Ncleo, organizao

da cromatina e
cromossomos
Fonte: Alberts et al. (1997)
Seco transversal de um ncleo tpico
Retculo
endoplasmtico
Filamentos
intermedirios
Poro nuclear
Cromatina
Nuclolo
Centrossomo
Microtbulo
Lmina nuclear
Membrana externa
Membrana interna
Envelope nuclear
O ncleo separado do citoplasma por duas membranas que formam o
envelope nuclear.
Envoltrio nuclear
Fonte: Alberts et al. (1997)
envelope
nuclear
poro
nuclear
lmina
cromatina
condensada
1 m
Citoplasma
Ncleo
Envelope nuclear
Cada membrana nuclear formada por uma dupla-camada de
fosfolipdios (que impermevel passagem de gua)e um grande
nmero de protenas.
O transporte de macromolculas atravs do ncleo (RNA mensageiro,
unidades ribossomais, tRNA, etc) realizado pelo complexo do poro
nuclear (CPN).
Envelope nuclear
Os poros nucleares so grandes e complexas estruturas responsveis pelo
transporte (entrada e sada) de molculas atravs do envoltrio nuclear.
Sentido Substrato Passagem/poro/min
Entrada Histonas 100
Outras protenas 100
Protenas ribossomais 150
Sada Subunidades ribossomais 5
RNA mensageiro < 1
Os poros nucleares esto presentes em nmero de 3000 por clula animal.
O envelope nuclear livremente permevel a ons, nucleotdios e
pequenas molculas, fazendo com que sua composio seja muito
semelhante do citoplasma.
Envelope nuclear
O complexo do poro nuclear formado por mltiplas cpias (100 em
vertebrados) de uma classe de protenas chamada de nucleoporinas.
Anlises de microscopia eletrnica revelam que o CPN possui uma
estrutura octagonal inserida na membrana nuclear que apresenta longos
filamentos que se estendem at o nucleoplasma.
Envelope nuclear
O CPN associado uma rede de filamentos chamada de lmina
nuclear que se localiza sobre a superfcie interna do CPN.
Envelope nuclear
A lamina nuclear formadas pelas protenas Lminas A, B e C. Estas
protenas pertencem uma classe de protenas do citoesqueleto, chamada
de filamentos intermedirios, que so muito importantes como suporte
das membranas.
No incio da mitose, uma protena kinase fosforila (adico de um grupo
fosfato) um aminocido Serina presente em todas as lminas. Este evento
causa uma despolarizao das lminas que leva desintegrao da
membrana nuclear.
Envelope nuclear
Envelope nuclear
Transporte de protenas para o ncleo
Todas as protenas que encontram-se no ncleo so sintetizadas no citosol
e importadas para o ncleo atravs do CPN. Estas protenas apresentam
um Sinal de Localizao Nuclear (SLN) que as direciona ao interior do
ncleo.
O SLN consiste de uma pequena sequncia de aproximadamente 7 amino-
cidos bsicos localizados na parte final (C-terminal) da protena..
O processo de importao de protenas ao ncleo envolve a presena de
protenas chamadas de importinas, que participam diretamente no
reconhecimento e transporte das protenas do citosol para o interior da
organela.
Transporte de protenas para o ncleo
Fuso de uma protena citosslica um SLN faz com que a protena seja
transportada ao ncleo.
Organizao estrutural dos cromossomos
eucariotos
A organizao do DNA no interior do ncleo essencial devido ao fato
de seu tamanho ser at 100.000 vezes superior ao tamanho das clulas.
Na intrfase, quando as clulas no esto se dividindo, o material gentico
existe na forma de um complexo de nucleoprotenas, chamado de
cromatina, que encontra-se disperso no ncleo.
Ao longo da mitose, ocorre um processo de compactao e montagem da
cromatina que produz cromossomos visveis (mxima consensao
ocorre na metfase) cuja morfologia e colorao so objeto de estudo por
parte dos citogeneticistas.
Organizao estrutural dos cromossomos
eucariotos
O DNA nuclear est associado uma massa igual de protenas na forma
de cromatina. As caractersticas estruturais da cromatina entre eucariotos
so bastante semelhantes.
As protenas mais abundantes associadas ao DNA so as Histonas. Estas
protenas formam uma pequena famlia de protenas - H1, H2A, H2B, H3
e H4. As histonas apresentam aminocidos bsicos que interagem com
a carga negativa das molculas de DNA.
A cromatina existe nas formas condensada e
estendida
A observao da cromatina ao microscpio eletrnico em baixas
concentraes de sal e na ausncia do on Mg
+2
, revela uma estrutura
semelhante um colar de contas.
Organizao da cromatina
A cromatina formada por DNA livre conectando estruturas na forma
de um colar de contas chamado de nucleossomo.
Os nucleossomos so formados por histonas e DNA, apresentam um
dimetro de cerca de 10 nm e so considerados as unidades estruturais
primrias da cromatina.
Os nucleossomos so formados por um ncleo principal composto pelas
histonas H2A, H2B, H3, H4 e envoltos por DNA.
As histonas esto presentes em duplicata formando um octmero.
