.1011!er.

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DILUCIONES
1.- INTRODUCCIN
El anlisis clnico de muestras biolgicas o el desarrollo de proyectos de
investigacin en un laboratorio, requiere que el personal del mismo est suficientemente
entrenado en lo que respecta a la preparacin de soluciones y diluciones de muestras,
previo a las pruebas concretas. Obviamente, si se desea que una determinada tcnica de
laboratorio tenga un desempeo ptimo y produzca resultados precisos, los reactivos y
las muestras deben prepararse correctamente. dems, las muestras a analizar !e"#
$uero% deben diluirse casi siempre antes de las pruebas. &a dilucin consiste en aadir a
un volumen de muestra biolgica tantos vol'menes de diluyente !agua destilada, solucin
salina, buffer, entre otros% como sean necesarios para obtener la dilucin deseada, la
misma tiene como consecuencia inmediata la disminucin de la concentracin de los
diferentes componentes de la muestra. En el laboratorio se pueden presentar diferentes
circunstancias que obligan en un momento determinado a preparar una determinada
dilucin de una muestra. continuacin se describirn una serie de e"emplos,
recomendaciones y orientaciones con el ob"etivo de facilitar la comprensin y realizacin
de las diferentes tcnicas para preparar diluciones.
UNIDADES DE MEDIDA (VOLUMEN)
En la mayora de los casos en las preparaciones de las diluciones se utilizan
pequeos vol'menes tanto del espcimen como del diluyente, estos vol'menes
generalmente se encuentran en el orden de los microlitros !pl%. (ecuerde que ) ml es
igual a ).*** pl y que ) pl es igual a *,**) mi, trate de familiarizarse con las conversiones
de ml a pl y viceversa !en todo caso +aga los clculos que correspondan%, tal y como se
muestra a continuacin,
-. mi
)* pl *,*) ml
)/ pi *,*0/ ml
/* pl *,*/ ml
)** pi *,) ml
0** pl *,0 ml
*,1 ml
).*** pi ) ml
)./** pi ),/ mi
2enga en mente que siempre tiene que realizar sus clculos utilizando la misma unidad
de medida de volumen (Ej., pi mi), en todo caso realice las
conversiones que tengan lugar.
PRINCIPIO DE LAS DILUCIONES SIMPLES
-ara preparar una dilucin, mezcle un volumen especfico de la muestra
espcimen !e". $uero% con un cierto volumen de un diluyente. (ecuerde que para
preparar la dilucin siempre agregue primero el ilu!e"#e ! $eguiame"#e la
mue$#ra (e%. Suero)& 'i"alme"#e me()le en forma adecuada.
En un caso simple, una parte de suero una parte igual de diluyente producirn una
dilucin de
)
30 ! ),0%. &a e4presin 5),05 representa la relacin de la cantidad de partes de suero
con el n'mero total de partes, en este caso representa una parte de suero y una parte de
diluyente para un total de dos !0% partes. 6na muestra pura de suero, es decir, que no
contenga ninguna parte del diluyente se representara por la relacin )3) !7 ),)%, es decir el total
de partes es una !)% y est representada 'nicamente por la muestra. Es importante tener
presente lo citado, ya que algunas pruebas de laboratorio !E"., 8.9.(.&. cuantitativo%, la muestra
del paciente se analiza en forma pura y diluida.
CALCULO DE DILUCIONES
6na dilucin de )3)** puede prepararse mezclando ) parte de suero con 11 partes de
diluyente: por e"emplo ) ml ; 11 ml !total de partes, )**: volumen final )** mi%. +ora bien, si
mantenemos la relacin de volumen de suero y la de diluyente necesaria para preparar una
determinada dilucin !como en este e"emplo: dilucin )3)**, ) ; 11%, podemos variar los
vol'menes de cada uno de ellos y se obtendr la misma dilucin.
