Teorias sobre a formao do Padro histolgico da Raiz

Teoria dos histogneos: fonte primordial de clulas na origem de diferentes tecidos,
diferentes conjuntos de clulas que se diferenciam em diferentes tecidos. O conceito durou 1 seculo
mas havia j na altura evidncias de falha da teoria.

Organizao Cito-histolgica

O que se sabe hoje que h diferentes modelos de
organizao. H grupos de iniciais organizados em camadas
ou no.

Organizao histolgica do tipo fechado: possvel
determinar uma camada precisa de origem; Organizao
histolgica do tipo aberto: seguindo a fiada chegamos a
clulas normais, no especficas;

Frequncia mittica


57

Desde a zona meristemtica que as divises aumentam quase exponencialmente at
alcanarem o mximo na zona de alongamento, depois as divises diminuem at pararem na zona
de diferenciao onde as clulas no se vo dividi mas sim especializar.

Na organizao fechada (Angiosprmicas), esto organizados em camadas mas os tecidos podem ter
origem em camadas diferentes. O promeristema do pice radicular est estabelecido como tendo 3
camadas sendo que o corte transversal igual mas as origens so diferentes, nomeadamente no que
toca protoderme:

Monocotiledneas: iniciais do cilindro central, inicias do crtex e protoderme e iniciais da coifa;
Dicotiledneas: iniciais do cilindro central, iniciais do crtex e iniciais da coifa e da protoderme;

A origem das fiadas celulares pode ser seguida at s camadas meristemticas histogneos.
Assim, em algumas plantas h uma camada inicial para a coifa, o caliptrogneo e a segunda camada
origina a protoderme e o meristema fundamental (crtex). Noutras os tecidos vasculares podem ser
seguidos at uma camada de clulas, pleroma, e a epiderme e coifa partilham a mesma camada
histognica.

Na organizao aberta (Gimnosprmicas) no h uma origem especfica para as fiadas. As razes
apresentam um crescimento indeterminado inicial que depois termina e as clulas diferenciam-se,
extinguem-se as camadas meristemticas.

Razes da mesma planta com o mesmo grau de desenvolvimento
variando a quantidade de um nutriente.

A) clulas em diviso, crescimento indeterminado;
B) estrutura parou de se dividir, tudo se diferencia formando-se
plos radiculares at. O crescimento determinado, h o fim do
meristema activo, todas as clulas se diferenciam. Isto surge em
pteridfitas, plantas superiores, em cactaceae (de ambientes secos) e
em situaes de escassez de nutrientes pois no h vantagem em
crescer.

A manuteno do RAM resulta de um equilbrio entre a proliferao celular, alongamento e
diferenciao celular. O gene RBR influencia o tamanha do RAM. Na raiz as clulas-me so
mantidas por um sinal do centro quiescente,
sendo este ltimo mantido pela interaco
SHR/SCR e PLT e um mximo de auxina.
Este mximo de auxina mantido por sua vez
por um fluxo directo para o pice que estimula
a diviso celular. WOX5, homlogo de WUS,
participa tambm na manuteno das clulas
indiferenciadas. Em contraste com o seu efeito
em promover o meristema caulinar, as
citocininas antagonizam um sinal autnomo
de diviso celular no meristema radicular,
promovendo a diferenciao celular. As
auxinas so necessrias para manter a RAM

58

mas promovem a organognese no SAM.

Os players podem ter o efeito inverso nos pices caulinar e radicular, assim como as fito-
hormonas. Cada vez se vo descobrindo mais intervenientes, alguns semelhantes que codificam
proteinas, SCR, SHR, RBR, Auxinas, Citocininas, etc.


59

X SAM

MERISTEMAS APICAIS E FORMAO DO CORPO DAS PLANTAS

O pice caulinar forma a parte area da planta, ramos, folhas, flores e frutos. diminuto e
imperceptvel.

Estrutura dos pices caulinares

1. Pteridfitas

Evoludas: a clula inicial divide-se alternadamente para os lados mas depois so as clulas laterais
que se dividem com divises periclinais que contribuem com clulas para a regio interna formando
a medula. So tambm as clulas laterais que formam os primrdios foliares. A existncia de uma
clula apical inicial uma caracterstica distintiva das pteridfitas evoludas.

Primitivas: o pice apresenta vrias iniciais apicais semelhantes. No h uma clula apical distinta
das circundantes. As clulas apicais so pouco activas ao contrario das sub-apicais que constituem
as regies meristemticas de iniciao das folhas e do estele.

2. Gimnosprmicas

Primitivas: Cicadales e ginkgo, h um conjunto de iniciais centrais (clulas-me) que praticamente
no se dividem e uma zona perifrica em anel de grande proliferao foliar que forma os primrdios
foliares e subjacente temos clulas mais alongadas que vo dar origem aos tecidos internos de todo
o caule. No centro surge o meristema medular.

Evoludas: Coniferales, tm um padro semelhante s primitivas, h a mesma zonao mas as
camadas so diferentes, as perifricas tm padres de diviso anticlinais e periclinais. A proliferao
aumenta at zona do anel gerador e depois diminui.

Corpus: clulas isodiamtricas relativamente volumosas que se dividem segundo vrios planos
(anticlinal e periclinalmente)

Tnica: uma a vrias camadas de clulas pequenas que se dividem anticlinalmente

3. Angiosprmicas

H uma zona de clulas com capacidade meristemtica como que descendentes do embrio,
com paredes finas mas muito preenchidas, que repetitivamente formam rgos laterais e outros
tecidos caulinares internos. O tamanho e estrutura varia conforme a atividade de formao de folhas
e poca do ano. Os gomos ramelares so outros pices caulinares e assim que se d a extenso dos
ramos e alargamento da poro formada no ano anterior, crescimento II. O prprio pice varia a sua
morfologia, de zona para zona e de espcie para espcie e planta para planta.

Dicotiledneas: temos uma estrutura semelhante s gimnosprmicas, as camadas perifricas s se
dividem anticlinalmente e adicionam clulas prpria camada provocando uma perpetuao ao
longo de toda a estrutura perifrica da planta. H uma organizao estratificada.


60

Monocotiledneas: o gomo um boto extremo. So estreitos, vo formar clulas que do folhas
para diferentes lados. H um esgotamento de clulas a, na zona central e o pice tem de repor em
vrios lados, oscila ciclicamente consoante a actividade mittica de formao de gomos foliares.

Organizao estratificada: na superfcie as clulas
surgem organizadas em duas ou mais camadas e com a
mesma orientao, tnica. So evidentes a camada L1 e as
L2, ambas com divises anticlinais. As clulas mais
internas constituem o corpus, com divises celulares que
podem ser anticlinais, periclinais ou outras.

Zonao cito-histolgica: vrias zonas em que as
clulas se dividem por diferentes planos, diferentes
em tamanho ou em grau de vacuolizao. A zona
central de clulas apicais axiais da tnica e corpo
constitui o conjunto de indiferenciadas e a zona
perifrica tem grande proliferao celular e
diferenciao de rgos laterais. Por baixo disto
temos a estrutura que origina a parte interna do caule,
o ring meristem.

Clulas-me (stem cells)

O pice vegetativo auto-perpectuante, h, sazonalmente, um reservatrio de clulas, com
capacidade de se dividir e que no esto determinadas sequer podendo diferenciar-se em qualquer
clula ou tecido. Consoante a atividade mittica as clulas-me podem ser mais reduzidas ou incluir
toda a parte central.
A zona central apical pode ser mais ou menos inactiva de acordo com a espcie. Esta
variao repete-se todos os anos enquanto houver crescimento vegetativo. Se um ramo der origem a
flores termina o crescimento. Passa de um crescimento indeterminado para determinado fadecendo
na fase reprodutiva. A atividade mittica da periferia tambm depende do que forma. O pice passa
de vegetativo a floral.

Actividade repetitiva dos pices vegetativos

O desenvolvimento das plantas geralmente repetitivo, particularmente no SAM. Este
forma fitmeros/metmeros, unidades modulares de diferenciao histolgica e desenvolvimento
coordenados. O fitmero caulinar basicamente constitudo por uma ou mais folhas, o n, o entre-
n subjacente e um ou mais gomos nas axilas das folhas. Apesar de os fitmeros sucessivos serem
constitudos pelos mesmos rgos, diferem quanto ao comprimento do entre-n, tamanho e forma
da folha e vigor do gomo de acordo com a sua posio no caule.


61

FUNCIONAMENTO DO PICE CAULINAR

(Equilbrio entre a proliferao e diferenciao celular)

Processos de Desenvolvimento

Primeiramente a clula cresce e s depois se d a diferenciao. O desenvolvimento envolve
informao posicional que pode ser promovida pela mobilizao de um sinal a partir da fonte
(sinais produzidas pelo meristema ou por certas clulas diferenciadas) ou por destruio selectiva de
um sinal (degradao de mRNAs ou miRNAs).

O desenvolvimento envolve territrios, permite criar barreiras especificando-os entre o pice
caulinar e o meristema apical. Um sinal cria um gradiente, do ponto de maior para o de menor
concentrao. Mas o gradiente pode ser bloqueado com a actuao de outra substncia ou factor. Na
emergncia do primrdio foliar h territrios da pgina inferior delimitados dos da pgina superior.
A produo de um padro celular na epiderme envolve tambm a inibio de sinais reguladores.

O desenvolvimento envolve reguladores, frequentemente factores de transcrio. Uma vez
estabelecidos os domnios de expresso de determinados genes para o desenvolvimento, os factores
de transcrio codificados por esses genes regulam o crescimento e diferenciao.

Expresso de genes reguladores da actividade meristemtica

Num meristema em actividade expressam-se preferencialmente determinadas classes de
genes, genes especficos de meristemas:

1. Genes envolvidos na proliferao celular (mitticos)
(reguladores do ciclo celular como ciclinas e CDKs, genes necessrios duplicao do DNA
e genes necessrios formao do fuso mittico)

2. Genes envolvidos na determinao do destino celular
(genes equivalentes a homeobox genes e outros reguladores de transcrio, homeobox
uma sequncia de DNA conservada que codifica para um motivo que se liga ao DNA)

3. Genes cuja expresso est limitada a tecidos e rgos especficos e cujos produtos intervm
na actividade dessas estruturas

Controlo gentico da actividade do pice caulinar
Como que o primrdio foliar se transforma numa folha, individualiza?

