I.

INMOVILIZACIN DE MICROORGANISMOS
La inmovilizacin de microorganismos ha sido estudiada durante las ltimas
dcadas como la solucin y el mejoramiento de sistemas de tratamiento de aguas,
suelos y aires contaminados. Algunos de los aspectos ms importantes
considerados en esta tcnica son expuestos a continuacin, as como algunas
aplicaciones ambientales.
1. Pre-requisitos para lograr una inmovilizacin.
Korkoutas y colaboradores (2004) indican que para lograr una inmovilizacin que
sea eficaz para el proceso a realizar, se deben tener en cuenta que los espacios
que se usarn como soporte de inmovilizacin cumplan con ciertos parmetros
tales como la presencia de una superficie de adherencia amplia, que sea de fcil
operacin y regeneracin; debe tener buena porosidad con el fin de permitir un
intercambio constante de sustratos, productos, gases, etc.; debe tener una buena
estabilidad qumica, biolgica, mecnica y trmica, as como resistente a enzimas,
solventes o cambios de presin.
En cuanto a las clulas a inmovilizar, afirman que estas deben ser viables y deben
mantener un metabolismo activo por periodos largos, as como su metabolismo no
debe verse afectado por los procesos de inmovilizacin.
2. Ventajas de la inmovilizacin de clulas.
La inmovilizacin de diferentes microorganismos en diversos soportes que van
desde los biodegrada- bles como residuos orgnicos o agroindustriales, hasta
aquellos de difcil o nula degradacin como plsticos y fibras de vidrio han
permitido el inters y el desarrollo de nuevas tecnologas debido a algunas
ventajas que presentan como son:
Concentracin de biomasa.
Actividad metablica
Resistencia a la toxicidad


2.1. Concentracin de biomasa.
Algunos estudios han demostrado que en ecosistemas acuticos, la concentracin
de biomasa inmovilizada es superior a la encontrada en un sistema donde la
biomasa se encuentra libre. (Cohen, Y., 2001) Esto posiblemente se deba a que
en los sistemas de agua, la biomasa puede ser arrastrada impidiendo que se
mantenga o que aumente su concentracin.
Sin embargo, Kourkoutas y colaboradores (2004) reportan que en la inmovilizacin
de levaduras en perlas de alginato de calcio, la concentracin de biomasa
adicionada no disminuye, pero tampoco aumenta, debido a que las clulas se
encuentran atrapadas impidiendo su crecimiento y reproduccin.
En la inmovilizacin de microalgas en perlas de alginato, la concentracin de
biomasa tambin se ve controlada, esto debido a que el espacio dentro de la perla
no permite un aumento en la densidad celular; tambin explican como en este
caso, la cantidad de luz que sea capaz de pasar a travs de la perla ser un factor
indispensable para el incremento de la biomasa, as como la cantidad de
nutrientes disponibles para las micro-algas (Moreno, I., 2008).

2.2. Actividad metablica
Varios estudios han demostrado que el metabolismo de las clulas inmovilizadas
es mucho mayor en comparacin al presentado por clulas libres (Pol- prasert et
al., 1989) (Angelova et al., 2000) (Navarro y Durand, 1977).
El incremento en la actividad metablica, puede deberse a diferentes factores;
Madigan y colaboradores (1997), afirman que gracias al incremento de la biomasa
en el soporte, as como la concentracin de nutrientes alrededor del soporte,
permitirn que se presente este incremento.
De igual forma debido a que tanto el soporte como la misma biopelcula que
algunos de estos microorganismos forman, atrapan gran parte de los nutrientes y
sustancias presentes en el medio, estos estarn ms disponibles para las clulas
inmovilizadas, que si estuvieran libres. (Cohen, Y., 2001).
Senthilnathan y Ganczarczyk (1990), Lazarova y Manem, (1995) y Cohen (2001)
han sugerido que al estar inmovilizados algunos microorganismos pueden
encender genes especficos que permiten un incremento en el metabolismo de
estos.
Se ha reportado que la disminucin del pH al interior de las perlas de alginato de
calcio, permite un aumento en el metabolismo celular. La disminucin del pH se
debe a que la membrana citoplasmtica incrementa la permeabilidad a protones,
permitiendo que se d un consumo superior de ATP, lo cual se ve reflejado en el
incremento del metabolismo (Galazzo y Bailey, 1990).