$upongamos que tenemos que preparar una dilucin )3)** y disponemos de poco
suero ! las condiciones de la tcnica implican que no +ay necesidad de utilizar vol'menes
mayores%, en base a lo e4puesto podramos preparar la dilucin utilizando tan solo /* microlitros
!pl%, en este sentido, para calcular el volumen de suero multiplicamos /* 4 ), lo que obviamente
nos da /* pl de suero y para calcular el volumen de diluyente, multiplicamos /* 4 11,
obtenindose como resultado <.1/* de manera que mezclando en un tubo de ensayo <.1/* pl de
diluyente y /* pi de suero, obtendramos una dilucin )3)**, pero en este caso el volumen final
seria de <,1/ mi. Este procedimiento se podra aplicar para preparar otras diluciones !e".,
)
30,
)30*, )3<*, )3=0*, )3)0>*%.
*RE*ARACION DE UNA DILUCION DE LA MUESTRA A UN VOLUMEN
+INAL
?on frecuencia se puede presentar la necesidad de preparar una dilucin de la muestra a
un vol umen f i nal !o t ot al % det ermi nado, por e" empl o, para real i zar una prueba
inmunoserolgica se requiere preparar ).*** pl !) mi% de una dilucin )30* de la muestra de
suero de un determinado paciente, para ello podemos proceder de tres maneras diferentes,
siendo la primera la siguiente,
).@ plicamos la formula,
8) 4 ?i @A 80 4 ?0
9onde,
V1 = )***
?l A )30*
80 A 8ol umen de suero que tenemos que aspi rar y mezcl ar con un vol umen
determinado del diluyente para preparar la dilucin deseada !cuyo volumen final es
de ).*** pl%
?0 A )3) !(ecuerde que el suero est puro, es decir, no diluido%
-or consiguiente,
1.000 pl x 1/20 = V2 x
1/1 0
111111111..lir
1.000

pi x 1/20 =
V2 V2 = 1.000 pl / 20
V2 = 50 pl de suero
Como el volumen final de la dilucin es 1.000 pl,
diluyente con 50 pl del suero del paciente.
tenemos que meclar !50 pl de
2.- "tra alternativa para calcular el volumen de suero del paciente necesario para
preparar 1.000 pl de suero diluido 1/20, seria la si#uiente$
%plicar la frmula del &actor de 'ilucin (&')$
V
F D

V
m
'onde$
' = *s la dilucin preparada (si se expresa como una cifra entera es el factor
de dilucin (&'$20).
Vf = *quivale al volumen final o total de la dilucin (volumen de suero +
volumen de diluyente).
Vm = Corresponde al volumen inicial de la muestra a diluir (en este caso,
suero) que
tenemos que meclar con el diluyente para preparar la dilucin al Vf deseado.
*n nuestro e,emplo$
&' (20) = 1.000 pl / Vm-
por lo que$ Vm = 1.000 pl /
20-
*s decir 50 pl de suero del paciente, el cual tenemos que meclar con !50 pl
de diluyente para preparar la dilucin deseada
3.- &inalmente, se podr.a aplicar una re#la de tres simple$
Como se requiere preparar una dilucin del suero 1/20, esto si#nifica que 1
parte de suero est/ contenida en un total de 20 partes (suero + diluyente). 0o
citado es equivalente a decir que 1 volumen de suero sin diluir est/ contenido en
20 vol1menes de suero diluido (Vf = suero + diluyente), por lo que$
1 volumen de suero sin diluir2222222222222222220 vol1menes de suero
diluido (Vf)
343 pl de suero sin diluir222222222222222222222 1.000 pl de suero diluido (Vf)
'espe,ando la inc#nita 343
4 = 1.000 pl x 1/20 = 50 pl de suero
El cual tenemos que mezclar con 1/* pl de diluyente para preparar la dilucin
deseada
CALCULO DE DILUCION +INAL DE UNA ME,CLA DE SUERO NO
DILUIDO CON VOLUMEN DE DILU-ENTE.