62

No meristema as clulas sao indeterminadas, totipotentes, distintas das clulas no primrdio
foliar funcionando como clulas-me. A determinao do destino celular num meristema activo
acontece quando durante a formao dos primrdios as clulas do meristema tm de perder a sua
identidade como clulas meristemticas para assumirem a identidade de apndices laterais. J no
se podem dividir mas adquirem caractersticas especficas que lhes permitem especializar-se. Sao
activadas por genes intervenientes na diferenciao e desactivadas por genes envolvidos na diviso
celular.
Contudo, no desenvolvimento de um tecido ou rgo a proliferao celular no
interrompida imediatamente. Enquanto o tecido ou rgo ocuparem a sua posio normal a
capacidade proliferativa limitada.

Mutantes KNOOTTED desenvolvimento indeterminado noot ns

As protenas KNOOTED1 actuam como factores de transcrio regulando a expresso de
outros genes e esto envolvidas na manuteno do estado indeterminado do SAM. A mutao kn1
faz com que as folhas fiquem encarquilhadas devido a divises celulares ao longo das nervuras
numa fase j adulta da folha, h uma continuao da proliferao celular provocando uma
encarquilhao porque nem todos os locais esto em diviso. Nestas zonas no h diferenciao, as
clulas continuam a dividir-se. A mutao causada por uma expresso incorrecta do gene e no
pela sua perda, o gene expressa-se na altura e local errados durante o desenvolvimento.
A expresso de KNOOTED1 acumula-se no meristema e no nos primrdios foliares.

KNOX1

Os genes KNOX1 codificam factores de transcrio expressando-se no meristema e no nos
primrdios incipientes, ajudando a manter o crescimento indeterminado. Os genes KNOX1 actuam
em parte estimulando a sntese de citocinina. A sobre expresso de genes KNOX1 aumento o estado
indeterminado e tambm a complexidade foliar, folhas compostas, lobadas. H uma sobre expresso,
uma proliferao e as folhas comeam a ficar mais complexas.

Mutantes SAM Mutantes na formao do pice caulinar

I. Mutantes que no mantm a actividade proliferativa no pice caulinar

Shot meristemless (stm1): durante a embriognese no edifica um pice caulinar reconhecvel e no
estado de plntula no forma folhas verdadeiras. Contudo, estes mutantes formam embries
aparentemente normais com cotildones e hipoctilo, demonstrando que a edificao do pice
caulinar embrionrio no necessria para a formao daqueles rgos. Anlises em algodoeiro
permitiram compreender que o SAM tem origem em clulas com uma linhagem diferente da das
clulas que originam os cotildones. Este mutante pode ser recuperado pela aplicao de citocinina
(CK) ou pela expresso de IPT, gene que codifica para uma enzima da biossntese da citocinina no
SAM. STM um factor de transcrio que induz a expresso de um gene IPT.

Shoot meristmless (stm2): mutante no qual o pice s surge no estado de plntula, formando
algumas folhas mas no inflorescncia.

Estudos com stm2 permitiram inferir que STM necessrio para a manuteno da actividade
proliferativa do SAM. A analise da srie de alelos mostra que o pice em stm apresenta uma

63

depleo das clulas proliferativas porque incapaz de impedir a diferenciao das clulas no
centro do pice caulinar.

Nas mutaes severas a diferenciao celular esgota as clulas proliferativas nos estados
iniciais do desenvolvimento do meristema apical caulinar (SAM).
Nas mutaes suaves a populao de clulas proliferativas no centro do pice caulinar dura
mais tempo, mas por fim extingue-se diferenciando-se.

A mutao stm consiste assim numa deficincia na manuteno do meristema e no na sua
formao, embora nas severas parea no formar SAM. No estado inicial apenas se expressa em 1
ou 2 clulas sendo que depois numa faixa de clulas na metade superior do embrio e mais tarde na
regio entre os cotildones onde se forma o SAM. Em plantas adultas expressa-se no pice e nos
gomos axilares desaparecendo nos locais de formao dos primrdios foliares e no surgindo nas
novas folhas. Expressa-se tambm no meristema de inflorescncia indo desaparecendo.

Genes como KNOOTED1 e STM so necessrios para manter a identidade das clulas
meristemticas, mantendo-as num estado indeterminado.

Wushel (WUS): mutante que no mantm o pice caulinar
funcional. Forma pices deficientes que terminam
prematuramente o crescimento aps terem formado algumas
folhas. H uma depleo de clulas proliferativas no meristema.
Posteriormente surgem pices caulinares secundrios com
primrdios foliares. A formao destes meristemas de segunda
ordem durante o desenvolvimento vegetativo leva produo de
numerosas folhas em roseta. Durante o desenvolvimento de
inflorescncias os mutantes apresentam um crescimento anormal
com o aparecimento de escapos florais entre conjuntos de folhas.
A depleo de SAM em wus parece ser o resultado de um forte contributo das clulas
proliferativas para a formao de rgos. Normalmente WUS deve impedir a diferenciao celular
mantendo a populao de clulas proliferativas. STM episttico relativamente a WUS

Nam (NAM no apical meristem): no formam ou no mantm SAM como embries ainda, no
ultrapassando o estado de plntula. O gene NAM expressa-se numa regio anelar nos limites do
meristema apical e dos primrdios, admitindo-se que intervm na delimitao de SAM.

Marcadores moleculares iniciais do destino de clulas

Diversos genes como AtML1, WUS e WWOX mostram uma expresso dinmica em
determinados domnios revelando no estado de embrio pr-globular a emergncia de novos
destinos celulares em cada round de divises.
No estado de embrio cordiforme reconhecem-se os primrdios da maioria dos tecidos e
rgos. O meristema radicular organiza-se volta da clula lentiforme, progenitora do centro
quiescente, e atravs das delimitaes resultantes da diviso assimtrica do zigoto.
O limite entre as camadas superiores e as camadas inferiores no coincide exactamente com
a delimitao entre o hipoctilo e os cotildones porque algumas clulas das camadas inferiores
contribuem para os primrdios dos cotildones.

Regulao da dorsiventralidade adaxial/abaxial

64

regulada pela formao do meristema apical caulinar no embrio que depende de uma
rede de interaco gnica.

A) Estado de embrio globular, expresso
de genes de polaridade adaxial
(HDZIPII) e abaxial (KANADI). O
pice caulinar desenvolve-se numa
poro central apical do domnio
adaxial. A unio dos domnios adaxial e
abaxial no primrdio cotiledonar define
os locais de crescimento dos futuros
cotildones.

B) Estado de embrio cordiforme aps
emergncia dos cotildones.

C) Embrio com sobre expresso de
KANADI ou sem funo HDZIPII, no
h edificao adaxial e no se forma
pice caulinar.

Primrdios Foliares

As clulas no primrdio foliar ficam determinadas, so funcionalmente distintas das do
meristema. H genes especficos nos primrdios que promovem a diferenciao:

ARP genes (ASYMETRIC LEAF, ROUGH SHEATH2 e PHANTASTICA): Codificam factores de
transcrio MYB, expressando-se nos primrdios foliares promovendo o crescimento determinado e
a diferenciao celular.

As atividades dos genes ARP e KNOX1 sao mutuamente antagnicas

As 2 classes de factores de transcrio so mutuamente repressivas e ajudam a estabelecer a
identidade do primrdio emergente. Ambas reprimem a expresso dos genes vizinhos nos seus
territrios contribuindo para a identidade das clulas.
Enquanto que o mRNA de ASYMETRIC LEAF se expressa nos cotildones mas no no
meristema normalmente, no mutante stm expressa-se no meristema.

A perda das funes dos genes ARP assemelha-se sobre expresso de KNOX1, mudanas
diferentes convergem para o mesmo efeito porque ocupam territrios que no deveriam.

II. Mutantes com produo excessiva de clulas proliferativas no SAM

Mutantes que continuam a formar activamente clulas com capacidade de diviso. H um
fluxo contnuo de clulas da zona perifrica do pice para a zona morfognica, as clulas que
intervm na formao dos rgos so substitudas pelas clulas resultantes de divises das iniciais


65

na zona perifrica.

Clavata 1 (cl1): pice caulinar muito grande, vrios alelos, fasciao grande (formao de estruturas
laterais). Os padres filotcticos so alterados nos mutantes com meristemas sobredimensionados
como o caso de clavata1 em que h uma produo excessiva de folhas. Contrariamente aos
mutantes stm e wus, os cl1 tm um pice caulinar maior devido a proliferao de clulas. O seu
embrio j tem um SAM maior, com mais clulas que uma planta normal. H peas florais
adicionais que nascem a partir dos meristemas florais.

Manuteno do SAM, interaco do CLV1, CLV3 e WUS

Admite-se que as clulas que expressam wus produzem um sinal que confere identidade
zona central mantendo as clulas indiferenciadas, h um territrio limitado. O wus promove a
expresso de CLV3 que interage com CLV1 e criando um sinal que inibe prprio wus permitindo a
diferenciao de clulas. um ciclo de feedback negativo. A regulao mantm o tamanho da zona
central. Sao genes antagnicos tambm. Esta regulao mantm o tamanho da zona central.

Trajecto de sinalizao de CLAVATA

Os produtos dos 3 loci CLAVATA (CLV1, 2
e 3) codificam componentes de um trajecto de
sinalizao que regula a expresso de WUSHEL.
CLV3 expressa-se predominantemente nas clulas
de L1 e L2 da zona central, enquanto que CLV1 se
expressa nas clulas da L3 da zona central. A
expresso de WUS est confinada a algumas clulas
da zona central clulas-me. Estas clulas formam um centro de
organizao que promove a identidade das clulas-me atravs de um sinal
para as camadas celulares adjacentes. Este sinal promove tambm a expresso
de CLV3, o qual subsequentemente activo o trajecto de sinalizao CLV1,
conduzindo represso da expresso WUS. Este feedback negativo limita o
tamanho da populao de clulas-me regulando o tamanho do centro
organizador.

Bases moleculares de retroaco CLV-WUS

Na ausncia de CLV3 o gene WUS est activo levando expresso de
CLV3. O reconhecimento de CLV3 conduz diminuio da expresso de WUS.


