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+
=
+
= ) )( (
3 2 4 1
= ) 2 / (
0 ,
=
B A
[5.79]
Figura 5.79 Sistema AB
El espectro correspondiente a AB
2
B muestra una nica lnea central por coalescencia de las
lneas interiores y desaparicin de las exteriores. Aun con /J = 15 se siguen observando
ligeras deformaciones del patrn de intensidades, aunque los errores asociados al clculo
de los parmetros espectrales como sistema de primer orden son despreciables. La
utilizacin de equipos con campos magnticos intensos incrementa la probabilidad de
140
Resonancia Magntica Nuclear
encontrar sistemas de primer orden, toda vez que al incrementarse BB
0
Ben el cociente /J,
el numerador crece y el denominador permanece constante.
Sistemas con ms de dos espines
El sistema a tres espines ms sencillo, AB
2
BX, genera un espectro con dos seales: un
doblete y un triplete. Si el espectro no es de primer orden (AB
2
BB) van a aparecer lneas
adicionales y los valores de la constante de acoplamiento, a diferencia del caso AB, no
puede evaluarse directamente como distancias entre picos en cada multiplete.
La dificultad del anlisis de un sistema de espines crece muy rpidamente con el nmero
de ncleos no equivalentes y la determinacin de los parmetros espectrales requiere del
uso de programas de cmputo especiales. Estos programas simulan un espectro a partir
de un conjunto de parmetros iniciales aproximados ( y J) y considerndolos como
variables los optimizan minimizando en forma iterativa las diferencias entre el espectro
calculado y el experimental.
5.6.4 Resonancia Magntica Nuclear Dinmica
5.6.4.1 RMN y procesos dinmicos.
La RMN no es slo un mtodo espectroscpico para determinar estructuras de
compuestos qumicos sino tambin una poderosa herramienta para la observacin y
determinacin de los parmetros de los procesos dinmicos que pueden estar ocurriendo
dentro de o entre las molculas que componen una sustancia. El intercambio de protones
entre sitios bsicos, el intercambio entre confrmeros por rotaciones alrededor de
enlaces, la inversin de anillos, el intercambio entre tautmeros, los complicados
equilibrios conformacionales a diferentes escalas de tiempo en las biomolculas y otros
procesos dinmicos que resultan en la variacin del entorno qumico de los ncleos
pueden ser estudiados por RMN. Estos cambios pueden reflejarse en el espectro de
RMN como variaciones en los desplazamientos qumicos, constantes de acoplamiento y
los parmetros de relajacin.
A diferencia de otras tcnicas espectroscpicas en RMN los estados entre los cuales
ocurren las transiciones se encuentran muy cercanos en energa. Si recordamos la
relacin de incertidumbre de Heisenberg para la energa-tiempo ( h t E . [1.37]) y su
aplicacin a las transiciones espectroscpicas ( h E E = = y = t ):
141
Resonancia Magntica Nuclear
2
1
. [5.80]
Vemos que la capacidad para diferenciar 2 entornos ( ) depender de los tiempos de
vida de los estados asociados a dichos entornos. Si existen procesos dinmicos que
interconvierten rpidamente un entorno en el otro (), la diferencia de frecuencias de
resonancia entre los mismos () deber ser apreciablemente mayor que la dada por la
relacin [5.80] para que puedan ser detectados como diferentes.
La forma ms sencilla de estudiar la velocidad de los procesos dinmicos es mediante la
variacin de la temperatura del sistema. La mayora de los espectrmetros de RMN estn
dotados de sondas que permiten variar y controlar la temperatura de las muestras en el
rango de +200 a -150P
0
PC haciendo posible el estudio de equilibrios dinmicos en un rango
amplio de energas de activacin (20-100 kJ/mol).
La apariencia del espectro de RMN de un sistema en equilibrio dinmico es funcin de
las velocidades de interconversin y por lo tanto de la temperatura. Analizando las
variaciones del espectro con la temperatura pueden determinarse parmetros cinticos (k,
EB
act
B, GP
P, HP
P, SP
Las fracciones molares en el equilibrio de ambas especies (xB
A
B y xB
B
B) reflejan el
desplazamiento del equilibrio del sistema, que depende de la energa libre de reaccin
G:
RT
G
A
B
x
e
x
x
K
= = [5.81]
Las constantes de velocidad kB
i
B (y los tiempos de vida B
i
B) dependen de la energa libre de
activacin GP
= [5.82] N- nmero de Avogrado
En la Figura 5.80 se muestran las variaciones del espectro con la velocidad del
intercambio entre dos entornos igualmente poblados (k = kB
-1
B) separados unos 50 Hz.
Figura 5.80 Efecto del intercambio sobre un espectro
5.6.4.2 Velocidad de intercambio y espectro
Consideraremos 3 regmenes de intercambio:
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Resonancia Magntica Nuclear
-Intercambio lento: La velocidad de interconversin de A y B es lenta en la escala de
tiempo de la RMN. Los tiempos de vida medios de las especies A y B son muy superiores
al inverso de la diferencia de frecuencias entre los sitios A y B. Se observan seales
independientes a las frecuencias B
A
By B
B
Bcuyas intensidades relativas permiten
determinar las fracciones molares xB
A
B y xB
B
B y por ende G.