Nucleossomo
O nucleossomo e
seus componentes
A
Estrutura tridimensional
do octmero de histonas
B
Estrutura da cromatina condensada
A cromatina tambm pode se apresentar sob a forma de fibras de 30 nm.
Neste caso, ela apresenta-se em fibras condensadas, nos quais os
nucleossomos so empacotas numa espiral irregular ou distribuio
solenide, com aproximadamente 6 nucleossomos por volta.
Nucleossomos ao microscpio eletrnico
Fonte: Alberts et al. (1997)
(B) Colar de contas
Fonte: Alberts et al. (1997)
(A) Fibra de 30 nm
50 nm
Estrutura da cromatina condensada
A histona H1est ligada ao DNA do lado interno do solenide, com uma
histona H1 para cada nucleossomo.
Estrutura da cromatina condensada
Cada uma das histonas presentes no interior do nucleossomo apresenta
uma sequncia N-terminal flexvel de 11 a 37 aminocidos. Estas regies
so chamadas de caudas das histonas. Alm disso, cada H2A tambm
possui uma cauda na extremidade C-terminal.
Estrutura da cromatina condensada
Estas caudas das histonas apresentam aminocidos Lisina que so alvo de
modificaes (acetilaes).
Estas modificaes neutralizam o carter bsico da lisina de forma que a
sua afinidade pelo DNA reduzida. Com isso, a estrutura da fibra de 30
nm desfavorecida e a cromatina torna-se menos condensada.
Presena de outras protenas funcionam
como uma espcie de suporte cromatina
Apesar das histonas serem as protenas predominantes na cromatina,
outras protenas tambm participam da sua organizao. Estas protenas
funcionam como um suporte/esqueleto sobre o qual o DNA organizado.
Estas protenas so conhecidas como
scaffold proteins (protenas do
esqueleto).
Nveis de compactao da cromatina e do
cromossomo metafsico
A cromatina tambm apresenta pequenas
quantidades de outras protenas
A cromatina e cromossomos metafsicos tambm apresentam pequenas
quantidades de um complexo grupo de protenas. Um exemplo so os
fatores transcricionais (necessrios transcrio dos genes).
Outro exemplo so as High Motility Proteins (protenas de alta
motilidade), presentes em nveis bem mais elevados do que os fatores
transcricionais. Estas protenas esto aparentemente envolvidas na
transcrio de um grande nmero de genes.
Cromossomo eucarionte - Resumo
O cromossomo eucarionte uma estrutura linear composta de uma cadeia
extremamente longa de DNA, ao qual encontram-se distribudos
octmeros de histonas a cada 200 pares de base, formando fitas de
nucleossomos compactados.
Os nucleossomos formam fibras de 30 nm, que so associados a protenas
que servem como esqueleto (scaffold proteins) em intervalos de milhes
de pares de base, resultando em longas alas que saem deste esqueleto
ou suporte.
Alm disso, um complexo grupo de milhares de protenas presentes em
pequena quantidade est associado sequncias especficas do DNA
cromossmico.
Morfologia e elementos funcionais de um
cromossomo eucarionte
Os cromossomos so apenas visveis em clulas em diviso celular com o
auxlio de corantes especficos para o DNA ou via microscopia eletrnica.
Na mitose ou meiose, os cromossomos condensam-se (mxima
condensao na metfase) e tornam-se visveis em microscpios ticos.
Os cromossomos consistem em duas cromtides ligados por um
centrmero.
O nmero, tamanho e forma de um cromossomo metafsico constitui o
caritipo, que caracterstico para cada espcie.
Representao de um tpico cromossomo
metafsico
Microfotografia de um cromossomo
Representao esquemtica de
um cromossomo metafsico
cromossomo
centrmero
cromtide
cromtide 2
cromtide 1
Cromossomos metsfsicos apresentam um
padro diferente de bandeamento
Certos corantes atuam especificamente sobre determinadas regies de
um cromossomo metafsico, produzindo um padro diferente de bandas
para cada cromossomo.
Este padro serve para identificar cromossomos de tamanhos e e formas
semelhantes.
Bandeamento G produzido com o corante Giemsa. As bandas G
correspondem a regies do genoma que normalmente apresentam baixos
teores dos nucleotdios G (guanina) e C (citosina).
Bandeamento G
Fonte: Alberts et al. (1997)
Mapa padro de bandamento
de cromossomos humanos
Pintura dos cromossomos
Recentemente foi desenvolvido um mtodo que permite marcar os
cromossomos com corantes fluorescentes. Desta forma, torna-se possvel
identific-los com preciso.
Pintura dos cromossomos
Translocaes cromossomais podem ser monitoradas via tcnicas de
marcao fluorescente dos cromossomos. Certos tipos de translocao
esto associados a doenas genticas, como certos tipos de cncer. Ex:
um tipo de leucemia.
Cromossomos politnicos
Nas glndulas salivares de certos tipos de insetos (ordem Diptera),
observa-se a presena de enormes cromossomos que so visveis com um
microscpio tico. Tratam-se dos cromossomos politnicos.
Os cromossomos politnicos so formados a partir de divises celulares
sendo que os cromossomos resultantes (duplicados) no se separam.