66

Gene Mutante Onde se expressa
STM: mantm as
clulas
indeterminadas
Mutante stm: deficincia na
manuteno do meristema e no na
sua formao

E. globular: 1//2 clulas faixa de
clulas na metade superior do embrio
E. cordiforme-torpedo: entre os
cotildones, onde se forma o SAM
Adulto: pice e gomos axilares
WUS: mantm as
clulas
indiferenciadas
Mutante wus: no mantm o pice
caulinar funcional

KNOX1: mantm o
SAM indeterminado

KNOOTED1:
mantm o SAM
indeterminado
Acumula-se no meristema mas no nos
primrdios foliares
CLV Mutante clv: SAM maior, pice
muito desenvolvido

ARP: promove o
crescimento
determinado e a
diferenciao

NAM: delimita o
SAM
Mutante nam: no passam do estado
de plntula e no produzem folhas

Relaes entre genes:

Menos ARP = Mais KNOX1
Mutante stm e wus inverso do mutante clavata


67

XI - LINHAGENS CELULARES QUIMERAS

Linhagens Celulares e Diferenciao Celular

Analisando os pices caulinares com padres helicoidais, as clulas mais perifricas so as
primeiras a ser recrutadas para formar as estruturas basais. As centrais contribuem para formar as
estruturas terminais e formar a influorescncia.

Linhagens celulares: no meristema apical caulinar de Angiosprmicas podem distinguir-se 3
estratos funcionais (L1, L2 e L3) que diferem no tipo de diviso celular e/ou no destino de
desenvolvimento. A maioria das clulas de uma planta adulta forma-se por divises nas camadas L3
do pice caulinar. A epiderme deriva exclusivamente da L1 sendo que as L2 formam camadas
subepidrmicas pluricelulares. Analisando os padres de linhagens celulares na planta poder-se-
demonstrar se existem iniciais apicais permanentes que originam certos tipos de clulas e de tecidos.

Qual o significado de cada sistema de tecidos ter a sua origem em clulas iniciais especficas?
Hipteses:

a) As iniciais tm um leque de possibilidades de desenvolvimento rigidamente fixadas; ( as
iniciais da camada externa da tnica esto determinadas de tal modo que as suas derivadas s se
diferenciam como clulas epidrmicas, estomas, tricomas, e as iniciais das outras camadas esto
determinadas para dar origem a outros tecidos)
b) As iniciais originam derivadas cujo destino no est determinado, o destino de diferenciao
de uma clula determinado gradualmente pela posio no corpo da planta; ( as iniciais de cada
camada esto determinadas para serem clulas caulinares ou radiculares mas o destino especfico de
cada derivada s determinado posteriormente durante o desenvolvimento pelo seu ambiente
qumico e fsico, incluindo interaces com clulas circundantes)

O plano de diviso de uma clula determina a posio das derivadas no corpo da planta. E a
posio fundamental no destino das clulas. A melhor prova advm da observao do destino das
derivadas, principalmente das derivadas que de uma camada integram tecidos de outra camada. As
divises nas camadas da tnica sao anticlinais, derivadas que participam na prpria camada, mas
podem ocorrer periclinais, e a acontece que essas clulas passam a estar integradas nos tecidos
internos e essa derivada que veio da tnica passa a comportar-se como as clulas do novo local. Isto
so quimeras periclinais.

Quimeras

possvel criar no pice caulinar quimeras em camadas, camadas celulares com uma
composio gentica diferente das clulas adjacentes, por poliploidias ou outras.
Os tecidos quimricos so constitudos por camadas ou sectores de camadas de clulas com
composio gentica diferente. Podem criar-se com raios X ou colquicina.

Estes padres s so possveis porque se dividem anticlinalmente.


68

Tipos de quimeras

Periclinais: composiao gentica de uma ou mais camadas diferente. Surgem ou so induzidas nas
Angiosprmicas porque o SAM constitudo por vrias camadas concntricas nas quais as divises
celulares ocorrem segundo um plano. A camada L2 origina parte dos tecidos internos. A L1 origina
a epiderme ficando as suas derivadas determinadas a originar clulas epidrmicas porque ocupam
uma posio externa, por fora das camadas corticais.

Sectoriais: sector, um conjunto/sector de clulas em vrias camadas difere geneticamente do resto.
Quando a cor afectada originam plantas variegadas, com cores diferentes na mesma folha. H
mutao nas clulas apicais iniciais da camada L2 da tnica fazendo com que as derivadas no
formem cloroplastos. Contudo, os cloroplastos podem desenvolver-se em clulas provenientes das
camadas L1 e L3. Admitindo que a maioria das clulas do colnquima tem origem na L2, as folhas
desta quimera deveriam apresentar muito tecido branco, no entanto, no so totalmente brancas mas
sim variegadas, com pores verdes que s podero ser provenientes das camadas L1 ou L3. Nas
fases iniciais do desenvolvimento das folhas, as divises periclinais ocasionais nas camadas L1 e L3
estabeleceram clones de clulas normais que se diferenciaram como clulas verdes do mesfilo.

Mericlinais: numa camada da tnica com apenas uma poro da mesma afectada. Originam plantas
variegadas uma vez que os sectores brancos ou amarelos resultam de clulas que no formam
cloroplastos, genes mutantes para o desenvolvimento cloroplastidial. Os tecidos brancos surgem de
uma regio do meristema distinta da dos tecidos verdes. As mutaes que afectam o
desenvolvimento dos cloroplastos so teis porque permitem identificar visualmente as clulas
brancas ou verdes.

A anlise das quimeras mostra que a diferenciao de uma clula no depende da sua
linhagem. O seu destino determinado pela posio que ocupa no corpo da planta.
Apesar destes padres existem divises aleatrias em que clulas de uma determinada
camada se dividem e a derivada vai para outro lado. Se for para uma camada mutada desempenha a
sua funo na mesma porque no est mutada.


69

XII - DESENVOLVIMENTO DE FOLHAS
FILOTAXIA

Formam-se como primrdios foliares, plastocronos que aparecem de tempo a tempo na
superfcie do pice e vo formando e expandindo numa srie gradual. Temos um pice caulinar que
forma folhas em diferentes disposies. Temos padres de insero foliar, controlados e
determinados no pice. O padro de diviso periclinal.

Filotaxia disposio de folhas ao longo de um ramo

H um padro filotctico de cada espcie determinado pelos primrdios foliares no pice.
medida que as folhas se formam podemos ver ostostiquias, linhas geradoras do padro de
distribuio das folhas no caule. A formao dos primrdios ocorre segundo um padro helicoidal
podendo distinguir-se conjuntos distintos de fiadas que se intersectam, parastiquias de contacto.
O padro filotctico de um caule pode ser determinado examinando a distribuio dos
primrdios foliares no caule, definindo algoritmos matemticos que determinam a localizao dos
mesmos. Na natureza h uma progresso linear que segue a srie de fibonacci, o n seguinte a
soma dos 2 anteriores.

Variao da filotaxia na mesma planta

Geralmente o n e distribuio das folhas estvel. Mas h plantas em que a filotaxia varia
com o tamanho e actividade do pice, a filotaxia dos rgos vegetativos diferente da dos rgos
florais. As folhas formam-se afastadas cerca de 137,5. possvel definir uma linha unindo as
folhas medida que so formadas. Uma vez conhecido o padro podemos prever onde se vai formar
o 2 primrdio foliar, o primrdio incipiente (l
1
), depois l
2
, etc.

Hipteses:

- Inibidor qumico
- Competio por um activador
- Foras fsicas

No processo de formao dos primrdios incipientes, quando se faz a ablao (remoo
cirrgica) de primrdios pr-existentes h modificao de posio do novo primrdio. Em vez de
imergir no local previsto vai aparecer noutro, deslocado. Os primrdios mais antigos controlam o
funcionamento dos futuros primrdios.

Qual o sinal que controla isto?

Hipteses:

- Participao de um inibidor
- Competio por um activador

Trabalhos experimentais mostraram que os primrdios foliares esto rodeados por zonas de
inibio onde no se podem formar novos primrdios. Estas zonas podem ser criadas pela produo
de um activador ou depleo de um inibidor.

70

O IAA muito importante para a
localizao dos primrdios incipientes, uma
activadora de iniciao porque se acumula em
locais que precedem a emergncia de
primrdios.

Transporte de auxina:

O IAA um cido fraco que na
parede celular tem um pH cido e no
citoplasma neutro. facilmente translocado
para o interior da clula, dissocia-se e j
no passa, precisando de transportadores.

Para a organognese necessrio um mximo localizado de auxina. O transporte e acumulao de
auxina contribuem para a iniciao de rgos. A polaridade da protena PIN1 forma um mximo de
auxina. Uma reverso da polaridade de PIN1 altera a posio do mximo de auxina e especifica a
localizao do prximo primrdio foliar. Aps a iniciao do primrdio a distribuio de PIN1
altera-se dirigindo o fluxo de auxina para a nervura em desenvolvimento.

Visualizao da localizao de PIN1

uma protena que quando excitada emite
um comprimento de onda de grande energia, sendo
possvel fazer protenas quimricas. A posio do
PIN pode ser localizada atravs de fuses com a
GFP.


71

A distribuio de PIN1
dinmica durante a organognese. A
PIN1 no fim localiza-se na
membrana normalmente.

O modelo de transporte de auxina pode gerar um padro de novo

Fazendo variar os picos e o espao entre os mesmos e a taxa de transporte geram-se padres
diferentes. Por simulaes computacionais podemos simular a realidade do que acontece nas plantas.

Iniciao foliar nas monocotiledneas: como tm bainhas que abraam o caule, os pices so
estreitos e altos. A bainha forma-se num local perifrico, abraando o entren todo.

Inibidores do transporte polar de auxina impedem a iniciao de folhas

Normalmente a formao de
folhas contnua. Mas com o
inibidor de auxina, a partir da
folha 5 no se forma mais nada.

O transporte polar de auxina
assim necessrio para a
organognese, formao de folhas,
em dicotiledneas e
monocotiledneas, em ambas as
filotaxias.

O que controla a localizao dos PINs? uma questo em aberto mas h algumas correlaes.

Papel da presso intercelular e da origem dos microtbulos na iniciao dos primrdios

H alteraes que ocorrem nas clulas, ocorrncia de reorientaes do citoesqueleto, dos


72

microtbulos. Numa clula quiescente, relativamente estvel e expandida tem PC estvel. Quando a
clula expande h uma reorientao dos microtbulos que se dispem num plano mais o menos
perpendicular ao eixo de expanso.

A orientao dos microtbulos correlaciona-se com a orientao da tenso

Aps a emergncia do primrdio foliar h tenses exercidas para os microtbulos se
orientarem paralelamente s mesmas. Num pice temos um resultado de tenses iguais a toda a
volta e nas depresses entre o pice e o primrdio a tenso fortemente direccionada tal como a
orientao dos microtbulos.

Os microtbulos respondem a variaes de presso nas clulas adjacentes

Aps a remoo a laser de
determinadas clulas h uma reorientao
dos microtbulos circunscrevendo a
regio da ablao. Nessas regies as PIN
vo localizar-se nas membranas das
clulas paralelamente aos microtbulos.
Tudo isto marca um domnio localizado
que condiciona a auxina a depositar-se em
certo local. PIN1 distribui-se equidistante
das clulas removidas.