2.3. Resistencia a la toxicidad
En un estudio reportado por Marrie y Costerton, (1981), en el cual realizaron
pruebas con diferentes concentraciones de antispticos, encontraron que aquellos
microorganismos que eran capaces de formar algn tipo de aglomeracin o
biopelcula, tenan mayor resistencia que aquellos que no la formaban.
Este fenmeno, es atribuido a diferentes razones entre las cuales se encuentran
las diferencias fisiolgicas entre los microorganismos inmovilizados y los de
crecimiento libre; tambin es atribuido a la concentracin de nutrientes alrededor
de la matriz, lo cual permite que los microorganismos sobrevivan a las altas
concentraciones de compuestos txicos.
Por ltimo, la matriz de exopolisacridos formada por los mismos
microorganismos, reduce la difusin de las sustancias txicas hacia el interior de
la biopelcula, gracias a la carga neutra o polianinica que puede tener el tipo de
exopolisacrido que sea, protegiendo as a los microorganismos que la componen.
(Lazarova y Manem 1995)(Naza, J., 2007)
II. TCNICAS DE INMOVILIZACIN DE MICROORGANISMOS.
Dependiendo de la forma en que se induce la inmovilizacin, esta se clasifica en:
inmovilizacin pasiva e inmovilizacin activa (Moreno, I., 2008)
1. Inmovilizacin pasiva
Algunos microorganismos de forma natural tienden a formar aglomerados o unirse
a superficies y crecer en ellas. Esta interaccin con superficies puede darse por la
presencia de estructuras celulares como la cpsula y las fimbrias en el caso de las
bacterias, y en el caso de los hongos sus propias hifas.
Durante la inmovilizacin pasiva puede darse un proceso de formacin de biofilms
el cual tan solo de un 15 - 25% corresponde a clulas vivas. El porcentaje restante
est compuesto por agua en su mayora, exopolisacridos (EPS), protenas y
cidos nucleicos; estos 3 ltimos compuestos son conocidos como sustancias
polimricas extracelulares (SPE). Son complejas estructuras, con sistemas de
canales de agua y aireacin, los cuales permiten el transporte de nutrientes,
desechos, oxgeno, y agua, entre otros. Gracias a estos canales se generan
diferentes gradientes de tensin de pH y oxgeno, lo cual permite que se
desarrollen micronichos y diversos grupos bacterianos (Korkoutas et al., 2004)
La formacin de la biopelcula se da en 4 pasos principalmente (Fig. 1). Durante el
primer paso, las clulas perciben una superficie de adherencia y forman una unin
activa reversible por medio de fimbrias, apndices, pilis, o protenas de superficie.
Durante la segunda fase se produce un incremento de la biomasa celular,
formando microcolonias alrededor del rea de adherencia, as como la formacin
de EPS permitiendo que sea una unin irreversible. La composicin del
exopolisacrido puede variar segn el tipo de microorganismo o las condiciones
ambientales, los principales componentes son alginato, N-acetil-glucosa-mina,
glucosa, y galactosa.
Durante el tercer paso, la biopelcula crece y madura, permitiendo la adhesin de
nuevas colonias bacterianas.
Luego de la maduracin, se da el ltimo paso, en el cual clulas individuales o
conglomerados se desprenden de la biopelcula por erosin, abrasin o
separacin para formar nuevos conglomerados. (Nazar, J., 2007)








Fig. 1 Formacin de biopelculas. Modificado de http://prometheus.mse.uiuc.edu/glossary/biofilms/

