Centro Federal de Educao Tecnolgica de Qumica de Nilpolis Unidade Rio de

Janeiro
Relatrio de Microiologia! Manoras
"ss#pticas e Manipulao de
Microrganismos
Rio de Janeiro, 28 de maro de 2008.
Alunas: Adriana de Menezes Lima N: 01.
Elizana de Azevedo Silva N: 0.
!"a#s $ris%ine dos San%os &ieira N: 1'.
!urma: (M 1)1.
*ro+essoras: $arolina e Lidiane.
,is-i.lina: Mi-ro/iolo0ia.
Manobras Asspticas e Manipulao de Microrganismos
$ntroduo Terica!
Na na%ureza en-on%ramos v1rias es.2-ies de mi-ror0anismos 3/a-%2rias, +un0os,
al0as e .ro%ozo1rios4 -onvivendo no mesmo am/ien%e. *ara es%udar as .ro.riedades de um
de%erminado mi-ror0anismo em .ar%i-ular, deve5se .rimeiramen%e isol15lo em -ul%ura .ura,
ou se6a, uma -ul%ura isen%a de %odos os demais %i.os de or0anismos, onde %odas as -2lulas na
.o.ula7o se6am id8n%i-as 3ori0in1rias de uma mesma -2lula .aren%al4. En%7o, al0umas
mano/ras ass2.%i-as %iveram 9ue ser u%ilizadas nesse %i.o de la/ora%:rio, 9ue +oram as
se0uin%es: ao -"e0ar ao la/ora%:rio o am/ien%e em 9ue se vai %ra/al"ar deve es%ar o mais
lim.o .oss;vel, 9uan%o mais livre de mi-ror0anismos, mel"or .ara a o/%en7o de um /om
resul%ado no e<.erimen%o, .ara 0aran%ir um am/ien%es lim.o deve .rimeiramen%e lavar as
m7os -om de%er0en%e e 1l-ool, a.:s lavar as m7os e in-luindo %am/2m os an%e/raos, deve5
se lim.ar %oda a /an-ada, onde ser1 +ei%o o %ra/al"o, -om 1l-ool .re+eren-ialmen%e iodado.
A .resena de um /i-o de /unsen na /an-ada 2, %am/2m, indis.ens1vel .ara -riar
uma zona es%2ril onde na 9ual ser1 e+e%uado %odo o e<.erimen%o, .ara diminuir ainda mais o
ris-o de -on%amina7o do nosso %ra/al"o.
E, al2m de se0uirmos as mano/ras ass2.%i-as devemos .re.arar meios de -ul%ura
ideais .ara a%endermos a ne-essidade de re.rodu7o de nossos mi-ror0anismos, .ois, assim
-omo n:s, eles .re-isam de -ondi=es a.ro.riadas .ra sua vida, -res-imen%o e re.rodu7o.
E os in0redien%es ne-ess1rios .ara o -res-imen%o de mi-ror0anismos .odem ser su.ridos
.or um sis%ema vivo, -omo um "os.edeiro animal ou ve0e%al, uma -ul%ura de -2lulas, ou
.or uma mis%ura de %odos os nu%rien%es re9ueridos 6un%os em um sis%ema ar%i+i-ial,
denominado meio de -ul%ura. >s meios de -ul%ura -on%2m os ma%eriais nu%rien%es .ara o
-ul%ivos dos di+eren%es mi-ror0anismos. Es%es meios .odem ser .re.arados no .r:.rio
la/ora%:rio -om .:s desidra%ados, ou ad9uiridos .ron%os no -om2r-io em .la-as de *e%ri ou
%u/os de ensaio. Es%es meios .odem ser em -aldo 3l;9uido4 ou 10ar 3s:lido4. >s meios
l;9uidos s7o ?%eis .ara a o/%en7o de rela%iva 0rande /iomassa de mi-ror0anismos e
revela7o de .rovas /io9u;mi-as, mas n7o .ermi%em a se.ara7o de dois ou mais
mi-ror0anismos de es.2-ies di+eren%es em uma .o.ula7o mis%a, n7o .ossi/ili%ando a
o/serva7o de al0umas -ara-%er;s%i-as es.e-;+i-as dos mi-ror0anismos, -omo a mor+olo0ia
de suas -ol@nias. Aez5se .ara o nosso mi-ror0anismo, 9ue 2 a /a-%2ria Staphylococcus
aureus, en%7o, esses dois %i.os de meios. E um deles .ode ser des-ri%o a%rav2s do es9uema
a/ai<o:
T#cnica de esgotamento por estrias! a%rav2s de uma ala ou a0ul"a de semeadura
es0o%a5se o ma%erial .or meio de es%rias na su.er+;-ie do meio.
