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BILOGA
Morelia, Michoacn, Noviembre de 2010
UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN
NICOLS DE HIDALGO
FACULTAD DE BIOLOGA
ENTEROBACTERIASDELAGUADELMEANDRODELROLERMAEN
LAPIEDAD,MICHOACNYSANTAANAPACUECO,GUANAJUATO
Tesis
Quepresenta
Figuura 1. Ubic
cacin dell municipi
18
o de La Piedad, Mic
choacn.
19
5. MATERIALES Y MTODOS
5.1. Materiales
Autoclave
Campana de flujo laminar
Balanza granataria
Bao de agua con control de la temperatura
Estufa incubadora con regulador de temperatura
Refrigerador
Potencimetro
Termmetro de mercurio
Gradillas
Tubos tipo Falcn estriles
Tubos de ensayo
Matraces Erlen-Meyer de 250, 500 y 1000 ml.
Cajas de Petri desechables
Micro pipeta de 1000 l
Asas bacteriolgicas.
Portaobjetos y cubreobjetos.
5.2. Medios de cultivo
Agar Nutritivo
Galeras Biomereux API20E
5.3. MTODOS
El presente estudio se llev a cabo en el laboratorio de Gentica y
Microbiologa ubicado en el edificio B4 del Campus de Ciudad Universitaria,
perteneciente a la Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo. Se
establecieron los sitios de muestreo en el tramo del ro Lerma (meandro) y en el
20
Dren artificial, que atraviesa las ciudades de La Piedad, Michoacn y Santa Ana
Pacueco, Guanajuato, mediante un recorrido inicial por la zona (Figura 2).
Figura 2. Fotografa area del ro Lerma en su tramo que atraviesa las ciudades
de La Piedad, Michoacn y Santa Ana Pacueco, Guanajuato. Tomada de
Googleearth. Los sitios de muestreo se representan con tringulos amarillos.
21
Se realizaron cuatro muestreos para cubrir las diferentes condiciones del
ao. Las muestras de agua se tomaron en frascos de vidrio estriles de 100 ml, a
una profundidad de 10 cm y posteriormente fueron colocados en hielo para evitar
el crecimiento bacteriano. Se trasladaron las muestras al laboratorio para su
anlisis.
Temperatura y pH del agua
La temperatura se determin con un termmetro de mercurio marca
Brennan, con precisin de 1
0
C. Para determinar el pH se tom la muestra de
agua (50 ml) y se coloc en hielo, para trasladarse al laboratorio, donde se utiliz
un potencimetro Conductronic pH20. Las concentraciones de oxgeno disuelto
fueron solicitadas al subproyecto de Calidad del Agua.
Aislamiento de colonias en Agar Nutritivo
Las muestrascon diferentes diluciones del agua se dispersaron sobre cajas
de Agar Nutritivo slido utilizando una varilla de vidrio estril, pasada por alcohol y
flameada. Las cajas se incubaron a 37C por 24 h y las colonias bacterianas
diferentes en morfologa y color fueron resembradas en cajas individuales del
mismo medio.
Prueba de Gram
Esta tincin clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram
negativas. La tcnica incluye tincin primaria, decoloracin y tincin de contraste:
a) Se tie el espcimen con el primer colorante, cristal violeta.
b) Se aade el mordiente, yodo.
22
c) Se aplica el agente decolorante, normalmente una solucin de alcohol-acetona.
En este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tincin violeta, pero las
Gram positivas retienen el colorante.
e) Se adiciona safranina durante un minuto.
f) Se retira el colorante con agua destilada y se observa al microscopio
Prueba de oxidasa (citocromooxidasa)
La prueba de citocromo oxidasa permite detectar la enzima citocromo
oxidasa de la cadena transportadora de electrones y por consiguiente descartas a
las Enterobacterias que son todas oxidasas negativas, de otros Gram negativos,
principalmente no fermentadoras
Se segui el protocolo de placa directa:
a) Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda
la placa y no invertirla.
b) Observar los cambios de color. Con el reactivo de Kovacs la reaccin se
produce en unos 10-15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es
dentro de los 10-30 minutos.