Gracias al mecanismo de quorum-sensing, se da una sealizacin al interior de
biopelcula, permitiendo que se mantengan las condiciones dentro de la misma.
Esta sealizacin se da mediante oli- gopptidos y acil-homoserina-lactonas.
(Nazar, J., 2007)
Este tipo de inmovilizacin ha sido usada en muchos ensayos en diferentes tipos
de matrices tanto naturales como sintticas.
Germeiner y colaboradores (1994), demostraron que los matrices orgnicos tienen
mayor adsorcin de la que pueden brindar las matrices sintticas. Esto se debe a
que los materiales orgnicos tienen mayor cantidad de grupos radicales como
amino, carboxil, entre otros; as como una mayor cantidad de nutrientes, lo cual
permite una adherencia y crecimiento ms eficaz. (Cohen, Y., 2001)
El estropajo, es una fibra vegetal proveniente del fruto de la Luffa, esta fibra es
obtenida una vez se ha secado el fruto y se ha retirado el pericarpio del fruto (Fig.
2).
El no ser txico, ni reactivo, as como su bajo costo, permite que sea usado
ampliamente en la inmovilizacin de microorganismos como Chlorella soroki-
niana, Porphyridium cruentrum, Penicillium cyclo- pium, Funalia trogii, entre
muchos, en la remocin de diversas sustancias txicas como metales,
colorantes, sustancias cloradas, entre otras. (Mazmanci y nyayar, 2005)
Mazamanci y colaboradores (2005) reportan que al inmovilizar Funalia trogii en
estropajo, y adicionarla una vez inmovilizada a una solucin con el colorante
Negro.
Reactivo 5, este fue degradado hasta un 99% luego de 4 das, sin necesidad de
adicionarle ninguna fuente de carbono o nitrgeno adicional. Igualmente estudios
realizados por Patta- nasupong y colaboradores (2004), reportan el uso de este
mismo soporte, as como el uso de fibras de coco para la inmovilizacin de un
consorcio bacteriano, el cual fue utilizado para la degradacin del fungicida
Carbendazim (metil-2-benzimidazol carbamato; MBC). En este estudio se encontr
que despus de 4 das de cultivo se logr obtener una degradacin del 95 y 80%
del MBC, en cada uno de los soportes respectivamente; un porcentaje de
degradacin muy superior al obtenido por el consorcio bacteriano en crecimiento
libre, el cual fue de tan solo un 12%.










Fig. 2 Esponja vegetal o estropajo (Luffa cilindrica). http://cgi.ebay.it/LUFFA-CILINDRICA

Castillo y Gonzlez (2007), reportan que al inmovilizar la biomasa de Trametes
versicolor en este mismo soporte, luego de cuatro das de exposicin a una
solucin del colorante Negro Reactivo 5, se logr una decoloracin del 92% y
genera una remocin de 69.27% luego de tres ciclos repetitivos durante 12 das.
Akhtar y colaboradores, (2004) reportan el uso del estropajo como soporte de
inmovilizacin para Chlorella sorokiniana, en la remocin del Niquel (II) de
soluciones acuosas, demostrando una efectividad superior a la mostrada por las
clulas libres en un 25%, luego de 20 minutos de exposicin. Asimismo, se ha
utilizado la fibra de Agave tequilana Weber en la inmovilizacin de hongos y
bacterias (Garzn, 2008) para la degradacin de colorantes textiles de diferentes
clases qumicas (Fig. 3).








Fig. 3 Microscopa de barrido electrnico para la inmovilizacin de Klebsiella sp sobre fibra de
Agave tequilana Weber. A 2000x.

En la degradacin de pesticidas como el DDT, Barragn y colaboradores (2007)
reportan el uso de granos de caf como matriz de inmovilizacin de diferentes
grupos bacterianos, los cuales crean micronichos microaeroflicos y anaerobios
dentro de los poros del caf, permitiendo as la degradacin total del DDT al no
producirse intermediarios como el DDD y el DDE (Fig. 4).









Fig. 4. Microfotografa mostrando la colonizacin bacteriana en los poros del grano verde de caf.