?on bastante periodicidad se plantea la interrogante de calcular la
dilucin final derivada de mezclar un volumen determinado del suero no diluido
procedente de un paciente con un volumen de diluyente, por e"emplo, supongamos que
en un tubo de ensayo se +an agregado <** pl !*,< mi% de diluyente y posteriormente
)** pi !*,) mi% de suero puro del paciente. El clculo de la dilucin final obtenida se
puede realizar de la siguiente manera,
plicar la frmula de Bactor de 9ilucin,
V
f
F
D
=
Vm
9onde,
8f A <** pl ! *,< mi% ; )** pl ! *,) mi% A /** pi !7 *,/ mi%
8m A )** pl ! *,) ml%
En el e"emplo citado,
B9 A /** p)3)** pi A /
-or lo que la dilucin preparada es el inverso del B9, es decir )3/ !7 ),/%
Otra alternativa para calcular la misma dilucin sera la siguiente,
)** pl del suero#################en un 8f de /** pi
) pl !una parte de suero%##########en un 8f !5C5%, que es equivalente al total de
partes.
?omo se puede observar se trata de una regla de tres simple, as que
procedemos a despe"ar la incgnita 8f ! 5C5%
Vf = 500 D).) 4 (.) @100 <)
rro"ando como resultado que el Vf = 5, es decir la dilucin preparada es )3/ !7
),/%
CALCULO DE DI LUCI ON +I NAL DE UNA ME,CLA DE SUERO
(*REVIAMENTE DILUIDO) CON VOLUMEN DE DILU-ENTE.
En el caso anterior, la dilucin se calcul en funcin que el suero del paciente estaba
puro !no diluido%, pero puede darse el caso !que de +ec+o se presenta con muc+a frecuencia,
por e"emplo, en caos de diluciones seriadas%, que el suero provenga de una dilucin previa del
mismo. $upongamos que en un tubo de ensayo se +an agregado <** pl !*,< ml% de diluyente y
posteriormente )** pi !*,) ml% del suero previamente diluido )30. Eso significa que +emos
realizado una dilucin )3/ de un suero que ya estaba diluido
1
./& de manera que con respecto al
suero puro, el suero qued diluido )* veces ms, es decir, la dilucin final sera el producto de
multiplicar dos fracciones, en este caso, )3/ 4
)
30 A )3)*
2enga siempre presente que la dilucin final de un suero tiene como punto de referencia al
suero puro no diluido y cada vez que tenga que calcular la dilucin realizada en un determinado
tubo de ensayo !u otro recipiente%, tome en cuenta si el suero que se agreg estaba puro
diluido, en caso de estar diluido, la dilucin final seria el producto de dos fracciones, una de ellas
sera la dilucin realizada y la otra la dilucin previa del suero.
DILUCIONES SERIADAS DO0LES.
&as diluciones seriadas son el producto de mezclar y transferir un volumen constante de
suero en sucesivos tubos de ensayo que contienen diluyente en volumen constante o en
vol'menes variables. &as mismas se realizan en casos que se desee preparar diluciones altas
de una muestra, utilizando para ello vol'menes pequeos tanto del espcimen como de
diluyente cuando se desea titular la presencia de un determinado anticuerpo o de un
antgeno en una muestra biolgica. ?uando se traba"a con diluciones seriadas, es 'til e4presar
todas las diluciones en trminos de fracciones. Esto +ace que resolver un problema de
diluciones seriadas se convierta en una cuestin de multiplicacin de fracciones.
-or E"., una dilucin seriada en dos ! )30% a un volumen constante de diluyente, es una
dilucin en la que un volumen fi"o de suero se mezcla y se traspasa en sucesivos tubos que
contienen idntico volumen de diluyente. Esta dilucin doble puede e4presarse as,
)3 dilucin en dos A -artes transferidas ) total de partes
6n e"emplo de una dilucin seriada )30 ! en dos% a un volumen constante de diluyente se
describe en el siguiente grfico !partiendo de un suero puro%.