Estes estudos sugerem um modelo no qual a orientao de PIN1 corresponde presso celular


73

A partir do momento que uma clula aumenta a sua presso as do lado reorientam-se. H um
feedback positivo de retroaco, controlado.

Resumindo: Existem mltiplas origens evolutivas para as folhas. Formam-se segundo padres
regulares no pice caulinar, frequentemente segundo uma hlice. A iniciao foliar determinada
em parte pela distribuio de auxina e PIN1. Os primrdios influenciam a localizao dos seguintes
atravs de efeitos biofsicos. As simulaes in silico podem recriar padres filotctios e testar
hipteses.

CONTROLO GENTICO DO DESENVOLVIMENTO DE FOLHAS

Formao de folhas

A expresso de factores de transcrio KNOX1 correlaciona-se com a complexidade
foliar, quando h sobre expresso de KNOX h um aumento da complexidade foliar e quando h
supresso surge folhas simples. Assim, na folha simples KNOX permanece desactivado enquanto
que na folha composta reactivado nos primrdios foliares. Os genes KNOX1 tm assim um papel
recorrente no desenvolvimento foliar.
Nas situaes em que as folhas apresentam lobos ou so mais ou menos cerradas volta a
surgir KNOX na emergncia das protuberncias, os genes sao reactivados conferindo actividade nas
margens das folhas. H um recrutamento de todo o mecanismo que se expressava no pice para as
zonas marginais formando folhas lobadas.

H tambm um mximo de auxina gerado por PIN1 que precede a formao do fololo.

74

H uma acumulao de PIN1 em determinados locais das clulas que canalizam o fluxo de auxina
para um ponto onde atinge um mximo. Os estudos de fuso de GFP com PIN1 mostram estes
locais de acumulao. As PIN1 sao relocalizadas de modo a criar outros mximos. A acumulao de
auxina precede a formao dos fololos.

A formao de folhas compostas depende do transporte polar da auxina uma vez que
em mutantes pin1, em que o fornecimento de auxina limitado, no h formao de fololos.

As citocininas contribuem tambm para o desenvolvimento de folhas complexas, so
outro player envolvido na formao de folhas compostas.

Algumas folhas so serradas devido a crescimento diferencial nas margens resultante de
depresses (sinus) ou protuberncias (dentes ou lobos). Sabe-se que o cupshake (CUC2) se expressa
nas depresses e inibe o crescimento celular, mas ento as margens resultam da inibio do
crescimento nas depresses ou do crescimento acelerado no lobo?
Um mximo localizado de auxina especifica as protuberncias na margem foliar, o
mximo precede a iniciao de folhas, iniciao de fololos e de lobos. A auxina tem um papel
recorrente, manifesta-se em vrios locais com efeito semelhante, o pico de auxina emerge vrias
estruturas.

Controlo gentico da polaridade das folhas

A maioria das folhas tem polaridade, tem pgina inferior e pgina
superior distintas anatmica e funcionalmente. As folhas tm
dorsiventralidade conferida pela face superior/adaxial, adjacente ao
meristema e pela face inferior/abaxial, afastada do meristema. O que
determina esta dorsiventralidade na protuberncia so as clulas do
meristema que se dispem para fazerem diferentes processos. A superior
far a fotossntese captando energia luminosa que transforma em
qumica e a inferior as trocas gasosas e perda de gua atravs dos
estomas.

Trabalhos experimentais sobre polaridade das folhas

Separar um primrdio do pice caulinar, faz com que ele fique cilndrico, perca a polaridade,
fica inteiramente abaxializado, s esses genes se expressaram, fica com simetria radial tipo agulha.
Experincias a laser com destruio da camada epidrmica mostram que isso suficiente

75

para a folha perder a polaridade adaxial.

Estabelecimento da Polaridade das folhas

Um sinal do meristema desloca-se atravs da epiderme para o primrdio incipiente
transportando informao posicional adaxial. Desconhece-se a natureza deste sinal, designado por
sinal sussex.

A expresso de um factor de transcrio especfico de um domnio controla a
polaridade. A dorsiventralidade depende da expresso de genes que definem territrios excluindo-
se mutualmente. H genes que especificam o destino abaxial e outros o adaxial.

KANABI destino abaxial
PHAN, PHB, PHV, VER destino adaxial
(O ARP e KNOX1 expressam-se nos primrdios, estes no.)

Mutantes phan: mutantes com folhas abaxializadas. PHAN assim necessrio para o destino
adaxial, para especificar essa morfologia da pgina superior da folha. Mutantes phan tm folhas
com simetria radial.
Mutantes kanadi: mutantes com folhas radiais, adaxializadas. KANADI assim necessrio para o
destino abaxial. oposto de PHAN.

necessrio um domnio mdio distinto para a expanso da lmina, ambos os genes
competem entre si em territrios sobrepostos. Em algumas folhas estes players so suficientes, mas
em outras preciso o desenvolvimento do eixo lateral que permite a expanso da lmina para a
direita e esquerda. Na epiderme inferior e superior h uma regio da expanso mdia da folha. H
estudos de hibridao que nos mostram a famlia de WOX relacionados com o WUS, que se
expressam no domnio mdio da folha. Sabe-se que h territrios que vo expandir no plano mdio
no sentido lateral e ai que se expressa WOX, expandindo a lmina foliar.

A perda da funo WOX origina folhas estreitas em varias espcies, a folha fica estreita
quando no h gene.

A expresso especfica de um domnio pode ser regulada por miRNAs


76

Nas plantas silvestres o miRNA liga-se ao mRNA PHB degradando-o no lado abaxial do
primrdio foliar uma vez que no esse o local da sua expresso.
Em mutantes, as alteraes nas bases de mRNA PHB impedem que o miRNA se ligue
possibilitando que se acumule atravs do primrdio foliar resultando numa folha com simetria
radial. Pode-se verificar ainda que em mutantes ago1 as folhas so radiais, AGO (est no miRNA)
necessrio para a funo do miRNA que no actuar nesta situao.

Resumo do estabelecimento da polaridade das folhas: o domnio adaxial especificado por um
sinal proveniente do meristema, o abaxial mantida por miRNA que degrada mRNA que vem da
pgina superior (PHB). H ento factores de transcrio em domnios distintos que contribuem para
mecanismos distintos que do a morfologia folha.

Controlo Gentico da Forma e Tamanho das folhas

O tamanho determinado pelo crescimento e a forma determinada pelo crescimento
diferencial uma vez que nem tudo cresce numa razo proporcional.
O crescimento envolve proliferao celular e expanso celular. H um crescimento
inicial por proliferao celular ficando depois essa proliferao restrita a pequenos locais
(meristemides). Segue-se um perodo de expanso celular que se sobrepe parcialmente s fases de
diviso. Vamos ter genes que atuam nas fases iniciais da diviso, na manuteno de determinados
locais (meristemides), genes que intervm para parar a actividade mittica e genes que intervm na
expanso (expansinas), etc.

O padro de expanso celular pode ser examinado desenhando uma grelha sobre uma
folha jovem ao longo dos eixos prximo-distal e mdio-lateral.

Os padres de diviso celular correlacionam-se com a expanso da lmina. Os
meristemides continuam a dividir-se depois de a maioria das clulas ter parado. Em algumas
dicotiledneas as divises celulares param primeiro no pice e depois na base. As divises celulares
so determinadas pela transcrio de um gene ciclina.


77

A maioria dos padres de crescimento pode ser linear, inicialmente o primrdio expande
isodiametricamente (igualmente em todas as direces) e em estados mais tardios a folha cresce por
diviso e expanso celular uni ou bidireccional.

Outras folhas tm um crescimento mais complexo, as divises celulares contribuem para
o alargamento da lmina e a forma complexa forma-se por manuteno do crescimento em regies
isoladas da lmina.

O crescimento foliar regulado por diversos factores endgenos e exgenos, h um
patrimnio gentico, um mecanismo que codifica morfologias. Mas a planta plstica e
influenciada pelo ambiente, tem de desenvolver mecanismos para resistir a condies adversas, e
por isso vai modelar a expresso dos genes.

Resumo do crescimento da folha: complexo, controlado e altamente coordenado.

CONTROLO GENTICO DA DESDIFERENCIAO CELULAR DE TECIDOS
VASCULARES, ESTOMAS E TRICOMAS

O desenvolvimento foliar envolve diferenciao celular para alm de crescimento regulado.

78

As folhas tm clulas especializadas clulas vasculares, tricomas e clulas oclusivas.

Nervuras

Nas nervuras circula gua e nutrientes. O posicionamento da nervura principal
especificado pela auxina. Aps a emergncia do primrdio h uma relocalizao dos
transportadores de auxina para o interior da planta com direco baspeta especificando o local da
nervura principal. A GFP acoplada PIN marca os locais mostrando que no primrdio mais velho a
futura nervura mdia surge desmarcada.

Os trajectos de circulao reforam os fluxos de auxina, as nervuras de 2 ordem
formam-se por redistribuio adicional de auxina. O trajecto resulta de um fluxo de auxina auto-
gerado por feedback positivo. H um trajecto predominante na zona central da folha e a
diferenciam-se as clulas que do origem ao procmbio. Os transportadores voltam a relocalizar-se
e a vasculatura comea a desenvolver-se.

A diferenciao vascular ocorre no trajecto especificado pelo fluxo de auxina, processo
de formao da vasculatura:

As clulas procambiais alongadas
formam-se por divises celulares
paralelas, ficam alongadas e as adjacentes continuam a dividir-se paralelamente segundo o eixo

79

longitudinal e o mesmo acontece com as nervuras laterais.

O xilema e o floema derivam do procmbio. Nas nervuras vamos ter uma vasculatura
muito simples, frequentemente nas terminaes nervosas temos clulas de parnquima vascular, h
elementos de xilema e floema mas sobre a forma de parnquima. Mas nunca temos elementos
condutores de floema a tocar em xilema, h sempre parnquima no meio. Surgem nos rgos areos
associados a feixes colaterais.

Resumo: O transporte de auxina estabelece os locais de formao das nervuras. Um programa de
expresso gnica conduz as clulas a diferenciarem-se em clulas vasculares. Alguns destes genes
esto j identificados.

Diferenciao de clulas na Epiderme

A epiderme foliar constituda por clulas de pavimento, clulas oclusivas e tricomas.

