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C h e mk e y s - L i b e r d a d e p a r a a p r e n d e r

w w w . c h e m k e y s . c o m
* Autor para contato
1
Qumica Analtica Bsica:
Os instrumentos bsicos de laboratrio
Joo Carlos de Andrade*
Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Qumica
Criado em Novembro de 2011
balana, pesagem
pHmetro
calibrao do pHmetro
eletrodo de vidro combinado
medidas de pH
espectrofotmetros e colormetros
espectrofotometria UV-Vis
absoro de radiao
Lei de Beer, desvios da Lei de Beer
calibrao do espectrofotmetro
cuidados operacionais
A B a l a n a An a l t i c a
Chemkeys. Licenciado sob Creative Commons (BY-NC-SA)
dandrade@iqm.unicamp.br
I n f o r ma e s d o Ar t i g o
Histrico do Artigo
Palavras-Chaves
R e s u mo
O emprego correto dos equipamentos em um laboratrio analtico est
diretamente relacionado com a qualidade e a confabilidade dos resultados
obtidos. A seleo de um procedimento de anlise deve considerar a
natureza do problema como um todo, o que requer pleno conhecimento
sobre a preciso e exatido requeridas, a disponibilidade de amostra, o
intervalo de concentrao a ser medido, os interferentes potenciais, as
propriedades fsicas e qumicas da matriz e a quantidade de medidas
a serem efetuadas. Neste artigo descreve-se o uso dos equipamentos
mais comuns em laboratrios, especifcamente as balanas analticas, os
pHmetros e os espectrofotmetros UV-Vis, incluindo informaes gerais
sobre o uso apropriado de cada um deles e os cuidados operacionais que
devem ser tomados durante as operaes em laboratrio.
um dos instrumentos de medida mais usados no
laboratrio e dela dependem basicamente todos os
resultados analticos [1]. As balanas analticas modernas,
que podem cobrir faixas de preciso de leitura da ordem
de 0,1 g a 0,1 mg, j esto bastante aperfeioadas, ao
ponto de dispensarem o uso de salas especiais para
a pesagem. Entretanto, como o simples emprego de
circuitos eletrnicos no elimina as interaes do sistema
com o ambiente, h procedimentos a serem observados
para se garantir para uma pesagem correta e manter a
confabilidade das medidas [2,3].
A pesagem um procedimento necessrio em quase todas
as anlises, seja para a medida do tamanho da amostra,
seja no preparo de solues padres, dentre outros.
Em um trabalho rotina, as massas pesadas podem variar de
vrios gramas a alguns miligramas, ou menos. Os pontos
mais relevantes a serem considerados nas operaes de
pesagem j foram abordados anteriormente [2-4]. Dentre
eles, os efeitos fsicos so os mais importantes, pois no
podem ser suprimidos.
Atualmente, as balanas analticas eletrnicas digitais
de prato nico so as mais empregadas. Alm da
comodidade operacional, esto sujeitas a menos erros
e falhas mecnicas. Entretanto, como os modelos
podem diferir entre si, sugere-se a leitura atenta dos
detalhes operacionais contidos nos manuais que devem
acompanhar cada instrumento. A Figura 1 mostra o
esquema eletroeletrnico de uma balana analtica tpica.
O conhecimento dos procedimentos de pesagem so
detalhes importantes a serem considerados.
O autor agradece a colaborao de Claudia Martelli. Ilustraes por Iveraldo Rodrigues. As fotos so do autor ou obtidas em sites de domnio
pblico.
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Quando a quantidade de substncia a ser pesada no
necessita ser conhecida com muita preciso, pode-se
empregar uma balana menos precisa, tipicamente com 2
ou 3 casas decimais, equivalentes a precises entre 1 mg
e 10 mg. Este procedimento muito comum quando,
por exemplo, deseja-se pesar reagentes para o preparo de
solues que devero ser necessariamente padronizadas
mais tarde, tal como o caso da soluo padro de NaOH.
Se pesagens mais precisas forem necessrias, deve-se
empregar balanas analticas com uma preciso de pelo
menos 0,1mg (quatro casas decimais). Estas balanas
so empregadas, por exemplo, nas pesagens envolvidas
em procedimentos gravimtricos, na pesagem de padres
primrios para o preparo de solues padres e na pesagem
inicial das amostras, quando a preciso das medidas for
um parmetro determinante da anlise. Os dois tipos de
balana mais comuns em laboratrios so mostrados na
Figura 2. As balanas devem fcar protegidas de qualquer
tipo de choque (para evitar danos nas suas partes mais
sensveis), devem fcar protegidas da poeira e da corroso
e devem ser colocadas onde no haja correntes de ar.
As tcnicas de pesagem independem do tipo de balana
e podem ser feitas por medidas diretas ou por diferena.
As pesagens diretas so as mais bvias, e podem ser
empregadas quando a substncia a ser pesada estvel
e no higroscpica. Caso contrrio, as pesagens por
diferena so as recomendadas.
Figura 2: Balanas de uso comum em laboratrios. Acima: balana
semi-analtica de prato nico (para fns preparativos) e balana para
uso analtico. Abaixo mostra-se um local de pesagem tpico.
Figura 1. O esquema eletroeletrnico de uma balana analtica de prato nico. Baseado no artigo de
Schoonover [5]
Detector de zero Detector de zero
Fonte luminosa
Brao indicador
S
Sinal
Amplificador de corrente
Sistema servo
Clula de carga
Legenda
(amplificador eltrico)
Pea sob teste (7)
Strain Gage (6)
Fita adesiva
alta temperatura (4)
Almofada de silicone (3)
Placa aplicadora
de tenso (2)
Tenso equivalente
Fora
(1)
1
2
3
4
7 5 6
com adesivo (5)
(Pode ser utilizada no lugar do sistema acima)
Setas brancas significam Terra
Setas pretas indicam a direo da corrente
S N
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As pesagens por diferena consistem em tarar um pesa-
fltro fechado contendo um pequeno estoque da amostra,
transferir uma poro desta substncia para outro
frasco e repetir a pesagem do pesa-fltro. A diferena
a massa transferida, que ser usada posteriormente no
procedimento analtico. Estas operaes esto mostradas
na Figura 3
Figura 3. Ilustraes das operaes de pesagem em um laboratrio [6].
