Ciencias con lo mejor de Vernier 3 - 1

Experimento
3
Accin Enzimtica:
Actividad de la Catalasa
Muchos organismos pueden descomponer el perxido de hidrgeno (H
2
O
2
) por la accin de las
enzimas. Las enzimas son protenas globulares responsables de la mayor parte de la actiidad
!umica de los organismos ios. "ct#an como catalizadores, !ue son sustancias !ue aceleran las
reacciones !umicas sin ser destruidas o alteradas durante el proceso. Las enzimas son
extremadamente e$icientes y se pueden utilizar una y otra ez repetidamente. %na enzima puede
catalizar miles de reacciones en cada segundo. &anto los alores de pH como de la temperatura a
los !ue traba'a la enzima son extraordinariamente importantes. La mayora de los organismos
tienen un interalo de temperatura pre$erente en el cual sobreien y sus enzimas $uncionan me'or
dentro de dicho interalo de temperatura. (i el ambiente donde se encuentra la enzima es
demasiado )cido o demasiado b)sico* la enzima puede desnaturalizarse de $orma irreersible o
trans$ormarse de modo !ue su $orma no le permita m)s realizar su $uncionamiento apropiado.
+l H
2
O
2

es txico para la mayora de los organismos ios. Muchos organismos son capaces de
destruir el H
2
O
2

mediante la accin de enzimas antes de !ue pueda realizar mucho da,o. +l H
2
O
2

se conierte en oxgeno y agua seg#n la siguiente reaccin-
2 H
2
O
2
2 H
2
O . O
2

"un!ue esta reaccin ocurre espont)neamente* las enzimas incrementan la elocidad de reaccin
de $orma considerable. (e conoce !ue al menos dos enzimas di$erentes catalizan esta reaccin- a)
catalasa, !ue se encuentra en animales y protistas/ b) peroxidasa* !ue se encuentra en las plantas.
Mucho se puede aprender sobre las enzimas mediante el estudio de la rapidez de reacciones
catalizadas por enzimas. La rapidez de una reaccin puede estudiarse de muy diersas $ormas-
Midiendo la presin de los productos !ue aparecen (en este caso* O
2
)
Midiendo la elocidad de desaparicin del substrato (en este caso* H
2
O
2
)
Midiendo la elocidad de aparicin del producto (en este caso* O
2
!ue se desprende como
gas)
+n este experimento se medir) la rapidez de la actiidad de la enzima ba'o di$erentes condiciones
como- distintas concentraciones de la enzima* distintos alores de pH y distintas temperaturas. (e
3 - 2 Ciencias con lo mejor de Vernier
Experimento 3
puede medir la presin del oxgeno gaseoso $ormado mientras el H
2
O
2