Tricomas

So clulas epidrmicas que se diferenciam originando plos epidrmicos que protegem a
planta dissuadindo insectos e herbvoros. Alguns tricomas reflectem a luz para reduzir a absoro de
UV e calor, outros ajudam na disperso de sementes. So diversos do ponto de vista estrutural e de
desenvolvimento podendo ser unicelulares ou pluricelulares, ramificados ou no, glandulares ou
no. Ao longo da evoluo surgem vrios tipos que so fenmenos de analogia e no de homologia.

Dos Tricomas glandulares extraem-se importantes substncias qumicas com propriedades
antimicrobianas, insecticidas ou medicinais. Modificando a expresso de genes nos tricomas
podemos aumentar a produo de um composto.

Tricomas mutantes permitiram identificar genes envolvidos em muitos processos,
processo de desenvolvimento dos tricomas:

medida que os tricomas se diferenciam, endorreduplicam de modo que a sua ploidia
aumente. O ciclo clulas das clulas em endorreplicao omite a mitose. Numa epiderme normal
nunca surgem 2 tricomas adjacentes. Os tricomas unicelulares sao muito grandes e tendo s um
ncleo e muito citoplasma para controlar, vo acontecer fenmenos de endorreplicao e vo ficar
poliplides.
Foram identificadas mutaes no padro de distribuio dos tricomas, alguns formam
poucos tricomas e outros formam tricomas em demasia.


80

GLABRA mutante l1 origina mutantes sem pelos, com poucos tricomas

CAPRI mutante cpc forma um revestimento com muitos tricomas

GLABRA e CAPRI so genes antagnicos.

O modelo Arabidopsis

Em arabidopsis, o espaamento dos tricomas controlado por um sinal inibidor. Um
complexo de transcrio activa a expresso do indutor de tricomas GLABRA2 (GL2) e um inibidor
desloca-se para as clulas adjacentes onde inibe a expresso de GL2. Se no h produo de
GLABRA2, no h transcrio, no h tricoma.

Em arabidopsis a via de desenvolvimento dos tricomas deriva de uma via bio-sinttica
ancestral, estes mecanismos surgiram vrias vezes no decurso da evoluo em que h o
recrutamento de genes para diferenciao de tricomas.

H diversas vias na formao de tricomas. Estudos moleculares sugerem que os tricomas
de arabidopsis surgiram independentemente da maioria das plantas. Adicionalmente, dentro de uma


81

mesma espcie, formam-se tricomas unicelulares e pluricelulares de maneira diferente indicando
que h vrias vias de formao dos mesmos. Os tipos celulares so anlogos, no homlogos.

Padro de distribuio e diferenciao das clulas oclusivas

As clulas oclusivas regulam a abertura por onde passam o vapor e os gases.
Nas gramneas, como monocotiledneas, as folhas tm nervuras paralelas separados por
clulas do mesfilo, as clulas oclusivas formam-se em certas fiadas de clulas entre as nervuras.
Neste grupo o desenvolvimento de estomas envolve o recrutamento de clulas adjacentes sendo as
clulas oclusivas (azul claro) so suportadas por clulas subsidirias (amarelo) que se formam de
clulas em filas adjacentes. A clula-me das clulas oclusivas forma-se por diviso assimtrica na
fila de clulas oclusivas. Isto recruta clulas de fiadas adjacentes oclusivas que se dividem
assimetricamente dando origem a mais clulas oclusivas.

Mutante pan1: a formao das clulas subsidirias anormal. PAN1 codifica uma protena
semelhante a um receptor de sinal que se expressa nas precursoras das clulas subsidirias. H uma
epiderme com clulas subsidirias anormais, com diferente perfil, grandes. O gene PANGLOSS do
mutante pan1, codifica um receptor de comunicao do sinal que falha e a comunicao da clula-
me s adjacentes deficiente.

Diferenciao das clulas oclusivas em Arabidopsis

Em Arabidopsis as clulas oclusivas formam-se atravs de uma srie controlada de divises
celulares. H um processo inicial de diviso celular assimtrica em que se forma uma clula mais
pequena. Aqui a configurao estomtica anisoctica mas de uma maneira geral os passos sao
semelhantes a estes.
Numa determinada clula protodrmica vai haver uma diviso celular assimtrica, a clula-
me do meristemide, que se divide outra vez assimetricamente dando origem a uma clula mais
pequena que ser a me das oclusivas. A grande ser uma clula subsidiria.
Os factores de transcrio regulam a diferenciao das clulas oclusivas. O gene
SPEECHLESS intervm na diviso celular assimtrica que d origem ao meristemide, na diviso
seguinte que leva formao da clula-me das oclusivas interfere o gene MUTE e depois o FAMA
que necessrio para parar as divises celulares das clulas oclusivas (GMC) e para promover a
diferenciao das clulas oclusivas. Nos mutantes fama por perde de funo h divises continuadas


82

da clula-me do meristemide que originam
fiadas indiferenciadas de precursoras das oclusivas.

Foram identificadas as proteinas necessrias s divises celulares assimtricas,
proteinas que marcam a polaridade, a distribuio desigual do citoplasma. Pr-marcam o plo
oposto diviso assimtrica de toda a linhagem, BASL e POLAR, marcando o que fica maior. H
um posicionamento cortical que define a polaridade da clula. Ainda no se sabe como afectam a
polaridade.

Mutante basl: a perda de funo conduz a mais divises simtricas e no h diferenciao celular.

Kinases MAP contribuem para a diferenciao das clulas oclusivas

H inibidores e reguladores positivos e ainda marcadores de polaridade. As MAPcinases so
inibidores.

A via de formao dos estomas tem curiosamente processos na mesma protoderme, os
meristemides satlites. A meio do percurso pode formar-se outra clula mais pequena adjacente e
fazer o mesmo processo desde o incio formando tambm um estoma.

O Desenvolvimento das Clulas Oclusivas sensvel a factores Exgenos e Endgenos

Os brassinoesterides e a luz afectam a actividade de SPCH e de outros reguladores da
diferenciao das clulas oclusivas. Todo o processo est dependente das condies ambientais, h
uma modelao da expresso gnica pelos factores ambientais.

A Distribuio dos Estomas determinada por inibio da Diferenciao


83

Modelo para a via gentica de distribuio e diferenciao dos estomas, mostrando
reguladores positivos e negativos:

Em Arabidopsis os estomas esto sempre separados pelo menos
por uma clula de pavimento.

As Precursoras Estomticas produzem Peptdeos Extracelulares inibidores

Produzem um ou mais peptdeos secretados que, clivados por uma peptidase, se ligam a
domnios extracelulares dos receptores em clulas adjacentes. Este sinal inibidor impede que clulas
adjacentes se diferenciem em clulas oclusivas.

A Densidade Estomtica determinada pelos Nveis de CO
2
ambiental

A transferncia de uma planta para um ambiente com elevada concentrao de CO2 faz com
que as novas folhas em iniciao produzam menos estomas, mas no afecta a densidade dos
estomas em folhas adultas.

Experincia:

As folhas adultas detectam os nveis de
CO2 e transmitem a informao s folhas em
desenvolvimento. Se estiverem em condies
diferentes as folhas novas vo comportar-se como
se estivessem sob as condies das adultas.

O espaamento entre tricomas e estomas
controlado por um sinal inibidor

84

H sinais extracelulares inibidores envolvidos no padro de espaamento de tricomas e de
clulas oclusivas.

Resumo da Diferenciao Celular: a informao posicional dada pela auxina e os factores
inibitrios modelam os padres de diferenciao.


85

XIII - RAZES LATERAIS
(PalestraAHP6 Inhibits cytokinin signaling to regulate the orientation of pericycle cell division
during lateral root initiation (publicado na PLOS one por Sofia Moreira)

O desenvolvimento de razes laterais acontece depois da fase embrionria. As razes laterais
so uma forma de facilitar a adaptao das plantas a condies adversas pois estas ajudam na
coeso ao solo, absoro de nutrientes e gua, etc. Formam-se a partir do periciclo, um
crescimento previsvel, ordenado e coordenado.

Fases:

1. Incio da diviso das clulas do periciclo anticlinalmente formando outras clulas do mesmo
tamanho
2. Divises periclinais das clulas formando 2 camadas
3.-8. Divises celulares organizadas dando origem a um primrdio da raiz

Mas tudo isto est dependente de hormonas, mesmo antes do primrdio existir, as clulas
saem do meristema basal, adquirem capacidade mittica e por um estmulo de auxina so
estimuladas a desdiferenciarem-se entrando em diviso. A auxina estimula a sntese de proteinas
transportadoras de auxina que leva a um mximo de auxina na clula. Ao contrrio das auxinas, as
citocininas tm um efeito antagnico ao das auxinas. As citocininas actuam nas clulas do periciclo
para desregularem a formao das razes laterais porque interferem com a expresso de protenas de
efluxo de auxina.
Mas ainda desconhecido o mecanismo molecular da formao de primrdios e a interaco
citocininas-auxinas.

As citocininas sao percebidas por ICD cinases que activam um grupo fosforil que
transferido para proteinas do citoplasma que activam a resposta de genes que regulam o processo de
desenvolvimento em resposta s citocininas. Existe uma protena, a AHP6, que inibe a sinalizao
por uma mutao de histidina que passou a asparagina e impede a transferncia do grupo fosforil e
inibe a sinalizao das citocininas por competio com outras cinases.

Objectivos:

i. Para perceber qual a funo de AHP6 no desenvolvimento de razes laterais: olhou-se a nvel
fenotpico para os mutantes, avaliando a densidade de primrdios, de razes laterais, a sua
distribuio, comprimento, etc. No houve diferenas significativas a no ser um dfice pequeno no
mutante, mas no significativo. Mas quanto distribuio, enquanto que no wild type era previsvel
o local dos primrdios, nos mutantes eram imprevisveis.

ii. Para perceber se AHP6 tem efeito nas citocininas ou no: fez-se a aplicao de tratamentos
hormonais em que se verificou que o wild type tambm respondia s citocininas levando
formao de primrdios com divises estranhas com incremento de razesm, em ambos mostrando
sensibilidade s citocininas. Para ter certeza que a AHP6 era um inibidor das citocininas analisaram-
se 2 linhas transgnicas em que numa havia degradao de citocinina num mutante para ver se o
fentipo era recuperado, e foi isso que aconteceu.

iii. Para perceber a interaco com a auxina: a PIN1 estava na membrana das clulas no wild type
enquanto que no mutante ocorria no citoplasma demonstrando que h interaco entre o AHP6 e a

86

auxina.