Acima se mostra com fazer uma pesagem direta; abaixo so mostradas
algumas etapas da pesagem por diferena. Notar o cuidado em no
tocar o pesa-fltro com os dedos.
H algumas regras importantes com as quais se deve
familiarizar antes de se trabalhar com qualquer tipo de
balana, especialmente as balanas analticas de preciso.
So elas:
1. Nunca tocar com as mos os objetos a serem
pesados. Estes objetos devem ser manipulados com
uma pina ou com um pedao de papel limpo (Figura
3).
2. Todo objeto deve ser pesado temperatura
ambiente para se evitar erros devidos formao de
correntes de conveco. Use dessecadores (Figura
4) para a estabilizao da temperatura. Solicite
instrues se no souber como utilizar um dessecador!
3. Nunca colocar reagentes diretamente sobre
os pratos da balana, mas pes-los em recipientes
adequados, tais como pesa-fltro, bquer pequeno,
vidro de relgio ou at mesmo em papel apropriado
para pesagem (papel acetinado). Sempre que alguma
substncia cair acidentalmente sobre o prato da
balana, este deve ser imediatamente limpo com um
pincel macio.
Figura 4 Dessecadores em uso em um laboratrio de anlise.
4. Manter sempre as laterais da cmara de pesagem
fechadas quando se faz a leitura em uma balana
analtica, pois qualquer corrente de ar externa pode
causar instabilidade e erros nas leituras.
5. Nunca colocar ou retirar objetos do prato de uma
balana sem que esta esteja travada. Em caso de
dvida, consulte o manual do seu equipamento.
Resumidamente, os cuidados e detalhes operacionais que
devem ser tomados durante uma pesagem so:
Antes de iniciar a pesagem
1. Verifcar se o prato da balana est limpo e seco.
2. Verifcar se todas as janelas esto fechadas.
3. Verifcar se a balana est nivelada e estvel.
4. Calibrar a balana com certa regularidade.
Durante a pesagem
1. Colocar o recipiente de pesagem sempre no
centro do prato.
2. Tarar (zerar) a balana com as janelas fechadas.
3. Adicionar cuidadosamente a massa desejada no
interior do recipiente.
4. Fechar as janelas e aguarde a sua estabilizao.
5. Anotar o valor da massa at a ltima casa decimal
6. Retirar o frasco de pesagem.
Aps a pesagem
1. Se necessrio utilizar um pincel para a limpeza.
2. Deixar o prato da balana limpo e seco.
3. Fechar todas as janelas da balana.
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4. Zerar a balana.
5. A bancada da balana deve estar sempre limpa e
os fracos de reagentes fechados.
Outros cuidados importantes
1. Deixar sempre a balana no modo stand by,
evitando a necessidade de novo tempo de aquecimento
(warm up).
2. Usar sempre o menor frasco de pesagem possvel.
3. A temperatura do frasco de pesagem e seu
contedo devem estar na mesma temperatura do
ambiente da cmara de pesagem.
4. Usar somente frascos de pesagem limpos e secos.
5. A massa total (frascos + amostra) no deve
ultrapassar 200 g.
6. No tirar a balana do lugar.
7. Utilizar esptula adequada para a pesagem.
8. No apoiar cadernos sobre a balana ou sobre sua
bancada.
O p Hme t r o e a s me d i d a s d e p H [ 7 ]
As medidas de pH so efetuadas em potencimetros
ou, mais precisamente, em voltmetros eletrnicos com
entrada de alta impedncia. A necessidade bsica desse
sistema que a medida da fora eletromotriz (FEM) seja
feita com corrente eltrica praticamente nula e por isso
que voltmetros comuns no podem ser usados para este
fm. Os potencimetros e os voltmetros eletrnicos com
entrada de alta impedncia permitem que as medidas
sejam feitas na escala de milivolts (mV), em pX (- log da
atividade do on X), ou ainda em unidades de concentrao,
aps a devida calibrao. Quando estes equipamentos so
usados para a determinao da concentrao de ons H
+

(mais rigorosamente, a atividade dos ons H
+
), recebem
a denominao especfca de pHmetro (ou peagmetro).
A medida do pH de uma soluo o processo mais
comum para se determinar a acidez ou basicidade de um
meio aquoso, mas o conceito de pH no to simples
como parece [7-11].
O pH pode ser defnido como log(aH
+
), ou seja, o
pH inversamente proporcional atividade dos ons
hidrognio. A atividade o teor de ons H+ efetivamente
dissociados. Porm, em solues diludas ( 10
-2
mol L
-1
ou
menos) pode-se considerar a atividade aproximadamente
igual concentrao de H
+
. Portanto, a defnio fca,
aproximadamente, como: pH = - log [H
+
]. Teoricamente,
a escala til de pH em soluo aquosa de 1 a 14.
Os Eletrodos de vidro
As medidas so efetuadas usando uma clula eletroqumica
composta de dois eletrodos, um de referncia e um
indicador (sensvel espcie de interesse), imersos na
soluo amostra, na ausncia de corrente eltrica ou sob
correntes muito baixas.
Os eletrodos so componentes essenciais nas medidas
de pH. As medidas potenciomtricas sempre devem ser
feitas com dois eletrodos, sendo que um deles deve ser
um eletrodo que tenha um potencial constante e estvel
em funo do tempo, independente das propriedades da
soluo no qual est imerso. Este eletrodo denominado
eletrodo de referncia, o qual ser sempre o fator de
comparao do eletrodo indicador.