Preparacin de la solucin salina 0.85% para suspensin bacteriana de API
20 E
a) Pesar 8.5 gr de NaCl.
b) Aforar a un litro con agua destilada o de preferencia tridestilada
c) Colocar en tubos de 7 ml con tapn de rosca, muestras de 4 ml.
d) Esterilizar a 120
0
C por 20 minutos
23
Identificacin de gneros y especies de bacterias de la familia
Enterobacteriaceae
La galera API20E consta de 20 microtubos que contienen medios
deshidratados. Las galeras se inocularon con una suspensin bacteriana; el
metabolismo de los microorganismos produce cambios de color en el medio, ya
sea directamente o tras adicin de reactivos. Tras 18-24 horas a 35-37 C se hizo
la lectura de la galera segn la tabla de lectura.
Las galeras tienen diferentes pruebas que se describen a continuacin:
ONPG, Es produccin de -galactosidasa, el sustrato utilizado es o-nitrofenil--D-
galactsido. El medio es incoloro; pero si la reaccin resultara positiva cambiar a
amarillo.
ADH, Es la produccin de arginina dihidrolasa, el sustrato que se utiliza es
arginina. Posterior a las 24 horas de incubacin se le aade una gota de reactivo
TDA (3.4g percloruro frrico +100ml de agua destilada). El medio es de color
amarillo y una reaccin positiva lo har cambiar a marrn.
LDC, Es produccin de lisina decarboxilasa, se utiliza lisina como sustrato. El
medio, de color amarillo vira al naranja cuando la prueba es positiva.
ODC, Produccin de ornitina decarboxilasa utilizando como sustrato ornitina. El
medio es amarillo; una reaccin positiva lo hace virar hacia el naranja-rojo.
CIT, Utilizacin de citrato. Cuando la prueba resulta positiva el medio vira del
amarillo al verde.
H
2
S, Produccin de sulfuro de dihidrgeno utilizando como sustrato tiosulfato de
sodio. El medio es incoloro-grisceo, cuando la prueba es positiva se forma un
depsito negro.
URE, Produccin de ureasa. El sustrato es urea, y si la reaccin es positiva el
medio, de color amarillo, vira al naranja-rojo.
24
TDA, Produccin de triptfano desaminasa utilizando como sustrato triptfano. El
medio es amarillo; cuando la prueba es positiva se puede apreciar un viraje al
marrn.
IND, El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido
triptfano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y
desaminar el triptfano con produccin de indol, cido pirvico y amonaco. La
produccin de indol es una caracterstica importante para la identificacin de
muchas especies de microorganismos. La prueba de indol est basada en la
formacin de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo del
p-dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio activo de los reactivos de Kovacs
y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.
VP, Prueba de Voges Proskauer. En sta se determina la va de fermentacin del
butanodiol descrita en la prueba de rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol (o
acetona) es un producto intermediario en la produccin de butanodiol. En medio
alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada a diacetilo. ste se
revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
GEL, Produccin de proteasas El medio contiene gelatina y tinta china. Si la
bacteria estudiada produce proteasas capaces de hidrolizar el sustrato, la tinta
china difunde, obtenindose una prueba positiva. En caso contrario la reaccin es
negativa.
Se cre una anaerobiosis con aceite de parafina en los ensayos: ADH,
LDC, ODC, H2S, URE.
Fermentacin de azcares. Los medios son de color azul verdoso; una
reaccin positiva viene dada por una coloracin amarilla. Ls pruebas especficas
se describen en la tabla 1.
