Efecto de la proporcin de gelanas en la microencapsulacin de Lactococcus lactis.

Artculo
Original

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Revista Colombiana de Microbiologa Tropical. Vol. 2 N 2. Enero Junio 2012.


Efecto de la proporcin de gelanas en la microencapsulacin de
Lactococcus lactis
Effect of gellans ratio on Lactoccocus lactis microencapsulation
Rafael E Gonzlez
1*
, Juan A Salazar
2
, Emma G Ramos
3
.


RESUMEN
PALABRAS CLAVE: Gelana de alto acilo, Gelana de bajo acilo, Microencapsulacin.
ABSTRACT
The gellan gum is an exopolysaccharide linear anionic that is classified based on their content
of acyl groups as high acyl gellan (HA) and low acyl gellan (LA), due to this structural
difference is obtained a wide range of physical and functional properties and therefore is
widely used in food and biotechnology industries. The aim of this study was evaluate the
contribution of binary mixtures of these biopolymers in the formation of microcapsules, using
as a model to encapsulate a lactic acid bacteria. To do this we used a concentration gellans at

1 Profesor Universidad Popular del Cesar. Ph,D. Valledupar Colombia. raemgo@hotmail.com
2 Profesor titular del Centro de investigacin y estudios Avanzados del IPN. Ph,D. Mxico, D.F.
3 Profesora titular del Centro de investigacin y estudios Avanzados del IPN. Ph,D Mxico, D.F.
La gelana es un exopolisacrido lineal aninico que es clasificada con base a su contenido de
grupos acilo como gelana de alto acilo (AA) y gelana de bajo acilo (BA), debido a esta
disparidad diferencia se obtiene una gran diversidad de propiedades fsicas y funcionales, por
lo cual es ampliamente utilizada en las industrias alimentarias y biotecnolgicas. El objetivo
del presente trabajo fue evaluar la contribucin de mezclas binarias de estos biopolmeros en
la formacin de microcpsulas, usando como modelo para encapsular Lactococcus lactis. Para
ello se emple una concentracin de gelana al 0.2%, usando un diseo de mezclas simple.
Gelana de AA, gelana de BA y sus mezclas 25AA/75BA, 50AA/50BA, 75AA/25BA, de igual
forma se estudi el efecto de la velocidad de agitacin (400 - 800 rpm) y la concentracin de
surfactante. Se evalu el tamao, la morfometra, la eficiencia de la microencapsulacin y la
viabilidad del microorganismo microencapsulado. Los resultados indicaron que las mezclas
con concentracin igual o superior al 50% de gelana de AA, no fueron eficientes para obtener
microcpsulas, solamente dieron resultados aceptables la gelana AA y la mezcla 25AA/75BA.
La mayora de las microcpsulas obtenidas presentaron un dimetro entre 3 y 125 m. En
cuanto a la eficiencia de la microencapsulacin, sta disminuy al aumentar la velocidad de
agitacin y la concentracin del surfactante, mientras la viabilidad se mantuvo constante
(72%).
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0.2%, using a simple mixture design. HA gellan, LA gellan and their mixtures 25HA/75LA,
50HA/50LA, 75HA/25LA, likewise was studied the effect of agitation velocity (400 - 800 rpm)
and the surfactant concentration. Also was evaluated the size, morphometric,
microencapsulation efficiency and viability of microencapsulated microorganism. The results
indicated that mixtures with equal concentrations or greater than 50% of HA gellan were not
efficient for obtain microcapsules, only gave acceptable results the LA gellan and the mixture
25HA/75LA. Most of the microcapsules obtained had diameters between 3 and 125 m.
Regarding to the microencapsulation efficiency, it decreased by increasing the agitation
velocity and surfactant concentration, while the viability remained constant (72%).
Key Words: High acyl gellan, Low acyl gellan, microencapsulation.

