Guia Laboratorio Reacciones Quimicas Naturales-20141

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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS, TECNOLOGA E INGENIERA
CONTENIDO DIDCTICO DEL CUSO: 401585 REACCIONES QUMICAS NATURALES

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA
ESCUELA DE CIENCIAS BSICAS, TECNOLOGA E INGENIERA
PROGRAMA DE QUMICA

GUA COMPONENTE PRCTICO

401585 REACCIONES QUMICAS NATURALES
Curso Metolgico de tres (3) crditos (con componente prctico presencial)

PATRICIA JOYCE PAMELA ZORRO MATEUS
(Directora Nacional)

LIC. DOLFFY RODRGUEZ
Acreditador

BOGOT
JULIO 2013

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1. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

Esta gua de laboratorio fue escrita por la Qumica Msc. Bioqumica Patricia Joyce Pamela
Zorro Mateus en el segundo semestre de 2012 y fue actualizada para el segundo
semestre de 2013. Quin actualmente se desempea como tutora de la UNAD en en
CEAD JAG. Este documento contiene prcticas de laboratorio de bioqumica con tcnicas
bsicas de biologa molcular y es suceptible a cambios que dependern de las
necesidades de los estudiantes.

Este documento hace parte del curso de bioqumica Reacciones Qumicas Naturales
que es ofertado para la carrera de Qumica de la UNAD como un complemento al curso
de bioqumica bsica. Como ya se mencion, la primera parte de este documento
contiene tcnicas bsicas en biologa molecular que deben ser conocidas por cualquier
investigador que se dedique al campo de la bioqumica. Tanto la estructura como el
contenido de est gua prctica han sido diseados segn las directrices impartidas por la
VIMMEP y la ECBTI.

El diseo de esta gua prctica fue acreditado por parte de la Escuela de Ciencias
Bsicas, Tecnologa e Ingenieras (ECBTI) por la Lic. en Qumica Dolffy Rodrguez,
docente de la UNAD, adscrita a la ECTBI - CEAD Arbelez, quien hizo aportes al presente
documento en el proceso de acreditacin.

Este documento se puede copiar, distribuir y comunicar pblicamente bajo las condiciones
siguientes:

Reconocimiento. Debe reconocer los crditos de la obra de la manera especificada por el
autor o el licenciador (pero no de una manera que sugiera que tiene su apoyo o apoyan el
uso que hace de su obra).
No comercial. No puede utilizar esta obra para fines comerciales.
Sin obras derivadas. No se puede alterar, transformar o generar una obra derivada a partir
de esta obra.
Al reutilizar o distribuir la obra, tiene que dejar bien claro los trminos de la licencia de
esta obra.
Alguna de estas condiciones pueden no aplicarse si se obtiene el permiso del titular de los
derechos de autor
Nada en esta menoscaba o restringe los derechos morales del autor.

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2. INDICE DE CONTENIDO

Pg.
INTRODUCCIN

PRCTICA No. 1. EXTRACCIN DE ADN DE TEJIDOS VEGETALES Y ANIMALES 8
PRCTICA No. 2. EFECTO HIPERCRMICO DEL ADN 15
PRCTICA No.3. FUENTE DE ROS EN ALIMENTOS: DETERMINACIN DE PERXIDO
EN ACEITES VEGETALES
21
PRCTICA No. 4. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE ALGUNOS ALIMENTOS 27
PRCTICA No. 5. DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE FENOLES EN MUESTRAS
NATURALES POR LA REACCIN DE TRAUTZ-SCHORIGIN
33
PRCTICA No. 6. ACTIVIDAD CATALTICA: IMPORTANCIA DE LOS COFACTORES

40
FUENTES DOCUMENTALES 46

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3. CARACTERSTICAS GENERALES

Introduccin Este documento hace parte del curso de Reacciones Qumicas Naturales, el
cual ha sido diseado como un complemento al curso de Bioqumica ofertado
para los estudiantes de la carrera de Qumica. Por lo tanto este contiene
prcticas que buscan ampliar el conocimiento de tcnicas que pueden
convertirse en conocimiento bsico para aquellos estudiantes que escojan
trabajar en el rea de la bioqumica. Este curso empieza con tcnicas bsicas
en biologa molecular para el estudio de cidos nuclicos, luego presenta
prcticas que tienen como temtica los radicales libres y sustancias
antioxidantes en los alimentos y finaliza con una prctica sobre las coenzimas
o cofactores enzimticos.

Esta gua ha sido diseada como componente prctico, el cual ser guiado
por un tutor y por ser prctica es de carcter presencial. Este proceso ser
desarrollado segn la programacin del CEAD o CCAV al que se encuentre
adcrito el estudiante. En los laboratorios los estudiantes desarrollarn las
prcticas, las cuales debern ser estudiadas y preparadas con anterioridad,
para asegurar el aprovechamiento de este documento, el cual si bien contar
con la guianza de un tutor, deber ser de inters directo del estudiante por lo
que el proceso de aprendizaje recaer principalmente en l. Con los
resultados obtenidos durante el laboratorio, los estudiantes desarrollaran un
informe en el que se prestar especial atencin al anlisis de resultados que
der ser soportado con los conocimientos tericos y contar con la literatura
debidamente referenciada.
Justificacin Esta gua de laboratorio se desarroll como complemento prctico del curso
de Reacciones Qumica Naturales y tiene como fin mostrar al estudiante
reacciones qumicas que suceden en los organismos como el metabolismo de
los cidos nuclicos, de las protenas, los pros y contras de las reacciones de
radicales libres y algunas molculas que son importantes para la transmisin
de seales y respuestas a estmulos en los organismos vivos. Por lo tanto
esta gua de laboratorio busca, como primera medida, introducir al estudiante
en tcnicas bsicas de extraccin y separacin de cidos nuclicos que son
indispensables para quienes quieren profundizar en bioqumica o
biotecnologa.

Este curso tambin busca que los estudiantes pongan en prctica los
conocimientos aprendidos en teora por medio de prcticas sencillas que
estimulan el pensamiento crtico para relacionar y analizar los resultados
obtenidos.
Intencionalidades
formativas
Propsito: Que los estudiantes evidencien algunos temas vistos en teora en
prcticas de laboratorio reales que les permitan abstraer el conocimiento a un
plano ms tangible.

Objetivo: Aplicar los conocimientos aprendidos sobre reacciones qumicas
que son bsicas para el funcionamiento de seres vivos e introducir al
estudiante en algunas tcnicas bsicas en los laboratios de bioqumica.

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Meta: El estudiante explicar reacciones qumicas que suceden en los
organismos a nivel molecular y lo relacionar con los resultados obtenidos a
nivel prctico y desarrollar hbilidades para el trabajo en laboratorios de
bioqumica.

Competencia: El estudiante conoce, intepreta, argumenta, analiza y concluye
de forma lgica sobre reacciones qumicas naturales que incluyen el
metabolismo de los cidos nuclicos, protenas, radicales libres y sobre
principios de transduccin de seales.
Denominacin de la
Prctica
PRCTICA No. 1. EXTRACCIN DE ADN DE TEJIDOS VEGETALES Y ANIMALES
PRCTICA No. 2. EFECTO HIPERCRMICO DEL ADN
PRCTICA No.3. FUENTES DE ROS EN ALIMENTOS: DETERMINACIN DE
PERXIDOS EN ACEITES VEGETALES
PRCTICA No. 4. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE ALGUNOS ALIMENTOS
PRCTICA No. 5. DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE FENOLES EN
MUESTRAS NATURALES POR LA REACCIN DE TRAUTZ-SCHORIGIN
PRCTICA No. 6. ACTIVIDAD CATALTICA: IMPORTANCIA DE LOS
COFACTORES
Nmero de horas 18
Porcentaje 30% (150 puntos/500 puntos)

Cada prctica tendr un valor de 50 puntos, los cuales sern evaluados as:

15 puntos correspondientes a los trabajos colaborativos que se
describen en las actividades 6, 10 y 14 en el curso en campus virtual;
para un total de 45 puntos. Estos trabajos sern un informe que los
estudiantes deben presentar en un formato de reporte rpido de la
revista cientfica Biochemistry. Para la presentacin de stos el
estudiante deber haber presentado la prctica de laboratorio ya que
gran parte ser sobre los resultados obtenidos en la prctica.

35 puntos correspondientes al desempeo en cada sesin de
laboratorio, sumando un total de 105 puntos en 3 sesiones de
laboratorio. Debido a que el curso en total tiene 6 prcticas, cada una
de ellas tendr un valor de 17,5 puntos los cuales sern evaluados
por el tutor de laboratorio segn la rbrica de evaluacin presentada
en esta gua.
Curso Evaluado por
proyecto
SI _ NO X

6


4. DESCRIPCIN DE PRCTICAS

A continuacin se muestras las normas de Bioseguridad que se deben seguir por el
personal del laboratorio en su comportamiento, manejo de reactivos y material de
laboratorio:

Comportamiento

1. Los estudiantes deben portar bata de laboratorio blanca, manga larga, que se pueda
cerar y cubra hasta cerca de las rodillas.
2. En el laboratorio, como en todo reciento cerrado, esta prohibido fumar.
3. Mientras trabaje en el laboratorio debe usar guantes de ltex o nitrilo.
4. Si trabaja con luz UV debe portar gafas de proteccin.
5. En el laboratorio no se puede comer (incluyendo masticar chicle), ni beber.
6. El personal que trabaja en el laboratorio debe portar pantaln y zapatos cubiertos
7. Mantenga en orden su rea de trabajo y trate de no llevar al laboratorio objetos
delicados. Trate de entrar al laboratorio slo con aquello que vaya a usar.
8. El cabello siempre debe estar recogido.
9. Evite el ingreso de personal ajeno a la prctica al laboratorio y no juegue mientras
que se encuentra en l.
10. Asegurese que al finalizar las prcticas las llaves del gas, agua y aire queden
cerradas, las luces y los equipos electrnicos apagados.
11. En caso de emergencia, trate de mantener la calma y buscar al personal capacitado
para que la atienda, sin escandalizarse o alterar a quienes trabajan con usted.
12. El estudiante debe conocer la gua de laboratorio y especficamente los
procedimientos que va a trabajar, los equipos que va a emplear para ste y la
peligrosidad d elos reactivos que va a usar.