25
Tabla 1. Pruebas de azcares de las galeras API20E
GLU
fermentacin/oxidacin de glucosa
MAN
fermentacin/oxidacin de manosa
INO:
Fermentacin/oxidacin de inositol
SOR
Fermentacin/oxidacin de sorbitol
RHA
Fermentacin/oxidacin de ramnosa
SAC
Fermentacin/oxidacin de sacarosa
MEL
Fermentacin/oxidacin de melobiosa
AMY
Fermentacin/oxidacin de amigdalina
ARA
Fermentacin/oxidacin de arabinosa
Descripcin de la produccin de indol
El indol es el producto final de la desaminacion del triptfano por bacterias
que presentan triptofanasa, con produccin de piruvato y amoniaco que se
detectan al agregar el P-dimetil aminobenzaldehido (Reactivo de Ehrlich o Kovac)
generando una capa de color rojo en el medio por ejemplo: MIO (movilidad indol
ornitina). (Figura 3).
26
Figura 3. Produccin de indol.
Descripcin de la prueba de descarboxilacin de aminocidos: arginina,
ornitina y lisina
Las Enterobacterias presentan descarboxilasas, enzimas capaces de
reaccionar con aminocidos especficos en el medio de prueba, con lo cualse
liberan aminas de reaccin alcalina y dixido de carbono y se leen con un
indicador de pH que se encuentra en el medio de prueba. La conversin de
arginina a citrulina es una dihidrolasa mas que descarboxilasa, en el cual el grupo
NH
2
es removido de la arginina como primer paso, luego la citrulina es convertida
en ornitina, la que es descarboxiada para formar putrescina:
Lisina cadaverina +CO
2
Ornitina putrescina +CO
2
Arginina citrulina +CO
2
27
Prueba de orntonitrofenil beta- d-galactsido
Las bacterias que fermentan lactosa poseen lactosa permeasa (beta-
galactsido permeasa)y beta galactosidasa, dos enzimas necesarias para la
produccin de cidos en la fermentacin de lactosa. La permeasa es necesaria
para que la molcula de lactosa ingrese en la celula bacteriana donde la beta-
galactosidasa puede romper la unin galactsido, produciendo glucosa y
galactosa. Las bacterias no fermentadoras de lactosa no poseen estas dos
enzimas, algunas carecen de lactosa permeasa y son fermentadores tardos de
lactosa.El ortonitrofenil beta D-galactsido (ONPG), es estructuralmente similar a
la lactosa, excepto en que la glucosa ha sido sustituida por ortonitrofenilo. En
fermentadores rpidos el ortonitrofenilo es liberado por accin de la beta-
galactosidasa formando ortonitrofenol, ste es un cromoforo que al ser liberado da
una coloracin amarilla.Resultados positivos nos dan un cambio de claro a
amarillo. Figura 4.
28
Figura 4. Internalizacin y rompimiento de la lactosa a glucosa y galactosa.
Descripcin de la prueba de Vogues-Proskauer
Se basa en la conversin de acetil metil carbinol (acetona) en diacetil a
travs de la accin de KOH y oxgeno atmosfrico. El diacetil es convertido en un
complejo rojo por la accin cataltica de alfa naftol y creatina y se determina en
bacterias que utilizan la via alternativa de acetona y butilenglicol en el
metabolismo del cido pirvico. Figura 5.
29
Figura 5. Prueba de Vogues-Proskauer.
30
Componentes, reactivos adicionales e interpretacin de las pruebas
bioqumicas de las galeras API20E
Las pruebas bioqumicas de las galeras API20E consisten en
reaccionesque se interpretan por coloraciones. En la tabla 2 se describen los
componentes de cada una de las pruebas y su interpretacin. En la figura 6 se
presentan los casos ms claros de las pruebas positivas y negativas, pero cabe
aclarar que no siempre se obtienen las coloraciones de esa manera y que
depende de la experiencia la interpretacin que se puede dar a cada una de las
pruebas, principalmente las de azcares.