-Intercambio rpido: La velocidad de interconversin es rpida. Los tiempos de vida
medios de las especies A y B son muy inferiores al inverso de la diferencia de frecuencias
entre los sitios A y B. Observaremos un espectro RMN que resulta de promediar los
parmetros espectrales de A y B. Las seales colapsadas en el espectro aparecern a
posiciones intermedias entre las de A y B:
B A A A B B A A obs
x x x x ) 1 ( + = + = [5.83]
Con la ayuda de esta ecuacin si conocemos los desplazamientos qumicos de los
confrmeros (medidos en rgimen de intercambio lento) podemos evaluar sus fracciones
molares en el rgimen de intercambio rpido.
Si hay acoplamiento con un segundo ncleo X, se observar igualmente una constante de
acoplamiento promedio:
BX B AX A obs
J x J x J + = [5.84]
Intercambio intermedio: Entre estos casos extremos tenemos la regin, mas interesante,
de intercambios de velocidad intermedia donde el sistema evoluciona desde seales
independientes para A y B a baja temperatura a seales promediadas a alta temperatura.
Cuando elevamos la temperatura observamos un proceso de ensanchamiento de las
seales, su posterior colapso a una seal nica promediada, inicialmente muy ancha, que
al continuar elevando la temperatura se convierte en una seal con reducido ancho de
lnea. La temperatura a la cual las seales individuales colapsan a una seal nica muy
ancha se denomina temperatura de coalescencia TB
C
B, a partir de la cual puede evaluarse la
constante de velocidad del proceso de interconversin:
= 2 . 2 ) (
2
B A T
C
k [5.85]
Vemos que la velocidad de interconversin a la temperatura de coalescencia depende slo
de la diferencia de desplazamientos qumicos. Dado que esta diferencia vara con BB
0
B, la
temperatura de coalescencia depende tambin de la intensidad del campo magntico.
144
Resonancia Magntica Nuclear
Sustituyendo a k en la ecuacin de Eyring podemos llegar a una expresin que nos
permite evaluar de forma aproximada la energa libre de activacin a la temperatura de
coalescencia:
) (
2
ln
B A
C
C
Nh
RT
RT G
=
[5.86]
mol kJ
k
T
T G
C
C
T
C
C T
/ 10 ) log 32 . 10 ( 1 . 19
3
+ = [5.87]
Una evaluacin ms exacta de los parmetros cinticos se logra mediante la
optimizacin de dichos parmetros por minimizacin de las diferencias entre los
espectros experimentales y los calculados (anlisis de forma de lneas, line shape
analysis). En particular las determinaciones de HP
P y SP
[5.88]
Las GP
P = 25 kJ/mol.
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Resonancia Magntica Nuclear
Figura 5.82 RMN-P
1
PH Dinmica del ciclohexano-dB
11
B
5.6.4.3 Dinmica de procesos por otros mtodos
Los procesos dinmicos pueden estudiarse por RMN, aun cuando no pueda lograrse
llevar al sistema a la zona de intercambio intermedios y sea imposible detectar la
coalescencia/decoalescencia de las seales.
Intercambios muy lentos.- La tcnica de transferencia de saturacin puede utilizarse en
los casos de intercambio lento donde no es posible alcanzar la temperatura de
coalescencia. La irradiacin selectiva y continua de una de las seales la satura y puede
tambin saturar parcialmente cualquier otra seal en intercambio con la primera. En
efecto algunos de los ncleos del primer sitio pueden transferir la saturacin a ncleos del
segundo sitio por intercambio y reducir la intensidad de este ltimo. Esta reduccin de
intensidad depende de las velocidades de intercambio y de los tiempos de relajacin.
Mediante esta tcnica pueden estudiarse procesos con constantes de velocidad de 10P
-3
P a
147
Resonancia Magntica Nuclear
10P
1
P sP
-1
P( ~ 0.1s -10P
3
Ps), lo que extiende el rango de procesos dinmicos detectables
mediante el mtodo de observacin de coalescencia (k ~10P
0
P 10P
4
P sP
-1
P, ~ s - ms).
Intercambios muy rpidos.- La relajacin, y por ende los parmetros asociados con la
misma (TB
1
B, TB
2
B, NOE), dependen de la presencia en la red de movimientos con
frecuencias cercanas a las de resonancia y por lo tanto permiten la determinacin de
dinmicas en la escala de los ns. Para estudiar movimientos ms lentos pero no al alcance
de las tcnicas de decoalescencia, puede aplicarse la tcnica del bloqueo de espines (spin-
locking). Como ya conocemos, la aplicacin de un pulso de radiofrecuencias de 90P
0
P
BB
1
B(x) a un sistema en equilibrio lleva la magnetizacin al eje y. La posterior evolucin
libre de la magnetizacin da lugar al FID y por transformada de Fourier al espectro. Sin
embargo si, inmediatamente despus de la aplicacin del pulso de radiofrecuencias, se
aplica de forma continua un campo BB
1
B a lo largo del eje y, forzaremos a la
magnetizacin macroscpica a permanecer alrededor del eje y, mientras que los espines
individuales precesarn alrededor de este eje. Este procedimiento se denomina bloqueo
de espines y es aplicado y tratado ms en detalle al estudiar algunos experimentos
bidimensionales. En esta situacin los espines precesan a baja frecuencia (BB
1
Ben lugar
de BB
0
B) y su relajacin (relajacin en el sistema con bloqueo de espines o en el sistema
rotatorio (TB
1
B)), depender de la existencia de movimientos de baja frecuencia (ms-s),
permitiendo el estudio de dinmicas en este rango.
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