Cdigo: I-CIRB-AADC-03

F-CIPLADE-CC-39/REV:00

Fecha de emisin:
1-Octubre -2012

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Instructivo para la Citometra
Hemtica


1.- OBJETIVO
Establecer los procedimientos necesarios para realizar correctamente la Citometra Hemtica
Completa que ayude a una buena orientacin diagnstica.

2.- ALCANCE
Aplica para la prueba de Citometria Hematica Completa de la muestra de los pacientes que acudan al
AADC.

3.- DESCRIPCIN DE LA OPERACIN

PROCEDIMIENTO DE LA CITOMETRIA HEMATICA COMPLETA
1.-Realizar la lectura automatizada.
2.-Realizar el frotis sanguneo.
3.-Realizar la tincin de reticulocitos.
4.-Conteo plaquetario en caso de requerirse.

A).-METODO AUTOMATIZADO

*ENCENDIDO DEL EQUIPO
1.-Encender el equipo presionando el botn: Encendido/apagado.
2.-Aspirar los 3 controles (alto, bajo y normal)
3.-Verificar los parmetros de cada control
4.-Mezclar bien la muestra que se va aspirar.
5.-Pasar las muestra por el analizador (Sysmex KX21).
6.-Transferir el reporte automatizado en la bitcora de CH.
7.-Poner en Sleep el equipo cuando no hay ms muestras que pasar.
8.-Presionar el botn verde para despertar el equipo si se desea seguir analizando muestras.

*APAGADO DIARIO:
1.-Presionar el botn Shudown
2.-Aspirar la solucin de lavado (cloro puro) como si fuera una muestra.
3.-Esperar que complete todo el ciclo de limpieza
4.-Apagar el equipo.

B).-TINCIN DE WRIGHT (mtodo de cubre objetos)
Es una tincin modificada del mtodo de Romanosky, los colorantes cidos se unen a los
componentes bsicos de las clulas afines al citoplasma e inversamente los colorantes bsicos son
atrados por los componentes no cidos, sea al ncleo, es decir que esta tincin es la mezcla de un
colorante cido que es la eosina y uno bsico que es el azul de metileno, tambin llamados colorantes
policromatfilos o neutros.
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cidos- Eosina
Bsico- Azul de metileno
Modo de preparacin de la tincin de Wright.
Pesar 1.5gr de Wright (colorante) y diluirlo para 500ml de metanol (frasco mbar) alejarlo de la
luz, se le aade pocas cantidades (al tanteo) de glicerina o al momento de prepararlo, mezclar
continuamente tratando de disolver el colorante.
1. Una vez practicado el frotis, ya sea de sangre perifrica o medula sea (M.O) se dejan
secar.
2. Se coloca los frotis en forma horizontal sobre varillas de vidrio
3. Se fijan con metanol y se deja escurrir
4. Se cubre con colorante de Wright:
a. Para Sangre perifrica: 1 min con Wright se le aade agua desionizada hasta la
aparicin de la capa metlica, se espera 4 minutos aproximadamente.
b. Para M.O: 1 minutos del colorante, se aade agua desionizada hasta que
aparece la capa metlica y activar cronometro por 7 minutos.
5. Posteriormente se lava con agua corriente de la llave, limpindose la parte posterior del
frotis, se dejan secar al aire libre y se observa al microscopio (100x)
6. Estos frotis as teidos pueden permanecer por tiempo indefinido si se cubren con
cubreobjetos o se protegen.
Interpretacin
El recuento diferencial es de mucha utilidad, para evaluar la infeccin o la inflamacin,
determinar los efectos de una posible intoxicacin por agentes qumicos o frmacos, controlar los
trastornos sanguneos (leucemias o anemias) y los efectos de la quimioterapia, o para detectar
reacciones alrgicas e infecciones parasitarias.
C).-TINCIN DE RETICULOCITOS
Introduccin
La velocidad de la eritropoyesis se determina por el recuento de reticulocitos. Normalmente,
algo menos del 1% de los glbulos rojos (GR) mas viejos son sustituidos por reticulocitos recin
formados cada da. Posteriormente el reticulocito tarda uno o dos das en transformarse en GR maduro
(1 da en medula sea y 1 da en sangre perifrica). Por consiguiente, los reticulocitos constituyen el
0.5%-1.5% de todos los GR de una muestra de sangre. Un recuento reticulocitario bajo en una
persona que padece anemia podra ser indicativo de una cierta incapacidad de la mdula sea para
responder, quiz debido a un dficit nutricional, un dficit de factor intrnseco o una leucemia. Un
recuento reticulocitico elevado podra indicar una buena respuesta medular a una perdida previa de
sangre o un tratamiento con hierro en una persona que presenta un dficit de hierro.