1. INTRODUCCION
La gelana es un heteropoliscarido lineal
aninico secretada por la bacteria
Sphingomonas paucimobilis (Sutherland,
1994) y consiste en un
tetrasacrido(ABCD) con un eje de
unidades de repeticin, de -1,3-D-
Glucosa, -1,4-D cido glucurnico, -1,3-
D-Glucosa, -1,4-L-rhamnosa y dos grupos
acilo, acetato y glicerato, unidos al residuo
de glucosa adyacente al cido glucurnico
(Jansson y col, 1983), En la gelana nativa,
tambin llamada gelana de alto acilo (AA),
el residuo de glucosa A contiene una
sustitucin de un grupo L-glicerato en el C2
y el grupo acetato a un nivel de sustitucin
del 50% aproximadamente en el C6 (Kuo y
Mort, 1986). La gelana comercial de bajo
acilo (BA) es producida por remocin de
los grupos acetato y glicerato con un fuerte
tratamiento con lcali.
De forma general, la gelana BA forma geles
ms firmes pero quebradizos; mientras
que la gelana AA, origina geles blandos y
elsticos. Por tal motivo, las mezclas de
geles con gelana de AA/BA pueden
producir un amplio rango de texturas que
pueden ser utilizadas para diversas
aplicaciones (Banik y col, 2000). Adems
dentro de los posibles usos de gelana se
encuentra la produccin de microcpsulas
para la proteccin de microorganismos,
debido a su estabilidad mecnica y trmica
(Norton y Lacroix, 1990; Camelin y col,
1993). La microencapsulacin por
biopolmeros naturales es favorecida por
la alta porosidad, ausencia de toxicidad, la
facilidad del proceso de
microencapsulacin y finalmente por la
alta viabilidad de las clulas
microencapsuladas (Trevors y col, 1992;
McLoughlin, 1994; Cassidy y col, 1996;
Leenen y col, 1996). Una de las bacterias
de mayor importancia para la industria
lctea es Lactococcus lactis; ya que es
empleado en un rango amplio de
productos fermentados. Por ende el
objetivo del trabajo fue caracterizar un
sistema modelo de microencapsulacin de
una bacteria cido lctica de importancia a
nivel alimentario como L. lactis empleando
mezclas binarias de gelana teniendo en
cuenta parmetros de microencapsulacin
tales como eficiencia y viabilidad del
microorganismo.



2. MATERIALES Y METODOS
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2.1. Microencapsulacin
A partir de las dispersiones de gelana al 0.2
% AA, BA y sus respectivas mezclas, 25/75
(AA/BA); 50/50 (AA/BA); 75/25 (AA/BA)
con Calcio (30 mM), (Huang y col, 2003), se
prepararon las emulsiones con el inculo
en una concentracin conocida
(10
8
bact/mL) del microorganismo
Lactococcus lactis en aceite vegetal
mezclado con un surfactante no inico
(Span 80) a diferentes concentraciones
(0.0-0.2%). Finalmente la emulsin es
sometida a diferentes velocidades (400-
800 rpm). El aceite es retirado por
adsorcin y las microcpsulas contenidas
en la fase acuosa son dos veces lavadas con
disolucin salina y almacenadas a 4C
hasta su uso (zer y col, 2009).
2.1. Dimetro de las microcpsulas
Para la determinacin de este parmetro
se emple un microscopio ptico OLIMPUS
IX50 integrado a una cmara CoolSNAP-
Procf y el programa de computo image
Pro-Plus ver. 5.1.
2.2. Determinacin de Eficiencia de la
microencapsulacin y viabilidad
del microorganismo
Para la determinacin de la viabilidad se
realizaron tcnicas de conteo en placa
utilizando cajas de Petri con agar MRS
Difco
TM
(Becton, Dickinson and Company
Le Pont de Claix, France). En cuanto a la
eficiencia de la microencapsulacin (%EE),
se utiliz la metodologa desarrollada por
Capela y colaboradores en 2007.
2.2.1. Anlisis estadstico
Todas las muestras del diseo ortogonal
L9 3**2 fueron tratadas mediante anlisis
normal de varianza (ANOVA de un factor)
empleando la prueba de diferencias
mnimas significativas (DMS) con un nivel
de confianza del 95% usando el programa
de cmputo (SPSS ver 13.0 para Windows).

