Demostracin de la naturaleza proteica

de la enzima catalasa en vegetales

I.- Introduccin:
Las enzimas estn en el centro de cada proceso bioqumico. Actuando en
secuencias organizadas catalizan cientos de reacciones consecutivas mediante
las que se degradan nutrientes, se conserva y transforma la energa qumica y se
fabrican las macromolculas biolgicas a partir de precursores sencillos.

Una enzima acta sobre un elemento especfico llamado sustrato, el sustrato es
una molcula y esto se convierte luego en molculas diferentes llamadas
productos al haber actuado con la enzima. Una enzima hace que una reaccin
qumica que es energticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy
baja, es decir que esta transcurre a mayor velocidad que sin la presencia de la
enzima.
Las enzimas son generalmente protenas globulares que pueden presentar
tamaos muy variables, desde 62 aminocidos hasta los 2.500 presentes en
la sintasa de cidos grasos. Casi todas las enzimas son mucho ms grandes que
los sustratos sobre los que actan, y solo una pequea parte de la enzima est
directamente involucrada en la catlisis.
Existen diferentes tipos de enzimas, una de las ms importantes es la catalasa.
La catalasa es una enzima que se encuentra en organismos vivos y cataliza la
descomposicin del perxido de hidrgeno en oxgeno y agua. El perxido de
hidrgeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos
organismos, pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la
enzima catalasa. Esta tiene diferentes usos, por ejemplo en la industria utiliza
para diversas cosas como en la industria textil para eliminar residuos de perxido
de hidrgeno.

II.- Objetivos:
Obtener un extracto crudo de la enzima catalasa.
Demostrar cualitativamente el efecto de cidos, bases y sales sobre la
actividad de la catalasa.
III.- Equipos materiales y reactivos:
EQUIPOS:
- Congeladora
- Centrfuga
- Estufa
MATERIALES Y REACTIVO:
PROPORCIONADO POR EL ALUMNO:
-Tomates verdes (inmaduras)
-Papas verdes (inmaduras)
-Manzanas verdes (inmaduras)
-Un cuchillo de cocina
-Un rayador
-Dos paquetes de gasa o papel de filtro
PROPORCIONADO POR EL LABORATORIO:
-Hidrxido de sodio 2N
- cido clorhdrico 0.5N
-cido tricloroactico 20%
-Sulfato de cobre 20%
-Buffer fosfato 0.05 M, y 0.1 M pH 6,5
-Perxido de hidrgeno 3%
-Cloruro de sodio 0.15 M
-Tubos de ensayo
-Embudos
-Matraces
-Pipetas de 5 y 10 ml
-Mortero
IV._PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
4.1 OBTENCION DEL EXTRACTO CRUDO
4.1.1. Pelar los tomates verdes y eliminar la cscara, el pericarpio almacenarlo a
-70 0C
4.1.2. Limar el pericarpio congelado, adicionar 3 ml de Buffer fosfato 0.1 M pH
6,5
4.1.3. Filtrar el extracto crudo a travs de 2 capas de gasa o papel de filtro y
centrifugar a 10 000 rpm por 15 minutos y guardar las alcuotas a -18 0C
4.2 DEMOSTRACIN DE LA NATURALEZA PROTEICA
4.2.1 Armar el siguiente sistema:
TUBOS (ml) I II III IV V VI
enzima 1 1 1 1 1 1
NaOH 2N . 2.4 . . . .
HCL 0.5N . . 2.4 . . .
ATCA 20% . . . 2.4 . .
CuSO4 20% . . . . 2.4 .
buffer fosfato 0.05 M ph 6.5 . . . . 2.4
Dejar en reposo los 6 tubos durante 20 minutos a 30C

4.2.2 Preparar el siguiente sistema
TUBOS (ml) I II III IV V VI
Buffer fosfato 0.05 M ph 6.5 2 2 2 2 2 2
NaCL 0.15 M 1 1 1 1 1 1
H2O2 3% 1 1 1 1 1 1

4.2.3 Preincubar por 2 minutos a 25 0C, luego agregar a cada uno de los tubos
2,0 ml de la enzima tratada en el paso 4.2.1.
4.2.4 Dejar en incubacin durante 5 minutos a 25 0C y determinar la actividad
enzimtica cualitativamente de la siguiente manera:
Presencia de actividad enzimtica (+) = Formacin de gas
Ausencia de actividad enzimtica (-) = Ausencia de gas
V._RESULTADOS:
Cuadro n1:
TUBOS I II III IV V VI
papa + - + - + +
pltano + + - - - -
manzana + + - + - -

Cuadro n2:
TUBOS I II III IV V VI
papa + - + - + +
pltano + + + + + -
manzana + + + - - -





































VI.- Discusiones:

Esta enzima actua en conjunto con el sustrato. Este ser el perxido de
hidrogeno (H2O2). Este contiene radicales libres y lo que hace la catalasa
es eliminar estos radicales para evitar de esta manera que se oxide el
alimento; por lo tanto la catalaza se considera un antioxidante.
.En las imgenes de arriba se observo en que tubos hubo mayor actividad
enzimtica. Esta actividad difiere mucho en la proporcin que se encuentra
la catalasa en los diversos tejidos vegetales.
-El proceso de la aparicin de burbujas fue ms lento en los tejidos
vegetales de la papa, existan abscesos en la manguera que permitan la
fuga del agua y poca segregacin

VII.- CONCLUSIONES:

La actividad de la catalasa puede medirse por diversos procedimientos, sin
embargo hay que procuraroperar con la menor concentracin posible de
sustrato, agua oxigenada, a temperatura baja (bao de hielo), para evitar la
inactivacin de la enzima por el sustrato.
. Las enzimas son molculas de naturaleza proteica que catalizan
reacciones qumicas.
La enzima acta sobre un sustrato definido. El sustrato es una molcula y
esto se convierte luego en molculas diferentes llamadas productos al haber
actuado con la enzima
Para incrementar la velocidad de las reacciones enzimticas, las enzimas
aumentan la temperatura.
Las enzimas muestran especificidad por el sustrato ya que solo puede
actuar con uno especficamente.
La catalasa es una enzima que se encuentra en organismos vivos
y cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno en oxgeno y agua.


VIII.- CUESTIONARIO.

1. Qu es un extracto crudo?
Segn el experimento llevado en el laboratorio, el extracto crudo es el jugo
del vegetal en estado primitivosin adicin de ningn reactivo.
2. A qu clase de enzima corresponde la catalasa. Su nombre y su cdigo
E.C?
Corresponde a las oxido reductasas y dentro de las hidroperxidasas, se
denomina catalasa y su cdigo E.C.es 1.11.1.6.
3. Qu otros factores pueden considerarse para demostrar que las enzimas
son protenas?
Los factores principales que alteran la actividad enzimtica son: la
concentracin de la enzima y del sustrato, temperatura, pH e inhibidores. Ya
que cuando estn en su punto ptimo, las enzimas se desarrollan
normalmente, pero cuando salen de su rango establecido, las enzimas se
desnaturalizan.
4. Indique 4 enzimas que pueden extraerse de los Vegetales.
Maltasa, que convierte el disacrido de malta en 2 unidades de glucosa. Alfa
Amilasa, sintetiza el almidn.Citocromooxidasas, que contienen protenas
distribuidas en tejidos vegetales y animales.

IX.- Referencias bibliogrficas:

. Braverman, J.B. 1980. Introduccin a la Bioqumica de los
alimentos. El manual moderno. Mxico.
Metzler, E.D. 1981. Bioqumica, Omega. Barcelona.
http://es.scribd.com/doc/143674185.