Para la prueba de TDA: Se agrega una gota de TDA (FeCl
3
10%) un color
marrn-rojizo indic una reaccin positiva.
Para la prueba de IND: Se agrega una gota del reactivo J AMES un color
rosado que se difumina en la cpula indica una reaccin positiva.
Prueba VP (Vogues Proskauer): Se agreg el reactivo VP1 (KOH) y VP2
(alfa naftol y creatina) y se ley la reaccin antes de 10 min. Una coloracin rosa
o roja en ese margen de tiempo indic una reaccin positiva. Despus se
consider negativa.
Se ley la galera anotando las reacciones en la hoja de resultados, para
buscar los posibles gneros y especies de las cepas encontradas. Debido a que
las combinaciones posibles de las pruebas para ubicar los gneros y las especies
son muy diversas (Tablas A y B de anexos), se utiliz el software para corroborar
el acierto de las especies encontradas, de igual manera s busc informacin ms
detallada acerca de las descripciones de las especies que permitieran asegurar lo
encontrado.
31
Tabla 2. Componentes de cada una de las celdas de las
pruebas bioqumicas y su interpretacin
PRUEBA COMPONENTES
ACTIVOS
miligramos REACCIONES-
ENZIMAS
NEGATIVO POSITIVO
ONPG 2 nitrofenil beta D
galactopiransido
0.223 Beta
galactosidasa
incolora Amarillo
ADH L-arginina 1.9 Arginina
dihidrolasa
amarillo Rojo/
anaranjado
LDC L-lisina 1.9 Lisina
descarboxilasa
amarillo Rojo/
anaranjado
ODC L-ornitina 0.756 Ornitina
descarboxilasa
amarillo Rojo/
anaranjado
CIT Citrato trisdico 0.075 Utilizacin del
citrato
Verde Azul
H
2
S Tiosulfato sdico 0.76 Produccin de
H
2
S
Incoloro Negro
URE Urea 0.38 Ureasa Amarillo Rosa/rojo
TDA L-triftfano 0.19 Triptfano
desaminasa
Amarillo Marrn
rojizo
IND L-triftfano 0.6 Produccin de
indol
Incoloro Rosa
VP Piruvato sdico 1.9 Produccin de
acetoina
Incoloro Rosa/rojo
GEL Gelatina (origen
bovino)
1.9 Gelatinasa No difusin Difusin
GLUC D-glucosa 1.9 O/F glucosa Azul Amarillo
MAN D-manitol 1.9 O/F D-manitol Azul Amarillo
INO Inositol 1.9 O/F Inositol Azul Amarillo
SOR D-sorbitol 1.9 O/F D-sorbitol Azul Amarillo
RHAM L-ramnosa 1.9 O/F L-ramnosa Azul Amarillo
SAC D-sacarosa 1.9 O/F D-sacarosa Azul Amarillo
MEL D-melibiosa 1.9 O/F D-melibiosa Azul Amarillo
AMY Amigdalina 0.57 O/F Amigdalina Azul Amarillo
ARA L-arabinosa 1.9 O/F L-arabinosa Azul Amarillo
OXI P-
aminodimetilanilina
1.9 Citocromo
axidasa
Incoloro Azul
purpura
32
Figura 6. Ejemplo de las coloraciones obtenidas para cada una de las pruebas
cuando son positivas (parte superior) o negativas (parte inferior).
Procedimiento de inoculacin de galeras API 20 E
Se realiza en condiciones de esterilidad, resuspendiendo la colonia fresca
en la solucin salina y posteriormente inoculndola en cada uno de los tubos. Las
condiciones de esterilidad se hacen mediante parafina lquida. (Figura 7).
33
Figura 7. Inoculacin de las galeras API20E.