Modelo resultante (concluses)

AHP6 inibidor das citocininas na formao de razes laterais. O mximo de auxina inicial
responsvel pela expresso de AHP6 que tem nos promotores elementos de resposta s auxinas. E
o AHP6 inibe as citocininas corrigindo a localizao das PIN1 e provocando o gradiente de auxina.
este balano entre auxinas e citocininas que leva formao de razes laterais.


87

XIV INDUO E CONTROLO DA FLORAO
Nomenclatura:
Mutante: minscula e itlico
Protena: maiscula e no itlico
Gene: maiscula e itlico

Meristema Apical Vegetativo - SAM

Possui um crescimento indeterminado, continuamente a produzir fitmeros. Estes SAM,
transformam-se em meristemas florais quando a planta induzida a florir e estes, pelo contrrio,
possuem crescimento determinado. O meristema floral aumenta de tamanho devido a um aumento
da taxa de divises.

Em Arabidopsis o meristema vegetativo transforma-se em
meristema de inflorescncia. Inflorescncias secundrias for-
mam-se nas axilas das folhas caulinares.

Induo da Florao

A induo floral chama-se evocao floral e determinada por:

Fatores internos (regulao autnoma): ritmos circadianos e hormonas (cido giberlico);
Fatores externos (regulao obrigatria ou facultativa): fotoperodo e temperatura; quando
obrigatria significa que a planta tem mesmo de passar por isso, facultativo no necessrio, acaba
por florir na mesma.

As plantas percebem as estaes e a temperatura mas o estado de desenvolvimento tambm
influencia a planta. Tem de haver uma transio da fase jovem para a fase adulta e s depois para a
fase vegetativa reprodutiva. A planta tem que crescer durante algum tempo, dependendo da planta e
do porte necessrio para florir. As folhas jovens no produzem estmulos florais e o meristema
tambm no est ainda capaz de responder aos mesmos.

A fase jovem da planta depende de vrias condies internas:

- Tamanho da planta ( mais importante que a idade)
- Incapacidade das folhas jovens produzirem suficiente estmulo floral
- Insensibilidade do meristema apical aos estmulos florais
- Insuficiente actividade fotossinttica poucos hidratos de carbono disponveis


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Quando a planta est capaz de receber a induo da florao, diz-me competente. O
fotoperodo pode ser a induo e, a partir de certa altura, esta fica determinada, irreversvel.
Depois de estar determinada a florao as hormonas actuam para a expressar.

LDP: long day plants, florescem quando o tempo de dia maior que o de noite num certo valor
critico.
SDP: short day plants, florescem quando o tempo da noite excede o do dia num certo valor critico.

H tambm plantas insensveis ao fotoperodo.

Efeito da idade na percepo do estmulo floral

Se for uma planta muito jovem pode precisar de muitos mais ciclos para perceber o estmulo
do que uma planta com um crescimento maior.

Dependncia: Obrigatria: qualitativa (pressente a qualidade de luz e tempo)
Facultativa: quantitativa (acaba por florir na mesma)

Plantas de dias curtos (SDP): quando
obrigatrias s florescem quando passam por
alguns dias curtos. Quando facultativas florescem
na mesma mas a florao acelerada em dias
curtos.


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Plantas de dias longos (LDP): quando obrigatrias s
florescem depois de passarem por vrios dias longos, quando
facultativas florescem na mesma mas a florao acelerada
em dias longos.

As plantas de dias curtos percebem os perodos de obscuridade e no de luz. Se fizermos
variar o perodo de luz a planta reage da mesma forma enquanto que variando o perodo de
obscuridade isso j no acontece. As plantas medem o perodo de obscuridade.

As plantas percebem o fotoperodo nas folhas. Se pegarmos numa planta de dias curtos e
taparmos uma folha, passado pouco tempo temos florao, o que demonstra que o local de
percepo a folha e que basta ter uma folha a receber o estmulo que o transmite a toda a planta.
Este estmulo induz a florao na planta toda e estvel, passa para vrias plantas por enxertia. Este
gene o CONSTANS

Relgios biolgicos

As plantas possuem ritmos circadianos, associados a diversos processos biolgicos. Se os sinais
forem removidos, pode haver uma certa alterao do ritmo. O relgio circadiano determina quando
que a planta responde s alteraes no fotoperodo. A Florao induzida quando a exposio
luz coincide com a fase apropriada do ritmo circadiano.

Experincia:

Na soja, como uma planta de dias curtos, precisa de vrios dias curtos, mais o menos 4, pa-
ra entrar em florao. A planta foi mantida na obscuridade durante muito tempo mas com pulsos de
luz rpidos entretanto. Apenas se o pulso for dado numa altura em que pelo ritmo circadiano devia
haver luz, a planta no floresce. A planta precisa ento de ter sensibilidade, de acordo com o seu
ritmo circadiano.

As plantas percebem a luz pelos receptores. As respostas das expresses gnicas so
alteradas de acordo com os receptores existentes e assim os genes activados levam a respostas
diferentes. Os factores de transcrio ligam-se ao promotor e podem activ-lo ou bloque-lo.

GATING: modelo para explicar a florao induzida pelo fotoperodo e dependente do ritmo
circadiano: h uma altura do dia, de luz, em que a porta est fechada e durante a noite a luz
desencadeia a resposta.


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Modelo da Coincidncia Actualmente Aceite

A induo da florao est entre a produo do mRNA CONSTANS e a luz, de modo a que
se acumule suficiente protena CONSTANS para induzir a florao.

A oscilao circadiana controla as fases de sensibilidade luz. Em Arabidopsis, planta de
dias longos, a florao promove a expresso de CONSTANS (CO), um factor de transcrio (regu-
lao ps-transcrio) degradado na obscuridade, o seu pico de actividade ocorre ao anoitecer (lus-
co-fusco).
Em dias curtos, no atinge um pico, no consegue induzir a expresso de FT.
Em dias longos, atinge o pico e induz FT antes de ser degradado. FT FLOWERING LO-
CUS T.
O CONSTANS induz a transcrio de FT que o florigene.

Arabidopsis uma planta de dias curtos facultativa.
Em dias curtos o mRNA do CONSTANS atinge o
pico mas assim que comea a obscuridade a protena vai
sendo degradada e no consegue levar expresso de FT. O
phyB o responsvel pela degradao. tarde phyA e
criptocromo so os que a degradam. O CONSTANS induz a
expresso de FT na mesma nos dias longos e produz em
tanta quantidade que o expressa mesmo, sendo translocado e
indo at ao SAM indicar planta para mudar para
crescimento floral. FT reconhecido agora como estmulo
floral.

No arroz, planta de dias curtos, h genes ortlogos
(semelhantes) aos anteriores, os Hd1 e Hd3 que so hom-
logos de FT e CONSTANS.
A sobre-expresso de FT em Arabidopsis ou de
Hd3a no arroz, resulta em florao independentemente do
fotoperodo. A diferena que Hd1 um inibidor de Hd3a.
Enquanto que CO activa FT. Como o arroz uma planta de
dias curtos, floresce em dias curtos, em que o Hh1 atinge o
pico e bloqueia o Hd3 havendo florao. Com grande
quantidade do gene expresso Hd1, h bloqueio da florao.


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R: red
FR: far red

A quebra da noite satura a converso do Fitocromo. Um pulso de luz FR converte o
pigmento na sua forma inactiva e restaura a resposta biolgica inicial. O responsvel pela percepo
da luz sao os fitocromos.

Variedade de Arabidopsis: winter annual Arabidopsis

O crescimento vegetativo aumenta muito quando a planta no apanha frio pois expressa um
gene, o FLC. Uma flor que passa pelo frio e uma que no passa pelo frio mas que tem uma mutao
nesse mesmo gene, o resultado igual. Ento o gene inibe a florao quando tem frio. A
vernalizao (frio) necessria para o gene deixar de ser expresso, e ai temos florao. A presena
do gene bloqueia a florao mantendo o crescimento vegetativo.


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Vernalizao: induo da florao por temperaturas baixas sendo o local do estmulo o pice
caulinar, os genes so apenas flowering time genes.

Flowering Locus C (FLC): reprime a florao sem a resposta ao frio, aps a vernalizao o gene
deixa de ser expresso.
Frigida (FRI): actua sinergicamente com o FLC promovendo a expresso um do outro.

Estas espcies, as winter-annuals, tm alelos destes genes que so dominantes enquanto que
outras variedades tm alelos fracos ou no funcionais.
A Arabidopsis normal de dias longos, facultativa, com vernalizao e produz flores em
inflorescncia. A primeira transio influenciada por sinais externos, os flowering time genes que
induzem o meristema de inflorescncia induzindo o CONSTANS, FCL e FRI.

O estmulo produzido nas folhas INDUO translocado para o SAM onde induz a
EVOCAO FLORAL

Estes factores do o estmulo que integrado pelo SOC1. Assim que SOC1, primeiro
integrador, expresso, leva expresso de LFY, o principal gene de meristema floral. O LFY leva
produo de AP1 que leva produo de LFY, feedback positivo.
A expresso de CONSTANS (CO) controlada pelo ritmo circadiano. Se a expresso de CO
for elevada e coincidir com a percepo de luz h expresso de FT e induo da florao.


93

A translocao destes factores atravs do floema, SE elementos do tubo crivoso e CC
clulas de companhia.

Induo Autnoma

O papel da induo autnoma reprimir a expresso de FLC. O FLC regula a florao
atravs da vernalizao, de FRI e da induo autnoma.

Genes

AGL20=SOC1: supressor da sobre-expresso de CONSTANS, tem um papel primordial pois
integra diferentes tipos de sinais e parece dar o passo inicial pois promove a expresso do LEAFY e
este por sua vez a do AP1, tm um feedback positivo. A expresso de SSOC1 aumenta durante a
induo floral.
Unusual flower organs (UFO): interage com o LFY p activar outros genes

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Cauliflower (CAL): semelhante ao AP1. O fentipo do mutante cal igual ao selvagem mas uma
mutao em CAL num mutante ap1 resulta numa proliferao macia de meristemas de
inflorescncia.

Flowering time genes

Activam genes de identidade do meristema floral que promovem a identidade do meristema
floral, transio de meristema de inflorescncia para primrdio floral.

1 classe: promovem o meristema de identidade floral
LEAFY (LFY), APETALA 1 (AP1): so necessrios e suficientes para a florao
independentemente, mutaes em qualquer um destes genes transformam as flores em meristemas
vegetativos e a sobre-expresso de qualquer um deles converte os meristemas em flores individuais
e acelera a florao. Ambos so reprimidos no SAM durante a fase vegetativa.
CAULIFLOWER

2 classe: mantm o meristema da inflorescncia
TERMINAL FLOWER (TFL): a inflorescncia termina na ltima flor terminal mas
no pice no se forma a flor terminal, tem de se formar lateralmente, tem de haver um
mecanismo para isso, e este gene. O TFL mantm o meristema de inflorescncia durante
algum tempo e expressa-se logo abaixo do meristema apical.