&a dilucin seriada
1
./ mostrada en el grfico produ"o una dilucin final de )30/7 !7
),0/7% e involucr el uso de > tubos de ensayo. 6tilizando un volumen constante de )** pi para
mezclar y transferir.
5ecle y transfiera 'escarte
)** pi de suero en el primer tu6o1 (ry(77(8878
)** pl de diluyente en cada
tu6o
2ubo EF 1 2 9 : 5 ; 8 <
?ada tubo es una dilucin de ),0 del tubo anterior y la dilucin final de cada tubo es un producto de dos
fracciones
) ) ) ) )
)
1 1 1
0x = x =
2
x =
2
x = x =
2
x
2
=
2
x
25;
Gultiplique las fracciones para encontrar la dilucin final de cualquiera de los tubos
) ) ) ) )
)
) 1
0 : < 1; 92
;:
12
<
25;
>ara cada tu6o del e,emplo$
>artes transferidas = 100 pi
1
1
?otal de partes = 200 pl 'ilucin en
dos
0
*n este caso, una dilucin en dos o do6le
DILUCIONES SERIADAS CUADRU*LES.
Es posible preparar la misma dilucin final del caso anterior, utilizando el mismo
volumen de suero puro !)** pl% y un n'mero menor de tubos de ensayo, por e"emplo, si
deseamos prepararle con < tubos, es decir, la mitad de los tubos empleados en el e"emplo en
referencia, cada tubo debe representar el equivalente a dos diluciones ),0, es decir,
1
./ 1i./
)3<, por lo que tendramos que +acer diluciones seriadas
)
3< ! en cuatro%, tal y como se
muestra a continuacin,
5ecle y transfiera
100 pl de suero en el primer tu6o, &I(r2@ ((33
900 pl de diluyente en cada
tu6o
'escarte
?u6o 1 2 9
Cada tu6o es una dilucin de 1$: del tu6o anterior y la dilucin final
de cada tu6o es un producto de dos fracciones
1 1 1 1
1
=
25; =
:
x
-4x
=:x =
:
x
5ultiplique las fracciones para encontrar la dilucin final de
cualquiera de los tu6os
1 1 1 1
1; ;: 25;
-ara cada tu6o del
e,emplo$
>artes transferidas = 100
pl
) 1
?otal de partes :00
pl
'ilucin en cuatro :
*n este caso, una dilucin en cuatro
En caso que deseemos preparar la misma
dilucin !)30/7%, utilizando inicialmente )** pl de
suero puro y tan solo 0 tubos de ensayo,
tendramos que +acer diluciones seriadas )3)7 !7
en diecisis%, debido a que !siguiendo el mismo
razonamiento% cada tubo debe representar una
dilucin equivalente a cuatro diluciones ),0, es de
cir, )30 4 4
)
30 C A )3)7 !7 a dos diluciones ),<:
)
)<
4 )< A )3)7 %.
En base a lo e4puesto, prepararamos la
dilucin colocando )/** pl !),/ ml% de diluyente
en dos tubos de ensayo, le agregaramos )** pl
de suero puro al primero de ellos, se mezcla y se
transfiere )** pl al otro tubo, mezclaramos
nuevamente y descartaramos )** pl, como en
los e"emplos en referencia, obtenindose la
dilucin final deseada, )3)7 4 )3)7 A )30/7 !8er
siguiente grfico%
5ecle y transfiera
100 pl de suero en el primer tu6off
1500 pl de diluyente en cada
tu6o
'escarte
?u6o AB 1 2
Cada tu6o es una dilucin de 1$: del tu6o anterior y la dilucin final de cada
tu6o es un producto de dos fracciones
) ) )
x x
1; 1; 25;
5ultiplique las fracciones para encontrar la dilucin final de cualquiera de los tu6os
1; 25;
>ara cada tu6o del e,emplo$
>artes transferidas = 100 pi
?otal de partes = 1500 pl
'ilucin en 1; 1;
*n este caso, una dilucin en cuatro
DILUCIONES SERIADAS A VOLUMEN VARIA0LE.