34
6. RESULTADOS
48
Tabla 9.Parmetros Fisicoqumicos obtenidos en el Muestreo 2
Temperatura
C
pH Oxgeno
Disuelto
mg/L
Demanda
Bioqumica
de Oxgeno
mg/L
Nitratos
mg/L
Nitrgeno
Amoniacal
mg/L
S1 21.6 8.5 2.5 73 1.0833 1.2
S2 23.4 9.2 1.60 48.6 1.76 2.19
S3 22.2 9.35 1.41 105.4 10.56 1.8
S4 26.3 9.55 1.80 20.4 0.66 0.999
S5 26.4 9.08 3.5 28.8 0.933 0.38
S6 27.9 8.98 3.79 34.5 0.77 0.75
S7 28.6 9.27 5.7 101.34 1.6 4.1
S8 28.4 9.22 Nd 61 Nd Nd
49
Tabla 11. Parmetros Fisicoqumicos obtenidos en el muestreo 4
Temperatura
C
pH Oxgeno
Disuelto
mg/L
Demanda
Bioqumica
de Oxgeno
mg/L
Nitratos
mg/L
Nitrgeno
Amoniacal
mg/L
S1 21.5 7.64 0.14 38.98 0.275 3.393
S2 22.3 8.29 4.08 46.6 0.23 2.26
S3 22.6 8.29 0.58 27.2 0.605 4.407
S4 23.1 8.09 1.39 54.6 0.646 2.025
S5 22.5 8.84 1.47 54.4 0.632 1.582
S6 24.1 8.6 3.17 54.36 0.56 4.859
S7 22.0 8.66 0.03 66 0.721 1.276
S8 19.7 9.16 Nd 52.2 0.91 2.52
50
Figura 14. Parmetros fsicoqumicos en los 8 sitios durante el muestreo 1.S1 a
S8 representan los sitios de muestreo.
0 5 10 15 20 25 30 35 40
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
NitrgenoAmoniacalmg/L
Nitratosmg/L
DemandaBioqumicadeOxgeno
mg/L
OxgenoDisueltomg/L
pH
TemperaturaC
51
Figura 15. Parmetros fsicoqumicos en los 8 sitios durante el muestreo 2.S1 a
S8 representan los sitios de muestreo.
0 20 40 60 80 100 120
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
NitrgenoAmoniacalmg/L
Nitratosmg/L
DemandaBioqumicadeOxgenomg/L
OxgenoDisueltomg/L
pH
TemperaturaC
52
Figura 16. Parmetros fsicoqumicos en los 8 sitios durante el muestreo 3.S1 a
S8 representan los sitios de muestreo.
0 10 20 30 40 50 60 70 80
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
NitrgenoAmoniacalmg/L
Nitratosmg/L
DemandaBioqumicade
Oxgenomg/L
OxgenoDisueltomg/L
pH
TemperaturaC
53
Figura 17. Parmetros fsicoqumicos en los 8 sitios durante el muestreo 4. S1 a
S8 representan los sitios de muestreo.
0 10 20 30 40 50 60 70
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
NitrgenoAmoniacalmg/L
Nitratosmg/L
DemandaBioqumicadeOxgenomg/L
OxgenoDisueltomg/L
pH
TemperaturaC
54
6.3. Descripcin algunos gneros y especies de Enterobacterias
identificadas
Klebsiella pneumoniae
Es una bacteria Gram negativa, fermentadora de lactosa. Clulas
encapsuladas. Inmviles. Facultativamente anaerobias. Quimioorganotrofas, con
dos tipos de respiracin y con metabolismo fermentativo. La temperatura ptima
esde 37
0
C. La D-Glucosa y otros carbohidratos se catabolizan con la produccin
de cido y gas, pero se producen cepas aerogenas. Oxidasa negativos y
catalizadores positivos de Indol, rojo de metilo, Vogues- Proskauer, citrato de
Simmons. Por lo general positiva para lisina descarboxilasa y ornitina
descarboxilasa negativa. Arginina dehydrolasa negativas. Varias especies
hidrolizan la urea. Crecen en KCN. Produccin de H
2
S. La mayora de las
especies fermentan todos los carbohidratos con frecuencia excepto dulcitol y
eritritol. Se producen en las heces humanas y las muestras clnicas, el suelo, el
agua, granos y verduras. Puede causar bacteriemia, neumona y otras
infecciones en seres humanos.Son causa frecuente de infecciones
nosocomiales en urologa, en la atencin neonatal intensiva y en os pacientes
geritricos.