En el estudio realizado por Iqbal y Saeed (2006), Phanerochaete chrysosporium
fue inmovilizado en fibra de madera de papaya, con el fin de remover
Zn(II) de una solucin acuosa, donde luego de una hora removi 66.17mg/g del
metal, un 41.93% ms que lo removido por el hongo en crecimiento libre; luego de
un proceso de desercin se pudo recuperar un 99%, lo cual permiti la
reutilizacin del soporte y el microorganismo inmovilizado.
Otra aplicacin que puede darse para la biomasa inmovilizada en fibras naturales,
es en la utilizacin de esta en reactores de lecho empacado, en donde las
matrices con biomasa inmovilizada es usada para la degradacin de sustancias
txicas como clorofenoles. En investigaciones realizadas, se reporta el uso de
cubos de madera para la inmovilizacin de hongos de podredumbre blanca como
Phanerochaete chrysosporium, donde el 4-cloro- fenol, fue degradado en un rango
de 71.1 - 83 % en condiciones de ausencia de fuente de Carbono y Nitrgeno
adicional. (Jin, et al., 1998)
En cuanto a materiales sintticos diversos estudios han demostrado el uso
efectivo de diversos materiales (Fig. 5) como vidrio o cermicas porosas en
algunos casos es adicionado Fe+3 , o ser tratados con policationes, quitosan u
otros qumicos con el fin de facilitar la colonizacin del soporte (Cohen, Y., 2001).








Fig. 5 Materiales diversos utilizados en la inmovilizacin de biomasa.

Daz y colaboradores (2002), luego de realizar un estudio sobre la degradacin de
petrleo por un consorcio de bacterias halotolerantes inmovilizadas en fibras de
polipropileno, reportaron que el consorcio fue ms efectivo estando inmovilizado,
debido a la estabilidad brindada por el soporte y a que sus propiedades fsicas
permitieron un mayor aprovechamiento del petrleo. Tambin reportan como la
estabilidad del soporte o del consorcio no se vio afectada pese a las condiciones
de salinidad a las que fueron
sometidos.









Fig. 6 Microscopa de barrido electrnico para la inmovilizacin pasiva de T. versicolor en espuma
de poliuretano a 200x. (Castillo & Gonzlez, 2007)