Manejo de material de laboratorio

1. Asegure de que el material de laboratorio este limpio antes de iniciar la prctica.
2. Tenga en cuenta que hay varias prcticas en este laboratorio para las que se requiere
que el material se encuentre debidamente esterilizado y que se trabaje cerca a un
mechero o en una cabina de tuboo laminar para evitar contaminacin.
3. Limpie el rea de trabajo antes de iniciar el laboratorio. Si va a trabajar con material
estril, asegurese de limpiar con etanol al 70% el lugar de trabajo previamente.
4. Verifique el buen estado de material de laboratorio cuando ste sea entregado al
principio d ela prctica por el auxiliar de laboratorio, recuerde que despus de que
firme el formato de entrega, no se aceptan reclamos sobre el estado de material y
usted ser responsable de mantenerlo en buen estado durante la prctica.
5. En caso de que rompa algn material de vidrio, recjalos usando una escoba y un
recogedor, si se encuentran en el piso, o un pedazo de carton y una bandeja, si estn
sobre el mesn y avis al auxiliar de laboratorio para que los disponga en el lugar
destinado para el vidrio.
6. Antes de devolver el material al auxiliar de laboratorio, asegurese de que ste est
limpio y en buen estado.
7. Trate el material y los equipos del laboratorio con delicadeza, si no sabe como
funciona algn equipo no lo manipule.

7


8. El material de laboratorio que sea desechable y que se encuentre con residuos de
muestras biolgicas debe disponerse en la caneca roja de riesgo biolgicos, al igual
que los guantes que use durante la prctica.
9. El material que se encuentre en contacto con cultivos de microorganismos debe ser
lavado con hipoclorito o su contenido debe ser autoclavado y despus desechado.
10. Todo el material que se encuentre en contacto con ADN debe ser lavado con extran
1% y autoclavado antes de su uso.

Manejo de reactivos de laboratorio

1. Llegue a la prctica de laboratorio conociendo la peligrosidad de los reactivos con los
que va a trabajar.
2. En el laboratorio esta prohibido pipetear reactivos con la boca.
3. Siempre que use un reactivo asegurese de dejarlo bien cerrado cuando finalice
4. No mezcle, huela desde la botella o prueba ningn reactivo qumico an sabiendo
que ste es no peligroso.
5. Cuando trabaje con enzimas, sobre todo con la Taq polimerasa, dNTPs y ADN,
recuerde que estos son sumamente lbiles, por lo que debe tratar de mantenerlos el
mayor tiempo posible en hielo y cuando termin de usarlos de be devolverlos
rpidamente a -20C.
6. Cuando trabaj con intercaladores de ADN, recuerde que estos son extremadamente
cancergenos.
7. Asegurese de mantenerse limpio de cualquier reactivo, en caso de derrame no trate
de limpiar, llame al personal capacitado para que limpuen e inactiven la sustancia de
forma correcta.
8. Concentrese cuando trabaje con reactivos qumicos y este siempre alerta de
cualquier salpicadura.
9. Cuando vaya desechar algn reactivo o mezclas de reactivos qumicos al finalizar las
prcticas, lea las etiquetas de los frascos de residuos y desechlos en el frasco
correspondiente. Recuerde que ningn residuo se debe botar al desage sin pevia
autorizacin del personal capacitado.

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PRCTICA No. 1. EXTRACCIN DE ADN DE TEJIDOS VEGETALES Y ANIMALES

Tipo de Prctica

Presencial X Autodirigida Remota
Otra, Cul?
Porcentaje de evaluacin 27%
Horas de la Prctica 4
Temticas de la prctica Extraccin de cidos nuclicos
Intencionalidades formativas Propsito
Aplicar los conocimientos aprendidos sobre cidos nuclecos en la
extraccin de ADN de tejidos vegetales y animales.

Objetivo
Aprender a extraer cidos nuclecos de un tejido animal y uno
vegetal teniendo en cuenta sus propiedades.

Meta
El estudiante pondr en prctica los conocimientos aprendidos
sobre cidos nuclecos para la extraccin y determinacin de la
calidad del mismo.

Competencia
Comprender conceptos bsicos de los cidos nuclecos por medio
de la extraccin de stos.

Fundamentacin Terica
El ADN en todas las formas de vida consiste en polmeros de nucletidos que contienen principalmente
cuatro bases nitrogenadas: adenina, tiamina, guanina y citocina. Estos nucletidos se mantienen juntos
por medio de enlaces 3,5-fosfodister. El ADN existe en cadenas de doble hlice y su composicin de
bases nitrogenadas es caracterstica de cada especie. En las clulas procarioticas el ADN se encuentra
en un nico cromosoma circular de doble hlice y tiene un tamao de 500000 pb a 9000000 pb, tamao
en que en comparacin con las clulas eucarioticas es bastante menor.

Debido al gran tamao y la frgil naturaleza del ADN es necesario tener en cuenta varios factores para
asegurar obtenerlo casi intacto y en forma estable. Los factores experimentales que se deben considerar
se citan a continuacin:

pH: Los enlaces de hidrgeno entre las hebras complemetarias es estable a pH entre 4 y 10. Los
enlaces fosfodister en la columna vertebral del ADN son estables a pH entre 3 y 12. Los enlaces N-
glicosdicos a las bases purnicas (adenina y guanina) son hidralizados a valores de pH iguales o
menores a 3.

Temperatura: Hay una variacin considerable en la estabilidad a la temperatura de los puentes de
hidrgeno de la doble hlice, pero en la mayora de los casos la doble hlice empieza a desunirse en
un rango de temperatura de 80 a 90C. Los enlaces fosodister y N-glicosdicos son estables hasta los
100C.

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Fuerza Inica: El ADN es ms estable y soluble en soluciones salinas. Concentraciones de sales de
menos de 0.05M debilitan los puentes de hidrgeno entre las hebras complementarias.

Condiciones celulares: antes de que ADN sea liberado la membrana celular debe estar lisada. Los
mtodos para la lisis de sta varian segn el organismo. Por ejemplo en la levadura es necesario el
uso de ultrasonido, en bacterias Gram positivas suele ser necesario el uso de enzimas hidrolticas,
mientas que en bacterias Gram negativas, en la mayora de los casos, basta con un choque trmico.
Tambin se debe tener en cuenta que al interior y en la vecindad de las clulas suele haber presencia
de deoxiribonucleasas que degradan el ADN. Adems, se debe tener en cuenta que el ADN suele
estar asociado a protenas las cuales deben ser disociadas de ste durante el proceso de extraccin.

Estrs mecnico en el ADN: durante el proceso de extraccin del ADN, ste no siempre es tratado con
delicadeza, pues este se debe agitar y centrifigar en muchas ocasiones lo cual puede causar el
rompimiento de las cadenas de ADN. Aunque esto no causa prdida de la estructura secundaria, s
causa un acortamiento de las cadenas.

Descripcin de la Prctica
En esta prctica el estudiante aprender a hacer una extraccin de ADN de clulas de alimentos
comunes. Para lo cual, se romper la membrana celular por estrs mecnico y adicin de una solucin de
un detergente tamponada. Una vez se han roto las membranas celulares, el ADN y el resto del material
celular como las protenas saldrn de la clula. Las molculas de ADN son frgiles y se pueden romper
fcilmente, por lo que deben ser tratadas suavemente. El ADN es soluble en soluciones salinas y
precipita en etanol.

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Materiales

Bao de agua con hielo
Licuadora
Beaker de 150mL
Beaker de 250mL
Plancha de calentamiento
Agitador de vidrio
3 Tubos de ensayo para centrifuga de 16x150mm
6 Tubos de ensayo con tapa 16x150mm
6 pipetas Pasteur
1 pipeta de 10mL
1 Gradilla

Reactivos

Solucin buffer carbonatada: Disolver 0.75g NaCl, 2.5g de NaHCO
3
y 1mL de detergente lquido de
lavar la loza en 60mL de agua destilada (pH 8).
25mL de solucin acuosa 3M de acetato de sodio.
100mL de agua destilada.
50mL de etanol absoluto o 96% fro.

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25mL de HCl 0.1M
10mL de Biuret
1 banano
1 cebolla cabezona
lb de hgado de res
Clara de huevo

Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la prctica
No require software para la realizacin de la prctica.

Seguridad Industrial
Se referencian aspectos de seguridad en el laboratorio al inicio de la gua prctica del curso acadmico.
Presete especial atencin al trabajo con fenol, recuerde que este es muy corrosivo y puede causar
quemaduras cutneas por lo que debe tener cerca etanol para lavar con ste en caso de sufrir
quemaduras. Manejelo con precaucin y en cabina de extraccin, pues susvapores son altamente
txicos.

Metodologa

Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica.

El estudiante debe conocer las propiedades del ADN y de la clula que lo contiene para que pueda
relacionar el procedimiento seguido. Adems debe conocer la ficha de seguridad de los reactivos
empleados durante esta prctica.