Ewingella
Facultativamente anaerbicos y quimioorganotrficas, teniendo una
respiracin y metabolismo fermentativo. La temperatura ptima es 37
0
C. La D-
Glucosa y algunos otros hidratos de carbono se catabolizan con la produccin de
cido. Oxidasa negativa, catalasa positiva, Indol negativas. La mayora de las
cepas son rojo de metilo positivo. Voges-Proskauer y citrato de Simmons
positivos, negativos en las pruebas de la lisina y ornitina descarboxilasa, arginina
dihidrolasa, H
2
S, la ureasa, y malonato. Reduce los nitratos. Los hidratos de
carbono fermentados incluyen D-manitol, D-manosa, y la trehalosa.
55
Frecuentemente aisladas de clnicas de humanos, de esputo ms a menudo,
las heridas y la sangre. Es un patgeno oportunista frecuente.
Tipo y nica especie: Ewingella americana.
Enterobacter
Gram negativas. Mviles con flagelos (excepto E. Asburiae).
Facultativamente anaerobias y quimioorganotrficas, teniendo una respiracin y
metabolismo fermentativo. Temperatura ptima de 30 a 37
0
C. La D-Glucosa y
algunos otros hidratos de carbono se catabolizan con la produccin de cido y
gas. Indol negativo. La mayora de las cepas en Voges-Proskauer y citrato de
Simmons dan positivo. Lisina negativas (excepto E. Gergoviae) y ortinina positiva
(excepto E. Agglomerans). El melanoato es usual utilizarlo y la gelatina lquida es
muy lenta (3-14 dias) en muchas cepas. H
2
S. Desoxirribonuleasa. La lipasa no se
produce. Los carbohidratos son fermentados en muchas cepas, inclusive L-
arabinosa, celobiosa, maltosa, D-manitol, D-manosa y tetralosa. Estn
extensamente distribuidas en la naturleza, se presentan en agua fresca, tierra,
aguas residuales, plantas y animales, y en heces fecales humanas. Varias
especies notables sonE. Cloacae, E. Sakazasii, E. Aerogenes, E. Agglomerans, y
E. Gergoviae. Son patgenos oportunistas. Causan infecciones en
quemaduras, heridas, zonas urinarias y ocasionalmente septicemia y
meningitis.
Pantoea
Gram negativas. Mviles con flagelos. Muchas cepas producen un pigmento
amarillo. Facultativamente anaerobias, quimioorganotrficas, teniendo una
respiracin y un metabolismo fermentativo. La temperatura ptima es de 30
0
C. La
D-glucosa y otros carbohidratos se catabolizan con la produccin de cido, pero
no de gas. Oxidasa positiva, catalasa positiva, Indol negativa, Voges-Proskauer y
56
citrato de Simmons positiva, y variable en rojo metilo. Negativo para lisina y
ortinina descarboxilasa y para arginina hidrolasa. Se ha encontrado que el 30% de
P. Agglomeransdan ortinina descarboxilasa positiva; otros estudios previos
reportaron varias cepas negativas). No se produce H
2
S. La urea no se hidroliza.
Varias cepas crecen en KCN. El melanoato es utilizadoen varias especies. Reduce
nitratos. Muchas cepas fermentan carbohidratos inclusive L-arabinosa, D-
galactosa, maltosa, D-manosa, L-rabinosa, sacarosa, tetralosa, y D-xylosa.