Os dois eletrodos de referncia mais empregados so o de
calomelano saturado (Hg/HgCl2, KClsat.) e o de prata/
cloreto de prata (Ag/AgCl, KClsat.). Tanto um como o
outro respondem atividade do on cloreto, de modo que
preciso manter a soluo do eletrlito saturada com estes
ons, para que os potenciais dos mesmos sejam constantes
durante a medida. O eletrodo de Ag/AgCl mais usado
porque apresenta algumas vantagens em relao ao de
calomelano saturado, tais como a sua maior faixa de
operao em funo da variao da temperatura e sua
construo mais simples.
O eletrodo de vidro combinado o mais utilizado
para medida de pH porque seu potencial no afetado
pela presena de agentes oxidantes e redutores e tem a
vantagem de poder ser operado numa larga faixa de
pH. Consiste de um corpo de vidro selado, dotado de
uma membrana de vidro na forma de um bulbo na sua
extremidade inferior (eletrodo indicador) e contendo
internamente uma soluo diluda de HCl em contato
com um fo de prata recoberto com cloreto de prata (Ag/
AgCl), o qual funciona como uma referncia interna
do eletrodo indicador. Essa referncia interna que vai
responder diferena de potencial da membrana devido
variao na concentrao dos ons H
+
na soluo a ser
medida.
Considerando que as concentraes de ons cloreto e de
ons H
+
permanecem constantes, o potencial interno do
eletrodo tambm mantido constante. H tambm uma
cmara contendo uma soluo de KCl (geralmente uma
soluo saturada), que fca localizada externamente ao
corpo de vidro interno. Dentro dela existe outro eletrodo
de referncia (Ag/AgCl), conforme mostra a Figura 5.
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Figura 5. A anatomia de um eletrodo de vidro combinado. O sensor
de pH deve estar limpo, sem a proteo que envolve a sua extremidade
(geralmente de borracha ou plstico) e com o orifcio superior
desobstrudo, para o efetivo contato eltrico. Quando estocado, este
orifcio deve estar fechado e o bulbo deve ser protegido.
Figura 6. Modo convencional para a estocagem de eletrodos de pH
( esquerda). Se o eletrodo no tiver um protetor para seu bulbo,
recomenda-se colocar um pedao de algodo no fundo do recipiente
de estocagem, para evitar o atrito direto deste com as paredes internas
do recipiente ( direita). A capa de proteo do bulbo deve estar
preenchida com o eletrlito de referncia (neste caso, uma soluo de
KCl 3,0 mol L
-1
), para que a membrana no se deteriore.
O mecanismo de funcionamento do eletrodo simples:
como a soluo de HCl apresenta uma concentrao de
H
+
constante, a variao na concentrao de H
+
da soluo
a ser medida que ser a responsvel pela variao de
potencial na membrana de vidro. Quando colocado em
soluo aquosa, os ctions da membrana de vidro (por ex.:
silicatos de Li
+
e Ba
2+
ou de Na
+
e Ca
2+
) so trocados por
ons H
+
, formando uma fna camada de slica ricamente
hidratada, que funciona como uma membrana de troca
catinica, sensivelmente seletiva aos ons H
+
.
Assim, a variao de potencial na membrana de vidro est
diretamente relacionada medida de pH da soluo, uma
vez que o eletrodo de referncia tem potencial constante.
Estes eletrodos tm um desempenho muito bom quando
operados no intervalo de pH entre 1 e 9 . Entretanto,
dependendo da composio do vidro do eletrodo, tendem
a indicar valores de pH mais baixos quando empregados
para medidas em solues mais alcalinas (chamado erro
de alcalino). Tambm esto sujeitos ao chamado erro
cido, quando so empregados para medir valores de
pH menores que um. Para mais informaes, verifque o
manual do fabricante do seu equipamento.
Na potenciometria direta, o valor de pH lido diretamente
no visor do pHmetro (potencimetro; Figura7).
Figura 7. O pH da gua destilada medida com um pHmetro
O potencial desenvolvido no eletrodo de vidro uma
funo da atividade dos ons H
+
, defnida pela equao
de Nernst:

onde E
0
o potencial padro, R a constante universal
dos gases, T a temperatura absoluta e F a constante
de Faraday. O fator 2,3 RT/F denominado de potencial
de Nernst, cujo valor 59,16 mV a 25
0
C. Desta forma,
pode-se escrever que

ou ainda,
+

+ =
H
0
a log
F
RT 3 , 2
E E
+

+ =
H
a log
F
RT 3 , 2
K E
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E = constante - (2,3 RT/F) pH
de modo que se as medidas forem efetuadas temperatura
de 25
0
C, tem-se:
E = constante 59,16 pH
ou seja, idealmente, para cada unidade de pH nesta
temperatura, o potencial varia de 59,16 mV.
Calibrao e uso do pHmetro
O uso de um medidor de pH (pHmetro) requer sua
calibrao prvia. Existe uma sequncia bsica de etapas
a serem seguidas para a calibrao dos pHmetros.
Geralmente utilizam-se duas medidas de pH de duas
solues tampo com valores de pH diferentes entre si.
O pHmetro deve ser calibrado diariamente, antes da
cada conjunto de medidas programado, porque o eletrodo
de vidro no reproduz as medidas de fora eletromotriz
(FEM) por longos perodos.
A calibrao deve ser feita com pelo menos duas solues
tampo (padres). De modo geral, calibra-se o pHmetro
usando-se tampes com valores de pH ao redor de 4,00 e
7,00 se as medidas posteriores forem efetuadas na regio
cida e com tampes com valores de pH ao redor de 7,00
e 10,00, se as medidas posteriores estiverem localizadas
na regio alcalina. Se a faixa de pH das amostras a serem
medidas for mais ampla, recomenda-se calibrar o aparelho
com trs tampes (ver aTabela 1).
Em geral os ajustes dos valores de pH dos tampes
(padres) so realizados com os botes calibrate (ou
calibration) e slope. Os equipamentos mais modernos
tm a opo da compensao automtica de temperatura
(Automatic Temperature Compensation ATC) que
deve ser empregado em medidas de preciso, desde que
seja usado um eletrodo de vidro combinado com sensor
de temperatura. Siga preferencialmente as instrues
contidas no manual que acompanha o equipamento.