Na zona apical onde h sempre crescimento de influorescncia terminal ou secundria, est
o TFL bloqueando o LFY e o APETALA1 (AP1). Mais abaixo da zona apical, nos gomos apicais, o
TFL no se expressa com tanta fora e o LFY e AP1 expressam-se induzindo a florao, e entre eles
tm um feedback positivo, inibindo o TFL tambm. No pice continua o TFL a no produzir a flor
terminal.
TFL1 expressa-se ento abaixo do meristema apical, na zona central e reprime a expresso
dos genes de identidade de meristema LFY e AP1. Se TFL for mutado a expresso do LFY e do AP1
na zona central do SAM levam formao de uma flor terminal.
S depois de toda a anatomia da planta crescer que o ciclo acaba.
As flores que tm flor terminal, ou no tm TFL ou tm um alelo muito fraco.


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Outra espcie muito estudada na gentica da
florao o Antirrhinum, tem genes equivalentes a
Arabidopsis. A determinao tem a ver com a estrutura,
com determinar que uma inflorescncia e no uma flor. E
estes genes determinam o n de peas florais.

(ND: no est determinado)

O estmulo floral leva produo de Genes de Florao que induzem os Genes de
Identidade do Meristema Floral que levam expresso dos Genes de Identidade dos rgos
Florais.


96


97

XV - ABC DOS GENES HOMETICOS FLORAIS

Na grande maioria das espcies os rgos florais surgem sempre de um modo sequencial de
fora para dentro formando crculos ou verticilos. Depois h variaes.

Spalas Ptalas Estames Carpelo

As plantas primitivas distinguem-se por terem muitas peas florais e flores grandes. Em
Arabidopsis h um pistilo no meio rodeado por 4 estames e 6 ptalas e 6 spalas. A formao em
cruz, tpica da famlia BRASSICACEAE.

ABC dos Genes Hometicos Florais

Mutante Hometico: possui um rgo no local onde normalmente se desenvolve outro rgo.
Durante muitos anos o Homem aproveitou-se destas mutaes espontneas da Natureza.


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Existem 3 classes de Genes de Identidade dos rgos Florais que funcionam em conjunto
como genes A, B e C, em que, para se formarem spalas h expresso de genes A, ptalas A e B,
estames B e C e carpelos apenas precisam de genes de classe C.

Variedade Selvagem:

Mutante AP2: quando fazemos o knock out no AP2, a flor fica mutante, no h genes de classe A
no se formando spalas nem ptalas.

Mutante AP3 e PI: knock out no AP3 e PISTILATA, sem genes de classe B, no temos ptalas nem
estames. Temos spalas, spalas, carpelos, carpelos.


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Mutante AGAMOUS: falta-lhe estames e carpelos e tem muito repetido: spalas, ptalas, ptalas,
spalas. O AGAMOUS tambm responsvel pela determinao floral, determina o n de peas no
verticilo e onde esto presentes e quando o retiramos aparecem mais.

Mutante tripo em A,B e C: produo de apenas folhas num n indeterminado.

Resumindo:

Os genes que sobram ocupam o espao onde so expressos os genes em falta, apenas em A e
C, o B funciona independentemente. Quando retiramos A, o C est presente no seu stio e vice-versa.
A e C para alm de serem responsveis pela formao dos rgos, so responsveis por reprimir o
outro, so cadastrais.

Mais tarde o gene AP1 foi adicionado como gene da classe A aps estudos com represso de
AGAMOUS. O AP1 no s um gene de identidade meristemtica, tambm um gene de
determinao da classe A, de rgo floral. Juntamente com o AP2 responsvel pela formao de

100

spalas e ptalas. Mas o AP1 no tanto de classe A como o AP2 porque se o mutarmos ainda
temos produo de spalas.

RNA de AP1 em mutantes agamous: H acumulao de AP1 RNA nas primeiras fases do
desenvolvimento. A perda do RNA de AP1 nos 3 e 4 crculos surge quando aparece o RNA de AG,
o seu regulador negativo. Nas fases finais do desenvolvimento, o AP1 e o AG ento apenas nos
crculos externos e internos, respectivamente. Em mutante agamous o AP1 expressa-se em todos os
verticilos internos.

Resumo:

Depois dos genes de florao (Flowering time genes):

1 Genes de Identidade Meristemtica: necessrios para a formao inicial do meristema floral
2 Genes de Identidade dos rgos: controlam directamente a identidade do rgo floral
3 Genes Cadastrais: regulam os genes de identidade dos rgos prevenindo a sua expresso
ectpica.

Flowering time genes Genes de Identidade Meristmtica Genes de Identidade de rgos
Genes Cadastrais

O AP2 um gene que surge expresso em toda a flor. Sabemos que quando o AGAMOUS
est presente consegue inibi-lo mas afinal continua l na mesma. O que faz com que o gene no se
expresse apesar de l estar pode ser o AP1 ou um fator X. O SUP regula negativamente os genes B
por isso mutantes sus estendem a produo de estames ao centro da flor no 4 verticilo. cadastral
para a classe B no ltimo verticilo. Chegou-se concluso que h o microRNA172 que controla a
expresso de AP2 nos verticilos internos que originam os estames e carpelos. O AP2 est presente
em toda a flor, no verticilo 1 e 2 faz a sua funo mas no 3 e 4 no se expressa porque bloqueado.

Mais...

H um factor que actua juntamente com os genes A, reprimindo a expresso de AG nos
crculos 1 e 2 da variedade selvagem, mas que independente da actividade de C e no se expande
para os crculos 3 e 4 nos mutantes agamous, o LUG, que actua com o AP1 e AP2.

LEUNIG LUG: apenas cadastral, regula a expresso de AG em 1 e 2 mas no possui identidade
de rgo.


101

Genes MADS (MADS box genes)

Todos estes genes tm uma zona chamada mads box, so todos factores de transcrio,
controlam a actividade de outros genes cujos produtos esto relacionados com a funo ou
formao destes rgos. So regulados a nvel do RNA, na traduo.

Interaces entre Genes

A, B e C interagem uns com os outros de diferentes maneiras:

Interaco positiva: h mais que um gene em cada classe.
Interaco competitiva/negativa: quando so cadastrais, controlam o local onde os genes so
expressos. o caso do AP1 e AP2, cadastrais para o AGAMOUS e vice-versa. O LUG e o SP
tambm.
Interaco combinal: B e C para os estames e o A e B para as ptalas.

Alguns destes genes sobrepem-se no tempo e na funo que especificam:

AP2: determinao floral e identidade de rgos em 1 e 2.
AP1: meristema floral e identidade de rgos em 1 e 2.
AG: regula a determinao do n de crculos florais assim como a identidade de rgos em 3 e 4 e
cadastral em 1 e 2. Os genes que codificam factores de transcrio provavelmente controlam um
nmero grande de genes que levam, no fim, maturao dos rgos. O produto de alguns destes
genes de identidade controla a actividade de outros genes de identidade (AG e AP2).

Destes genes, todos, tem a organizao normal, com excepo do AP2 que no pertence aos
MADs box genes. Todos eles tm esta organizao:


102

A MADS box determina que o gene um factor de transcrio que se liga ao DNA. So
factores dimricos, juntam-se 2 a 2.

MADS-box: codifica um Dna-binding and dimerization domain igual aos factores de transcrio
de outros eucaritas
K box: domnio proteico envolvido em relaes protena-protena
I: regio conservada
N: extenso N-terminal
C: regio C-terminal que pode funcionar como um domnio de activao da transcrio, um
domnio que faz com que funcionem como um promotor constitutivo, os genes que estiverem junto
dele vo ser expressos em mais quantidade, dificilmente vo ser silenciados.

MADS: 56 aa presentes em todos os factores de transcrio dimricos que se ligam s CarG boxes.

MCM MCM de levedura
AG - AGAMOUS de Arabidopsis
DEF DEF de Antirrinum
SER SER dos mamferos

H ligaes especficas evidenciadas pela imunoprecipitao. A classe B de heterodmeros:

Regulaes coordenadas: os produtos dos genes so autorreguladores, interactuam de modo a regularem a
sua prpria transcrio.

Gene CRABS CLAW

O nome vem das patas do caranguejo. um gene fundamental que atua com os genes de identidade
dos rgos florais. expresso especificamente nos carpelos e nectrios, promove o desenvolvimento abaxial
sendo responsvel pelo crescimento longitudinal e no radial do ovrio. O seu mutante (mutante crc) no faz
a fuso das folhas carpelares e no h crescimento longitudinal ficando os carpelos com crescimento mais
radial e no se fundindo. O estilete e estigma ficam abertos com os ovos vista.

Notas: os genes de meristemas florais no afectam de igual modo os genes de identidade dos rgos
florais. Vrios genes so responsveis pelo nmero de rgos produzido em cada crculo floral
(determinao floral): CLAVATA, AG, AP3 e PI, SUP, FON1 e PAN. Todos estes genes tm a ver
com o n de peas que se forma em cada verticilo.


103

XVI Reaprender o ABC

Pela impossibilidade de converter folhas em rgos florais estas mantm-se folhas (isto
consegue-se fazendo o knock out dos genes).
Mas ento em sobre expresso devamos ter flores em n indeterminado, mas no. O correto
desenvolvimento da flor necessita dos genes ABC e dos genes SEPALLATA (inicialmente
descobertos como AGAMOUS LIKE).

Experincia (utilizaram uma construo que activa a transcrio):

35S::AP3 + 35S::PI Vo fazer com que a flor tenha os 2 crculos
exteriores com ptalas e os 2 interiores com
estames.
35S::AP3 + 35S::GUS

Surge expresso do GUS em toda a flor mas no
fora da flor. necessrio algum outro factor
para induzir a funo de B fora das flores.

Triplo Mutante: Sep1,2,3 triplo mutante muito idntico ao duplo mutante B, C. As peas todas
aparecem tipo spalas. (SEP: AG like). Quando fazemos a mutao de um SEP, no h nenhum
fentipo. Na tripla mutao induz-se um fentipo igual ao mutante duplo B e C.