Aisladas en la superficies de plantas, semillas, suelo y agua. Tambin aisladas
de animales y humanos, en sangre y orina. Son patgenos oportunistas.
Pseudomonas
Gram negativas. Aerbicos teniendo estrictamente una respiracin y tipo de
metabolismo con oxgeno con una unidad terminal aceptadora de electrones. En
algunos casos pueden usar el nitrato como sustituto del electrn aceptor, lo que
permite que se les encuentre en condiciones anaerobias. Oxidasa positiva o
negativa. Muchas especies acumulan poli-B-hidroxibutirato como material de
reserva de carbono, que aparece como inclusiones sudanoflicas. Hay formas de
resistencia que se conocen.Mviles por uno o varios flagelos polares. En algunas
hay flagelos laterales y cortos en longitud y tambin en forma. No todas las
especies crecen bajo condiciones cidas (pH 4.5). Varias especies no requieren
de factores orgnicos. Catalasa positiva y quimioorganotrficas. Algunas especies
son facultativamente quimiotrficas. Capaces de usar H
2
o CO como energa. Muy
distribuidas en la naturaleza. Algunas especies son patgenas de humanos,
animales o plantas.
Aeromonas
Gram negativas. Generalmente mviles con flagelos sencillos polares (los
flagelos peritricos forman medios de comunicacin slidos en cultivos jvenes),
facultativamente anaerobias. Quimioorganotrficas teniendo una respiracin y tipo
57
de metabolismo fermentativo. La temperatura ptima es de 22-28
0
C, muchas
especies crecen bien en 37
0
C pero algunas cepas no. La D-glucosa y otros
carbohidratos son catabolizados con la produccin de cidos y a menudo de gas.
Oxidasa positiva y catalasa positiva. Generalmente son arginina hidrolasa positiva
y ortinina descarboxylasa negativa. Las pruebas de ureasa y de fenilalanina
desaminasa son negativas. La Gelatinasa y Dnasa son positivas. Reduce nitratos.
Los carbohidratos son fermentados por casi todas las cepas, inclusive maltosa, D-
galactosa, y trehalosa. Resistente a la agentes vibriostaticos 2,4-diamino-6,7-
diisopropilpteridina (0/129). Se encuentra en agua dulce y semillas. Algunas son
patgenas de ranas, pescados y humanos. Usuales en enfermedades en
humanos, como diarrea o bacteremia.
Escherichia
Con cpsulas y microcpsulas en muchas cepas. Gram negativa. Estados
mviles por flagelos peritricos o bien inmviles. Anaerobias facultativas.
Quimioorgantrofas, teniendo un tipo respiratorio y del metabolismo fermentativo.
La temperatura ptima es de 37C. La D-glucosa y otros hidratos de carbono se
catabolizan con la formacin de cido y gas. Metilo oxidasa negativa, catalasa
positiva, rojo positivo, Voges Proskauer negativa, y por lo general citrato negativa.
Negativas para H
2
S, hidrlisis de la urea y la lipasa. Pueden reducir los nitratos.
Todas o la mayora de las cepas pueden fermentar la maltosa, L-arabinosa, D-
manitol, D-manosa, L-ramnosa, trehalosa, xilosa. 0-nitrofenil-B-D-
galactopiransido positiva. Se producen como flora normal en la parte inferior del
intestino de animales de sangre caliente y en el caso de E. Blattae en las
cucarachas.Hay cepas de E. Coli que contienen enterotoxinas y otros factores de
virulencia, incluyendo los factores de invasin y colonizacin y pueden ser la
causa de enfermedades diarreicas. E. Coli es tambin una especie importante
de las infecciones del tracto urinario e infeccin nosocomial e infecciones
como la septicemia y la meningitis.