As instrues bsicas a serem observadas antes de se
operar um pHmetro so:
1. Verifcar a voltagem do aparelho. Nos laboratrios
comum ter vrias tomadas, podendo ser de 110 e/ou
220V.
2. Verifcar se o sensor de pH e as solues tampo
esto em condies de uso.
3. Retirar a ponta protetora do sensor de pH (bulbo)
do eletrodo de vidro. Com o auxlio de uma pisseta,
lave-o bem e descarte a gua de lavagem em um
bquer ou em outro recipiente apropriado.
4. Caso o bulbo esteja engordurado, sugere-se
tambm a lavagem manual com acetona e enxge
com gua destilada. Enxugue cuidadosamente o
sensor. Utilize um leno de papel macio para isso
(Cuidado: nunca friccione o bulbo do eletrodo).
Instrues para a calibrao de um pHmetro
1. Retire o eletrodo da sua capa de proteo e lave-o
com gua destilada (ou deionizada) e seque-o com
um leno de papel macio.
2. Introduza o eletrodo em cerca de 70-80 mL
da soluo tampo padro (contida em um bquer
de cerca de 100 mL, previamente limpo e seco)
de pH ao redor de 7,00 (exatamente conhecido).
Coloque uma barra de agitao pequena, sem que
haja a possibilidade de toque no eletrodo durante a
agitao. Leia o valor do pH sem agitao, aps cerca
de 15-20 s em repouso. ATENO: O eletrodo
de vidro deve ser mergulhado de tal maneira que
tanto o bulbo como a juno lquida (pequeno furo
capilar localizado acima do bulbo) fquem imersos na
soluo.
3. Ajuste o controle slope a 100%, exatamente.
4. Leia o pH do tampo. Se for diferente do valor
padro, ajuste-o com o boto calibrate at a leitura
correta do pH do padro utilizado.
5. Lave e seque o eletrodo como mencionado
anteriormente e repita o procedimento usando um
tampo com valor de pH prximo de 4,00 (se as
medidas a serem feitas estiverem na faixa cida de
pH) ou um tampo com valor de pH prximo de
9,00 (se as leituras a serem feitas estiverem situadas
na regio alcalina de pH). Leia o pH do tampo.
6. Se o pH no for exatamente o valor do padro
(cerca de 7,00 ou 9,00) ajuste o controle slope at ler
exatamente o valor de pH tampo.
7. Repita o procedimento novamente, at que seja
possvel ler exatamente os valores de pH dos tampes
usados na calibrao. Depois disto, o pHmetro est
calibrado para as leituras subseqentes.
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Para efetuar a medida direta de pH em uma amostra,
mergulhar o eletrodo limpo e seco na soluo a ser
analisada. Agitar suavemente e aguardar 15-20 segundos
para a estabilizao da medida e anotar o valor em seguida.
Entre as medidas, importante manter o eletrodo imerso
na soluo de descanso (soluo de KCl 3 mol L
-1
) e o
pHmetro em standy by.

Na Tabela 1 descrevem-se as preparaes das solues
tampo mais usadas para a calibrao de eletrodos
de vidro, para medidas de pH. Usar gua destilada
ou desionisada de boa qualidade, livre de dixido de
carbono. O CO
2
dissolvido pode ser eliminado por
ebulio, mas no se esquecer de resfriar a gua
temperatura ambiente antes do preparo das solues
(e das leituras). Se no houver meno em contrrio,
estas solues se conservam por at trs meses. As
medidas devem ser idealmente realizadas em (25 1)
0
C.
Tabela 1. As trs solues tampo mais usadas na calibrao de
eletrodos de pH
pH do Tampo Modo de Preparo
4,008
Dissolver 10,21 g de hidrogenoftalato
de potssio (KHC
8
H
4
O
4
- biftalato de
potssio) em aproximadamente 800 mL
de gua e completar o volume a 1000 mL.
O sal deve ser secado por duas horas a
110 130
o
C, antes de ser pesado. Esta
soluo se conserva por aproximadamente
seis semanas
7,413
Dissolver 1,179 g de dihidrogenofosfato
de potssio (KH
2
PO
4
) e 4,30 g de
hidrogenofosfato de sdio (Na
2
HPO
4
) em
cerca de 800 mL de gua e completar o
volume a 1000 mL
9,180
Dissolver 3,814 g de tetraborato de sdio
(Na
2
B
4
O
7
.10H2O) em aproximadamente
800 mL de gua e completar o volume a
1000 mL
Os cuidados operacionais
Os cuidados bsicos que devem ser dispensados na
operao e manuteno dos eletrodos de vidro so os
seguintes:
1. Manuseio: Os eletrodos devem ser lavados
com gua destilada de boa qualidade, ou com gua
desionisada, aps cada medida. NUNCA esfregue
o eletrodo, pois esta ao pode causar leituras
errneas, devido a cargas estticas. Para remover o
excesso de gua, seque apenas a ponta do eletrodo
com um leno de papel macio.
2. Verifcao do nvel de eletrlito: Encher o
eletrodo com a soluo de eletrlito apropriada
(geralmente KCl saturado), sempre que necessrio,
sem ultrapassar o nvel do furo de enchimento. Deixar
este furo sempre aberto, durante as medidas, para
assegurar que a soluo interna fua apropriadamente
atravs da juno de referncia (juno lquida).
3. Estocagem: Sempre mantenha o seu eletrodo de
pH mido. Recomenda-se a estocagem do eletrodo
de pH em uma soluo de KCl 3 mol L
-1
. Se esta
soluo no estiver disponvel no laboratrio, use
uma soluo tampo de pH 4 ou 7. NUNCA estoque
o seu eletrodo em gua destilada ou desionisada, pois
isto causar a lixiviao dos ons do eletrlito interno,
atravs do bulbo de vidro, tornando-o inoperante.
