PCA:

Uso: El Agar Mtodos Estandar es un medio utilizado para el recuento de bacterias aerbicas a partir de agua, aguas
residuales, alimentos y productos lcteos. Este medio tambin es conocido como Agar Cuenta Estandar.
Explicacion : El Agar Mtodos Estandar fue desarrollado por Buchbinder Baris and Goldstein en 1953 como un
requerimiento de la American Public Health Association. Este medio se formula con los ingredientes originales. El
extracto de levadura y la peptona de casena han sido utilizados en medios diseados para estudiar la presencia de
microorganismos termoflicos en productos lcteos desde 1928.
La peptona de gelatina y el extracto de levadura proporcionan la fuente de carbono y nitrgeno. La dextrosa es el
carbohidrato fermentable y el agar es adicionado como agente solidificante.
Formula:
Peptona de Casena 5.0 Dextrosa 1.0
Extracto de Levadura 2.5 Agar Bacteriolgico 15.0
pH 7.0 0.2
Preparacion
Mtodo:
Suspender 23.5 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y
hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una
temperatura entre 45-50 C y vaciar en placas de Petri estriles.
Procedimiento:
1. Consultar las referencias apropiadas respecto a los procedimientos para procesar y sembrar muestras de alimentos,
agua y otros materiales.
2. Colocar alcuotas de la muestra en las placas Petri y vaciar el medio enfriado a 45 qC. Mezclar, dejar solidificar e
incubar. Este medio tambin puede utilizarse para hacer la siembra por filtracin de membrana.
3. Incubar las placas a 35 r2 qC durante 18-24 horas.




EMB
BD EMB Agar (Eosin Methylene Blue Agar), Modified

USO PREVISTO
BD EMB Agar, Modified (frmula de Holt-Harris y Teague) es un medio ligeramente selectivo y de diferenciacin para el
aislamiento y la diferenciacin de bacilos gram negativos entricos (Enterobacteriaceae y diversos otros bacilos gram
negativos) a partir de muestras clnicas.

PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Mtodo microbiolgico
EMB Agar se basa en una frmula originalmente descrita por Holt-Harris y Teague en 1916 La frmula original de Holt-
Harris y Teague posteriormente fue modificada por Levine. La principal diferencia entre las dos es la inclusin de
sacarosa en el medio de Holt-Harris y Teague. Ciertos microorganismos entricos fermentan con mayor facilidad la
sacarosa que la lactosa.
BD EMB Agar, Modified contiene colorantes de azul de metileno y eosina Y, que inhiben las bacterias gram-positivas en
cierto grado. Los colorantes tambin actan como indicadores diferenciales en respuesta a la fermentacin de la lactosa
o la sacarosa por parte de los microorganismos. Los coliformes producen colonias de color negro azulado, mientras que
las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras o de color mbar transparente. Las colonias de Escherichia coli
pueden exhibir un brillo verde metlico caracterstico debido a la rpida fermentacin de la lactosa.
El conjunto de medios de aislamiento de baja selectividad para Salmonella en muestras fecales y de otros tipos incluye
el EMB Agar (con y sin sacarosa) .
Este medio puede inhibir el crecimiento de las bacterias gram-positivas como los estreptococos fecales, estafilococos y
levaduras, o bien favorecer su crecimiento con formacin de colonias puntiformes.
REACTIVOS
BD EMB Agar, Modified
Frmula* por litro de agua destilada
Digerido pancretico de gelatina 10,0 g
Lactosa 5,0
Sacarosa 5,0
Fosfato dipotsico 2,0
Agar 13,5
Eosina Y 0,4
Azul de metileno 0,065
pH 7,2 +/- 0,2




OGGY



Medio para el aislamiento selectivo y enumeracin de levaduras y mohos en los alimentos.


Agar oxitetraciclina-glucosa-levadura (OGYE Agar) descrito por MOSSEL et al. (1962, 1970) se utiliza para el aislamiento y
enumeracin de levaduras y mohos en los alimentos.

Modo de accin Composicin tpica
Preparacin Control de calidad
Aditivos / Reactivos Literatura
Empleo e interpretacin Dibujo / Imagen


Modo de accin
El medio de base permite un buen crecimiento de levaduras y mohos. Oxitetraciclina inhibe el crecimiento de bacterias.