Nosso mi-ror0anismo, a /a-%2ria Staphylococcus aureus 2 uma das es.2-ies
.a%o02ni-as mais -omum 6un%amen%e -om a Escherichia coli, -ausando, .or e<em.lo,
doenas -omo +oli-uli%e, os%eomieli%e e endor-adi%e. Ela +az .ar%e do 08nero Es%a+ilo-o-os
30r. staphyle, uva4 9ue s7o -o-os Bram5.osi%ivos, im:veis,a0ru.ados em massas irre0ulares
ou em -a-"os de uva. Aer:/ios ou anaer:/ios +a-ul%a%ivos, -a%alase .osi%ivos. Aermen%am a
0li-ose -om .rodu7o de 1-ido, %an%o em aero/iose, -omo em anaero/iose, e nisso se
di+eren-iam dos mi-ror0anismos do 08nero Micrococcus, 9ue s: +ermen%am em aero/iose.
E, a%ualmen%e esse 08nero 2 -om.os%o .or -er-a de 2) es.2-ies, sendo al0umas
+re9Cen%emen%e asso-iadas a uma am.la variedade de in+e-=es de-ar1%er o.or%unis%a, em
seres "umanos e animais. As .rin-i.ais es.2-ies de es%a+ilo-o-os en-on%rados em seres
"umanos s7o os Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis e Staphylococcus
saprophyticus. > S. epidermidis 2 en-on%rada .rimariamen%e -omo residen%e da .ele, %endo
um /ai<o .o%en-ial .a%o08ni-o, assim -omo o S. saprophyticus, 9ue +az .ar%e da mi-ro/io%a
normal da re0i7o .eriure%ral do "omem e da mul"er e da .ele. Ao -on%r1rio, o S. aureus 2
um .a%:0eno em .o%en-ial e .ode ser en-on%rado na re0i7o da naso+arin0e e %am/2m nas
+ossas nasais.
%&eti'os!
Re-on"e-er a im.or%Dn-ia da u%iliza7o de mano/ras ass2.%i-as na mani.ula7o de
mi-ror0anismos, no .re.aro do meio de -ul%ura .ara o -res-imen%o dos mesmos.
Materiais e Reagentes!
*la-as de *e%ri
' !u/os de Ensaio -om !am.a
1 Erlenme#er 32'0 mL4
1 Ee-"er 3'00 mL4
1 Ala Ea-%eriol:0i-a
1 *i.e%a 3' mL4
F $o%one%es Es%2reis
Ei-o de Eunsen
!ela de Amian%o
!ri.2
G0ar Nu%ri%ivo
$aldo Nu%ri%ivo
5 e<%ra%o de -arne: H,0 0IL
5 .e.%ona de -arne: ',0 0IL
5 .J a 2'$: ),0
Staphylococcus aureus
(rocedimentos!
Manoras "ss#pticas!
*rimeiramen%e, "i0ienizaram5se as m7os e a /an-ada -om 1l-ool iodado, a +im de
reduzir a -ar0a mi-ro/iana do lo-al de %ra/al"o. E %ra/al"ou5se, %odo o %em.o, nas
.ro<imidades do Ei-o de Eunsen, na -"amada zona es%2ril.
E, .ara -om.rovar a %eoria de 9ue es%amos -ir-undados .or mi-ror0anismos, +ez5se
uma e<.eri8n-ia da se0uin%e +orma: .e0ou5se uma .la-a de .e%ri -omo meio de -ul%ivo
es%2ril e dividiu5se a 1rea da .la-a em 9ua%ro .ar%es. En%7o, -om o -o%one%e es%2ril,
re-ol"eu5se o ma%erial mi-ro/iol:0i-o do 6ale-o, do .er+e<, do -ouro -a/eludo e da salivaK
.aras 9ue servissem, se.aradamen%e, -omo in:-ulos nas 9ua%ro 1reas do meio de -ul%ura.