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Material biolgico
Aproximadamente 2ml de sangre con EDTA
Reactivos
Colorante para reticulocitos
1gr de Azul de Cresil brillante
100ml de sol. Salina c.b.p (NaCl 0.9%)
Modo de preparacin del reactivo Azul de Cresil brillante
Se pesa 1gr de Azul de Cresil brillante, luego lo disolvemos con solucin salina y mezclar, una vez
disuelto, lo filtramos en un matraz de 100ml, luego de filtrarlo completamos el volumen sobre el
embudo que tiene el mismo papel filtro ajustar a 100ml.
Mtodo de la prueba
1. Diluir partes iguales del colorante y sangre: 1 gota de sangre mas 1 gota del reactivo.
2. Esperar 15 segundos a 37C (incubar) o 30 segundos a temperatura ambiente.
3. Realizar un extendido de sangre en un portaobjetos.
4. Contar 1000 clulas y de esta cuenta (GR) sacar la proporcin de reticulocitos.

ndice Reticulocitario
IR=(Hto. Real/Hto. Ideal) x % Retis / 1 +Fc


D).- CONTEO MANUAL DE PLAQUETAS
Principio
La sangre se diluye con el Oxalato de Amonio al 1%, el cual hemoliza completamente los
hemates, posteriormente se cuentan las plaquetas mediante la cmara de Newbauer y al microscopio
de contraste de fase u objetivo de 40x, se verifica el resultado obtenido efectuando un segundo contaje
observamos la laminilla (frotis sanguneo) teido con colorante de Wright.

Tcnica de conteo manual de plaquetas
1. Se mezcla la sangre (tomada con EDTA) con suavidad durante 2 min. aprox.
2. Con la micropipeta de (GR) se aspira la sangre hasta la marca de 1.0, se diluye hasta la
marca de 101 con el Oxalato de Amonio (dilucin 1:100)
3. Se coloca la pipeta en un agitador de 10 a 15 minutos, de esta forma la mezcla de la
sangre y la hemolisis de los hemates sern completados.
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4. Se llena la cmara de Newbauer con el contenido de las pipetas debidamente
mezclado, desechando las 3 primeras gotas de la micropipeta y la siguiente gota se
pone en la cmara, por un lado o en el canal.
5. Se deja reposar por 15 min. Y en una cmara hmeda (caja de Petri con algodn
hmedo) con esto se facilita la sedimentacin de las plaquetas o al tiempo que la
humedad de la cmara hmeda evita la evaporacin del lquido de la cmara de
Newbauer.
6. Con ayuda del microscopio de contraste de fase se cuentan las plaquetas en la
cuadricula central destinada a la cuenta de GR (25 cuadros), calculando la cifra de
plaquetas como sigue:
a. Plaquetas/mm=#de plaquetas contadas por factor de dilucin por factor de
volumen
#De plaquetas contadas x 100


