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Problemas de Ampliacin de Qumica Fsica 2014

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TEMA 7
CINTICA ENZIMTICA (INHIBICIN)

1.- A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de que manera
est actuando el inhibidor. Determinar la Km para el enzima y la Ki para el complejo
enzima-inhibidor. Cul es la velocidad mxima?

[S] mM g P /h
(sin inhibidor)
g P/h
(6mM inhibidor)
2 139 88
3 179 121
4 213 149
10 313 257
15 370 313


2.- Se ha aislado de la bacteria Salmonella tyfpimurium una enzima que cataliza la
reaccin AP, se decidi hacer un estudio estructural y cintico de dicha enzima:

[A] mM 1.00 0.55 0.25 0.20
V(mmol P/ min) 1.00 0.71 0.50 0.41
V (nmol P/min) +I 0.66 0.41 0.25 0.20

donde I es un inhibidor de la enzima cuya influencia se quiere estudiar. Para una
concentracin de inhibidor [I] = 0,25mM
a) Km de la enzima estudiada para A, y Vmax para la transformacin AP en
presencia de E
b) Que tipo de inhibidor es I? Calcula la Ki.
c) Cul sera el efecto sobre la Vmax de la enzima, de un aumento de la
concentracin de I?

3.- La cintica de una enzima viene determinada como funcin de la concentracin de
sustrato en presencia y ausencia del inhibidor I.

[S], Mx10
-5
0.3 0.5 1.0 3.0 9.0
V(mol/min) 10.4 14.5 22.5 33.8 40.5
V(mol/min)+I 10
-4
M 2.1 2.9 4.5 6.8 8.1

a) Calcular la Km y la Vmax en presencia y ausencia de inhibidor
b) Que tipo de inhibidor es? Calcular la Ki

4.- Para la enzima catalasa se realiz un experimento en el que se determin la velocidad
de descomposicin del perxido de hidrgeno en ausencia en presencia de 10 nM de
enzima en el ensayo.

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T V(sin catalasa) V(con catalasa) 10nM
(C) (mol/s) (mol/s)
4 0.40x10
-8
0.0410
10 7.74 x10
-9
0.0464
15 1.31 x10
-8
0.0476
20 2.09 x10
-8
0.0497
25 3.52 x10
-8
0.0530
30 5.74 x10
-8
0.0598

Suponiendo que la concentracin de perxido de hidrgeno fue suficiente para garantizar
la saturacin de la enzima, calcular la energa de activacin de la reaccin con o sin enzima
y discuta sus resultados. (R=1.987 cal/mol.K)

5.- Los valores de Km y Vmax siguientes se determinaron midiendo la hidrlisis de
bromuro de acetilcolina catalizada por la esterasa bovina a diferentes temperaturas:

T (C) KM (mM) kcat
(mmol min
-1
pmol. t
-1
)
20 0.403 0.307
25 0.375 0.322
30 0.335 0.340
35 0.305 0.362
45 1.500 0.013

a) Qu intervalo de temperaturas deberan emplearse como datos para calcular la
energa de activacin de la reaccin catalizada por la enzima?.
b) Para realizar el clculo anterior: debera emplearse los valores de KM o de kcat.

6.- Los siguientes valores de velocidad inicial de enzimas fueron obtenidos para la -
quimotripsina actuando sobre un sustrato artificial (ester etlico de acetil-L-triptofano):

pH V (UI) pH V (UI)
5.4 10 7.2 260
5.6 19 7.4 280
5.8 32 7.8 300
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6.4 99 8.0 328
6.5 112 8.4 331
6.6 141 9.0 327
6.8 192

a) Determine los valores de pKa(s) del (los) grupo(s) involucrado(s) en este
comportamiento.
b) Diga que residuos de aminocido podran responsables de esta respuesta.
c) Si el experimento se extendiera hacia la regin ms alcalina de la escala de pH que
cabra esperar (explique su respuesta).
7.- Se realizaron estudios de inhibicin para dos enzimas diferentes presentes en el suero
bovino. Se vari la concentracin de sustrato a en ausencia y en presencia de tres
concentraciones diferentes de inhibidores de cada enzima. En cada caso encontrar:
a) El tipo de inhibicin.
b) El valor de Km y Vmax.
c) El valor de Ki para el inhibidor.
Enzima1: Fosfatasa alcalina de suero bovino. Inhibidor: Oxalato de Bromolevamisol

[Bromolevamisol]
(mM)
0 8 16 40
[Sustrato]
[FP](mM)
V0 (mmol min
-1
mg E
-1
)
0.1 0.231 0.210 0.191 0.158
0.3 0.431 0.369 0.309 0.239
0.7 0.607 0.488 0.425 0.277
1.3 0.751 0.599 0.467 0.304
1.8 0.811 0.657 0.530 0.319
2.6 0.912 0.657 0.546 0.328
4.1 0.957 0.688 0.561 0.351
5.8 0.981 0.741 0.558 0.344

Enzima 2: Transaminasa Glutmico Pirvica. Inhibidor: 2-hidroxi-succnico

[2-HS] (mM) 0.0 1.0 2.0 5.1
[Sustrato]
[Glu](mM)
V0 ( mol. min
-1
. mg E
-1
)
0.6 0.59 0.48 0.38 0.24
1.4 1.12 0.91 0.78 0.51
2.9 1.63 1.43 1.19 0.87
5.2 1.94 1.70 1.64 1.19
8.0 2.19 1.94 1.94 1.56
10.3 2.28 2.06 1.99 1.74
16.0 2.32 2.33 2.24 1.89
25.1 2.62 2.53 2.25 2.09


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8.- Se realiz un experimento con la enzima fosfoenolpyruvato:pyruvil tranferasa de
Streptococcus sp. Este enzima participa en la sntesis de la pared celular de las bacterias y
cataliza la transferencia de un grupo piruvilo a un precursor del pptido-glicano,
liberando fosfato. La fosfomicina (FSM) es un antibitico sintetizado por ciertas bacterias
del grupo Streptomyces que inhibe a esta enzima. Usando el fosfoenolpiruvato (PEP) como
sustrato a dos diferentes niveles de concentracin, se estudi la inhibicin de esta enzima
por fosfomicina.

[PEP] (mM) 75 200
[FSM] (mM) V
(nmol min
-1
mg E
-1
)
V
(nmol min
-1
mg E
-1
)
0 0.73 2.49
5 0.53 2.29
10 0.42 2.15
25 0.26 1.78
50 0.16 1.4
100 0.09 0.98

a) Identifique el tipo de inhibicin que se presenta
b) Calcule el valor de la I50 para este inhibidor a las concentraciones ms baja y ms
alta de sustrato empleadas en el experimento.
b) Qu diferencias observa entre este parmetro calculado con diferentes
concentraciones de sustrato?
c) Suponga que encuentra reportados en la literatura otros inhibidores de esta
enzima que actan por un mecanismo semejante a este compuesto, pero descubre
que en varios casos los autores emplearon diferentes concentraciones de PEP para
estudiar el efecto del inhibidor. Sera vlido comparar los valores de KI ?

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