Fava y colaboradores (1996), informan los resultados obtenidos al inmovilizar un
consorcio bacteriano identificado como ECO3, en tres diferentes soportes de
inmovilizacin, los cuales fueron perlas de vidrio, perlas de slice, y cubos de
poliuretano, con el fin de observar la declorinacin de bifenilos poco clorados.
Terminado el estudio demostraron que la declorinacin y degradacion de PCB
increment al inmovilizar el consorcio ECO3. De igual forma se demostr que la
biomasa inmovilizada en perlas de slice tiene mayor capacidad de declorinacin
que la inmovilizada en vidrio y poliuretano; as como tienen mayor capacidad de
reduccin del PCB que el poliuretano pero la misma capacidad que las perlas de
vidrio. Sin embargo la mayor concentracin de biomasa fue inmovilizada por las
perlas de vidrio, seguida por las perlas de slice y los cubos de poliuretano,
respectivamente; indicando que la cantidad de biomasa inmovilizada no tena una
relacin directa con la degradacin y declorinacin del PCB.
El poliuretano al igual que el polivinil, son materiales ampliamente usados en la
inmovilizacin de microorganismos gracias a su resistencia a condiciones
ambientales diferentes (Fig. 6). Se ha reportado el uso de estas sustancias en la
inmovilizacin de Scenedesmus obliquus para la remocin de metales en agua
(Urrutia, et al., 1995). Yamaguchi y colaboradores (1999) igualmente reportan el
uso de espuma de poliuretano en la inmovilizacin de Prototheca zopfii, en la
degradacin de hidrocarburos.
La espuma de polivinil fue usada por Doronina y colaboradores, (2006) en la
inmovilizacin de Pseudomonas esterophilus, para la biodegradacin de 510 ppm
de etilacetato y 520 ppm de metilace- tato, logrando una degradacin del 100% de
los dos compuestos luego de cuatro das de contacto de la solucin contaminada
con la biomasa inmovilizada.
Wang y Li, (2007) reportaba el uso de carbn activado y de una membrana de un
polmeto con el fin de inmovilizar una cepa aislada de suelo contaminado,
Pseudomonas putida. Se utiliz en un reactor, en el cual se puso en contacto con
el medio y contaminado con fenol. Luego de 24 horas el fenol fue removido y se
demostr que dicho proceso se haba dado en cuatro pasos. Adsorcin por el
soporte, remocin por biodegradacin y por absorcin de las membranas
celulares, biodegradacin por parte de las clulas inmovilizadas y las clulas en
suspensin, y por ltimo la bio-regeneracin, donde la concentracin de biomasa
en el reactor aument. La degradacin de fenoles fue superior al adicionar el
carbn activado granular, esto debido a que el carbn activado aumento la
capacidad de sorcin del fenol, as como facilito el transporte de este hacia las
clulas.
Mileva y colaboradores, (2008) reportan el uso de carbn activado para la
inmovilizacin de Klebsiella oxytoca 8391, en la biodegradacin de 1,2-
dicloroetano. Se reporta como la inmovilizacin de K. oxytoca 8391 en carbon
activado, aumenta notablemente la biodegradacin del compuesto txico, as
como brinda una mayor proteccin a el micro-organismo frente a las
concentraciones txicas de este mismo compuesto. Igualmente gracias al modelo
matemtico creado y probado en este estudio, demuestran que la liberacin de
clulas inmovilizadas es mnima y stas no realizan biodegradacin del 1,2-
dicloroetano.
El carbn activado tambin ha sido usado en biodegradacin de fenoles a
concentraciones de 0.2, 0.4, y 0.6 g/L en aguas residuales. La degradacin
mxima fue realizada por Pseudomonas pictorum, quin produjo un porcentaje de
degradacin de 95.2%, a un pH de 7.6, una concentracin de carbn de 1.12g/L, y
una concentracin de fenol de 0.229 g/L; este resultado se mantuvo constante,
demostrando que P. pictorum inmovilizada es capaz de mantener un alto nivel de
degradacin durante un largo tiempo de colonizacin. (Annadurai, et al., 2000)
Al realizar tratamiento de residuos en plantas de tratamiento industriales, uno de
los mtodos ms implementado es el uso de digestores anaerobios; sin embargo
para que sea un proceso realmente efectivo, es necesario mantener constante una
alta concentracin de biomasa. Dadas estas circunstancias, Garca y
colaboradores (1997), realizaron un estudio donde se evalu la efectividad de las
perlas de vidrio poroso (SIRAN) en un reactor de lecho fijo, usado a condiciones
termoflicas, para la degradacin de las vinazas del vino. Luego del estudio
llegaron a la conclusin de que gracias a las caractersticas del soporte como los
diferentes tamaos de poro que presenta, as como su amplia superficie favorecen
la adhesin del microorganismo al soporte. Observaron que durante la
colonizacin de este soporte, sin importar el microorganismo, se diferencia
claramente tres pasos: una fase de latencia, una de formacin de la biopelcula, y
una final de estabilizacin de la biopelcula. Sin embargo al presentarse un
sistema de alimentacin por cargas la fase de latencia inicial se ve reducida a
unas pocas horas y facilita la estabilizacin de la poblacin bacteriana, logrando
que la biomasa llegue a una concentracin del 93% de los slidos voltiles al
finalizar el proceso; este valor supera la inmovilizacin lograda en procesos de
inmovilizacin en (GAC) carbn activado granular reportados por Fox (1990).
Adicionalmente afirman que la colonizacin del soporte se dar de las partes ms
internas como grietas y poros, hacia la superficie; este proceso puede darse
gracias a que estas irregularidades de la superficie proporcionan proteccin a los
microorganismos facilitando la adhesin inicial de estos al soporte.
Reportes similares sobre la forma de colonizacin de los soportes, fueron dados
por Barragn y colaboradores (2007) donde indica, como la colonizacin sobre
GAC se dio desde la parte interna hacia la externa facilitando la creacin de micro-
ambiente anaerbicos (que facilitaron la degradacin de colorantes textiles hasta
su mineralizacin, al
darse ambientes aerobios y
anaerobios en el mismo soporte).