se destruye. (i se obtiene
un gr)$ico* 0ste debe ser similar al !ue se muestra en la $igura a la derecha.
"l inicio de la reaccin no existe a#n un producto de la misma* por lo !ue la presin es igual a la
atmos$0rica. 1espu0s de un corto tiempo se acumula oxgeno a una elocidad bastante constante.
La pendiente de la cura en este periodo inicial es constante y de denomina velocidad inicial. "
medida !ue se destruye el perxido* !ueda menos para reaccionar y el O
2
se produce a menor
elocidad. 2uando se termina el peroxide ya no se produce m)s O
2
.
OBJETIVOS
+n este experimento usted
%sar) un computador y el sensor de presin de gas para medir la produccin de oxgeno
gaseoso a medida !ue el perxido de hidrgeno se destruye por la accin de la enzima
catalasa o peroxidasa a di$erentes concentraciones de la enzima.
Medir) y comparar) la elocidad inicial de reaccin para esta enzima cuando se utilizan
distintas concentraciones de la enzima !ue reacciona con H
2
O
2
.
Medir) la produccin de oxgeno gaseoso a medida !ue se destruye el perxido de
hidrgeno por la accin de la enzima catalasa o peroxidasa a arias temperaturas.
Medir) y comparar) la elocidad inicial de reaccin para la enzima a cada temperatura.
Medir) la produccin de oxgeno gaseoso a medida !ue el perxido de hidrgeno se
destruye por la accin de la enzima catalasa o peroxidasa a distintos alores de pH.
Medir) y comparar) la elocidad inicial de reaccin para la enzima a cada alor de pH.
1 2 3 4
Figura 1
ATE!IA"ES
2omputador 3aso de precipitado de 455 mL
6nter$az de 3ernier para computador (uspensin de enzima
Logger Pro 2uatro tubos de ensayo de 78 X 795 mm
(ensor de presin de gas de 3ernier hielo
&apn monohoradado (olucin amortiguadora de pH
:robeta de 75 mL ;radilla para tubos de ensayo
3aso de precipitado de 295 mL de agua termmetro
<= H
2
O
2
&res pipetas de goteo
#!OCE$IIE%TO
7. Obtenga y emplee guantes.
Ciencias con lo mejor de Vernier 3 - 3
Accin Enzimtica: Actividad de la Catalasa
2. 2onecte el sensor de presin de gas a la inter$az para computador. :repare el computador
para la recoleccin de datos abriendo el archio >54? +nzima (:resin)@ de la carpeta
Biologa con Vernier del Logger Pro.
<. 2onecte el tubo pl)stico a la )lula en el sensor de presin de gas.
#arte I Ensa&o del E'ecto de la concentracin de la Enzima
A. 2olo!ue cuatro tubos de ensayo en la gradilla y eti!u0telos como 7* 2* <* y A. Llene
parcialmente un aso de precipitado con agua corriente para usarlo en el :aso 9.
9. ",ada < mL de agua y < mL de H
2
O
2
al <= a cada tubo.
4. %sando una pipeta de goteo limpia* a,ada 7 gota de suspensin de enzima al &ubo de +nsayo
7. Nota- "seg#rese !ue la enzima no caiga por los lados del tubo de ensayo.
Tabla 1
Etiqueta de Tubo de Ensayo Volumen de 3% H2O2 (mL) Volumen de agua (mL)
1 3 3
2 3 3
3 3 3
4 3 3
B. 2olo!ue el tapn en el tubo de ensayo y agtelo bien para lograr la mezcla completa del
contenido. 1ebe comenzar la reaccin. +l prximo paso debe realizarse
lo m)s pronto posible.
8. 2onecte el extremo libre del tubo de pl)stico al conector en el tapn de goma seg#n se
muestra en la Cigura <. Haga clic en el botn Iniciar toma de datos para comenzar la
ad!uisicin de datos. La toma de datos terminar) en < minutos.
D. (i la presin excede el alor 7<5 E:a* la presin dentro del tubo ser) demasiado alta y el tapn
saltar) destapando el tubo. 1esconecte el tubo pl)stico del sensor de presin de gas si la
presin excede el alor de 7<5 E:a.
Figura 2
3 - 4 Ciencias con lo mejor de Vernier
Experimento 3
75. %na ez terminada la ad!uisicin de datos* desconecte el conector del tubo pl)stico del tapn
de goma. Fetire dicho tapn del tubo de ensayo y deseche el contenido en un aso de
precipitado de desperdicios.
77. +ncuentre la elocidad de la actiidad enzim)tica-