En ciertas circunstancias, las diluciones seriadas se preparan
variando el volumen de diluyente !dilucin seriada a vol'menes
variables%. $upongamos que tenemos la necesidad de preparar una
dilucin )3)7* del suero obtenido de un paciente, la misma la
podramos obtener en la forma que se describe en el presente grfico,
5ecle y transfiera
100 pl de suero en el r
!
((@ rr.8
primer tu6o 'escarte
?u6o AB
Volumen de diluyente en cada tu6o
'ilucin del tu6o
'ilucin final
1
!00
pl
1
Cx
10
)
10
2
900
pl
1
C
:x
)
9
100
pl
1
2x
)
:
100 pl
1
21;0
1
1;0
5ecle y transfiera
10.0 pl de suero en el primer tu6orr. !H
EEEEE
'escarte
?u6o AD 1 2 9 : 5 ;
Volumen de diluyente en cada
tu6o
:00
pl
100
pl
100
pl
100
pi
100
pl
100
pl
'ilucin del tu6o
1 1 1 1 1 1
$
4
0x 2x x x
0
'ilucin final
1
) ) )
1
)
5 10 20 :0 <0 1;0
En resumen, al +acer diluciones seriadas,
En esta alternativa fueron necesarios seis !7% tubos para llegar a la dilucin deseada.
?abe dest acar, que cual qui er pequeo error en el proceso de di l uci n aument a
e4ponencialmente con cada tubo adicional. -or lo tanto, siempre es me"or utilizar el n'mero
mnimo de tubos para obtener las diluciones que deseamos preparar. continuacin se
muestra una forma ms eficiente de obtener la misma dilucin usando cuatro !<% tubos de
dilucin,
(ecuerde que el volumen de suero que se utiliza para mezclar y transferir permanece
constante, mientras que el volumen del diluyente puede variar o permanecer constante,
con el fin de producir la dilucin ms apropiada.
-ara conservar el suero, use siempre el volumen ms pequeo posible para diluir.
$i bien utiliza el volumen ms pequeo posible para diluir, recuerde que no se
recomienda utilizar menos de /* pl !vol'menes finales% para las diluciones seriadas,
porque un volumen menor que ste sera difcil de controlar con precisin.
Guc+os errores se producen cuando s +acen diluciones seriadas porque se pierde el
rastro de la secuencia. Esto puede evitarse utilizando dos carriles adyacentes en la
gradilla, de manera que, una vez mezclado el suero en el tubo correspondiente, ste se
coloque en el carril donde +emos decidido ordenar los tubos con las diluciones que
vamos secuencialmente preparando. ?uando se usan placas de microtitulacin, se puede
utilizar una tapa o +acer una marca en la mesa de traba"o que indique el pocillo donde se
va a agregar la muestra diluida y mover la placa despus de realizada cada dilucin.
CALCULO DE +ACTOR DE DILUCIN EN DILUCIONES SERIADAS.
Es recomendable familiarizarse con lo que se denomina 5factor de dilucin5, trmino el cual est
asociado a la preparacin de diluciones seriadas como se muestra a continuacin, $upongamos
que para realizar una determinada prueba semicuantitativa se requiere realizar las siguientes
diluciones seriadas del suero, )3)*: )30*: )3<*: )3>*: )3)7*: )3=0*. 9e cada dilucin se van a
utilizar )** pl para la prueba inmunoserolgica. ?omo se necesitan )** pl de cada dilucin, se
pueden preparar /** pl de cada una de las diluciones
Vol. inicial de la muestra(X)
26IO ),
9ilucin, )3)*
Bactor de 9ilucin !B9%, )*
8olumen de la 9ilucin !8f%, /** 8olumen
inicial de la muestra !8m%, X
Volumen final de la dilucin
Factor de Dilucin (FD)
500 pl
Vol. inicial de la muestra(X) =
10
Vol. inicial de la muestra(X) 50 [1.1 de suero puro En el
tubo EF ) se aaden </* pl de diluyente ; /* pl de muestra