Forma de trabajo:

Los estudiantes organizarn grupos de trabajo segn lo dispuesto en los respectivos CEAD. Una vez los
grupos de trabajo se hayan conformado, el tutor, quien dirijir el laboratorio, resolver inquietudes sobre
el laboratorio y dar indicaciones para su desarrollo.

Procedimiento:

Extraccin de ADN

1. Enfre los 50 mL de etanol y el buffer carbonato en un bao de agua hielo.
2. Disponga 5cm
3
de hgado crudo de res y 30mL de agua destila en una licuadora, lice por
intervalos cortos por un tiempo total de 20 a 30s.
3. Disponga el pure de hgado en un beaker y adicione la misma cantidad de solucin buffer carbonato
fra y agite con un agitador de vidrio por dos minutos.
4. Transfiera de 10 a 15mL de la mezcla a un tubo de ensayo y centrifugue por 3 minutos. El material
ms denso se ir al fondo del tubo y el ADN quedar en el sobrenadante.
5. Transfiera cerca de 5mL del sobrenadante a un tubo de ensayo y adicione 10 gotas de solucin

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acuosa de acetato de sodio 3 M y agite suavemente la solucin.
6. Cuidadosamente deje caer 10mL de etanol fro por las paredes del tubo con la mezcla anterior, de
tal manera que se generen dos capas. El ADN aparecer en la interfase entre las dos capas. Si se
obtienen hebras largas de ADN se pueden enrrollar en una pipeta Pasteur o en una varilla de vidrio
como spaguettis.
7. Repita el mismo procedimiento con la cebolla y el banano pero incremente el tiempo de licuado.
Caracterizacin del ADN obtenido
1. Localice una de las hebras de ADN obtenidas en un tubo de ensayo y adiciones 2 mL de agua
destilada.
2. En otro tubo de ensayo adicione 0,5mL de clara de huevo.
3. Mezcle los dos tubos suavemente
4. Disponga los dos tubos en un bao Mara de agua hirviendo, dejlos por 2 min., pasado este tiempo
retrelos con las pinzas para tubo.
5. Registre las observaciones.
6. Localice una de las hebras de ADN obtenidas en un tubo de ensayo con tapa y adiciones 2 mL de
agua destilada.
7. En otro tubo de ensayo con tapa adicione 0,5mL de clara de huevo.Adicione a cada uno de los
tubos anteriores 2 mL de HCl 0.1M
8. Tape los tubos de ensayo y agite por 2 min.
9. Registre sus observaciones
10. Localice una de las hebras de ADN obtenidas en un tubo de ensayo con tapa y adiciones 2 mL de
agua destilada.
11. En otro tubo de ensayo con tapa adicione 0,5mL de clara de huevo.
12. Adicione a cada tubo 5 gotas de reactivo de Biuret, tape y agite por 1min.
13. Registre las observaciones.
14. El ADN sobrante, debe ser guardado para la siguiente prctica de laboratorio.

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Sistema de Evaluacin
La nota definitiva de la prctica d elaboratorio se obtiene de la siguiente forma:

20% preinforme de la Prctica (individual): los preinformes deben contener el ttulo de la prctica, los
objetivos, el marco terico, en el que desarrollan los conceptos que deben conocer para realizar la
prctica y el diagrama de flujo de los procedimientos que se llevarn a cabo en el laboratorio con los
dibujos de los montajes, si los hay, que sern usados durante la prctica y la bibliografa empleada.
Adems el estudiante debe presentar una carpeta con las fichas de seguridad de los reactivos que usar
en el laboratorio.

30% Trabajo prctico (individual): Los laboratorios empezaran con un qz sobre el conocimiento
previo que los estudiantes deben tener de la prctica. Adems se evaluar el orden, la obediencia y el
manejo de conceptos durante la misma.

50% Informe de Laboratorio (Grupal): El informe ser una continuacin del preinforme y se calificar
uno grupal. Este debe contener ttulo de la prctica, los objetivos, el marco terico, diagramas de flujo de
los procedimientos que se llevarn a cabo en el laboratorio con los dibujos de los montajes, si los hay;
tabla de datos, clculos y reacciones, tabla de resultados, anlisis de resultados, conclusiones, preguntas
y ejercicio y bibliografa.

Los tutores de laboratorio estarn en la libertad de definir las fechas en las que los pre-informes e
informes sern entregados, as como las fechas en las que entregarn notas a sus estudiantes, siempre y
cuando stas se encuentren dentro del calendario definido para el curso.

Informe o productos a entregar

PREGUNTAS Y EJ ERCICIOS

1. Por qu se emplea detergente lquido para lavar loza en la solucin buffer carbonatada?, explque la
accin del detergente mediante un dibujo.

2. Para qu licua los tejidos y que sucede si los licua por mucho tiempo?

3. Por qu se sugiere un mayor tiempo de licuado para la cebolla que para el hgado?, Explquelo
estructuralmente.

4. Por qu el etanol precipita el ADN?

5. Qu tan puro se obtiene el ADN en esta prctica?, explque que impurezas puede tener y que
procedimiento podra seguir para obtenerlo ms puro.

6. Qu mtodos podra emplear para cuantificar el ADN obtenido? Nombre por lo menos dos y explque
su fundamento.

7. Por qu el tubo que contiene el ADN tratado con calor se ve translcido, mientras que el tubo que
contiene la clara de huevo se ve blanco?

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8. Qu diferencias observ entre el tubo que contiene el ADN tratado con 1 mL de HCl 0.1M y el tubo
que contiene la clara de huevo? Explque a que se deben estas diferencias.

9. Qu diferencias observo entre el ADN y la clara de huevo al reaccionar con el reactivo de Biuret?,
Desde el punto de vista qumico, a qu se debe esta diferencia?

Rbrica de evaluacin

RBRICA DE EVALUACIN DE LA PRCTICA DE LABORATORIO (Evaluada por el tutor de laboratorio)

QZ DE ENTRADA

PUNTAJE
TOTAL
El tutor de laboratorio har una evaluacin corta de entrada sobre los temas que el estudiante deba preparar
como parte del pre-informe. Esta evaluacin deber tener como mnimo dos preguntas.
2,5
TOTAL 2,5
PRE-INFORME
TEM PUNTAJE MINIMO PUNTAJE MEDIO PUNTAJE ALTO
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta errores
ortogrficos y/o de
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
redaccin y ortografa son
deficientes (0,25 puntos)
El documento est
ordenado y esta escrito
con ortografa y buena
redaccin (0,5 puntos)
0,5
TTULO
El ttulo no corresponde a la
prctica o no tiene ttulo
(0 puntos)
Tien un ttulo, pero es
demasiado general
(0,25 puntos)
El ttulo representa la
prctica d elaboratorio
(0,5 puntos)

0,5
OBJETIVOS
No hay objetivos o son
excesivamente generales
(0 puntos)
Presenta objetivos pero
son muy generales
(0,5 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
prctica de laboratorio a
desarrollar
(1 puntos)
1
MARCO TERICO
No presenta marco terico o
es muy insuficiente
(0 puntos)
Presenta marco terico
pero est incompleto
(0,75 puntos)
El marco terico incluye
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(1,5 puntos)
1,5
PROCEDIMIENTO
No presenta procedimiento
o copia el procedimiento de
la gua tal cual se presenta
en sta
(0 puntos)
Presenta el procedimiento
en diagrama de flujo pero
esta incompleto o no es
lgico
(0,75 puntos)
Se presenta el
procedimiento en diagram
de flujo, est completo y
sigue un orden lgico
(1,5 puntos)
1,5

TOTAL 5
INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta errores
ortogrficos y/o de
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
redaccin y ortografa son
deficientes (0,1 puntos)
El documento est
0,2

14


TTULO
El ttulo no corresponde a la
prctica o no tiene ttulo
(0 puntos)
demasiado general
(0,1 puntos)
(0,2 puntos)

0,2
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,25 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
desarrollar
(0,5 puntos)
0,5
INTRODUCCIN
No presenta marco terico o
es muy insuficiente
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,25 puntos)
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(0,5 puntos)
0,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el procedimiento
en diagrama de flujo pero
lgico
(0,25 puntos)
Se presenta el
procedimiento en
diagram de flujo, est
completo y sigue un
orden lgico
(0,5 puntos)
0,5
TABLAS DE DATOS
No se presentan tablas de
datos
(0 puntos)
Se presentan tablas de
datos pero no tienen ttulo
y estn incompletas
(0,5 puntos)
datos completas y con
ttulos
(1 puntos)
1
REACCIONES Y
CALCULOS
No se presentan reacciones
ni clculos
(0 puntos)
Se presentan reacciones y
clculos pero estn
incompletos
(0,5 puntos)
Se presentan
reacciones y clculos
completos
(1 puntos)
1
TABLAS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
resultados pero no tienen
ttulo y estn incompletas
(0,3 puntos)
resultados completas y
con ttulos
(0,6 puntos)
0,6
ANLISIS DE
RESULTADOS
No presenta anlisis de
resultados
(0 puntos)
Presenta anlisis de
resultados pero su
contenido no es
propiamente un anlisis
(1,5 puntos)
Presenta un anlisis de
resultados correcto
(2,5 puntos)
2,5
CONCLUSIONES
No presenta conclusiones o
no corresponden a los
objetivos planteados
(0 puntos)
Presenta conclusiones
pero son demasiado
generales
(0,5 puntos)
Las conclusiones se
encuentran escritas
segn los objetivos
(1 puntos)
1
PREGUNTAS Y
EJERCICIOS
No presenta preguntas y
ejercicios
(0 puntos)
Presenta preguntas y
ejercicios pero est
incompleto
(1,0 puntos)
ejercicios en su
totalidad
(1,5 puntos)
1,5
BIBLIOGRAFIA
No presenta bibliografa
(0 puntos)
Presenta bibliografa pero
no esta citada segn
normas APA
(0,3 puntos)
La bibliografa se
encuentra citada segn
normas APA
(0,5 puntos)
0,5

TOTAL 10

Retroalimentacin
El tutor responsable del curso ser el encargado de dar la retroalimentacin de los estudiantes segn la
rbrica de evaluacin presentada en este documento.

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PRCTICA No. 2. EFECTO HIPERCRMICO DEL ADN
Tipo de Prctica

Otra, Cul?
Temticas de la prctica Comportamiento del ADN con la temperatura
Mostrar el comportamiento del ADN con la temperatura y entender
el impacto que este comportamiento ha tenido para el desarrollo
de la vida e investigacin.

Objetivos
Observar el comportamiento del ADN con la temperatura y
realacionar ste con su estabilidad.

Meta
El estudiante aplicar lo aprendido en teora sobre el
comportamiento del ADN con la temperatura, dentro de sus
caractersticas ms importantes.

Competencia
Observar experimentalmente la estabilidad del ADN con la
temperatura y la relacionar con los procesos biolgicos y
snteticos que se han desarrollado.

Si las soluciones de ADN son tratadas con agentes desnaturalizantes (calor, bases o solventes
orgnicos) su absorcin en el espectro UV se incrementa. Esto se debe a que el ADN pierde la dobre
hlice y por lo tanto la absorbancia de las bases incrementa. Esto se puede evidenciar si se contruye
una curva de A
260(T)
/A
280(25C)
vs. Temperatura (C). Si en un experimento como ste se toman datos a
una temperatura entre 25 y 80C se evidencia que la diferencia en absorcin es muy baja, mientras que
a temperaturas mayores se observa una umento rpido de la absorbancia seguida por una A
260

constante. El incremento normal en absorbancia en esta ltima zona es de un 40% y ocurre en un
rango muy estrecho de temperatura. Esta curva es llamada curva de desnaturalizacin o de fusin.

El origen en el incremento de la absorcin es conocido como efecto hipercrmico y se basa en que los
cambios en absorbancia resultan de la transicin de una hebra ordenada en doble hlice a un estado
desnaturalizado, en el que se encuentran hebras desapareadas o apareadas por fragmentos al azar.
En esta prctica se estudiar el comportamiento del ADN con la temperatura, para lo que se segur la
absorbancia de ste a 260 nm. Este valor de absorbancia ser tomado como un indicativo de que tan
desnaturalizado est el ADN.

16



Material

Tubos de ensayo
Celdas de quarzo
Espectrofotmetro UV-Vis
Tubos Eppendorf
Termmetro de 0-110C
Beaker de 250 mL
Bao de hielo
Pipeta de 5mL graduada
Pipeteador
Micropipeta de 100-1000uL
Puntas azules

Reactivos

ADN extrado en la anterior prctica
10 mL de buffer TE pH 7.5


Se referencian aspectos de seguridad en el laboratorio al inicio de la gua prctica del curso
acadmico.

Metodologa


El estudiante debe conocer la teora sobre la estructura molecular del ADN y el efecto de la
temperatura en la absorcin de este a 260 nm en el ultravioleta o efecto hipercrmico.

Forma de trabajo:

Los estudiantes organizarn grupos de trabajo segn lo dispuesto en los respectivos CEAD. Una vez
los grupos de trabajo se hayan conformado, el tutor, quien dirijir el laboratorio, resolver inquietudes
sobre el laboratorio y dar indicaciones para su desarrollo. Es recomendable que los estudiantes sigan
en los mismos grupos de trabajo que se definieron para la primera prctica.

Procedimiento:

1. Diluya una alcuota de 1mL de solucin de ADN con 4.5mL de buffer TE, asegurese de que la

17


solucin quede bien homognea.

2. Transfiera algo de la solucin a una celda de cuarzo del espectrofotmetro y determine la
absorbancia a 260 nm. Si esta es mayor que 1, la solucin debe ser disuelta hasta que se
encuentre entre 0.5 y 1.

3. Determine la absorbancia de la muestra anterior a 280nm.

4. Prepare 5 mL de una solucin de ADN en buffer TE pH 7.5 a una concentracin cercana a 20
ug/mL. Determine la absorbancia de sta a 260 nm, la cual debe ser cercana a 0.4.

5. Transfiera 1.5mL de la anterior solucin de ADN en tubos eppendorf. Deje un tubo a temperatura
ambiente y ponga los otros dos en un bao de agua a 90C (bao mara con agua hirviendo) por
15 minutos.

6. Remueva los tubos del bao de agua a 90C, enfrie uno de los tubos rpidamente en un bao de
hielo y permita que el otro se enfrie a temperatura ambiente por un periodo cercano a una hora.

7. Mida las absorbancias finales de los tres tubos a 260 nm.

Tabla para registrar resultados:

Tabla No. 1.
MEDIO ABSORBANCIA A 260nm
Tubo a temperatura ambiente
Tubo calentado a 90C y enfriado
en bao de hielo

Tubo a 90C y enfriado lentamente

Adems el estudiante debe presentar una carpeta con las fichas de seguridad de los reactivos que
usar en el laboratorio.


uno grupal. Este debe contener ttulo de la prctica, los objetivos, el marco terico, diagramas de flujo
de los procedimientos que se llevarn a cabo en el laboratorio con los dibujos de los montajes, si los

18


hay; tabla de datos, clculos y reacciones, tabla de resultados, anlisis de resultados, conclusiones,
preguntas y ejercicio y bibliografa.

informes sern entregados, as como las fechas en las que entregarn notas a sus estudiantes,
siempre y cuando stas se encuentren dentro del calendario definido para el curso.



1. Qu le sucede al ADN cuando se calienta?

2. Cmo es el comportamiento del ADN con el calor? Explquelo mediante una grfica

3. A qu hace referencia la temperatura de fusin del ADN?

4. Prediga el impacto que tendran las siguientes condiciones sobre la temperatura de fusin de una
muestra de ADN nativo:
Buffer pH 13
Agua destilada
SDS 10%

5. A que se debe la diferencia en absorcin a 260 nm de las muestras de ADN tratadas?

6. En qu muestra se debe presentar la mayor absorcin a 260 nm y por qu?

7. Qu impacto tiene el descubrimiento del comportamiento del ADN con la temperatura en el
desarrollo d ela investigacin en el campo de la gentica?

Rbrica de evaluacin


QZ DE ENTRADA

PUNTAJE
TOTAL
2,5
TOTAL 2,5
PRE-INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
errores ortogrficos y/o de
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
redaccin y ortografa
son deficientes (0,25
puntos)
El documento est
0,5

19


TTULO
El ttulo no corresponde a
la prctica o no tiene ttulo
(0 puntos)
demasiado general
(0,25 puntos)
(0,5 puntos)

0,5
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,5 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
desarrollar
(1 puntos)
1
MARCO TERICO
No presenta marco terico
o es muy insuficiente
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,75 puntos)
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(1,5 puntos)
1,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
diagrama de flujo pero
lgico
(0,75 puntos)
Se presenta el
(1,5 puntos)
1,5

TOTAL 5
INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,2
TTULO
(0 puntos)
demasiado general
(0,1 puntos)
(0,2 puntos)

0,2
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,25 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
prctica de laboratorio
a desarrollar
(0,5 puntos)
0,5
INTRODUCCIN
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,25 puntos)
El marco terico
incluye todos los
conceptos necesarios
para el desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(0,5 puntos)
0,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,25 puntos)
Se presenta el
procedimiento en
completo y sigue un
orden lgico
(0,5 puntos)
0,5
TABLAS DE DATOS
datos
(0 puntos)
datos pero no tienen
(0,5 puntos)
ttulos
(1 puntos)
1
REACCIONES Y
CALCULOS
No se presentan
reacciones ni clculos
Se presentan reacciones
y clculos pero estn
Se presentan
1

20


(0 puntos) incompletos
(0,5 puntos)
completos
(1 puntos)
TABLAS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
(0,3 puntos)
con ttulos
(0,6 puntos)
0,6
ANLISIS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
Presenta anlisis de
resultados pero su
contenido no es
(1,5 puntos)
resultados correcto
(2,5 puntos)
2,5
CONCLUSIONES
No presenta conclusiones
o no corresponden a los
(0 puntos)
pero son demasiado
generales
(0,5 puntos)
Las conclusiones se
encuentran escritas
segn los objetivos
(1 puntos)
1
PREGUNTAS Y
EJERCICIOS
ejercicios
(0 puntos)
ejercicios pero est
incompleto
(1,0 puntos)
ejercicios en su
totalidad
(1,5 puntos)
1,5
BIBLIOGRAFIA
(0 puntos)
no esta citada segn
normas APA
(0,3 puntos)
La bibliografa se
normas APA
(0,5 puntos)
0,5

TOTAL 10

Retroalimentacin

21


PRCTICA No. 3. FUENTES DE ROS EN ALIMENTOS: DETERMINACIN DE PERXIDO EN
ACEITES VEGETALES

Tipo de Prctica

Otra, Cul?
Temticas de la prctica Determinacin de perxidos en aceites vegetales como especies
reactivas de oxgeno
Mostrar que los alimentos pueden ser fuentes de especies
reactivas de oxgeno.

Objetivo
Determinar el contenido de perxidos en aceite de cocina y
asociar este contenido a la estructura de los acidos grasos que
contienen y al nmero de veces que se ha usado el aceite.

Asociar el consumo de perxidos de fuentes vegetales con las
consecuencias bioqumicas que estos pueden tener en el
organismo.

Meta
Establecer asocianes entre la estructura qumica de un cido
graso y el tratamiento que ste ha recibido y la produccin de
peroxidos a partir de ste.

Competencia
El estudiante asocia la estructura y el nmero de veces que un
aceite vegetal ha sido usado con la cantidad de perxidos
producidos por ste .

El estudiante conoce los efectos a nivel bioqumico que los
perxidos consumidos de fuentes vegetales pueden tener.

Los organismos aerbicos producen especies reactivas de oxgeno (ROS, por sus siglas en ingls), las
cuales son producidas como consecuencia de la respiracin aerbica y la oxidacin del sustrato, como
por ejemplo la oxidacin de cidos grasos. Pequeas cantidades de ROS, incluyendo radicales
hidroxilo (OH), aniones superxido (O
2
-
) y perxido de hidrgeno; son constantemente generados en
organismos aerbicos en respuesta a estmulos internos y externos. Altas dosis o una remocin
inadecuada de los ROS causan estrs oxidativo, el cual debe causar malfuncionamiento metablico
severo y dao de las macromolculas biolgicas.

22


Los cidos grasos pueden ser una fuente importante de perxido de hidrgeno, pues son suceptibles a
autoxidacin, sobretodo si estos contienen insaturaciones. Para determinar si una muestra de aceite ha
sufrido oxidacin primaria se determina el contenido de perxidos como valor de perxido (POV), pues
estas molculas son intermedarios en el proceso de autoxidacin.

En esta determinacin, la muestra a ser valorada se disuelve en una mezcla de cloroformo: cido
actico 2:3. Luego se adiciona yoduro de potasio y el yodo libre desprendido de la reaccin entre los
perxidos y el yoduro, se titula con tiosulfato de sodio. La reaccin se da como sigue:

Se determinar el contenido de perxidos en seis muestras deferentes de aceite vegetal de cocina por
medio de su reaccin con yoduro de potasio y la posterior titulacin del yodo producido con tiosulfato
de sodio. Para luego determinar que muestra es mejor para consumo humano.


Materiales

Bureta 25 mL
Pinza para bureta con nuez
Soporte universal
Erlenmeyer de 250 mL
Beaker de 250 mL
Balanza analtica
Probeta de 50 mL
Agitador magntico
Plancha de agitacin
Pipeta de 1 mL con pipeteador
Calculadora

Reactivos

10 mL de aceite vegetal para fritar
10 mL de aceite vegetal para fritar que ha sido usado una vez
10 mL de aceite vegetal para fritar que ha sido usado dos vez
10 mL de aceite vegetal para fritar que ha sido usado tres veces
10 mL de aceite vegetal comercial rico en omegas sin usar
10 mL de aceite vegetal comercial rico en omegas usado una vez
Solucin saturada de yoduro de potasio
Mezcla cloroformo - cido actico 2:3
Agua destilada
Solucin de almidn 1%P/V
Tiosulfato de sodio 0.01M

23



acadmico.

Metodologa


El estudiante debe repasar conceptos sobre especies reactivas de oxgeno y su efecto en el
organismo, adems debe investigar cual es el POV permitido en los aceites que se encuentran
disponibles comercialmente segn NTC y como es el proceso de auto-oxidacin y de oxidacin
catalizada por calor de los cidos grasos.

Forma de trabajo:


Procedimiento:

1. Adicione 5 g de muestra en el erlenmeyer limpio y seco

2. Adicione 30 mL de la mezcla de cloroformo y cido actico y agite hasta formar una solucin

3. Adicione a la anterior solucin 0.5mL de solucin saturada de yoduro de potasio inmediatamente
tape el erlenmeyer y agite suavemente por un minuto.

4. Deje el frasco a la oscuridad por 5 minutos

5. Adicione 30 mL de agua destilada, ciere nuevamente y agite magnticamente.

6. Titular con tiosulfato de potasio hasta llegar a un amarillo tenue

7. Adicione 1 mL de almidn

8. Continu la titulacin con tiosulfato hasta desaparicin del color azul

9. Registre el volumen gastado y reemplace los datos en la siguiente formula para obtener el POV:

24


Siga este procedimiento con las seis muestras de aceites vegetales.

La nota definitiva de la prctica del laboratorio se obtiene de la siguiente forma:







1. Cmo sucede la auto-oxidacin de los cidos grasos y que productos se obtienen?

2. Qu factores pueden catalizar la oxidacin de los cidos grasos?

3. Cmo pueden afectar los perxidos producidos por la oxidacin de los cidos grasos el
organismo?

4. Qu cidos grasos contienen las muestras de aceite empleadas, sin usar, y cules de ellos
pueden oxidarse ms fcilmente?

5. En cul de las muestras de aceite vegetal obtuvo un mayor valor de prxidos, comparando entre
nmero de veces que se uso y tipo de aceite empleado?, sus resultados son los esperados?
Explque sus respuestas.

6. Cmo podra evitar o minimizar la oxidacin de los cidos grasos presentes en los aceites
vegetales empleados?

25


7. Para qu se determina el POV en la industria y por qu es importante?

8. De qu otra forma podra determinar que tan oxidado est un aceite?

Rbrica de evaluacin


QZ DE ENTRADA

PUNTAJE
TOTAL
2,5
TOTAL 2,5
PRE-INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,5
TTULO
(0 puntos)
demasiado general
(0,25 puntos)
(0,5 puntos)

0,5
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,5 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
desarrollar
(1 puntos)
1
MARCO TERICO
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,75 puntos)
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(1,5 puntos)
1,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,75 puntos)
Se presenta el
(1,5 puntos)
1,5

TOTAL 5
INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,2
TTULO El ttulo no corresponde a Tien un ttulo, pero es El ttulo representa la

26


(0 puntos)
demasiado general
(0,1 puntos)
(0,2 puntos)

0,2
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,25 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
a desarrollar
(0,5 puntos)
0,5
INTRODUCCIN
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,25 puntos)
El marco terico
incluye todos los
entendimiento d ela
prctica
(0,5 puntos)
0,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,25 puntos)
Se presenta el
procedimiento en
completo y sigue un
orden lgico
(0,5 puntos)
0,5
TABLAS DE DATOS
datos
(0 puntos)
(0,5 puntos)
ttulos
(1 puntos)
1
REACCIONES Y
CALCULOS
No se presentan
(0 puntos)
y clculos pero estn
incompletos
(0,5 puntos)
Se presentan
completos
(1 puntos)
1
TABLAS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
(0,3 puntos)
con ttulos
(0,6 puntos)
0,6
ANLISIS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
Presenta anlisis de
resultados pero su
contenido no es
(1,5 puntos)
resultados correcto
(2,5 puntos)
2,5
CONCLUSIONES
(0 puntos)
pero son demasiado
generales
(0,5 puntos)
Las conclusiones se
encuentran escritas
segn los objetivos
(1 puntos)
1
PREGUNTAS Y
EJERCICIOS
ejercicios
(0 puntos)
ejercicios pero est
incompleto
(1,0 puntos)
ejercicios en su
totalidad
(1,5 puntos)
1,5
BIBLIOGRAFIA
(0 puntos)
no esta citada segn
normas APA
(0,3 puntos)
La bibliografa se
normas APA
(0,5 puntos)
0,5

TOTAL 10

Retroalimentacin

27


PRCTICA No. 4. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE ALGUNOS ALIMENTOS

Tipo de Prctica

Otra, Cul?
Temticas de la prctica Determinacin de compuestos antioxidantes en alimentos
Evidenciar las propiedades antioxidantes de algunos alimentos y
vitaminas.

Objetivo
Determinar las propiedades antioxidantes de algunos alimentos
como t, cascara de toronja y vitaminas, por medio de la reaccin
con el pigmento quimioluminiscente proveniente de una barra
luminosa.

Meta
Comprobar la capacidad antioxidante de algunos alimentos y
vitaminas y asociarla con su funcin biolgica como supresores de
radicales libres.

Competencia
El estudiante comprende la importancia de los compuestos
antioxidantes como supresores del exceso de radicales libres en
el organismo y reconoce que los alimentos son una buena fuente
para la obtencin de stos.

Los organismos aerbicos poseemos sistemas de defensa antioxidantes que lidian con especies
reactivas de oxgeno (ROS, por sus siglas en ingls). Los antioxidantes son definidos como
compuestos orgnicos que son adicionados a materia orgnica oxidable para retardar su oxidacin y
en general, para prolongar el tiempo de vida til del sustrato.
El sistema de defensa del organismo contra los radicales libres son los anti-oxidantes, estos
interactan con los radicales libres antes de que molculas vitales sean daadas. Los antioxidantes
son fabricados al interior del cuerpo y tambin pueden ser obtenidos de los alimentos que los humanos
consumen como las frutas, vegetales, semillas, nueces, carnes y aceites. Hay un balance entre los
radicales libres y los antioxidantes producidos en el cuerpo humano, el cual debe ser entendido para
saber si los radicales libres son funcionales o disfuncionales en el cuerpo humano.
La capacidad antioxidante de los alimentos suele estudiarse por medio de reacciones que son seguidas
por compuestos quimioluminiscentes, lo que permite medir el cecrecimiento oxidativo de la

28


concentracin del pigmento fotomtricamente. Estos mtodos suelen ser caros y dispendiosos de llevar
a cabo, por lo anterior en este laboratorio se propone un mtodo para demostarar la capacidad
antioxidante usando la reaccin de quimioluminiscencia de las barras luminosas que suelen ser usados
como objetos de seguridad y emergencia.
Cuando una barra luminiscente se rompe, sta muestra una quimioluminiscencia brillante. Esta
luminiscencia resulta de la reaccin del perxido de hidrgeno, proveniente del vial de vidrio en la
barra, con el ster de fenil oxalato del tubo plstico. El ester es oxidado, produciendo dos molculas de
fenol y una molculad e 1,2-dioxoetanodiona. Esta ltima se descompone espontneamente en dixido
de carbono, liberando energa que excita los electrones del pigmento, lo cuales se relajan liberando un
foton. La longitud de onda del fotn, el color de la luz emitida, depende de la estructura del pigmento.

Se determinar la capacidad antioxidante de algunos alimentos comunes usando el contenido de las
barras luminiscentes como pigmentos quimioluminiscentes.

Materiales

Barras luminescentes (preferiblemente amarilla de 15mm X 150 mm)
Tubos de ensayo con tapa
Gradilla para los tubos de ensayo
Coladores de metal
Pipeta de 2 mL con pipeteador
Pipetas pasteur
Tijeras o cuchilla
Beaker de 250mL
Vidrio de reloj
Balanza analtica

Reactivos

T negro
T verde
Cascara de toronja
Pastillas de un multivitamnico
Pastilla de vitamina C
Pentano


29


Los aspectos bsicos de seguridad se presentan al inicio de esta gua. Como consideracin adicional,
se debe tener en cuenta que en esta prctica se trabajar con sustancias qumicas altamente irritantes
(pimentos fluorescentes d elas barras luminosas), peligrosas y nocivas (como el pentano), txicas
(como el dibutil-ptalato, usado como solvente en las barras luminosas), corrosivas (como el perxido de
hidrgeno) y altamente inflamables (como el pentano). Por lo tanto se recomienda que los estudiantes
usen los implementos de bioseguridad completos.

Metodologa

Los estudiantes deben revisar los conceptos sobre radicales libres y antioxidantes. Adems deben
buscar la reaccin de quimioluminiscencia que sucede entre el ster de fenil oxalato y el perxido y
deben tener claro lo que sucede con la quimioluminiscencia en presencia de antioxidantes y con el
cloruro de sodio.

Forma de trabajo:


Procedimiento:

1. Destape la barra luminosa (preferiblemente amarilla de 15mm X 150 mm), quiebre el vial de vidrio
y agite el contenido.
2. Corte el extremo de la barra luminosa.
3. Filtre el contenido de la barra luminosa a travez de una malla de metal y porcionela en dos tubos
de ensayo.
4. Repita este mismo procedimiento con otros dos tubos de ensayo, de tal modo que al final tendr 6
tubos de ensayo para hacer pruebas.
5. Adicione 2 mL de pentano a cada tubo de ensayo.
6. A un tubo de ensayo aada 1 g de muestra del alimento a probar (t negro, t verde, cascara de
toronja, pastillas de un multivitamnico y pastilla de vitamina C) y a otro tubo al mismo tiempo
adicione 1g de cloruro de sodio, el cual funciona como sustancia control.
7. Tape los tubos de ensayo y agite bien.
8. Compare la diferencia en emisin de la luz despus de 3 minutos, esta es ms fcil de distinguir si
la determinacin se hace en un cuarto oscuro.
9. Califique la intensidad de la luz de 0 a 5, siendo 5 la mayor emisin y 0 una emisin nula.

La nota definitiva de la prctica del laboratorio se obtiene de la siguiente forma:


30








1. Cul es la composicin qumica de las barras luminosas y cmo funcionan?

2. Escriba la reaccin qu sucede en las barras luminosas y que es responsable de la
quimioluminiscencia producida por estas

3. qu debe suceder con la quimioluminiscencia de una muestra de alimento comparada con el
blanco de NaCl, si el alimento contiene sustancias antioxidantes?

4. Segn los resultados obtenidos, qu alimento presenta ms actividad antioxidante? Explque su
respuesta.

5. Investigue cuales molculas en los alimentos probados tienen actividad antioxidante y relacinelo
con los resultados encontrados.

6. Por qu es importante la ingesta o fabricacin de antioxidantes para el funcionamiento de nuestro
organismo.

7. De qu otra forma podra medir la capacidad antioxidante de los alimentos?

31


Rbrica de evaluacin


QZ DE ENTRADA

PUNTAJE
TOTAL
El tutor de laboratorio har una evaluacin corta de entrada sobre los temas que el estudiante deba
preparar como parte del pre-informe. Esta evaluacin deber tener como mnimo dos preguntas.
2,5
TOTAL 2,5
PRE-INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,5
TTULO
(0 puntos)
demasiado general
(0,25 puntos)
(0,5 puntos)

0,5
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,5 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
a desarrollar
(1 puntos)
1
MARCO TERICO
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,75 puntos)
El marco terico
incluye todos los
entendimiento d ela
prctica
(1,5 puntos)
1,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,75 puntos)
Se presenta el
procedimiento en
completo y sigue un
orden lgico
(1,5 puntos)
1,5

TOTAL 5
INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,2
TTULO
(0 puntos)
demasiado general
(0,1 puntos)
(0,2 puntos)

0,2
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,25 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
0,5

32


a desarrollar
(0,5 puntos)
INTRODUCCIN
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,25 puntos)
El marco terico
incluye todos los
entendimiento d ela
prctica
(0,5 puntos)
0,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,25 puntos)
Se presenta el
procedimiento en
completo y sigue un
orden lgico
(0,5 puntos)
0,5
TABLAS DE DATOS
datos
(0 puntos)
(0,5 puntos)
ttulos
(1 puntos)
1
REACCIONES Y
CALCULOS
No se presentan
(0 puntos)
y clculos pero estn
incompletos
(0,5 puntos)
Se presentan
completos
(1 puntos)
1
TABLAS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
(0,3 puntos)
con ttulos
(0,6 puntos)
0,6
ANLISIS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
Presenta anlisis de
resultados pero su
contenido no es
(1,5 puntos)
resultados correcto
(2,5 puntos)
2,5
CONCLUSIONES
(0 puntos)
pero son demasiado
generales
(0,5 puntos)
Las conclusiones se
encuentran escritas
segn los objetivos
(1 puntos)
1
PREGUNTAS Y
EJERCICIOS
ejercicios
(0 puntos)
ejercicios pero est
incompleto
(1,0 puntos)
ejercicios en su
totalidad
(1,5 puntos)
1,5
BIBLIOGRAFIA
(0 puntos)
no esta citada segn
normas APA
(0,3 puntos)
La bibliografa se
normas APA
(0,5 puntos)
0,5

TOTAL 10
Retroalimentacin

33


PRCTICA No. 5. DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE FENOLES EN MUESTRAS NATURALES
POR LA REACCIN DE TRAUTZ-SCHORIGIN
Tipo de Prctica

Otra, Cul?
Temticas de la prctica Anlisis del contenido de polifenoles en t
Estudiar ms detenidamente la actividad antioxidante del t

Objetivo
Determinar la presencia de polifenoles en muestras de t para
evidenciar las sustancias responsables de su activiada
antooxidante

Meta
El estudiante evidenciar por medio de una reaccin
quimioluminescente la presencia de polifenoles en las hojas de t
molido

Competencia
El estudiante reconoce la importancia de compuestos atioxidantes
en alimentos consumidos cotidianamente como las hojas de t
molido para hacer infusiones.

El t es una de las bebidas ms ampliamente consumidas en el mundo, siendo la bebida ms
consumida despus del agua. En general el t se puede clasificar en tres tipos, que dependen
principalmente del grado de fermentacin, estos son: el t verde que no est fermentado, el t oolong
que est parcialmente fermentado y el t negro que est completamente fermentado. Muchos estudios
han mostrado la relacin entre el consumo de t y la prevencin de enfermedades, las cuales se
atribuyen principalmente al contenido de polifenoles y tambin a los metabolitos que las plantas usan
como sistema defensivo contra factores ambientales como la radiacin ultravioleta y los patgenos.

Los polifenoles en mayor concentracin en el t son los flavonoides, particularmente los flavanoles
(como por ejemplo las catequinas) y los cidos fenlicos. El t es adems una fuente importante de
cido glico, que es un cido hidrxibenzoico. El contenido de catequinas es del 30 al 42% de los
slidos solubles en agua en el t verde molido.

Una de las principals caractersticas de los polifenoles y los taninos es la presencia del grupo structural
pirogalol. Los cidos hmicos tambin incluyen compuestos que llevan el grupo funcional pirogalol o
cido glico. El pirogalol fue uno de los reactivos quimioluminiscentes ms olvidados, sus propiedades
fueron descubiertas por J. M. Eder en 1887 cuando se us como desarrollador fotogrfico, despus la
reaccin entre el pirogalol y el perxido de hidrgeno alcalino en presencia de formaldehdo produjo

34


una quimioluminiscencia roja relativamente fuerte. Esta reaccin se conoce como la reaccin de
Trautz-Schorigin y su caracterstica emisin de luz roja es debida a la generacin de especies de
oxgeno molecular en singlete O
2
*
.

Por lo anterior, las reacciones en las que se desarrolla quimioluminiscencia han sido usadas por mucho
tiempo usando lofina, luminol y oxalilo esteres. El oxgeno en singlete quimioluminiscente tambin ha
sido uno de los productos buscados en qumica analtica, pero normalmente se llega a l por medio del
uso de sustancias muy txicas como cloro gaseoso. La reaccin de Trautz-Schorigin ofrece una forma
inisual de producir el oxgeno en singlete quimioluminiscente. Sin embargo, la reaccin original es una
reaccin vigorosa que necesita el uso de reactivos muy peligrosos tales como el pirogalol y soluciones
concentradas de formaldehdo y perxido de hidrgeno.

El procedimiento descrito en esta gua lleva a cabo la reaccin de Trautz-Schorigin con un sustrato
mucho ms seguro que el pirogalol, como lo son los polifenoles que contiene el t verde. Los cidos
glico, tnico y hmico tambin pueden ser usados. En este experiemento se usa paraformaldehdo y
perxido de hidrgeno al 3% p/p, lo cual hace que la reaccin sea qumicamente ms segura que
cuando se usa formaldehdo concentrado y perxido de hidrgeno 30%, pues aunque en este ltimo
caso la quimioluminiscencia producida es ms brillante, la reaccin produce una efervescencia violenta
debida a la formacin de aerosoles nocivos. Este procedimiento no slo detecta el efecto de sustancias
antioxidantes como los fenoles en el t, sino que tambin muestra el impacto de antioxidantes bien
conocidos en el diario vivir como el cido ascrbico que reduce el estrs oxidativo celular, el cual esta
relacionado a la ocurrencia y empeoramiento de enferemedades y al envejecimiento.

Material

2 Beaker 150mL
2 Beaker 250mL
2 Beaker 400mL
Papel indicador universal de pH
Cuarto oscuro

Reactivos

1.0g de cido glico, tnico o hmico
10g de paraformaldehdo
20g de carbonato de sodio
150mL de perxido de hidrgeno 3% p/p


acadmico.

35


Metodologa

El estudiante debe revisar la teora sobre radicales libres y debe conocer la reaccin de Trautz-
Schorigin, el mecanismo que este sigue y debe estudiar como se produce la quimioluminiscencia.

Forma de trabajo:


Procedimiento:

Reaccin de Trautz-Schorigin con el polifenol patrn

1. En un beaker de 250mL adicione 0.2g de un polifenol patrn (cido glico, tnico o hmico)
2. Adicione 50mL de agua hirviendo, ponga sobre una plancha de calentamiento y agite
magnticamente hasta disolver el polifenol
3. Adicione 2g de paraformaldehdo y 5g de carbonato de sodio sin detener la agitacin magntica.
4. Deje enfriar la solucin caf resultante a temperatura ambiente en un bao de agua.
5. Verifique con el papel indicador que el pH de la solucin resultante sea aproximadamente de 11.
6. Transfiera la solucin caf a un beaker de 400mL
7. Lleve la solucin a un cuarto oscuro
8. Adicione 50mL de perxido de hidrgeno 3%p/p
9. Observe la quimioluminiscencia que dura de 5 a 10s.

Reaccin de Trautz-Schorigin con los polifenoles presentes en el t

10. En un beaker de 250mL adicione una bolsa de t (de aproximadamente 2g de t molido)
11. Adicione 200mL de agua hirviendo y permita que se forme la infusin por 3 minutos, ponga sobre
una plancha de calentamiento y agite magnticamente ocasionalmente.
12. Remueva la bolsa de t
13. Adicione 8g de paraformaldehdo y 20g de carbonato de sodio sin detener la agitacin magntica.
14. Deje enfriar la solucin caf resultante a temperatura ambiente en un bao de agua.
15. Verifique con el papel indicador que el pH de la solucin resultante sea aproximadamente de 11.
16. Transfiera 50mL de la solucin caf a un beaker de 400mL
17. Lleve la solucin a un cuarto oscuro
18. Adicione 50mL de perxido de hidrgeno 3%p/p
19. Observe la quimioluminiscencia que dura de 5 a 10s.

Efecto del cido ascrbico

20. Lleve a cabo el procedimiento de la reaccin de Trautz-Schorigin con los polifenoles presentes en
el t, como se describe arriba, hasta el punto 17.
21. Antes de adicional el perxido de hidrgeno 3% p/p, disuelva 1g de cido ascrbico en la solucin
caf.

36


22. Observe que la quimioluminiscencia es inhibida.

Efecto del cido brico

23. Lleve a cabo el procedimiento de la reaccin de Trautz-Schorigin con los polifenoles presentes en
el t, como se describe arriba, hasta el punto 17.
24. Antes de adicional el perxido de hidrgeno 3% p/p, disuelva 1g de cido brico en la solucin
caf.
25. Observe la quimioluminiscencia que se tarda unos segundos en ocurrir.

La nota definitiva de la prctica de laboratorio se obtiene de la siguiente forma:







1. Por qu los polifenoles tienen actividad antooxidante?

2. Escriba el mecanismo para la produccin de oxgeno en singlete por la oxidacin del pirogalol por el
perxido de hidrgeno.

3. Se sabe que cuando el t negro es tratado con la reaccin de Trautz-Schorigin, este no exhibe
quimioluminiscencia como el t verde. A qu se debe esta diferencia?
4. Por qu la solucin obtenida despus de adicionar el paraformaldehdo y el carbonato de sodio al
t es de color caf?

37


5. La reaccin de Trautz-Schorigin, se debe llevar a cabo en medio bsico, este medio se ha probado
empleando hidrxido de potasio y carbonato de sodio, este ltimo es preferido porque se logran
mejores resultados. Cmo podra explicar que el carbonato de sodio funcione mejor que el
hidrxido de potasio?

6. Cmo explica que el cido ascrbico inhiba la quimioluminiscencia causada por los polifenoles
presentes en el t?

7. Por qu la quimioluminiscencia sufre un retraso cuando la muestra es tratada con cido brico?

Rbrica de evaluacin


QZ DE ENTRADA

PUNTAJE
TOTAL
2,5
TOTAL 2,5
PRE-INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,5
TTULO
(0 puntos)
demasiado general
(0,25 puntos)
(0,5 puntos)

0,5
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,5 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
desarrollar
(1 puntos)
1
MARCO TERICO
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,75 puntos)
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(1,5 puntos)
1,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,75 puntos)
Se presenta el
(1,5 puntos)
1,5

TOTAL 5

38


INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,2
TTULO
(0 puntos)
demasiado general
(0,1 puntos)
(0,2 puntos)

0,2
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,25 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
desarrollar
(0,5 puntos)
0,5
INTRODUCCIN
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,25 puntos)
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(0,5 puntos)
0,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,25 puntos)
Se presenta el
(0,5 puntos)
0,5
TABLAS DE DATOS
datos
(0 puntos)
(0,5 puntos)
ttulos
(1 puntos)
1
REACCIONES Y
CALCULOS
No se presentan
(0 puntos)
y clculos pero estn
incompletos
(0,5 puntos)
y clculos completos
(1 puntos)
1
TABLAS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
(0,3 puntos)
con ttulos
(0,6 puntos)
0,6
ANLISIS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
Presenta anlisis de
resultados pero su
contenido no es
(1,5 puntos)
resultados correcto
(2,5 puntos)
2,5
CONCLUSIONES
(0 puntos)
pero son demasiado
generales
(0,5 puntos)
Las conclusiones se
encuentran escritas
segn los objetivos
(1 puntos)
1
PREGUNTAS Y
EJERCICIOS
ejercicios
(0 puntos)
ejercicios pero est
incompleto
(1,0 puntos)
ejercicios en su totalidad
(1,5 puntos)
1,5
BIBLIOGRAFIA
(0 puntos)
no esta citada segn
normas APA
(0,3 puntos)
La bibliografa se
normas APA
(0,5 puntos)
0,5

39


TOTAL 10

Retroalimentacin

40


PRCTICA No. 6. ACTIVIDAD CATALTICA: IMPORTANCIA DE LOS COFACTORES

Tipo de Prctica

Otra, Cul?
Temticas de la prctica Determinacin de compuestos antioxidantes en alimentos
Evidenciar la importancia de los cofactores en la actividad
cataltica

Objetivo
Determinar el efecto del cofactor grupo hemo en la reaccin de
descomposicin del perxido, cuando se cataliza con la enzima
perxidasa.

Meta
Comprobar la importancia de los cofactores y asociarla con su
funcin biolgica, especficamente en reacciones enzimticas para
descomposicin de radicales libres.

Competencia
El estudiante comprende la importancia de los compuestos
antioxidantes como supresores del exceso de radicales libres en
el organismo y reconoce que algunas de estas reacciones son
llevadas a cabo por enzimas.

El estudiante reconoce la importancia de los cofactores en la
actividad enzimtica.

Las coenzimas o cofactores son molculas orgnicas no protecas y estables al calor, que se unen a
las enzimas para formar haloenzimas, que son la forma catalticamente activa de las enzimas. Estas
molculas suelen tener pesos moleculares bajos y son indispensables para la catlisis ya que stas
pueden donar o aceptar grupos o electrones. Los cofactores enzimticos se diferencian de las enzimas,
principalmente, en que estos ltimo si se consumen durante la reaccin.

La descomposicin del perxido de hidrgeno, entre otras especies reactivas de oxgeno, es muy
importante en el organismo porque ste es uno de los productos secundarios producidos durante la
respiracin aerobia. En el organismo, las especies de reactivas de oxgeno son descompuestas por
sustancias con actividad antioxidante, como las vitaminas o por enzimas oxidoreductasas, como la
catalasa. La reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno, la cual es espontnea aunque no
rpida, ser catalizada por la enzima catalasa y por nitrato frrico.

41


Todas las enzimas oxidorreductasas requieren coenzimas. stas pueden actuar en forma soluble o
prostticamente. Entre las ms importantes estn los nucletidos de piridina (NAD+ y NADP+), flavina
(FMN y FAD), la ubiquinona, el cido ascrbico (vitamina C), el cido lipico, el glutatin, los clusters
de hierro-azufre y los grupos hemo. En la catalasa, el cofactor, consiste en cuatro grupos hemo
porfirnicos, que son estructuras de anillos orgnicos con un cofactor hierro en el centro. En la catalasa,
el hierro ayuda a acelerar el rompimiento del perxido de hidrgeno, pues ste, como otros metales,
afecta el ordenamiento electrnico de las molculas vecinas ayudndolas a pasar al estado de
transicin. En el organismo, la catalasa funciona como un antioxidante, pues el hierro en sta, la ayuda
a neutralizar otras sustancias oxidantes, adems del perxido, como radicales libres.

Se estudiar la importancia de la unin enzima cofactor en la actividad cataltica enzimtica de la
catalasa en la descomposicin del perxido de hidrgeno.

Materiales

Calorimetro
Termmetro con divisin mnima de un grado
Agitador magntico
Pinza para bureta con nuez
Soporte universal
Probeta de 25 mL
Probeta de 100mL
Beaker de 50 mL
Balanza
Frasco lavador con agua destilada
Microesptula

Reactivos

Nitrato ferrico 0.5M
Perxido de hidrgeno 3% p/p
Buffer pH 7.00
Levadura para hornear


acadmico.

42


Metodologa


El estudiante debe revisar el tema de enzimas y cofactores, leer sobre la actividad catlitica de la
catalasa y su importancia en la reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno que se
encuentra presente en el organismo. Adems debe investigar cual es el cofactor de la catalasa y que
funcin cumple.

Forma de trabajo:


Procedimiento:

Descomposicin del perxido catalizada por el nitrato frrico

1. Ponga la plancha de calentamiento sobre el soporte universal, asegurese de que la plancha no
est calentando y ponga sobre sta el calormetro
2. Ubique el agitador magntico en el calormetro y adicione 75 mL de perxido de hidrgeno al 3%
3. Cierre el calormetro y ubique el termmetro, teniendo cuidado de que no pegue con el agitador
cuando empiece la agitacin. Asegure el termmetro con una pinza para bureta
4. Agite a 250 rpm y tome la temperatura por 2 min, cada 30 s para asegurarse de que el perxido
est atemperatura ambiente.
5. Adicione 15 mL de nitrato frrico 0.5M, cierre el calorimetro y mida la temperatura cada 30 s por 10
minutos.
6. Grafique los resultados obtenidos como tiempo vs. temperatura

Descomposicin del perxido catalizada por la catalasa

1. Ponga la plancha de calentamiento sobre el soporte universal, asegurese de que la plancha no
est calentando y ponga sobre sta el calormetro
2. Ubique el agitador magntico en el calormetro y adicione 75 mL de perxido de hidrgeno al 3%
3. Cierre el calormetro y ubique el termmetro, teniendo cuidado de que no pegue con el agitador
cuando empiece la agitacin. Asegure el termmetro con una pinza para bureta
4. Agite a 250 rpm y tome la temperatura por 2 min, cada 30 s para asegurarse de que el perxido
est atemperatura ambiente.
5. Mezcle 0.50 g de levadura para hornear con 5 mL de solucin buffer pH 7.00 y 10 mL de agua
6. Adicione esta solucin al calorimetro, cierre el calorimetro y mida la temperatura cada 30 s por 10
minutos.
7. Grafique los resultados obtenidos en el mismo plano cartesiano del anterior procedimiento

Consigne los datos recogidos en una tabla como la siguiente:

43


Tabla No. 1.
REACCIN CATALIZADA POR CATALASA REACCIN CATALIZADA POR NITRATO
FERRICO
Tiempo (s) Temperatura (C) Tiempo (s) Temperatura (C)









1. Con los datos recolectados en la tabla 1 construya una grafica en papel milimetrado de
temperatura (C) vs. Tiempo (s) para la reaccin de descomposicin del perxido de hidrgeno
catalizada por la catalasa y el nitrato frrico, construya las dos graficas en el mismo plano
cartesiano.

2. De la grfica anterior, Cul de las dos reacciones es ms rpida y por qu?

3. Qu otros cofactores conoce a nivel biolgico, en qu reacciones intervienen y que papel
desempean?

44


4. Qu le sucede a una enzima si no est acompaada de un cofactor?

5. Cmo podra mejorar est prctica de laboratorio?

Rbrica de evaluacin


QZ DE ENTRADA

PUNTAJE
TOTAL
2,5
TOTAL 2,5
PRE-INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,5
TTULO
(0 puntos)
demasiado general
(0,25 puntos)
(0,5 puntos)

0,5
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,5 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
desarrollar
(1 puntos)
1
MARCO TERICO
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,75 puntos)
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(1,5 puntos)
1,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,75 puntos)
Se presenta el
(1,5 puntos)
1,5

TOTAL 5
INFORME
PUNTAJE
TOTAL
PRESENTACIN
GENERAL
El documento no est
ordenado y presenta
redaccin graves
(0 puntos)
El documento est
ordenada pero la
puntos)
El documento est
0,2
TTULO El ttulo no corresponde a Tien un ttulo, pero es El ttulo representa la

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(0 puntos)
demasiado general
(0,1 puntos)
(0,2 puntos)

0,2
OBJETIVOS
(0 puntos)
son muy generales
(0,25 puntos)
Los objetivos
corresponden a la
desarrollar
(0,5 puntos)
0,5
INTRODUCCIN
(0 puntos)
pero est incompleto
(0,25 puntos)
todos los conceptos
necesarios para el
desarrollo y
entendimiento d ela
prctica
(0,5 puntos)
0,5
PROCEDIMIENTO
en sta
(0 puntos)
Presenta el
procedimiento en
lgico
(0,25 puntos)
Se presenta el
(0,5 puntos)
0,5
TABLAS DE DATOS
datos
(0 puntos)
(0,5 puntos)
ttulos
(1 puntos)
1
REACCIONES Y
CALCULOS
No se presentan
(0 puntos)
y clculos pero estn
incompletos
(0,5 puntos)
y clculos completos
(1 puntos)
1
TABLAS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
(0,3 puntos)
con ttulos
(0,6 puntos)
0,6
ANLISIS DE
RESULTADOS
resultados
(0 puntos)
Presenta anlisis de
resultados pero su
contenido no es
(1,5 puntos)
resultados correcto
(2,5 puntos)
2,5
CONCLUSIONES
(0 puntos)
pero son demasiado
generales
(0,5 puntos)
Las conclusiones se
encuentran escritas
segn los objetivos
(1 puntos)
1
PREGUNTAS Y
EJERCICIOS
ejercicios
(0 puntos)
ejercicios pero est
incompleto
(1,0 puntos)
ejercicios en su totalidad
(1,5 puntos)
1,5
BIBLIOGRAFIA
(0 puntos)
no esta citada segn
normas APA
(0,3 puntos)
La bibliografa se
normas APA
(0,5 puntos)
0,5

TOTAL 10
Retroalimentacin

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Generales
David L. Nelson, Michael M. Cox, Claudi M.Cuchillo. (2005). Lehninger - Principios de
Bioqumica. Cuarta edicin. Editorial Omega.

Horton, Moran, Scrimgeour, Perry, R. Principios de Bioqumica, 4 Edicin. Pg. 11 y 12.
Pearson, Mxico 2008.
Koolman, J., & Roehm, K.-H. (2005). Color Atlas of Biochemistry. Second edition. New
York: Thieme.
Boyer R. Modern Experimental Biochemistry. (2000).Third edition. Benjamin Cummings.
Prctica 1: Extraccin de ADN de tejidos vegetales y animales
Lpez-Valentn, D., Pulido-Cordoba, L., & Chavez-Reyes, A. (2012). An Easy Way To
Distinguish DNA from Protein: An Experiment for General Chemistry. Journal of Chemical
Education, 89(10), 13331335. doi:10.1021/ed200686e
Nordell, K. J., Jackelen, A. L., Condren, S. M., Lisensky, G. C., & Ellis, A. B. (1999). Liver
and Onions: DNA Extraction from Animal and Plant Tissues Liver and Onions: DNA
Extraction from Animal and Plant Tissues, 76(3).
Prctica 2: Efecto hipercrmico del ADN
Boyer R. Modern Experimental Biochemistry. (2000).Third edition. Benjamin Cummings.
Pg. 399-414
Prctica 3: Fuente de ROS en alimentos: Determinacin de perxidos en aceites
vegetales.
KEM aplication note. Pexide value of oleica cid. Recuperado el 10 de octubre de 2012
de: http://www.kyoto-kem.com/en/pdf/industry/FatVegetableOil/ETIB-99309.pdf
Prctica 4: Capacidad antioxidante de algunos alimentos
Wieczorek, R. R., Sommer, K., Chemie, D. D., & Bochum, R. (2011). Demonstrating the
Antioxidative Capacity of Substances with Lightsticks, 88(4).
Prctica 5: Determinacin del contenido de fenoles en muestras naturales por la
reaccin de Trautz-Schorigin
Panzarasa, G., Sparnacci, K., Michel, V. T., Orientale, P., & Avogadro, A. (2012). Glowing
Teacup Demonstration: TrautzSchorigin Reaction of Natural Polyphenols.

47


Prctica 6: Actividad cataltica: Importancia de los cofactores

Marzzacco C. 1999. The Enthalpy of Decomposition of Hydrogen Peroxide: A General
Chemistry Calorimetry Experiment. Journal of Chemical Education. V.76(11). P. 1517-
1518.

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