4. Use o protetor de borracha: Muitos eletrodos so
fornecidos com um protetor de borracha para o bulbo
de vidro. Nestes casos, mantenha o seu eletrodo
sempre estocado com o protetor, no esquecendo de
preencher o receptculo do protetor com soluo de
KCl 3 mol L
-1
, de modo a manter o eletrodo sempre
umedecido. Se o eletrodo no tiver um protetor
para seu bulbo, recomenda-se colocar um pedao de
algodo no fundo do recipiente de estocagem, para
evitar o atrito direto deste com as paredes internas
do recipiente (Figura 6). Aps longos perodos de
estocagem, pode-se perceber a formao de cristais
de KCl na parte exterior do corpo do eletrodo.
Neste caso, simplesmente lave as paredes externas do
eletrodo com gua destilada ou desionisada e remova
o excesso de gua com leno de papel fno. Isto no
interferir com as medidas.
O e s p e c t r o f o t me t r o UV - V i s e s u a
u t i l i z a o [ 7 , 1 2 ]
A luz branca constituda por vrios componentes que
podem ser separados ao passar atravs de um elemento
dispersivo (prisma ou grade de difrao). Este o mesmo
fenmeno verifcado na disperso da luz solar por
gotculas de gua, que provoca o aparecimento do arco-
ris.
fcil perceber deste modo que, se um lquido
transparente se apresenta vermelho, porque absorveu
todos os outros componentes. Assim, se uma soluo
absorve o amarelo (580-595 nm), apresentar cor azul
(435-480 nm). O amarelo, portanto a cor complementar
do azul e vice-versa. De maneira geral podemos dizer
ento que a cor aparente de uma soluo, ou de um objeto
qualquer, o complemento da cor que absorvida, como
mostrado na Figura 8.
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Isto muito importante na colorimetria, onde a escolha do
comprimento de onda fundamental para o procedimento
de anlise. No caso de um corpo opaco colorido o
fenmeno o mesmo, ou seja, haver a absoro de certos
componentes sendo refetidos os demais ou apenas um
deles. Quando um material se apresenta incolor (meio
transparente) ou branco (meio opaco), podemos dizer que
no houve absoro de qualquer comprimento de onda
da regio do visvel. O mesmo fenmeno de absoro
ocorre no ultravioleta e em outras regies do espectro
eletromagntico, sendo que o no aparecimento da cor se
justifca pela no sensibilidade do olho humano a estes
comprimentos de ondas.
Entretanto sabido que o espectro eletromagntico
muito mais amplo que o espectro visvel e que a interao
da radiao com a matria ocorre em qualquer regio de
comprimento de onda, que se estende desde os raios
csmicos (l 10
-9
nm) at as ondas de rdio (l > 1000 m).
Como ao comprimento de onda da radiao est associada
uma energia, diversos tipos de espectroscopias podem
ser usadas para fornecer informaes analticas. Dentre
estes extremos, a regio do ultravioleta e do visvel, onde
ocorrem as transies eletrnicas, que so do nosso
interesse particular.
A absoro e a emisso de radiao no UV-Vis [13-15]
A radiao eletromagntica pode interagir com a
matria de diversas maneiras. Se a interao resultar na
transferncia de energia de um feixe de energia radiante
para a matria, o processo chamado absoro. O processo
inverso, no qual uma poro da energia interna da matria
convertida em energia radiante, chamado de emisso.
Para explicar o processo de absoro nesta regio do
espectro preciso considerar a natureza corpuscular da
radiao, a qual estabelece que a energia dos ftons
quantizada,
E = hn
onde h a constante de Plank (h=6,626 x 10
-34
Js) e n a
frequncia da radiao (s
-1
).
A teoria quntica prope que se houver ocorrncia
de colises entre ftons e receptores (tomos, ons ou
molculas), existe uma probabilidade fnita de que esta
energia associada aos ftons possa ser transferida aos
receptores em um processo descontnuo. Quando o
processo de absoro ocorre, ele pode ser descrito como
M + hn 4 M*
onde M* o receptor no estado excitado.
Os tomos de substncias monoatmicas, na sua maioria,
esto em um estado mais baixo de energia (chamado de
estado fundamental). Estes tomos so capazes de absorver
energia radiante somente atravs de um aumento nas suas
energias eletrnicas, isto , elevando eltrons a orbitais
Figura 8. As cores espectrais e suas cores complementares na regio do Visvel. Ilustrao proposta pelo Prof. Marcelo
Ganzarolli de Oliveira, do Instituto de Qumica da UNICAMP. As cores mostradas so apenas indicativas. Publicado
com permisso.
COR VISTA
(COR COMPLEMENTAR)
COR ABSORVIDA (OU EMITIDA)
(CORES ESPECTRAIS)
UV prximo
Amarelo Amarelo
Prpura
L
a
r
a
n
j
a
UV distante
2
0
0
3
0
0
4
0
0
5
0
0
6
0
0
4
9
0
4
8
0
4
3
5
5
8
0
5
6
0
5
9
5
6
0
5
7
0
0
7
5
0
esverdeado V
e
r
m
e
l
h
o
V
i
o
l
e
t
a
A
z
u
l
A
z
u
l

e
s
v
e
r
d
e
a
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o
A
m
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V
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o
L
a
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n
j
a
A
z
u
l

e
s
v
e
r
d
e
a
d
o
V
e
r
d
e

a
z
u
l
a
d
o
Verde
Azul
Violeta
Verde azulado
Vermelho
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de nvel energtico mais alto. Estas transies ocorrem
somente se os ftons possurem exatamente a mesma
quantidade de energia necessria transio eletrnica.
Caso contrrio isto no ocorre. Este o princpio bsico
da tcnica de absoro atmica, que no ser abordada
neste artigo.