a. Muea el puntero del mouse hasta el lugar donde los datos comienzan a aumentar su
alor. Mantenga presionado el botn del mouse. "rrastre el puntero del mouse hasta el
punto donde los alores de la presin no aumenten m)s y suelte dicho botn.
b. Haga clic en el botn "'uste Lineal * para realizar la regresin lineal. "parecer) una ca'a
$lotante con la $ormula de la lnea del me'or a'uste.
c. Fegistre la pendiente de la lnea* m* como la elocidad de la actiidad enzim)tica en la
&abla A.
d. 2ierre la ca'a $lotante de la regresin lineal.
72. +ncuentre la elocidad de la actiidad +nzim)tica para los tubos de ensayo 2 G A-
a. "gregue 2 gotas de la solucin de enzima al tubo de ensayo 2. Fepita los pasos B G 77.
b. "gregue < gotas de la solucin de enzima al tubo de ensayo <. Fepita los pasos B G 77.
c. "gregue A gotas de la solucin de enzima al tubo de ensayo A. Fepita los pasos B G 77.
#arte II Ensa&o del e'ecto de la Temperat(ra
7<. 2olo!ue cuatro tubos de ensayo limpios en la gradilla y eti!u0telos & 5 G 9* & 25 G 29* & <5 G <9
y & 95 G 99.
7A. "gregue < mL de <= H
2
O
2
y < mL de agua a cada tubo de ensayo* como se muestra en la
&abla 2.
Tabla 2
Etiqueta de tubo de ensayo Volumen de 3% H2O2 (mL) Volumen de agua
T 0 ! 3 3
T 20 2! (tem"# ambiente) 3 3
T 30 3! 3 3
T !0 !! 3 3
79. Mida la actiidad +nzim)tica a 5 G 92-
a. :repare un ba,o de agua a la temperatura correspondiente al interalo de 5 G 92
colocando agua y hielo en un aso de precipitado de 455 mL. "segure !ue la temperatura
permanece en dicho rango a lo largo del ensayo.
b. 2olo!ue el tubo de ensayo & 5 G 9 en el ba,o de agua $ra hasta !ue la temperatura de la
mezcla alcance una temperatura dentro del interalo de 5 G 92. Fegistre el alor real de la
temperatura del contenido del tubo de ensayo en el espacio en blanco en la &abla A.
c. "gregue 2 gotas de solucin enzim)tica al tubo de ensayo & 5 G 9. Fepita los pasos B G 77.
74. Mida la actiidad +nzim)tica a <5 G <92-
a. :repare un ba,o de agua a la temperatura correspondiente al interalo de <5 G <92
colocando agua caliente en un aso de precipitado de 455 mL. "segure !ue la temperatura
permanece en dicho rango a lo largo del ensayo.
Ciencias con lo mejor de Vernier 3 - 5
Accin Enzimtica: Actividad de la Catalasa
b. 2olo!ue el tubo de ensayo & <5 G <9 en el ba,o de agua caliente hasta !ue la temperatura
de la mezcla alcance una temperatura entre <5 G <92. Fegistre el alor real de la
temperatura del contenido del tubo de ensayo en el espacio en blanco en la &abla A.
c. "gregue 2 gotas de solucin enzim)tica al tubo de ensayo & <5 G <9. Fepita los pasos B G
77.
7B. Mida la actiidad +nzim)tica a 95 G 992-
a. :repare un ba,o de agua a la temperatura correspondiente al interalo de 95 G 992
colocando agua muy caliente en un aso de precipitado de 455 mL (el agua corriente de la
tubera caliente serir) probablemente). "segure !ue la temperatura permanece en dicho
rango a lo largo del ensayo.
b. 2olo!ue el tubo de ensayo & 95 G 99 en el ba,o de agua muy caliente hasta !ue la
temperatura de la mezcla alcance la temperatura del interalo 95 G 992. Fegistre el alor
real de la temperatura del contenido del tubo de ensayo en el espacio en blanco en la &abla
A.
c. "gregue 2 gotas de solucin enzim)tica al tubo de ensayo & 95 G 99. Fepita los pasos B G
77.
78. Mida la actiidad enzim)tica a 25 G 292 (temperatura ambiente)-
a. Fegistre la temperatura del tubo de ensayo & 25 G 29 en la &abla A.
b. +n el tubo con la eti!ueta & 25 G 29* agregue 2 gotas de solucin enzim)tica. Fepita los
pasos B G 77.
#arte III Ensa&o del E'ecto del p)
7D. 2olo!ue tres tubos de ensayo limpios en la gradilla y eti!u0telos con los siguientes datos- pH
A* pH B y pH 75.
25. "gregue < mL de <= H
2
O
2