Composicin (g / litro)
de extracto de Levadura 5,0; D (+) glucosa (dextrosa) 20.0; Agar-Agar 12,0


Preparacin
Suspender 18,5 g en 500 ml de agua purificada. Calentar hasta ebullicin para disolver completamente. Al autoclave a 121 C fr 15
minutos. Enfriar el medio a 45-50 C y aadir aspticamente el contenido de 1 vial OGYE Suplemento Selectivo.. Mezclar bien y verter
en placas de pH final: 6,6 + 0,2 a 25 C. El medio preparado es claro y ligeramente amarillento-marrn en color.






Empleo e interpretacin
Las placas se inocularon con el mtodo de vertido de placa o la superficie mtodo de propagacin. Incubacin: hasta 5 das a 20-25
C. Contar el nmero de colonias por placa. Calcular el factor de dilucin en el recuento final de la muestra analizada.







Aditivos


EMD gato. No. Producto Tamao del paquete
1.09877.0001 OGYE Suplemento Selectivo 15 viales




Control de calidad


Cepas de ensayo Crecimiento
Candida albicans ATCC 10231 Buena a muy buena
Microsporum canis ATCC 36299 Feria de Buenas
Comuna Penicillium ATCC 10428 Buena a muy buena
Aspergillus niger ATCC 16404 Buena a muy buena
Escherichia coli ATCC 25922 Ninguno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Ninguno
Bacillus cereus ATCC 11778 Ninguno


Literatura

MOSSEL, DAA, Visser, M., a. Mengerink, WHJ: Una comparacin de los medios de comunicacin para el recuento de mohos y levaduras en los alimentos y bebidas. -
Lab. Pract, 11. ;. 109-112 (1962)
MOSSEL, DAA, KLEYNEN-Semmeling, AMC, a. VENCENTE, HM: La oxitetraciclina-Glucosa-Agar extracto de levadura para la enumeracin selectiva de mohos y levaduras
en alimentos y material clnico. - J. Appl. Bact, 33. , 454-457 (1970).


Aspergillus niger, Candida albicans

AGAR NUTRITIVO
Es un medio de cultivo enriquecido sin aditivos preparado para la recuperacin y aislamiento de toda clase de
microorganismos gram-positivos y gram-negativos, hongos y levaduras que no requieren elementos especiales para su
crecimiento, se usa principalmente para el mantenimiento de cepas, realizacin de subcultivos para confirma la pureza
de los aislamientos.
METODOLOGA:
Principio del mtodo:
El agar Nutritivo garantiza el crecimiento de todos los microorganismos de importancia clnica tanto grampositivos
como gramnegativos, hongos y levaduras, adems de proporcionar una herramienta para el mantenimiento y
confirmacin de aislamientos primarios
El agar Nutritivo se prepara a partir del medio de cultivo deshidratado, materia prima producida por la casa BBL y tiene
la siguiente composicin:
g/l
Extracto de carne.................................... 3.0 g
Peptona........ ........................................... 5.0 g
Agar........................................................ 15.0 g
CRITERIOS DE DESEMPEO Y LIMITACIONES DEL MTODO
Por ser el Agar Nutritivo un medio enriquecido permitir el crecimiento de bacterias tanto patgenas como saprofitas,
por esto es importante trabajar con las mayores condiciones de asepsia para garantizar que no hay crecimiento de
microorganismos contaminantes que puedan ocasionar un resultado errneo.
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS:
El Agar Nutritivo debe conservarse a T de 4-8C colocando las placas en posicin invertida para evitar que el agua de
condensacin pueda caer sobre la superficie del medio. Este producto debe manipularse con cuidado evitando
movimientos bruscos o cadas que puedan resquebrajar la capa del medio.
La congelacin arruina totalmente el medio. Conservado en condiciones ptimas el medio es estable hasta la fecha de
expiracin sealada.

PROCEDIMIENTO:
1-Con asa bacteriolgica estril trabajando siempre a la llama del mechero, tomar una mnima muestra.
2. Sembrar suavemente sobre la superficie tersa del medio por el procedimiento de agotamiento.
3. Incubar las placas en posicin invertida a 37C en aerobiosis.
4. Al trmino de 18-24 horas de incubacin examinar el cultivo, observando si hay crecimiento monomicrobiano
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
ANALTICOS:
Es importante hacer una coloracin de Gram sobre las colonias presentes para garantizar la pureza del cultivo.
CONTROL DE CALIDAD:
El Agar Nutritivo tiene un estricto control de calidad a lo largo del proceso de produccin. El producto final tiene un
cuidadoso control para asegurar que cada lote llene las especificaciones del medio: Color, consistencia, tersura,
esterilidad, pH.
El desempeo del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:
Escherchia coli 255922
Enterococcus faecalis 19433
Candida albicans 14083
Pseudomonas aeruginosa 27853

Para determinar calidad y caractersticas del crecimiento bacteriano que deben observarse en el medio. El usuario recibe
una copia de este estudio.