Por outro lado, o estado de energia total de uma molcula
inclui componentes eletrnicos, vibracionais e rotacionais,
todos eles quantizados. Para cada nvel eletrnico existem
sub-nveis correspondentes aos estados vibracionais, que
por sua vez, tambm apresentam sub-nveis rotacionais,
de modo que a absoro de radiao por molculas um
processo mais complexo que a absoro de radiao por
tomos (Figura 9).
Sendo a interao matria-energia um fenmeno reversvel,
as espcies que atingem um estado excitado podem
emitir ftons de energias caractersticas, retornando ao
estado fundamental. Da mesma maneira que no caso da
absoro, a emisso (ex. fuorescncia) pode ser molecular
ou atmica.
Figura 9. O diagrama de energia de Jablonski para transies
moleculares
As leis quantitativas dos processos de absoro [7,16]
Em estudos quantitativos envolvendo absoro de
radiao, o feixe de radiao dirigido para uma amostra
e a Potncia da radiao transmitida medida. A radiao
absorvida pela amostra determinada comparando-se a
Potncia Radiante [16] do feixe transmitido na ausncia de
espcies absorventes com a Potncia Radiante transmitida
na presena de espcies absorventes.
A Potncia Radiante, P, de um feixe de radiao,
em qualquer ponto do absorvedor, defnida como
a velocidade do fuxo de ftons, atravs de um plano
perpendicular direo do fuxo. A unidade o Watt e a
Potncia pode variar em direo e espao.
A Intensidade de radiao, I, defnida como a razo
entre a Potncia Radiante e o ngulo slido de incidncia.
Quando a rea iluminada, o ngulo slido e o volume do
absorvedor so pequenos, que o caso das medidas para
fns analticos, a Potncia da radiao pode ser tomada
como a sua Intensidade.
Em 1852, August Beer verifcou que a transmisso da
luz atravs de uma determinada soluo proporcional
concentrao da substncia absorvedora (Figura10).
Figura 10. Representao grfca das observaes de Beer
Modifcada do site Wikipedia [17]
O modelo fsico que descreve a absoro de luz por uma
soluo (Figura 11) simples: dentro de uma camada
infnitesimalmente fna a diminuio da energia (dP)
proporcional energia incidente (P), concentrao das
espcies absorventes (c) e espessura da seo (dx), onde
P a Potncia Radiante
Figura 11. Modelo fsico do processo de absoro de luz em uma
soluo homognea.
Matematicamente:
Relaxao
vibracional
Converso
Cruzamento
Intersistema
interna
e
externa
Fosforescncia
Relaxao
vibracional
Converso
Estado
S
l
0
E
n
e
r
g
i
a
Estados excitados singlete
interna
Estado excitado triplete
Fluorescncia Absoro
Fundamental
l l l l l
S
2
S
1
T
1
2 1 3 4
x=0 dx x=b
Soluo
Absorvente
P-dP P
P
0 P
b
Luz
Incidente
Luz
Emergente

b - = b - =
P
P
b
0
o
dx c
P
dP
cdx
P
dP
Pcdx dP b - =
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Mudando a base para decimal
A absortividade, a, a usada quando no se conhece a
natureza do material absorvente (e portanto a sua massa
molar), sendo a concentrao expressa em gramas por
litro. A absortividade molar (e; concentrao expressa em
mol por litro) empregada quando se deseja comparar
quantitativamente a absoro de vrias substncias.
A relao A= -log
10
(P/P
0
) = log
10
(P
0
/P) = ebc, chamada
de absorvncia por muitos autores de lngua portuguesa.
Outros (como no presente artigo) ainda preferem a
derivao do ingls, absorbncia.
Figura 12 Espectros das solues padro de ferro com
o-fenantrolina e a representao grfca da Lei de Beer na
determinao espectrofotomtrica de ferro. Dados obtidos usando o
espectrofotometro de UV-Vis 1601 PC Shimadzu, com uma cela de
vidro com espessura de 1,0 cm.
Percebe-se claramente a relao linear entre a absorbncia,
A, e a concentrao c (Figura 12). A sensibilidade do
mtodo dada diretamente pelo coefciente angular da
reta de calibrao.
Uma outra caracterstica particular da lei de Beer a
aditividade das absorvncias, que nunca deve ser esquecida
em medidas espectrofotomtricas. A absorbncia total
devido s espcies presentes na soluo pode ser expressa
como a soma das absorbncias de cada uma delas.
onde o subscrito i refere-se ao comprimento de onda e o
subscrito j refere-se ao componente da mistura.
A espectrofotometria no UV-Visvel
A estrita aderncia Lei de Beer observada apenas
quando uma radiao monocromtica (l nico e constante)
utilizada. Esta dependncia mostra seu carter limitado,
j que na prtica isola-se apenas uma banda de radiao,
composta por diversos comprimentos de onda, o que
implica em desvios desta lei. Experimentalmente resolve-
se este problema fazendo-se as medidas em uma regio
de mximo da banda de absoro, onde o valor de l no
varia signifcativamente e torna os desvios desprezveis.
Alm de ser estritamente vlida apenas para
radiao monocromtica, a deduo da Lei de Beer
tambm pressupe que os centros absorventes atuam
independentemente um dos outros, isto , que no existem
interaes recprocas destes centros, nem interaes com
outros ons e molculas presentes. Desta forma, a Lei de
Beer s pode ser aplicada corretamente a solues diludas,
tipicamente com concentraes menores que 10
-2
mol L
-1
.
Em altas concentraes a distncia mdia entre os centros
absorventes diminuda, ao ponto de afetar a distribuio
de cargas dos seus vizinhos e alterar a efcincia da
absoro. O mesmo efeito pode ser observado em solues
contendo baixas concentraes do absorvedor, mas com
altas concentraes de outras espcies, como eletrlitos.
A proximidade dos ons altera o valor de e do absorvedor
por interaes eletrostticas, mas este efeito pode ser
diminudo.