y < mL de cada solucin amortiguadora de pH a cada tubo de
ensayo* como se ilustra en la &abla <.
Tabla 3
"H solu$i%n amo&tiguado&a Volumen de 3% H2O2 (mL) Volumen de solu$i%n amo&tiguado&a (mL)
"H 4 3 3
"H ' 3 3
"H 10 3 3
27. +n el tubo con la eti!ueta pH A* agregue 2 gotas de solucin enzim)tica. Fepita los B G 77.
22. +n el tubo con la eti!ueta pH B* agregue 2 gotas de solucin enzim)tica. Fepita los B G 77.
2<. +n el tubo con la eti!ueta pH 75* agregue 2 gotas de solucin enzim)tica. Fepita los B G 77.
$ATOS
Tabla 4
Etiqueta de tubo de ensayo (endiente o &a"ide) (*(a+min)
1 gota
3 - 6 Ciencias con lo mejor de Vernier
Experimento 3
2 gotas
3 gotas
4 gotas
0 ! ,- ..... ,
20 2! ,- ..... ,
30 3! ,- ..... ,
!0 !! ,- ..... ,
"H 4
"H '
"H 10
Ciencias con lo mejor de Vernier 3 - 7
Accin Enzimtica: Actividad de la Catalasa
#!OCESAIE%TO $E $ATOS
*r'ico de la concentracin de enzima
7. +n la p)gina 2 del archio de este experimento* genere el gr)$ico de la elocidad de la
actiidad enzim)tica vs. 2oncentracin de enzima. Los alores de elocidad se deben gra$icar
en el e'e ertical (e'e y) y el n#mero de gotas de enzima en el e'e horizontal (e'e x). Los
alores de la elocidad son los mismos !ue los alores de las pendientes en la &abla A.
*r'ico de Temperat(ra
2. +n la p)gina < del archio de este experimento* genere el gr)$ico de la elocidad de la
actiidad enzim)tica vs. &emperatura. Los alores de elocidad se deben gra$icar en el e'e
ertical (e'e y) y los de temperatura en el e'e horizontal (e'e x). Los alores de la elocidad
son los mismos !ue los alores de las pendientes en la &abla A.
*r'ico del p)
<. +n la p)gina A del archio de este experimento* genere el gr)$ico de la elocidad de la
actiidad enzim)tica vs. pH. Los alores de elocidad se deben gra$icar en el e'e ertical (e'e
y) y el pH en el e'e horizontal (e'e x). Los alores de la elocidad son los mismos !ue los
alores de las pendientes en la &abla A.
#!E*+%TAS
#arte I E'ecto de la Concentracin de Enzima
7. HIu0 e$ecto hace el cambio en la concentracin de la enzima en la elocidad de
descomposicin del H
2
O
2
J
2. HIu0 cree usted !ue pasar) con la elocidad de reaccin si la concentracin de enzima se
aumenta a 9 gotasJ :rediga cu)l debera ser la elocidad de reaccin para 9 gotas.
#arte II E'ecto de la Temperat(ra
<. H" !u0 temperatura es m)xima la elocidad de la actiidad enzim)ticaJ HMnimaJ +xpli!ue.
A. H2mo a$ecta el cambio de temperatura a la elocidad de la actiidad enzim)ticaJ H2oncuerda
esto con el patrn !ue usted anticipJ
9. H:or !u0 la actiidad enzim)tica disminuye a temperaturas eleadasJ
#arte III E'ecto del p)
4. H" !u0 alor de pH es m)xima la elocidad de la actiidad enzim)ticaJ HMnimaJ
B. H2mo a$ectan los cambios de pH a la elocidad de la actiidad enzim)ticaJ H2oncuerda esto
con el patrn !ue usted anticipJ
E,TE%SIO%ES
7. 1i$erentes organismos a menudo ien en muy di$erentes habitats. 1ise,e una serie de
experimentos para inestigar cmo los di$erentes tipos de organismos pueden a$ectar a la
elocidad de la actiidad enzim)tica. 2onsidere ensayos con planta* animal y protista.
3 - 8 Ciencias con lo mejor de Vernier
Experimento 3
2. :resumiblemente a mayores concentraciones de H
2
O
2*
debe aumentar la probabilidad !ue una
mol0cula de enzima pueda colisionar con H
2
O
2
.
(i $uera as* la concentracin de H
2
O
2

pudiera
alterar la elocidad de produccin de oxgeno. 1ise,e un con'unto de experimentos para
inestigar cmo di$erentes concentraciones del substrato perxido de hidrgeno pudieran
a$ectar la elocidad de la actiidad enizim)tica.
<. 1ise,e un experimento para determinar el e$ecto de herir la catalasa sobre la elocidad de la
reaccin.
A. +xpli!ue cmo los $actores ambientales a$ectan la elocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas.