PRACRICA 1

PREPARACION DE SOLUCIONES
El propósito de esta práctica es ayudar al estudiante a entender los principios de
preparación de las soluciones. Al final de esta práctica el estudiante será capaz de
preparar soluciones porcentuales, normales y molares.

SOLUCIONES: La concentración de una solución se define como la masa de soluto

disuelta en una unidad de solvente o solución.
SOLUCION VALORADA: Es una solución donde se expresa cuantitativamente la
relación entre soluto y solvente o solución. Las soluciones generalmente se clasifican
en:

• Porcentual
• Molaridad
• Molalidad
• Normalidad o formalidad

Para poder realizar matemáticamente estas soluciones debemos conocer los factores de
conversión y la regla de 3 simple.

Unidad de peso Unidad de volumen Regla de tres simple

1 gr =1000 mg 1L = 1000 ml Base para las conversiones:
1 mg =1000 ug 1ml= 1000 ul 1 gr=1000 mg
1 ug =1000 ng =50 mg ¿a cuanto equivale en gr?
1 ng =1000 pgr (50 mg) (1 gr) / 1000 mg
1 p =1000 f = 0.05 gr

SOLUCIONES PORCENTUALES
PROCIENTO DE PESO: Se define como los gramos (gr) de soluto disuelto en 100 gr
de solución
% Peso: gr de soluto * 100 gr de solución
gr de solución: gr de soluto más mililitros de solvente

PORCIENTO DE VOLUMEN: Se define como los mililitros (ml) de soluto disuelto en

100 ml de solución
%V=ml de soluto * 100 ml de solución
ml de solución: ml de soluto más mililitros de solvente

PORCIENTO PESO/VOLUMEN: Se define como los gramos de soluto disuelto en

100ml de solución
% P/V: gr de soluto * 100 ml de solución

SOLUCIONES MOLES
MOLARIDAD: Moles de solutos en un litro de solución

M= n/V n= gr/PM
M= Molaridad
n= numero de moles
V= Volumen de litros
 SOLUCIONES NORMALES
NORMALIDAD: Numero de equivalentes-gramos de soluto contenido en un litro de
solución

N= gr/peq/V
#e, H o OH
Por ejemplo: Peq Mg(OH)2= 58
Peq Al(OH)3= 78
Problemas:
1. Si tenemos 50 ug/ul ¿A cuantos ng/ul equivalen?
2. La concentración del estándar de DNA=0.578 ug/ul para una reacción se
requiere 1ug en un volumen final de 50ul ¿Cuánta ADN tengo que agregar ala
solución?
3. La enzima Kpn II viene a una concentración de 8-12U/ul para determinar la
actividad enzimática la reacción requiere 1U ¿Cuánta enzima tengo que agregar?
4. De acuerdo a los siguientes datos: DNA=0.578 ug/ul, Buffer (10X)= 10ul, Xho=
5-10 u/ul se requiere hacer una reacción a:
Vf= 50/ul
V= 1ul/u
Buffer concentración final 1X
Xho II= 1u
Agua= ¿?
¿Cuáles son las cantidades que utilizaremos cada uno de cada uno de los
reactivos?
5. En una reacción tengo que agregar 1 U del estándar de la enzima, la
concentración de estándar es de 10U/ul. ¿Cuántos ul tengo que tomar del
estándar? Si la cantidad a tomar es muy pequeña tengo que hace runa dilución
¿Cuál seria la dilución?
6. ¿Qué normalidad tenia una solución si 600 ml de la misma tiene 60 gr de Acido
fosforito?
7. Prepare una solución de acido Sulfúrico 0.5 N 500ml
8. Prepare una solución de HCl 2N 350ml
9. ¿Qué molaridad tiene una solución de Acido Sulfúrico si 600 ml de solución
contiene 50gr de acido?
10. Se requiere preparar 50ml al 10% de los siguientes ácidos:
HCl= 35%
HNO3= 60%
¿Qué volumen de cada acido ocupara?
11. Tenemos una solución al 2% de acetato de sodio, pero necesito 50 ml de acetato
de sodio 0.5% ¿Qué cantidad necesita de acetato de sodio al 20%?
12. ¿Qué cantidad de NaOH requiero para preparar 200 ml al 10%?
13. Si disuelvo 30 gr de glucosa en 100ml de H2O ¿Cuál es el % de glucosa en la
solución?
14. A partir de Tris-borato ADTA (TE) 10X prepare 1 L de TBE 0.5X
15. A partir de Tris-EDTA (TE) 100X prepare 200ml de TE 1X
16. Prepare un gel de agarosa 0.8% en TBE 0.5 X, prepare 100ml
17. Prepare un gel de agarosa 0.8% en TBE 0.5 X, prepare 200ml
18. A partir de un stock de Syber gold a 10000 X, prepare 1 ml 1 X
 19. Prepare Buffer de corrimiento de electroforesis (jugo azul), con las siguientes
concentraciones: 0.25% de azul de bromofenol, 0.25% de xiñene cyanol y 30%
de glicerol. El resto de agua para 100ml
20. Prepare 50ml de proteinasa K a 20 mg/ml
21. Prepare 1 L de etanol al 70%
22. Prepare 180 ml de dodecilsulfato de sodio (SDS) al 20%
23. Prepare 10ml de bromuro de etidio 10mg/ml
24. Haga los cálculos para saber cuanto se requiere para una reacción de PCR con
los siguientes datos
• DNA Stock 50 ng

Concentración Inicial Concentración final 1X

DNA 50 ng
Buffer (10X) 1x
MgCl2 (25mM) 1.5 mM
dNTPs (10 mM) 0.2 m
Iniciador 5´ (20 uM) 0.3 uM
Iniciador 3´ (20 uM) 0.3 uM
Taq (5U/ul) 0.2 U/ul
H2O -
Vol final 25 ul

PRACTICA 2
MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y
CELULAR
Objetivo: Conocerá los equipos mas comunes de laboratorio de biología molecular
Reactivos y Equipos:
• Balanza analítica
• Minicentrifuga Refrigerada
• Termomixer
• Transiluminador
• Campanas de flujo laminar
• Incubadoras
• PH metro
• Purificador de H2O mili-Q
• Acetato de sodio
• Beffer PH 7 y 10
• Vaso de precipitado
• Probeta de 50 ml

Procedimiento: Preparar 10ml de solución de acetato de sodio 1M y ajustar a el PH de

5.5, utilizar agua mili-Q en el experimento

Demostración teórica del uso de equipos de laboratorio

• Campana de flujo laminar
• Transiluminados
• Termomixer
 • Incubadoras
• Minicentrifuga refrigerada
Observaciones y resultados

PRACTICA 4
OBTENCIÓN Y PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
La función biológica de los ácidos nucleicos, especialmente el DNA es la de contener la
información hereditaria. En 1953 Watson y Crick resolvieron su estructura molecular,
dando comienzo una nueva era en la bioquímica y la biología.

El DNA se encuentra en el interior de núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a

proteínas para formar la cromatina. Para extraerlo es necesario romper las células para
separar el núcleo, romper este para liberar el DNA, separarlo de las proteínas y
precipitarlo para extraerlo de la solución.

Desde que se considera al DNA como el material genético se definieron 3 funciones

principales:
1. Almacén de información genética. El ADN contiene las instrucciones precisas
que definen las características hereditarias en un individuo.
2. Autoduplicación y Herencia. El ADN contiene tamben toda la información para
su autoduplicación, ya que es el medio de transmitir las instrucciones a las
células hijas o de un individuo a su descendencia
3. Expresión del mensaje genético

El estudio del DNA ha llevado a importantes avances no solo en el área de biología

molecular, también a dado lugar a avances en la medicina y las ciencias de la salud.
Gracias a los estudios sobre esta molécula se sabe que muchas enfermedades tienen
una base genética y pueden en algunos casos prevenirse o corregirse. Además del
uso para el diagnostico de enfermedades, es una herramienta en la genética forense
y nos permite asignar paternidad y parentesco.

El primer paso para el estudio del ADN es extráelo de las células, como sabemos el
ADN se encuentra en el núcleo por lo que primero debemos quitar todos los
componentes celulares hasta llegar a el, posteriormente retirar las histonas y dejar la
molécula libre para seguir con el análisis.

Existen varios métodos ya bien conocidos de extracción de DNA, cuya base

primero es el uso de sales que permiten romper las paredes celulares para liberar los
componentes (TE), un agente reductor de proteínas (DTT) y una enzima que separe
las proteínas pegadas al DNA (proteinasa K). La extracción de ADN es el paso
crucial para el resto de las pruebas, ya que un ADN puro y sin degradar es el inicio
de un resultado exitoso.

TSNT

1. Colocar 500ul de sangre periférica con EDTA en un tubo de 2 ml eppendorf

2. Añadir 200ul de solución amortiguadora de lisis TSNT al paquete celular y
mezclar perfectamente por inversión.
3. Agregar 500ul de fenol saturado y mezclar por inversión.
4. agregar 100ul de cloroformo alcohol isoamílico y agitar vigorosamente hasta
homogenizar completamente.
5. Añadir 200ul de TE-1x, mezclar y centrifugar por 8 minutos a 14000 RPM.
Transferir la fase acuosa a otro tubo appendorf de 2ml
6. Precipitar agregando 1ml de etanol al 100% frío, mezclado por
inversión(mezclar suavemente hasta observar una hebra blanca). No agitar
vigorosamente, por que se rompe el DNA.
7. Centrifugar 8 minutos a 14000RPM y decantar el sobrenadante.
8. Agregar 500ul de etanol al 70% frío, mezclar y centrifugar 8 min. a 14000
RPM. Sacar a temperatura ambiente.
9. Resuspender con 50-100ul de TE-1x (Según el tamaño de la pastilla obtenida.
10. Etiquetar la muestra.
11. Disolver el ADNg a 55ºC por 10 min.
12. Correr un gel de agarosa al 1% 5ul de DNAg en la cámara de electroforesis a
100 volts.