A Absortividade (a ou e) depende do ndice de refrao do
meio, h, de modo que a Lei de Beer tambm afetada por
cb
P
P
ln cb ) P ln P (ln
0
0
b - =

b - = -
0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a
C(Fe) / mgL
-1
l =525 nm
Fe:o-fen
400,0 450,0 500,0 550,0 600,0
0,000
0,400
0,800
1,200
1,600
2,000
15
10
7
5
4
3
2
1
A
b
s
o
r
b

n
c
i
a
/ nm
A = log(P0/P) = bbc(loge)
A = b(loge)bc = abc
A1 = A11 + A12 + A13 + .... = S Aij
Ai = ei1c1b + i2c2b + i3c3b + ...=bS e e eijci
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este parmetro. Entretanto, via de regra, este efeito no
aprecivel para concentraes menores que 10
-2
mol L
-1
.
Desvios aparentes da Lei de Beer podem ainda ser
observados a partir de fenmenos qumicos inerentes ao
sistema ou sob a ao de efeitos fsicos. Os fenmenos
qumicos mais comuns envolvidos so:
Dissociao ou Associao: pode deslocar o espectro
da espcie absorvente, gerando o efeito batocrmico
(deslocamento para l maiores) ou o efeito ipsocrmico
(deslocamento para l menores). Muitas vezes em
sistemas em equilbrio, pode-se medir a absorvncia
em um ponto isoabsortivo, chamado isosbstico.
Neste comprimento de onda, todas as espcies
absorventes do sistema tm a mesma absortividade, de
modo que a lei de Beer no afetada pelo equilbrio.
Solvlise: a mudana de solvente (polar para no polar
e vice-versa) pode causar deslocamentos de espectros
(mximos de absoro).
Formao de complexos: tambm pode provocar
deslocamentos de espectros.
Temperatura: geralmente a variao mxima
permitida de 5
o
C.
Efeitos de luz incidente: pode induzir dissociaes,
associaes e reaes fotoqumicas de decomposio
ou polimerizao, principalmente sob a ao da
radiao UV .
Emisso secundria de radiao: associadas aos
fenmenos de fuorescncia e fosforescncia, que no
sero discutidas aqui.
Espalhamento de radiao: geralmente causados pela
presena indesejvel de substncias em suspenso.
Esta situao pode ser usada para medidas
quantitativas sob condies especiais (turbidimetria
e nefelometria).
Os fatores fsicos mais comuns que tambm podem infuir
nas medidas da Absorbncia so:
Abertura da fenda do monocromador: est relacionada
com a intensidade da radiao incidente e um
parmetro importante em espectroscopia atmica
(absoro ou emisso), porque neste caso as bandas so
muito estreitas (linhas atmicas). Em espectroscopia
molecular, se for muito grande, deixar passar uma
banda de radiao muito larga, acentuando os desvios
das medidas.
Luz espria: resultado do espalhamento e refexes
das vrias superfcies do monocromador. Difere
grandemente dos comprimentos de onda da banda
de radiao selecionada e pode ainda no ter passado
pelo absorvedor (amostra). Se esta luz atingir o
detector, tem-se uma medida aparentemente menor
da absorbncia.
Colormetros e Espectrofotmetros
Os componentes bsicos dos colormetros e
espectrofotmetros so a fonte de energia radiante, o
sistema de seleo de comprimento de onda, os detectores
de radiao e os sistemas medidas.
Os colormetros geralmente so equipamentos mais
simples, operando na regio do visvel e que normalmente
usam fltros para seleo de uma faixa de comprimentos
de onda da radiao incidente. Os espectrofotmetros
diferem dos colormetros por operarem atravs do uso
de elementos dispersivos de radiao (monocromadores,
construdos com prismas ou grades de difrao), o que
permite uma separao mais efciente das faixas de
comprimentos de onda. Com aparelhos deste tipo pode-se
geralmente obter espectros da soluo absorvedora, desde
a regio do UV at a regio do infravermelho prximo.
A sensibilidade destes equipamentos basicamente
determinada pelo sistema de seleo de comprimento de
ondas e pelo sistema de deteco de radiao. Os fltros
(de absoro) so os dispositivos mais comuns usados
para selecionar bandas de comprimento de onda, que
so mais largas do que as obtidas usando prismas ou
grades de difrao. Para certas espcies qumicas, cuja
absoro ocorre em picos estreitos, a sensibilidade
maior nos espectrofotmetros com monocromadores de
alta resoluo ou em colormetros equipados com fltros
de interferncia. Para outras espcies, cujos espectros de
absoro so mais amplos, a utilizao de colormetros
com fltros perfeitamente vivel.
A qualidade e o custo dos colormetros e espectrofot-
metros dependem do tipo e qualidade de seus componentes.
A aquisio desses equipamentos deve-se basear sempre
num conhecimento prvio das caractersticas de cada um
deles e, se possvel, na consulta a outras pessoas que j
possuam o aparelho.
A calibrao de um espectrofotmetro de feixe simples
Quando so usados aparelhos de feixe simples, o
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procedimento consiste em ajustar o nvel de 100% de
transmitncia (zero de absorbncia) do equipamento com
uma cubeta (Figura 13) contendo todos os componentes
da soluo a ser medida, menos a substncia de interesse
("branco"), e o nvel 0% de transmitncia com o obturador
do aparelho fechado. As demais medidas sero feitas em
relao ao branco, substituindo-o pelas amostras.
O procedimento bsico o seguinte:
1 - Antes de conectar o equipamento rede eltrica,
verifque se a tenso compatvel com a voltagem
descrita no equipamento;
2 - Conecte o cabo de fora a rede eltrica;
3 - Ligue o equipamento utilizando a chave localizada
no painel traseiro do aparelho;
4 - Recomenda-se um perodo de pr-aquecimento
de 30 minutos, para melhor estabilidade e
reprodutibilidade das medidas;
5 - Selecione o comprimento de onda desejado.
importante verifcar a faixa de trabalho do
instrumento. Na obteno de um espectro com
um equipamento de feixe simples, o instrumento
deve ser calibrado com o branco a cada seleo de
comprimento de onda;
6 - Para calibrao do equipamento no comprimento
de onda escolhido, colocar uma cubeta com o solvente
utilizado (branco) e ajustar 100% de Transmitncia
(ou 0,000 de Absorbncia);
7 - Para a leitura da Absorbncia, colocar a cubeta
contendo a amostra e efetuar a leitura (observar a
posio correta da cubeta, alguns modelos possuem
apenas dois lados polidos, estes devem estar no
caminho do feixe).