A perda de funo dos genes SEP individualmente no exibe nenhum fentipo notvel, mas
uma mutao tripla produz um fentipo igual a um mutante duplo B e C, ou seja, consiste
inteiramente de spalas e possui um desenvolvimento indeterminado. Isto permite concluir que os
3 genes SEP so necessrios para o correcto desenvolvimento de ptalas, estames e carpelos.
Funcionam redundantemente porque se fizermos o knock out de apenas um no temos alteraes.
Mas se os genes so iguais para que que a planta quereria manter 3 cpias iguais? O SEP3
tem uma expresso diferente do 1 e 2.


104

Interaces Moleculares entre ABC e SEP

A transcrio dos genes independente, nos mutantes ABC o RNA dos genes SEP acumula-
se normalmente e nos triplos mutantes sep a expresso dos ABC normal.
Na interaco entre proteinas, as proteinas com domnio MADS ligam-se in vitro como
dmeros (homo ou heterodmeros), no entanto in vivo estas combinaes no so conhecidas.

Ligao CarGbox: Em Arabidopsis AG liga-se como homodmero ou como heterodmero com
SEP1, mas AP3 e PI s formam heterodmeros entre si e no com os genes SEP o que exclui a
possibilidade da heterodimerizao como explicao da necessidade dos genes SEP e classe B para
formao de ptalas e de estames.

Identificando quais os genes de uma biblioteca de cDNA de flor que interactuam com o
complexo AP3/PI, verificou-se que interagem com AP1 e com SEP3. Assim, possvel que as
protenas MADS das flores funcionem atravs de interaces protena-protena. AG no interage
com o AP3 e PI diretamente, mas tem de interagir para formar os estames, interagindo atravs do
SEP3.

Como as protenas MADS formam dmeros entre si, a formao de tetrmeros aumentar a
capacidade de ligao s CArG boxes.

AP1 interage com SEP3 (possuem domnios activadores de transcrio localizados no
domnio C), e como podem formar homodmeros, um destes dmeros suficiente para fornecer o
domnio de activao do AP3 PI.

As protenas MADS podem-se associar em complexos maiores do que dmeros

Existem trs modelos que mostram como as protenas ABC e SEP interactuam umas com as
outras e com o DNA (sequncia conservada CarGbox) para direccionar a transcrio dos genes que
determinam a identidade dos rgos florais.

a) Modelo quaternrio, C-terminal das protenas MADs
interactua a ligao protena protena, ou seja, medeia a
interaco entre os dmeros. ( o modelo aceite hoje)

b) H um factor tercirio a interagir via C-terminal,
fundamental para alterar/especificar a ligao destes ao
DNA.

c) Os dmeros ligam-se a sequncias CArG box
adjacentes no envolvendo interaces entre protenas.


105

Folhas vegetativas de Plantas Transgnicas Triplos Mutantes

As folhas vegetativas so transformadas em rgos petalides e nos mutantes quando
fazemos a sobre expresso de:

35S::PI; 35S::AP3; 35S::AP1; 35S::PI; 35S::AP3; 35S::SEP3
E:
35S::PI;35S::AP3;35S::SEP3;35S::AG so transformadas em rgos estaminides.

Reviso do Modelo ABC

A reviso ao modelo ABC juntou-lhe a classe E porque a D j tinha sido encontrada

Isto mostra a existncia de complexos tercirios e quaternrios de interaces protena-
protena como base molecular do funcionamento do modelo ABC-SEP.

A expresso especfica dos genes SEP3 nas flores

A expresso especfica dos genes SEP3 nas flores, restringe a aco dos genes ABC s flo-
res.


106

LEAFY interage com UFO para activar os genes da
classe B - AP3 e PI
LEAFY interage com WUS para activar AG

Spalas: AP1, o sep3 no expresso no 1 circulo floral. O
AP2 no um factor de transcrio, no funciona como os
outros.
Ptalas: AP1, SEP3, PI e AP3.
Estames: PI, SEP3, AP3 e AG.
Carpelos: SEP3, AG, SEP3 e AG.

A expresso dos genes SEP3 restringe a expresso
dos ABC s flores. Se no mexermos no SEP3 no
conseguimos retirar a funo ABC das flores.

LFY activa os genes de identidade floral juntamente com
um co-activador, WUS para a classe C e UFO para o gene
AP3 da classe B.

Os mutantes ufo apresentam tambm problemas no
posicionamento dos rgos florais.
WUS episttico para AG no que respeita a determinao
floral, pois WUS necessrio para o meristema manter o seu
estado proliferativo.

SEP4

Encontrado o SEP4, no tem fentipo quando mutado sozinho mas mutando os 4 SEPs
apesenta os rgos todos tipo folhas. Isto indica que os genes SEPALLATA so tambm
responsveis pelo desenvolvimento das ptalas. O SEP 4 tambm gene do meristema floral.


107

Modelo actualizado de aco dos Genes Hometicos Florais

Genes da classe E so em todos os verticilos responsveis pelos genes A se manterem
expressos nas flores.

O modelo quarteto actualizado

Expresso dos mRNAs dos genes ABCE

O SEP1 e 2 so alelos muito fracos. O SEP3 est ausente nos verticilos externos mas o SEP4
no. Funo de represso mtua nos verticilos cadastral.


108

S quando os factores de transcrio se ligam que o gene lido. Alm de se ligarem tm
de interagir com os domnios protena protena.

Fim do meristema de influorescncia

Acontece quando gasto com a formao de carpelos. AG desliga o organizing center pois
ao ser expresso em grande quantidade reprime o WUS.

WUS e AG - negative feedback loop

WUS activa a transcrio de AG, que por sua vez reprime a expresso de WUS.


109

XVII Desenvolvimento do vulo

Ser um rgo floral separado ou um sub-rgo do carpelo ?

H fsseis que mostram megasporngios a formar-se na extremidade de rgos foliares
(teloma), um teloma fica frtil e os esteris recobrem-no (tegumento).
Outros registos mostram a formao de uma cpula (formada de folhas) a cobrir o pr-vulo.

Os vulos esto nos carpelos, cada folha carpelar tem 2 placentas onde esto os vulos.
Podem fechar parcialmente ou completamente sendo que tudo isto determinado pelos genes
hometicos florais. O megasporngio nos vulos chama-se nucelo.

Hoje em dia vemos ambas as hipteses. A placenta e os vulos podem surgir como
primrdios separados (Petunia hybrida) ou os vulos podem formar-se nas margens das folhas
carpelares (Arabidopsis).

Em Petunia hybrida dois genes MADS especficos dos vulos foram recentemente isolados,
FBP7 e FBP11, que codificam factores de transcrio importantes para iniciar o desenvolvimento
dos vulos expressando-se apenas dos 2 primeiros crculos. Os vulos aparecem na zona central
ligados ao septo.

Spagetti mutant: FBP7 e 11 suprimidos resulta em vulos alongados e formao de estruturas
carpelides tipo folhas carpelares alongadas. O fentipo deste mutante igual ao de Arabidopisis
com o AG sobre expresso.

Sobreexpressao de 7 e 11: induzimos a expresso de vulos nos 2 primeiros crculos florais, junto
das spalas e ptalas.

Isto demonstra que estes genes so fundamentais para a formao de vulos.

Aumento do Modelo ABC-D

D so os genes responsveis pela formao dos vulos.


110

Mutantes

Mutante wt: 2 tegumentos e tenuinucelado.

Mutante sin1 (short integuments): estreis, no ocorre meiose.

Mutante ant (aintegumenta): no possui tegumentos nem SE.

Mutante ats (altered testa shape): um s tegumento diferente e saco embrionrio normal.

Mutante sup (superman): devido ao elevado n de estames e carpelo reduzido. Tegumento alongado
e SE normal.

Mutante bel 1-1: o tegumento uma estrutura diferente. No desenvolve SE.

Mutante ino (inner no outer): no possui tegumento externo.

Regulao do Desenvolvimento do vulo

No se encontraram ortlogos do 7 e 11.

BEL1 um gene regulador que bloqueia a expresso tardia do AG nos tegumentos,
controlando o desenvolvimento do vulo via regulao negativa do AG.


111

a) wt

b) Mutante ap2 e ag: vulo muito alongado mas com saco
embrionrio.

c) Mutante bel: no se forma saco embrionrio.

d) Mutante ap2-ag-bel1: vulo tipo foliar sem saco embrionrio.

O AP2 e AG sao cadastrais, quando esto presentes tm de estar ambos. Quando tiramos o AG,
o AP2 estende-se. Quando tiramos o AP2, o AG estende-se. Se tirarmos ambos vemos um vulo
tipo folha. O BEL e AG atuam no desenvolvimento inicial dos vulos.

BEL

BEL1 e AG actuam no desenvolvimento inicial dos vulos
BEL1 necessrio para o correcto desenvolvimento dos tegumentos
BEL1 tambm necessrio para o correcto desenvolvimento do saco embrionrio.

Mutantes agamous

H a presena estranha de estruturas carpelides estranha. Existem vulos estranhos nas
margens.

Mais Genes envolvidos

AG: especifica a identidade dos carpelos mas no mutante ag/ap2 desenvolvem-se estruturas
carpelides no lugar das spalas. Actua redundantemente com SHP para especificar a identidade
dos carpelos.
SHP1 e SHP2 (SHATTERPROOF) actuam redundantemente com AG pois estes genes
expressam-se nos carpelos ectpicos de ap2. Promovem tambm a deiscncia dos frutos.
STK (SEEDSTICK) - outro gene redundante com AG.

Mutantes stk: as sementes no se separam quando maduras. O funculo muito maior nestes
mutantes.

Mutantes quadrplos ap2 ag shp1 e shp2: no apresentam nenhuma estrutura carpelar nem vulos.

35S::SHP1/2: fentipos idnticos expresso ectpica de AG.


112

STK sobre-expresso:

Mutante stk: as sementes no se separam quando maduras. O funculo muito maior nestes
mutantes e por isso ficam agarradas.

Expresso ectpica de STK num mutante agamous:

Clade agamous: conjunto onde todos os genes actuam para
especificar os vulos. Todos os membros do clade agamous
redundantemente especificam a identidade dos vulos.


113

Os 4 membros do clade
AGAMOUS contribuem para o
correcto desenvolvimento dos vulos.

Estes 4 genes tero evoludo
de um ancestral comum (duplicao
gnica) com posterior especificao.

As grandes famlias de
multigenes aparecem agora com os
genomas de Arabidopsis e de outros
organismos sequenciados.

AGAMOUS (AG): um gene de classe C, fundamental para a formao dos estames, determinao
floral, identidade dos carpelos e vulos.

SHATERPROOF: identidade dos frutos, carpelos e deiscncia dos frutos.

SEEDSTICK: vulos, crescimento e abciso do funculo.

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