Fig 7. Crecimiento de Pseudomonas sp dentro de los poros de carbn activado a 10, 000x
(Barragn, 2004).

2. Inmovilizacin activa
Dentro de las tcnicas de inmovilizacin activa, o inmovilizacin artificial pueden
distinguirse el ataque qumico, atrapamiento en geles de polmeros naturales o
sintticos, y el uso de agentes floculantes. (Moreno-Garrido, 2008).
Los agentes floculantes se usaron inicialmente con el fin de sedimentar partculas
suspendidas, evitando as el uso de tcnicas como la centrifugacin. Actualmente
pueden usarse con el fin de permitir que clulas que por su naturaleza propia no
tienden a aglomerarse, lo hagan, permitiendo as el atrapamiento de otras
sustancias suspendidas en el medio (Kourkoutas, et al., 2004).
En cuanto a agentes floculantes, el quitosano ha sido, por excelencia, el
compuesto ms usado (Moreno-Garrido, 2008). El quitosano (Fig 8), es un
polisacrido lineal compuesto de cadenas distribuidas aleatoriamente de P-(1-4)
D-glucosamina (unidades deacetiladas) y N-acetil-D-glucosamina\ (unidad
acetilada), el cual es extrado de la quitina. Posee una carga positiva, y es soluble
e medios cidos. (Kean, et al,
2005)








Fig. 8 Estructura qumica de la Quitina y del Quito- sano.
http://www.tecsup.edu.pe/webuds/web/publicacion/publicacion7/index.htm

Presenta grupos aminos cargados positivamente, los cuales le permiten tener una
alta afinidad por partculas cargadas negativamente. Es un medio comnmente
usado en bioremediacin de aguas residuales con altos contenidos de metales a
travs de la inmovilizacin de algas (Moreno-Garrido, 2008) . Este tipo de
inmovilizacin es muy variable, factores como composicin de la pared celular, pH,
oxgeno disuelto y la composicin del medio, puede hacer que la cantidad de
clulas cambie.
El atrapamiento en una matriz porosa, es uno de los procesos ms utilizados. Este
puede darse en polmeros sintticos (resinas, acrillamidas, poliure- tanos),
protenas (gelatina, colgeno, albmina de huevo), o polisacridos naturales
(agares, carragrenanos o alginatos) (Moreno-Garrido, 2008).Consiste en la
inmovilizacin de clulas dentro de una matriz, la cual impide la difusin de las
clulas en el medio, pero permite el paso de metabolitos y nutrientes (Kourkoutas,
et al., 2004).
El procedimiento general para el atrapamiento de las molculas en gotas de
polmeros, consiste es suspender el microorganismo a inmovilizar en una solucin
lquida que contiene los monmeros de la macromolcula.
Para la gelificacin de esta mezcla se usan diferentes mtodos de acuerdo a la
naturaleza del polmero a usar. Entre los mtodos a usar se encuentran la
disminucin o aumento de temperatura, la gelificacin ionotrpica de macro-
molculas con cationes multivalentes, y otros mtodos qumicos como la adicin
de las gotas a un buffer enfriado en hielo o en diferentes soluciones qumicas
(Cohen, Y., 2001).
Este tipo de inmovilizacin, puede tener como problema que las clulas libres del
medio se ubiquen sobre la superficie de la esfera y degraden est permitiendo la
liberacin de la biomasa inmovilizada. Para solucionar este problema, se ha
implementado el uso de esferas de gel con un ncleo interno que contiene las
clulas inmovilizadas (Fig. 9) y una capa externa protectora que impide su
liberacin. (Ramon-Portugal et al., 2003) (Kourkoutas, et al., 2004).
Algunas de las ventajas que ofrece este tipo de inmovilizacin, es que permite la
inmovilizacin de una alta concentracin de biomasa, ofrece una alta resistencia a
sustancias txicas presentes en el medio, permite la inmovilizacin de diferentes
especies de microorganismos, separados fsicamente unos de otros, entre muchos
(Cohen, Y., 2001).
La inmovilizacin de clulas en este tipo de matrices ha sido ampliamente aplicada
en biorremediacin (Tabla 1).