Os sistemas de leitura do tipo analgico esto em desuso.
Nos aparelhos mais modernos as medidas so feitas
com sistemas de leitura digital, com possibilidade de
uso de escalas de transmitncia (%T), absorbncia ou
concentrao.
Os equipamentos de feixe duplo
Para equipamentos de duplo feixe (Figura 14), a radiao
proveniente do monocromador igualmente dividida em
dois feixes, que incidem em dois compartimentos, o de
referncia e o da amostra.
Figura 13. Cubeta (cela) espectrofotomtrica e os fenmenos
envolvidos na passagem da radiao atravs dela, no processo de uma
medida espectrofotomtrica.
O ajuste inicial feito colocando-se o "branco" nos
dois compartimentos e regulando-se o aparelho para
absorbncia zero, e as leituras so feitas substituindo-
se o "branco" do compartimento da amostra pelas
amostras a serem medidas (Figura 14). O usurio dever
ler atentamente o manual do seu equipamento para se
informar sobre os demais detalhes operacionais.
Figura 14. Foto e esquema ptico do espectrofotometro UV-Vis de
feixe duplo Shimadzu modelo 1601 PC.
Cuidados Experimentais
As curvas padro usadas na colorimetria ou espectrofoto-
Perdas por
Perdas por disperso
Feixe emergente P
reflexo nas
inferfaces
na soluo
Feixe incidente P
o
Perdas por reflexo
nas interfaces
ESPELHO
ESPELHO
LENTE
REFERNCIA
ESPELHO
DIVISOR DE
FEIXE
ESPELHO
REDE DE
DIFRAO
JANELAS
QUARTZO
FILTRO
LENTE
DETECTOR
FOTODIODO
DETECTOR
FOTODIODO
AMOSTRA
FENDA
DE SADA
LMPADA
DE TUNGSTNIO
LMPADA
DE DEUTRIO
FENDA
DE ENTRADA
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metria devem, em ltima anlise, relacionar sempre
a absorbncia como uma varivel dependente da
concentrao. Portanto, se a leitura for obtida em
transmitncia deve-se primeiro fazer a converso para
absorvncia.
A faixa entre 15 e 65% T a que apresenta o menor erro
relativo da concentrao em funo de um erro fotomtrico
absoluto constante. Dessa forma importante que as
concentraes dos extratos sejam adequadas, de modo a
se obter leituras dentro desses limites.
Como os mtodos de anlise quantitativos devem
considerar a preciso e a exatido dos resultados, alm
dos cuidados usuais a serem tomados no preparo das
amostras e nas medidas da absorbncia propriamente dita
(ex.: evitar a presena de bolhas de ar, sujeiras e riscos
nas celas de leitura, etc.), a aplicao de um mtodo
espectrofotomtrico deve ainda levar em conta dois outros
parmetros:
A escolha do comprimento de onda: um parmetro
importante. Geralmente deve ser posicionado na
regio de mxima absoro e o mais longe possvel
do mximo de absoro de outras espcies (ex. o
agente complexante), j que as absorvncias so
aditivas. Cada procedimento deve ser estudado
separadamente.
Interferentes: qualquer espcie, alm daquela de
interesse, que provoque um aumento ou diminuio
de absoro de luz, um interferente. Nestes casos,
devem ser usados procedimentos de separao para
diminuir ou eliminar os seus efeitos, tais como a
cromatografa , a extrao com solventes, etc.
Outros fatores qumicos devem tambm ser observados,
principalmente se reaes qumicas estiverem envolvidas
no processo:
pH: tem um papel importante na formao de
complexos. Caso exista um ponto isoabsortivo do
sistema, independente do pH, este ponto deve ser
preferencialmente usado na medida da absorvncia.
Concentrao dos reagentes: ditada pela composio
da(s) espcie(s) absorvente(s). Excesso ou falta de
reagente pode infuenciar na sensibilidade do mtodo
ou causar desvios na Lei de Beer.
Tempo: depende basicamente da cintica do
sistema qumico (s, min, h, etc.).
Temperatura: deve ser constante e tambm depende
do sistema qumico. Temperaturas mais altas
podem resultar em decomposio ou em uma cintica
mais rpida.
Ordem de mistura: a ordem de adio dos reagentes
deve sempre ser obedecida, porque pode alterar
o resultado da medida (ex. a cor no se desenvolve
totalmente).
Estabilidade qumica: se a espcie absorvente no for
estvel, deve-se montar um esquema que permita
medidas rpidas. Se a espcie for fotossensvel, a
medida deve tambm ser rpida ou deve-se adicionar
um estabilizante para evitar a sua decomposio.
Mascaramento: as reaes para fns espectrofoto-
mtricos, em geral, no so especfcas e apenas
algumas poucas so seletivas, de modo que o
mascaramento de interferentes quase sempre
inevitvel, quando no so totalmente eliminados
por processos de separao.
Solvente: a escolha do solvente pode ser decisiva em
medidas espectrofotomtricas, pois muitos compostos
apresentam valores da Absortividade Molar (e)
maiores em solventes orgnicos, quase sempre com
um deslocamento do mximo de absoro. Por
outro lado, quando solventes volteis so usados
como meio, deve-se tomar cuidados adicionais para
evitar futuaes das medidas, por evaporao. Celas
espectrofotomtricas com tampas e o controle da
temperatura so os cuidados mais imediatos a serem
tomados.
Concentraes de sais: a fora inica do meio pode
alterar o espectro de absoro de um composto,
atravs da formao de complexos ou por associao
inica.
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