(reparo dos Meios de Cultura!
Meio slido *esou5se ...0 do meio 10ar nu%ri%ivo em um erlenme#er de 2'0 mL.
,ilui5se essa massa em 100 mL de 10ua des%ilada. A9ue-eu5se o sis%ema em um /i-o de
/unsen .ara mel"or solu/iliza7o do 10ar em 10ua. Es%erilizou5se o meio, a .ar%ir disso,
dis%ri/uiu5se asse.%i-amen%e o 10ar nu%ri%ivo em ' .la-as de .e%ri, 61 es%erilizadas. Ln-u/ou5
se as .la-as .ara -on+irma7o de es%erilidade.
Meio l)uido *esou5se 0,20 do meio -aldo nu%ri%ivo em um /e-"er de '00 mL.
,ilui5se essa massa em 2' mL de 10ua des%ilada. A9ue-eu5se o sis%ema em um /i-o de
/unsen .ara 9ue o-orresse a solu/iliza7o do meio. $om o au<ilio de uma .i.e%a,
dis%ri/uiu5se ' mL de meio em -ada %u/o de ensaio. !am.ou5se a.ro.riadamen%e os %u/os.
Es%erilizou5se os meios em au%o5-lave.
$noculao dos Meios de Cultura (uros!
M%ilizou5se o mi-ror0anismo Staphylococcus aureus .ara ino-ular %an%o o meio
s:lido, 9uan%o o meio li9uido.
Meio slido !ra/al"ou5se na zona es%2ril. Alam/ou5se ao ru/ro uma ala
/a-%eriol:0i-a. A/riu5se o %u/o de ensaio 9ue -on%in"a o mi-ror0anismo, +lam/ou5se a /o-a
do mesmo. $om a ala /a-%eriol:0i-a, re%irou5se uma al;9uo%a do meio 9ue -on%in"a os
mi-ror0anismos. Alam/ou5se novamen%e a /o-a do %u/o e o %am.ou. A/riu5se a .la-a de
.e%ri, a.li-ou5se a -ar0a de mi-ror0anismo em uma .e9uena re0i7o da .la-a. Alam/ou5se a
ala novamen%e .ara diminuir a -ar0a mi-ro/iana. $om essa mesma ala, es.al"ou5se, -om
movimen%os de zi0ue5za0ue, a /a-%2ria .ela su.er+;-ie do meio. Ln-u/ou5se as .la-as em
es%u+a.
Meio l)uido Alam/ou5se ao ru/ro uma ala /a-%eriol:0i-a. A/riu5se o %u/o de
ensaio 9ue -on%in"a Staphylococcus aureus e +lam/ou5se a /o-a do mesmo. $om o au<ilio
da ala /a-%eriol:0i-a, re%irou5se essa /a-%2ria. *e0ou5se o %u/o -om o meio de -ul%ura
.uro, +lam/ou5se a /o-a do %u/o e %rans+eriu5se a -ar0a /a-%eriol:0i-a .ara esse re-i.ien%e.
Alam/ou5se novamen%e a /o-a do %u/o e o +e-"ou. Ln-u/ou5se as .la-as em es%u+a.
A.:s uma semana de in-u/a7o, o/servou5se o -res-imen%o das -ol@nias.
Resultados e *iscusso
+, Resultados de $noculao de Microorganismos E-istentes no!
a. Jaleco/ (er0e- e 1ali'a As -ol@nias +i-aram mui%o .are-idas e,
a.aren%emen%e, es%avam mis%uradas. E +i-aram -om as.e-%o de al0uns ra6ados
amarelados, man-"as amarelo -laro5/e0e.
. Caelo , Essas -ol@nias +i-aram -om um as.e-%o de .on%os amarelados de +orma,
a.aren%emen%e, de+inida.
2, Resultados dos Meios de Cultura (reparados "tra'#s de Manobras
Asspticas!
*re.arou5se, -omo 61 -i%ado, -in-o .la-as -om meio de -ul%ura e, a.:s uma semana,
o/%eve5se o se0uin%e resul%ado: duas .la-as no +oram -on%aminadas e %r8s .la-as +oram
-on%aminadas.
