E S C R I T O P O R : K A T I A E S T H E R

M O R E N O V A L E N C I A
E S T U D I A N T E D E 1 1 0 2
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QUE ES?
La ingeniera gentica es la tecnologa del
control y transferencia de ADN de un
organismo a otro, lo que posibilita la creacin
de nuevas especies, la correccin de los
defectos genticos y la fabricacin de
numerosos compuestos.







De los genes a la ingeniera gentica
Cuando los cientficos comprendieron la estructura de los genes y cmo la
informacin que portaban se traduca en funciones o caractersticas, comenzaron
a buscar la forma de aislarlos, analizarlos, modificarlos y hasta de transferirlos de
un organismo a otro para conferirle una nueva caracterstica. Justamente, de eso
se trata la ingeniera gentica, que se podra definir como un conjunto de
metodologas que permite transferir genes de un organismo a otro y expresarlos
(producir las protenas para las cuales estos genes codifican) en organismos
diferentes al de origen. El ADN que combina fragmentos de organismos diferentes
se denomina ADN recombinante. En consecuencia, las tcnicas que emplea la
ingeniera gentica se denominan tcnicas de ADN recombinante. As, es posible
no slo obtener protenas recombinantes de inters sino tambin mejorar cultivos
y animales. Los organismos que reciben un gen que les aporta una nueva
caracterstica se denominan organismos genticamente modificados (OGM) o
transgnicos. A su vez, la ingeniera gentica es lo que caracteriza a la
biotecnologa moderna que implementa estas tcnicas en la produccin de bienes
y servicios tiles para el ser humano, el ambiente y la industria (ver Cuaderno
N1)

Etapas para la obtencin de un organismo transgnico
La siguiente tabla resume los pasos bsicos de la ingeniera gentica empleados
para transformar un organismo, y se ejemplifica con un caso concreto:



Metodologa
Caso: obtencin de maz Bt que
produce una protena recombinante que
le confiere resistencia a determinados
insectos
1.Identificar un carcter deseable en el
organismo de origen
1. Identificar el carcter resistencia a
insectos en el organismo de origen, la
bacteria del suelo Bacillus thuringiensis
(Bt)
2.Encontrar el gen responsable del
carcter deseado (gen de inters),
aislarlo y caracterizarlo.
2. Encontrar al gen que lleva las
instrucciones para esta caracterstica,
aislarlo y caracterizarlo.
3.Combinar dicho gen con otros
elementos necesarios (vector) para que
ste sea funcional en el organismo
receptor
3. Combinar este gen con otros
elementos genticos para que sea
funcional en una planta: especialmente
una secuencia promotora (y ligarlo a un
vector adecuado para transformar
plantas)
4.Transferir el gen de inters,
previamente introducido en el vector
adecuado, al organismo receptor.
4. Transferir este gen a clulas de maz
(organismo receptor).
5. Crecer y reproducir el
organismo receptor, ahora
modificado genticamente.
5. Identificar las clulas de maz
que recibieron el gen (clulas
transformadas) y regenerar, a partir
de estas clulas, una planta adulta
resistente a insectos.

Tcnicas de Ingeniera Gentica o del ADN Recombinante

La obtencin de un organismo transgnico mediante tcnicas de ingeniera
gentica implica la participacin de un organismo que dona el gen de inters y un
organismo receptor del gen que expresar la nueva caracterstica deseada. Por
ejemplo, para el caso particular de la produccin de una variedad de maz que
resista el ataque de insectos, el organismo dador es la bacteria del suelo
denominada Bacillus thuringiensis (Bt) de la cual se extrae el gen que determina
la sntesis de la protena insecticida, y el organismo receptor del gen es la planta
de maz. Las etapas y tcnicas involucradas en este proceso seran:

1. Corroborar que existe un gen que codifica para la caracterstica
de inters. Cuando se encuentra una caracterstica en un organismo que
resulta interesante para transferir a otro organismo debe verificarse que es
producto de un gen. Se identifica el gen de inters por medio de cruzamientos a
partir de una caracterstica que se expresa, y se verifican las proporciones
mendelianas (ver Cuadernos 40 y 41). Si la caracterstica se atribuye a una
protena, que es producto directo de un gen, ser ms sencillo transferir esa
caracterstica a un organismo que no la tiene.

2. Clonar el gen de inters. Clonar un gen significa tenerlo puro en el tubo de
ensayos, o mejor an, dentro de un vector (una molcula mayor de ADN que
permite guardar fragmentos de ADN en forma estable y prctica por ms tiempo).
La tarea de clonar un gen involucra varias tcnicas (ver Cuaderno N 67): i)
Extraccin de ADN; ii) Bsqueda de un gen entre la mezcla de genes del ADN; iii)
Secuenciacin; iv) Construccin del vector recombinante. El ADN de inters se
inserta en plsmidos-vectores que son molculas de ADN lineales o circulares en
las cuales se puede guardar (clonar) un fragmento de ADN. Los ms usados son
los plsmidos de origen bacteriano.

