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Gua de Laboratorio BOT-142

Laboratorio #2
Daro Ach Cordero Ph.D. I-2010

Produccin de oxgeno en la fotosntesis y longitud de onda que absorben las
plantas

Introduccin

La fotosntesis oxignica es el proceso anablico ms importante de la mayora de los
ecosistemas (Wilkinson, 2006). Es responsable de que exista oxgeno en la atmsfera y de que la
vida sea posible sobre la superficie de la tierra, ya que gracias al oxgeno existe la capa de ozono
(Campbell & Reece, 2001). De hecho la fotosntesis oxignica es la responsable de la mayor
parte de la biomasa sobre la superficie de la tierra y los cuerpos de agua.

La existencia de la fotosntesis no fue conocida por mucho tiempo y menos an su capacidad de
generar molculas orgnicas. La primera pista de esto fue una observacin relativamente simple.
Si plantamos una planta en una maceta con el tiempo la planta incrementar su masa pero la masa
de la tierra en la maceta no cambiar significativamente (Wilkinson, 2006). Esto llevo a concluir
que la planta se alimentaba del agua, pero ahora sabemos que en realidad se alimenta de dixido
de carbono del aire.

La fotosntesis hoy en da tiene una importancia tambin para la mitigacin del cambio climtico,
reduciendo la cantidad de dixido de carbono en la atmsfera. Por ello es importante determinar
cuanto CO
2
es capturado por la vegetacin aprovechando la luz solar. Sin embargo, no toda la luz
solar es aprovechada por las plantas, sino solo ciertos rangos de longitud de onda muy especficos.

Con el fin de cuantificar la captura de CO
2
por una macrfita acutica se determinar la
produccin de oxgeno y cuantificar la clorofila en la planta. As, se determinar cuanto CO
2
se
fija por gramo de macrfita y por gramo de clorofila.

Materiales y mtodos

Captura de CO
2

Para determinar cuanto CO
2
es capturado por una macrfita se requerirn de dos acuarios con
macrfitas o algas vivas, dos cilindros graduados o probetas de no ms de 30 mL y una caja o tela
gruesa capaz de cubrir todo el acuario. Las algas en ambos acuarios sern introducidas en los
cilindros libres de aire. Uno de los acuarios ser expuesto al sol o luz artificial de luminosidad
conocida. El otro ser protegido de la luz mediante la tela o caja de cartn y servir como control.
Adicionalmente podrn prepararse otros acuarios cubiertos con diferentes filtros de luz. Esto para
comparar la eficiencia de captura de CO
2
frente a diferentes longitudes de onda.

De ser posible el experimento deber ser controlado despus de 2, 4, 8, 12 y 24 horas. Se deber
anotar el volumen de aire producido. El total de oxgeno producido puede ser calculado restando
la diferencia entre el volumen de aire en el cilindro control y el o los cilindros expuestos al sol.
Deber tratarse de que la cantidad de macrofita o alga en cada cilindro sea la misma y para
2
eliminar cualquier variacin se deber trabajar al menos por triplicado. La concentracin de
molculas de oxgeno puede determinarse asumiendo una presin atmosfrica de 1. A partir de
esto se puede determinar cuanto CO
2
ha sido absorbido por la planta por hora de luz o da
simplemente usando estequiometria.

Cuantificacin de la clorofila

La cuantificacin de la clorofila se la realizar mediante un mtodo estndar de extraccin con
Alcohol etlico al 96% (Fonturbel et al, 2007). Brevemente se pesarn un par de gramos de la
macrfita que sern luego molidos con un mortero en presencia del etanol. El extracto se filtrar
en papel filtro para finalmente ser ledo en un espectrofotmetro a 652 nm y 665.2 nm.

La muestra ser leda en cubetas de plstico en un espectrofotmetro de luz. Previamente se
dejar calentar el equipo, se ajustar el cero para la longitud de onda respectiva y se determinar
la lnea base usando un blanco compuesto de etanol.

El contenido de clorofila en la solucin se determinar de acuerdo a la frmula presentada por
Porra para etanol (Porra, 2002) y que fueron desarrollados por otros investigadores (Arnon, 1949):

[Chl a + b] =22.12 E
652.0
+2.71 E
665.2


La concentracin del clorofila a y b en esta ecuacin est en ug mL
-1
, pero para el clculo final
deber considerarse el volumen de dilucin y la masa original de muestra que fue molida en el
mortero.

Para el informe de laboratorio

El estudiante debe seguir la gua de elaboracin de informes de laboratorio de la materia e incluir:

El mtodo detallado ejecutado durante el laboratorio
Las cantidades de aire producidas en la macrofita expuesta al sol y la macrfita control
El volumen de oxgeno producido y a que masa de CO
2
corresponde
La cantidad (peso) de la clorofila total por gramo de macrfita
La cantidad de CO
2
fijado por gramo de macrfita y por gramo de clorofila
Discutir el porque se mide la clorofila a estas longitudes de onda
Discutir cualquier problema o dificultad tcnica observada durante el laboratorio. Porqu
el clculo es aproximado y no exacto?
Discutir sobre el funcionamiento del espectrofotmetro y su utilidad
Discutir sobre la importancia de saber la capacidad de las plantas para fijar dixido de
carbono
Usar al menos 3 citas bibliogrficas

Bibliografa

Arnon DI (1949) Copper enzymes in isolated chlorophlasts and polyphenol oxidase in Beta
vulgaris. Plant Physiology 24: 1-15
3

Campbell NA, Reece J B (2001) Biology, Sixth edn. San Francisco: Benjamin Cummings.

Fonturbel FR, Ach DC, Mondaca DAG. (2007) Manual de Introduccin a la Botnica.
Publicaciones Integrales.

Porra R (2002) The chequered history of the development and use of simultaneous equations for
the accurate determination of chlorophylls a and b. Photosynthesis Research 73(1): 149-156

Wilkinson DM (2006) Fundamental processes in ecology an earth systems approach, New York:
Oxford University Press Inc.