3. RESULTADOS Y DISCUSIN
3.1. Microencapsulacin
3.1.1. Formacin de Microcpsulas
En este trabajo fueron obtenidas
microcpsulas con gelana de BA y con la
mezcla 25AA/75BA con una relacin 1:2
agua/aceite, bajo condiciones variantes de
velocidades de agitacin (400 - 800 rpm) y
concentracin de surfactante (0.0 - 0.2 %);
posteriormente se separaron las
microcpsulas por centrifugacin. En las
mezclas de gelana con concentraciones
superiores al 50% de gelana de AA, no fue
posible obtener microcpsulas; debido a la
formacin de un sistema tipo gel a altas
temperaturas (70 C); lo cual impide la
formacin de la emulsin para la obtencin
de las microcpsulas, adems; debido a
que se obtienen geles elsticos no es
posible mantener la forma de las
microcpsulas; lo cual imposibilita llevar a
cabo el proceso de microencapsulacin.
nicamente se obtuvieron microcpsulas
con la gelana de BA y la mezcla
25HA/75LA; ya que la gelana de BA
proporciona geles ms estables.
3.1.2. Distribucin de los tamaos de
las microcpsulas
Con respecto a las microcpsulas
obtenidas con la gelana de BA se pudo
observar una disminucin del dimetro de
las mismas a medida que aumentaba la
concentracin del surfactante y la
velocidad de agitacin; ya que en las
muestras con mayor concentracin del
surfactante (0.2%) y velocidad de agitacin
(800 rpm) no se observaron microcpsulas
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de dimetro superior al 75 m, siendo el
dimetro promedio para este tratamiento
de 13.72 m; mientras que a menores
concentraciones del surfactante y
velocidades de agitacin, el rango de
distribucin estuvo entre 5 y 250 m
encontrndose las mayores frecuencias
entre 3 y 75 m. con respecto a las
microcpsulas obtenidas con las mezclas
HA/LA (datos no mostrados), estas
presentaron el mismo comportamiento
sealado anteriormente. A medida que
aumenta la concentracin del surfactante y
la velocidad de agitacin (datos no
mostrados). Las mayores frecuencias
fueron obtenidas para los dimetros
comprendidos entre 3 y 75 m. Todos los
dimetros obtenidos en este trabajo son
menores que los reportados por Jankowski
y col, (1997), quienes obtuvieron
microcpsulas con dimetros entre 5.2 y
5.7 mm utilizando la tcnica de
coacervacin con alginato de sodio y
almidn de papa.
Todos los dimetros obtenidos en este
trabajo estuvieron por debajo de los
reportados por Groboillot y col, (1993)
quienes emplearon quitosan para
microencapsular L. lactis obteniendo un
incremento en el dimetro de las
microcpsulas de 220 a 629 m cuando la
concentracin de quitosan aumento de 1 a
4%.
3.1.3. Eficiencia de la
microencapsulacin
En trminos generales las microcpsulas
obtenidas con las mezclas AA/BA
presentaron mayor porcentaje de
microencapsulacin que la gelana BA,
tambin se observ que a medida que
aumentan la velocidad de agitacin y la
concentracin de surfactante, disminuye la
eficienciade microencapsulacin (Tabla
1).En cuanto al anlisis estadstico aplicado
a las muestras, se puede observar
diferencias estadsticas significativas a un
nivel de confianza del 95% entre todos los
tratamientos utilizados, para la eficiencia
de microencapsulacin. Con respecto a la
viabilidad de los microorganismos no se
observaron diferencias estadsticas
significativas entre las muestras evaluadas
(Tabla 1).
La mayor eficiencia de microencapsulacin
se obtuvo en la mezcla de gelana AA/BA
sin surfactante y con una velocidad de
agitacin de 400 rpm (98.2%), mientras
que la menor eficiencia se encontr en las
microcpsulas obtenidas con gelana BA a
mayores concentraciones de surfactante
(0.2%) y velocidades de agitacin (800
rpm). Con respecto a la viabilidad se no se
observaron diferencias en cuanto a las
concentraciones de surfactante y
velocidades de agitacin ya que se
mantuvo contaste durante todos los
tratamientos (73%), esto probablemente
se debe al mtodo de determinacin, ya
que se emplea una varilla de vidrio para
liberar los microorganismos de las
microcpsulas (Yez, 2007).

4. CONCLUSIONES
Bajo las condiciones estudiadas no fue
posible obtener microcpsulas con gelana
de AA y/o sus mezclas con una
concentracin igual o superior al 50%. Con
respecto a la velocidad de agitacin y
concentracin del surfactante, estas fueron
inversamente proporcionales al dimetro
de las microcpsulas obtenidas. Las
microcpsulas de bajo acilo presentaron
menor porcentaje de microencapsulacin
que las mezclas de gelana AA/BA, tambin
se observ que a medida que aumentan la
velocidad de agitacin y la concentracin
de surfactante disminuye la eficiencia de la
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microencapsulacin, mientras que la
viabilidad microbiana se mantiene
constante en todas las muestras evaluadas.
prevencin y control, con el fin de detectar
los factores de riesgo en las condiciones
locales.
5. AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen al CONACYT por la
beca N 296286 otorgada a REGC y al
ingeniero Miguel Mrquez Robles por el
soporte tcnico.

7. BIBLIOGRAFIA
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Tabla 1. Eficiencia en la microencapsulacin de las microcpsulas de gelanas a diferentes
concentraciones de surfactante y velocidades de agitacin.
GELANA %
SPAN
rpm Viabilidad %EE GELANA %
SPAN
rpm %EE Viabilidad

HA/LA

0.0
400 72.90.43 98.20.14
a

LA

0.0
400 97.80.26
a
72.20.13
600 73.30.23 97.30.18
b
600 96.50.32
b
72.50.24
800 73.20.18 92.60.24
c
800 89.20.45
c
73.00.31

HA/LA

0.1
400 72. 0.08 96.30.21
d

LA

0.1
400 91.80.41
d
73.30.06
600 71.80.21 93.10.38
e
600 85.20.18
e
72.50.24
800 72.40.32 87.20.15
f
800 78.30.32
f
72.40.21

HA/LA

0.2
400 72.40.15 94.80.31
g

LA

0.2
400 87.30.12
g
72.10.18
600 72.10.28 90.60.26
h
600 84.20.11
h
73.10.54
800 71.91.23 82.40.32
i
800 72.20.28
i
72.81.27
a

Filas sin ninguna letra en comn presentaron diferencias significativas (p<0.05)