Los plsmidos pueden extraerse de las bacterias e incorporarse a otras, a travs
del proceso de transformacin. Los plsmidos fueron modificados por los
investigadores para ser empleados como vectores (vehculos). As, el gen de
inters puede insertarse en el plsmido-vector e incorporarse a una nueva clula.

El desarrollo de estas tcnicas fue posible en gran medida por el descubrimiento
de las enzimas de restriccin (ver Cuaderno N 34 y 49). Las enzimas de
restriccin reconocen secuencias determinadas en el ADN. De esta manera,
conociendo la secuencia de un fragmento de ADN, es posible aislarlo del genoma
original para insertarlo en otra molcula de ADN. Hay muchas enzimas de
restriccin obtenidas a partir de bacterias y que sirven como herramientas para la
ingeniera gentica.

Las enzimas de restriccin reconocen secuencias de 4, 6 o ms bases y cortan
generando extremos romos o extremos cohesivos. Estos extremos, generados en
diferentes molculas de ADN, pueden sellarse con la enzima ADN ligasa y
generar as una molcula de ADN nueva, denominada recombinante.

Para tener gran cantidad y fcil disponibilidad del ADN de inters, el vector se
inserta dentro de bacterias (E. coli), las cuales crecen fcil y rpidamente. O sea,
la bacteria se utiliza como multiplicadora del vector, y por ende del inserto de
inters. Esta es una etapa de amplificacin del ADN para poder tener gran
cantidad para secuenciarlo, caracterizarlo, y luego poder hacer con l ADN
recombinante.

En placas de Petri se cultivan las bacterias. Se originan colonias de bacterias
iguales (clones). Las bacterias transformadas, que incorporaron el plsmido y el
gen de inters, se seleccionan por medio de antibiticos y por reacciones con
indicadores de color.

3. Caracterizar el gen de inters. A partir de conocer la secuencia del gen
se puede, mediante bioinformtica, comparar esta secuencia con las de genes ya
conocidos para determinar a qu gen se parece, y se le asigna una posible
funcin. Una vez predicha la funcin del gen clonado por medio de anlisis
informtico, se debe proceder a confirmar la funcin real in vivo, o sea corroborar
que en un sistema biolgico funciona acorde a lo que se prev. Para ello se suele
transferir el gen a un organismo modelo, en el cual se pueda expresar el gen y
medir su funcin. En el ejemplo del maz, el gen Bt se puede transferir primero a
las especies modelo Arabidopsis thaliana y Nicotiana tabacum (ver Cuaderno N
50).

4. Modificar el gen de inters. Si as se desea se puede agregar, deletar o
mutar secuencias dentro de la regin codificante, y agregar secuencias (promotor,
terminador, intrones) para que se pueda expresar en el sistema de inters. Por
ejemplo: si se clona un gen Bt de una bacteria para luego ponerlo en maz, se
debe agregar un promotor que funcione bien en plantas, es decir, que permita que
las clulas vegetales expresen la protena Bt. El promotor es una regin
fundamental del gen ya que determina cundo y dnde se expresar el gen.

EPGRAFE: Inserto preparado para ser transferido.
5. Transformacin de un organismo con el gen de inters. Una vez
hecha la construccin gentica con el gen y promotor deseado, se elige el mtodo
de transformacin ms indicado para el organismo que se desea hacer
transgnico (para plantas ver Cuadernos N 18 y 28, para animales ver Cuaderno
N 47).

6. Caracterizacin del OGM. Una vez obtenido el OGM, se lo analiza desde
el punto de vista molecular y biolgico. Para el anlisis molecular se debe
demostrar, entre otras cosas, si tiene una (o ms) copias del transgn, y cmo y
en qu tejidos se expresa el gen. Para analizar en qu tejido, momento y cantidad
se expresa el gen se analiza la presencia del ARN mensajero y de la protena
recombinante codificados por el transgn (ver Cuaderno N 49 y N67). Para la
caracterizacin biolgica, el OGM se analiza desde el punto de vista del objetivo
(en este ejemplo, si el maz resulta efectivamente resistente a los insectos) y
desde el punto de vista que sea necesario acorde al OGM en cuestin. Si ser
utilizado como alimento y se lo cultivar a campo, entonces se deber hacer el
anlisis de riesgo alimentario y ambiental (ver Cuadernos 62 y 60,
respectivamente).

Hasta el momento se ha utilizado la ingeniera gentica para producir, entre otras
aplicaciones:
Vacunas, por ejemplo contra la hepatitis B
Frmacos, como la insulina y la hormona del crecimiento humano, tanto en
clulas transformadas y crecidas in vitro como en bacterias recombinantes y
animales transgnicos
Enzimas para disolver manchas, como las que se usan en los detergentes en
polvo, mayormente por medio de microorganismos recombinantes
(transgnicos) que crecen en biorreactores.
Enzimas para la industria alimenticia, como las empleadas en la elaboracin del
queso y en la obtencin de jugos de fruta, entre otras.
Plantas resistentes a enfermedades, entre otras caractersticas.