VALOR DE REFERENCIA:
Este medio al usarse, debe ser estril y permitir un desarrollo ptimo de las cepas de referencia.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS
ANALTICOS:
Es importante hacer una coloracin de Gram sobre las colonias presentes para garantizar la pureza del cultivo.
CONTROL DE CALIDAD:
El Agar Nutritivo tiene un estricto control de calidad a lo largo del proceso de produccin. El producto final tiene un
cuidadoso control para asegurar que cada lote llene las especificaciones del medio: Color, consistencia, tersura,
esterilidad, pH.
El desempeo del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:

Escherchia coli 255922
Enterococcus faecalis 19433
Candida albicans 14083
Pseudomonas aeruginosa 27853

Para determinar calidad y caractersticas del crecimiento bacteriano que deben observarse en el medio. El usuario recibe
una copia de este estudio.
Nutritivo Agar

Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos
nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales.
No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de
cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5.0 Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada.
Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar
suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta
su disolucin. Distribuir y esterilizar a 121C durante
15 minutos.
Extracto de carne 3.0
Cloruro de sodio 8.0
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.2
Siembra
En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.

Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.

Resultados
a-Agar nutritivo:
Microorganismos Crecimiento
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno-excelente
E. coli ATCC 25922 Bueno-excelente
S. aureus ATCC 25923 Bueno-excelente
B. cereus ATCC 10876 Bueno-excelente
E. faecalis ATCC 29212 Bueno-excelente
P. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente
b-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero:
Microorganismos Crecimiento Hemlisis
S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta
S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa
S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar claro a medio ligeramente opalescente.

.
AGAR-AGAR

El agar-agar es una mezcla de polisacridos complejos (glcidos o carbohidratos) principalmente agarosa,
agaropectina , galactosa y cido urnico: la pared celular de estas algas est diferenciada en una capa interna de
celulosa y una externa amorfa de naturaleza pctica, rica en coloides geliflcados. Estas sustancias son
indigeribles y constituyen fibra de tipo soluble.
El agar-agar es tambin una buena fuente de magnesio y de hierro. Tambin presenta calcio, potasio y yodo.
Caractersticas del agar-agar
Es un hidrocoloide completamente soluble en agua a 100C.
Se puede disolver a bajas temperaturas.
Al contacto con agua fra se hincha y puede aumentar hasta 30 veces su volumen.
No aporta sabor ni aroma y carece de color.
Es un poderoso agente gelificante.
Es un gel termoreversible.
Gelifica entre 35C y 43C y se derrite entre 85C y 95C.
No aporta caloras.
Es ligeramente saciante y laxante.
Es el nico hidrocoloide que ofrece gelatinas que pueden soportar temperaturas de esterilizacin.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica
completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas
excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen
en l.














REVISI



















Medios y Reactivos



PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS:
Ya que para la utilizacin de este medio se deben
manipular microorganismos patgenos, se deben
guardar las ms estrictas normas de asepsia y
antisepsia, los cultivos una vez ledos deben
esterilizarse y luego colocarse en bolsa roja
identificada y entregada a la compaa
especializada en recoleccin de productos
biolgicos de desecho.
BIBLIOGRAFA
1. Wentworth BB, Baselkivs, Doern GV et al.
Diagnostic procedures for bacterial infections 7th
Ed. 1987. Washington, D.C.AM Pub Health Ass.
2. Pfaller MA. Microbiology. Section IX, Chapter
44, Bacteriology pg 1111-1168 in Clinical
laboratory Medicine Edited by McCIatchey KD.
1994 Williams and Wilkins. Baltimore MD 21202
USA.
3. Becton, Dickinson and Company. Section III
Culture Medium an Ingredients Manual of
Microbiological Culture Media. Pg 151 -153
Maryland 2003
4. Nash P, Krenz. MM. . Culture Media. Chapter
121. pg 1226-1228 in: Manual of Clinical
Microbiology, edited by Balows A, Hauser WJ, Jr,
Herrmann KL, Isenberg HD, Shadomy HJ. Fifth
Ed. 1991 Am Soc Microbiol. Washington DC.

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