Fig. 9 Modelo de inmovilizacin en matriz porosa.
Blanco y colaboradores (1999), describen el uso de un polmetro sinttico, el
polisulfano, y una resina epxica, para la inmovilizacin de clulas de Phormidium
laminosum, una cianobacteria con la capacidad de absorber metales pesados
como Cu (II), Ni (II) y Zn (II).
Bandhyopadhyay y colaboradores (1999), reportan el uso de gotas de alginato de
calcio, en la inmovilizacin de una cepa de Pseudomonas putida MTCC1194, para
la biodegradacin de fenol.
Chitiva y colaboradores (2003), tambin reportan el uso de Pseudomonas spp., en
la biodegradacin del fenol. Como matrices de inmovilizacin se usaron polmeros
de poliuretano (inmovilizacin pasiva), alginato y una mezcla con alginato y alcohol
poli- vinlico (inmovilizacin activa); estos se compararon entre s y contra un
cultivo de clulas libres. Gracias a la adicin de un polmero con grupos OH- en el
gel de alginato, y a su interaccin con los grupos amino de la pared celular del
microorganismo, se permiti una mayor concentracin celular e esta matriz, pero
la degradacin de fenol no se vio aumentada lo cual indica que la concentracin
de biomasa, no es proporcional a la biodegradacin la cual fue de 100% para
todos los matrices.
Las perlas de alginato han sido reportadas en la inmovilizacin de Pseudomonas
sp., para la degradacin de p-Cresol (O'reilly, et al. 1989), de etil- benceno
(Parameswarappa, et al., 2008).
La inmovilizacin de Pseudomonas luteola fue estudiada por Chang y
colaboradores (2001), en la degradacin del colorante Rojo reactivo 22. P. luteola,
fue inmovilizada en tres diferentes matrices, Alginato de calcio (CA), K-
carragenano (CGN) y poliacrilamida (PAA).
En comparacin con las clulas libres, las clulas de P.luteola inmovilizadas tienen
mayor resistencia a las variaciones de pH y oxgeno disuelto presentando adems
una mayor estabilidad al ser usadas durante varios ciclos de decoloracin.
Pese a que se presenta una buena decoloracin en el tratamiento realizado con
clulas inmovilizadas en alginato de calcio y K-carragenano, la inmovilizacin en
poliacrilamida, es mejor que en clulas libres, alginato de calcio y K-carragenano.
Pseudomonas putida, inmovilizada en alginato de calcio, carragenano y agar; fue
usada en la biode- gradacin de cianidas, cianatos y tiocianatos de amonio y
dixido de carbono, producidas en la minera y extraccin de metales. El mejor
ndice de biodegradacin, fue reportado por las clulas de P.putida inmovilizadas
en alginato de calcio, mineralizndose los compuestos hasta NH3 y CO2.
(Chapatwala, et al., 1998).
Tabla 1. Comparacin entre polmeros naturales (Carrageno y alginato) y
polmeros sintticos (PVA, polietilen glicol (PEG) y policarbomil sulfato (PCS))
usados en la inmovilizacin microbiana, aplicado en el tratamiento de aguas
residuales domsticas. (Modificado de Llenen, et al., 1996)
Las gotas de alginato de calcio, tambin pueden ser utilizadas en la inmovilizacin
de cepas fngicas.
Domnguez y colaboradores (2005) reportan el uso de esta matriz en la
inmovilizacin de Trametes versicolor, para la decoloracin de colorantes
sintticos textiles.
Los resultados obtenidos indican que luego de 40 das de operacin de la biomasa
inmovilizada en un reactor, las biopartculas mantuvieron su forma y consistencia y
no presentaron problemas de operacin. Igualmente reportaron altos porcentajes
de decoloracin en un tan solo 24 horas, 96% para ndigo y 69% para rojo de
fenol.
Ramsey y colaboradores usan este mismo tratamiento en la remocin de
Amaranto, Negro Reactivo 5, Azul Reactivo 19 y Negro Directo 22, donde la
decoloracin de las soluciones con estos compuestos fue casi completa; sin