58
Stenotrophomanas maltophilia
No fermentadores bacilos, Gram negativos, anteriormente conocido como
Pseudomonas maltophilia y ms tarde Xanthomonas maltophilia. Esta bacteria se
encuentra en varios ambientes, tales como el de agua, suelo, plantas, alimentos y
hospitales. Es cada vez ms comn como una causa importante de
hospitalizacin. Quienesadquirieron la infeccin normalmente estn gravemente
debilitadoso inmunodeprimidos, como los que recibieron a largo plazo la terapia
antimicrobiana y las personas con catteres venosos centrales. Las infecciones
resultantes son amplias, en el tracto respiratorio, tejidos blandos y en la piel, son
las ms frecuentemente implicados. Aunque el patgeno se considera que es una
causa poco frecuente de meningitis, se ha convertido en un foco de inters no slo
debido al aumento de reconocimiento de su potencial patgeno, sino tambin por
su resistencia a los antibiticos.
59
7. DISCUSIN
En este trabajo se llev acabo el estudio microbiolgico del meandro del Rio
Lerma en La Piedad, Michoacn y Santa Ana Pacueco, Guanajuato,para
determinar los gneros y especies de Enterobacterias presentes, para establecer
los posibles riesgos de la poblacin humana de contraer infecciones. En estas
localidades algunas de sus zonas agrcolas utilizan el ro como sistema de riego
para sus plantas, que son utilizadas tanto para alimento humano como para el
ganado. Adems, debido a que parte de la zona urbana se encuentra a un lado del
ro Lerma, existe un contacto directo de los pobladores con el agua y un riesgo
potencial de interaccionar con las bacterias.
El anlisis se realiz en 8 sitios (Figura 2), los cuales se muestrearon en
cuatro ocasiones para cubrir un ciclo anual. Las pruebas que permitieron
identificar a las especies de Enterobacteriaceae fueron el aislamiento en medio
EMB, la tincin de Gram y las pruebas bioqumicas mediante el Sistema de
galeras de API20. Este sistema result ser muy confiable, sin embargo, el costo
de cada muestra no permiti analizar mayor cantidad de muestras, por lo que
primeramente se tomaban las colonias bacterianas con base en su morfologa y
color, para su posterior aislamiento y anlisis. Esto indica que la distribucin de las
especies encontradas en cada uno de los sitios muestreados en cada una de las
temporadas, est subestimado. De manera que si Klebsiella pneumoniae, una
patgena de humanos, se aisl de un sitio, pudo estar presente en otros sitios.
Los resultados obtenidos indican que un alto porcentaje de contaminacin
ya que se encontraron 12 diferentes especies en los sitios muestreados.Entre las
especies de bacterias encontradas existen patgenas de humanos, comunes y
oportunistas.
Con respecto a los riesgos que puede tener la poblacin humana al
exponerse al agua del ro Lerma en el tramo estudiado, si bien en todos los sitios y
pocas del ao hay contaminacin fecal y bacterias patgenas oportunistas, se
debe evitar el contacto directo con el agua, particularmente en los sitios cercanos
a la zona urbana de La Piedad (La Pursima y El Malecn) en las pocas en que el
60
cauce del ro es menor, que usualmente ocurre en los periodos de sequa o
cuando se interrumpe el flujo de agua para desviarla hacia el Dren.
61
8. CONCLUSIONES
1. El sistema API20E es confiable para identificar enterobacterias del agua,
previo aislamiento en agar nutritivo.
2. El sistema de galeras, sin embargo, es costoso y no permite analizar
nmeros grandes de colonias, como es el caso de los estudios ecolgicos.
3. Las especies encontradas, 12 en total, permiten alertar a la poblacin de
evitar contacto directo con el agua del ro.
4. El riego de cultivos con el agua del ro Lerma se realiza de manera normal,
por lo que es conveniente que los productos vegetales sean desinfectados
previamente, como es el caso del consumo de verduras frescas.
62
9. REFERENCIAS
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Tabl
iden
TABLA
la 3A. Inte
ntificacin
AS DE RE
erpretaci
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65
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