E).-VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR (V.S.G)
Introduccin
Cuando se dispone de un tubo de sangre con anticoagulante y se deja en reposo, se observa
que despus de un cierto tiempo las clulas sedimentan formndose 3 zonas: la inferior, constituida
por los hemates. Una media, de poco espesor constituida por los leucocitos, otra superior que es el
plasma. A Este proceso se denomina velocidad de sedimentacin globular y el inters de su estudio
reside en el hecho de que la velocidad a que se realiza o velocidad de sedimentacin globular (V.S.G)
puede variar en diversas situaciones patolgicas.
En la practica, la existencia de hemates de pequeo tamao (VCM ) o un numero muy escaso
(anemia intensa) y el marcado aumento de la concentracin plasmtica de ciertas protenas, como el
fibringeno o las globulinas (haptoglobulinas, -glicoprotena acida, 1 anti-tripsina, protena c-reactiva
e inmunoglobulinas), son las principales causas de un aumento de la V.S.G.

La sedimentacin globular se realiza en 3 etapas.
1. Hemaglutinacin o tendencia de los hemates a formar agregados en forma de pilas de
monedas
2. Sedimentacin o desplazamiento de los hemates hacia el fondo del recipiente a
velocidad constante.
3. Acmulos de los hemates en el fondo del recipiente.


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De estas etapas la ms importante es la primera o hemaglutinacin, ya que de ella depender
la velocidad de todo el proceso. As, cuanto mas pequeos sean los agregados, mas lentamente se
producir la sedimentacin y viceversa.
Tcnica
1. Se mezcla bien la sangre.
2. Se llena un tubo de Wintrobe con la sangre del paciente hasta la marca 10.
3. Se pone en una superficie plana y totalmente vertical y se deja reposar 1 hora.
4. Al trmino de la hora se lee la fila opuesta donde se lee el hematocrito o sea la fila de la
izquierda.

Valor de referencia:
Hombres: hasta 15 mm/h.
Mujeres: hasta 20 mm/h.
Nios: hasta 10 mm/h.
Recin nacidos: 0-2 mm/h.


Cdigo
(cuando aplique)
Nombre del documento Lugar de almacenami ento
N/A Manual de Operacin Sixmex KX21 Laboratorio de AADC
N/A Capitulo de Citometra Hemtica. Libro Arguelles Laboratorio de AADC
L-CIRB-AADC-02
Lineamiento para el manejo de Residuos Peligrosos
Biologicos Infecciosos (RPBI).
Laboratorio de AADC
P-CIRB-AADC-03 Procedimiento de muestras y entrega de resultados Sherpoint



Identificacin
(cdigo)
Nombre del
registro
Lugar de
almacenami ento
Responsabl e de
su proteccin
Tiempo de
retencin
Disposicin de
los regi stros
F-CIRB-
AADC-05
Bitcora de
Citometra hemtica
Laboratorio de
AADC
Qumica 1 ao Archivo muerto







4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA
5.- CONTROL DE REGISTROS
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Hemtica


6.- GLOSARIO

6.1 .- SIGLAS
AADC.-Area de apoyo al diagnstico clinico.
CH.-Citometria hematica
6.2 .- DEFINICIONES
CITOMETRIA HEMATICA.- Medicin de clulas sanguneas.


Nota: La seccin 7 ser utilizada a partir de la primera modifi cacin a este documento. La revisin 00, se
mantendr en blanco.







Las firmas avalan la responsabilidad de l as personas que: elaboran el documento, revisan su adecuacin
y aprueban para su implementacin dentro del Sistema de Gestin de la Calidad de la Universi dad
Autnoma de Yucatn.
7.- CONTROL DE REVISIONES

NIVEL DE
REVISIN
SECCIN
Y/O PGINA
DESCRIPCIN DE LA MODIFICACIN Y MEJORA
FECHA DE
MODIFICACIN

00
Todo el
documento

Seccin 1
Se cambi el formato


Se modific la redaccin del objetivo.

18 de Enero 2013
Elabor

QFB. Gabriela Alonzo Salomn
Tcnico Acadmico

Revis

Dr. Pedro Gonzlez Martnez
Responsable del AADC

Aprob

DR. J orge Zavala Castro
Director del CIR