embargo notaron que las perlas que fueron colonizadas podan fracturase
fcilmente.
Otro polmetro usado para la inmovilizacin de microorganismos por atrapamiento,
es el agar. El agar puede ser usado en esferas o en fibras.
Un consorcio de microorganismos conformado por un grupo bacteriano oxidador
del fenol, Methanoth-rix y un microorganismo metanognico degradador de H2 fue
inmovilizado en filamentos delgados de agar, previamente tratados con CO2 y N2
para hacer anaerbica la matriz.
Luego de tratar una solucin que contena una concentracin de fenol, durante un
mes, este fue convertido en CH4 y CO2. La inmovilizacin protegi el consorcio de
la toxicidad que altas concentraciones de fenol pueden producir; de esta forma
concentraciones de 500 ug/mL disminuy la tasa de degradacin de los
microorganismos en crecimiento libre, pero una concentracin de 1000 ug/mL
logr disminuir la tasa de degradacin del fenol en microorganismos inmovilizados.
Una concentracin de 2000 ug/mL logr inhibir totalmente la degradacin por parte
de las clulas libres, pero las clulas inmovilizadas aun a esa concentracin
presentaban un alto ndice de degradacin. (Dwyer, et al., 1986).
Gardin y colaboradores, (2001) reportan la coinmovilizacin muy efectiva de
microorganismos aerobios y anaerobios, en perlas de gel de k-
carragenano/gelatina (2%p/p), para la degradacin de 2, 4,6-triclorofenol (2, 4,6-
TCP).
El tratamiento se dio en un reactor USB, en anaerobiosis, donde se controlaron las
condiciones de temperatura y pH, entre otros.
El 2, 4,6-TCP fue degradado a 2,4-DCP y 4-CP. Las concentraciones residuales
de este ltimo, causaban la inhibicin de una mineralizacin completa.
En otro estudio realizado por Kabaivanova y colaboradores (2008), son utilizadas
perlas de agar como matriz para inmovilizar una cepa de Bacillus sp. Termfila,
con la cual lograron la degradacin de nitrilos, producidas por industrias
petroqumicas. Se logr una degradacin del 93% de la 4- cianopirimidina, a altas
temperaturas, a travs de una nitrilasa termoestable, demostrando la efectividad
de este mtodo de inmovilizacin para el tratamiento de aguas residuales
provenientes de las industrias petroqumicas.
Otros numerosos estudios han sido realizados para la biodegradacin de
sustancias txicas por mtodos de atrapamiento en geles. Por ejemplo el uso de
geles de poliacrilamida, alginato y agar para la inmovilizacin de clulas de
Pseudomonas sp. en la degradacin de naftaleno (Karegoudar, et al., 1998), o la
biodegradacin de pireno y fenantreno, por medio de Fusarium sp. inmovilizado en
polivi- nil y alginato (Li, et al., 2005).
El uso de matrices de inmovilizacin se ha convertido en una solucin a problemas
de toxicidad de sustancias, al proteger a los microorganismos degradadores por
medio de geles, ha mejorado la tasa de degradacin al hacer esta ms rpida,
incrementando el metabolismo de las clulas inmovilizadas; ha disminuido la
prdida de biomasa al permitir la adhesin o atrapamiento no reversible de sta:
son estas razones principalmente las que han permitido que cada da sea
incrementado el uso de estas tcnicas no solo en la biorremediacin, sino tambin
en diversos procesos ambientales e industriales, incentivando el estudio y trabajo
de los mismos. El uso de residuos agroindustriales en este proceso ofrece ciertas
ventaja sobre soportes convencionales, ya que al ser materiales de desecho son
economicos, se promueve el uso sustentable del recurso y pueden servir adems
como fuente de nutrientes a los microorganismos inmovilizados, incrementar en
algunos casos su actividad cataltica o la produccin de enzimas especficas.







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