As .la-as 9ue +oram -on%aminadas -on%in"am re0i=es es/ran9uiadas, 9ue
re.resen%am as -ol@nias de mi-roor0anismos 9ue n7o +oram iden%i+i-ados.
3, Resultados da (r4tica de Manipulao de Microorganismos!
*ara essa .r1%i-a, -omo 61 des-ri%o, usaram5se as duas .la-as n7o -on%aminadas da
.r1%i-a, a -ima -i%ada, e mais duas .la-as n7o -on%aminadas, -edidas .ela .ro+essora,
-on%endo o mesmo meio de -ul%ura das 9ue +oram .re.aradas .elo 0ru.oK e mais -in-o
%u/os de ensaio, -on%endo meio l;9uido. Esses, meios +oram .re.arados .ara ino-ula7o
da /a-%2ria Staphylococcus aureus. >/%iveram5se dois resul%ados .er%o do sa%is+a%:rio,
-omo mos%rados nas duas ?l%imas .la-as a/ai<o, e "ouve -res-imen%o do
mi-ror0anismo, sa%is+a%oriamen%e, em %odos os -in-o %u/os de ensaio.
Nas +o%os a-ima mos%radas, .ode5se .er-e/er 9ue na .rimeira .la-a de .e%ri o-orreu
a.enas uma Na0lomera7oO das -ol@nias da /a-%2ria, .ois, esses mi-ror0anismos n7o +oram
/em dis.ersos .elo meio de -ul%ura, -omo o o-orrido na %er-eira .la-a de .e%ri. E, o/%eve5
se, na se0unda, .la-a um resul%ado .ou-o sa%is+a%:rio, -omo %am/2m, na %er-eira .la-a de
.e%ri. *ois, na9uele -aso, os mi-roor0anismos .oderiam %er sido mel"or es.al"ados e
o-u.ado, assim, uma maior 1rea no meio de -ul%ura e de uma +orma mais isolada3no -aso
da %er-eira .la-a de .e%ri4K .ara a%in0irem o o/6e%ivo e o ideal da .r1%i-a.
*ara resolver a +al"a -ome%ida na %er-eira .la-a de .e%ri, a 9uan%idade de
mi-ror0anismos ino-ulados no meio deveria ser menor e eles %in"am 9ue ser dis%ri/u;dos de
+orma mais or0anizada na .la-a, e, -om isso, evi%ar a a0lomera7o de -ol@nias, 9ue n7o
+i-aram isoladas -omo o ne-ess1rio.
P im.or%an%e dizer 9ue esses isolamen%os de -ol@nias, no meio de -ul%ura, +izeram5
se ne-ess1rios .ara se %er -er%eza de 9ue na9uele meio s: o-orreu o -res-imen%o do
mi-ror0anismo de in%eresse.
J1 nas +o%os dos %u/os de ensaio, o/servam5se, no +undo dos %u/os, .re-i.i%ados
/ran-os, 9ue s7o os mi-ror0anismos 9ue -res-eram nesse meio, sa%is+a%oriamen%e.
As +o%os mos%radas a se0uir servem de e<em.lo .ara um -orre%o isolamen%o de
mi-ror0anismos.
Macromorfologia de cinco morfotipos de bactrias isoladas de espinheira-santa 5 fotos
retiradas do site: genetica.bio.ufpr.br/posgraduacao/teses/pileggi.pdf
Concluso!
Sendo, assim, -om os resul%ados o/%idos, .ode5se -on-luir 9ue es%amos -er-ados .or
mi-ror0anismos 9ue .odem vir a a+e%ar, ne0a%ivamen%e, nossos e<.erimen%os e ma%eriais. E,
essa -on%amina7o, se n7o .reviamen%e dia0nos%i-ada, .oder1 -ausar, uma +alsa an1lise, um
+also laudo. *or isso, %am/2m, 2 ne-ess1rio o/ede-er %odas a9uelas mano/ras ass2.%i-as
-i%adas.
5iliogra0ia!
QQQ.+o..uni-am../rImi-ro/iolo0iaIaulasIes%a+ilo-o-os..d+ 5 a-essado em 2'I0HI2008
"%%.:IIQQQ.+o..uni-am../rImi-ro/iolo0iaIaulasIisolamen%o..d+ 5 a-essado em 2)I0HI2008