Relba - V3N1

Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal
Revista Latinoamericana de
Biotecnologa Ambiental y Algal

Volumen 3 No. 1, 2012

www3.inecol.edu.mx/relbaa

ISSN: 2007-2570
(Versin Electrnica)

Editor en Jefe

Eugenia. J. Olgun

Editores Asociados

Gabriel Acin Fernndez
Roberto de Philippis
Ever Morales Avendao
Hugo Moreira Soares
Sergio Revah
Gloria Snchez Galvn

REVISTA LATINOAMERICANA DE BIOTECNOLOGA AMBIENTAL Y ALGAL
Ao 3, No.1, enero - junio 2012, es una publicacin semestral editada por el Instituto de Ecologa, A,C.
Carretera antigua a Coatepec No. 351, El Haya, Xalapa, Veracruz, C.P. 91070, Mxico. Tel (228) 8 42 18
49. Editor responsable: Dra. Eugenia Judith Olgun Palacios. ISSN: 2007-2570. Responsable de la ltima
actualizacin de este nmero: Ing. Ricardo Erik Gonzlez Portela. Fecha de ltima modificacin: 30 de
julio de 2012. Las opiniones expresadas por los autores no necesariamente reflejan la postura del editor
de la publicacin. Queda estrictamente prohibida la reproduccin total o parcial de los contenidos e
imgenes de la publicacin sin previa autorizacin del Instituto de Ecologa, A.C. Carretera Antigua a
Coatepec No. 351 El Haya, Xalapa, Ver. 91070, Mxico.

I I N N E E C C O O L L

M M E E X X I I C C O O


.
Katiushka Arvalo Nio
Universidad Autnoma del
Estado de Nuevo Len, Mxico

Bertha Olivia
Arredondo Vega
Centro de Investigaciones
Biolgicas del Noroeste, S.C.,
Mxico

Elisa Esposito
Universidade de Mogi das
Cruzes, Brasil

Jorge Luis Folch Mallol
Universidad Autnoma del
Estado de Morelos, Mxico

Joan Garca
Universidad Politcnica de
Catalua, Espaa

Jorge Gmez Hernndez
Universidad Autnoma
Metropolitana-Iztapalapa,
Mxico

Mariano Gutirrez Rojas
Universidad Autnoma
Mxico

Sylvie Le Borgne
Universidad Autnoma
Metropolitana-Cuajimalpa,
Mxico

Ral Muoz
Universidad de Valladolid,
Espaa

Adriana Matiz Villamil
Pontificia Universidad
Javeriana, Colombia

scar Monroy Hermosillo
Universidad Autnoma
Mxico

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Universidad Autnoma
Mxico

Leopoldo Naranjo Briceo
Instituto de Estudios
Avanzados, Venezuela

Adela Irmene
Ortiz Lpez
Universidad Autnoma
Mxico

Juan Jos
Pea Cabriales
Centro de Investigacin y de
Estudios Avanzados del
Instituto Politcnico Nacional-
Irapuato, Mxico

Mnica Cristina
Rodrguez Palacio
Universidad Autnoma
Mxico

Eliora Z. Ron
Tel-Aviv University,
Israel

Georgina Sandoval
Centro de Investigacin y
Asistencia en Tecnologa y
Diseo del Estado de Jalisco,
Mxico

Rafael Vzquez-Duhalt
Universidad Nacional Autnoma
de Mxico

Avigad Vonshak
Ben-Gurion University of the
Negev, Israel

Chisti Yusuf
Massey University, New
Zealand
Gabriel Acin Fernndez
Universidad de Almera,
Espaa
Roberto De Philippis
Universit degli Studi di Firenze,
Italia
Ever Morales Avendao
Universidad del Zuila,
Venezuela
Hugo Moreira Soares
Universidade Federal de Santa
Catarina,Brasil
Gloria Snchez Galvn
Instituto de Ecologa, A.C.
Mxico
Sergio Revah
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Metropolitana-Cuajimalpa, Mxico
Editor en Jefe
Eugenia J. Olgun
Instituto de Ecologa, A.C., Mxico
Editores Asociados

Comit Editorial

Produccin Editorial
Ricardo E. Gonzlez-Portela
Diseo de portada: J. Sandria, Instituto de Ecologa, A.C., Mxico

Derechos Reservados
REVISTA LATINOAMERICANA DE BIOTECNOLOGA AMBIENTAL Y ALGAL // INSTITUTO DE ECOLOGA, A.C.
Carretera antigua a Coatepec No. 351 El Haya. Xalapa, Veracruz, 91070, Mxico.


Objetivos y Temtica

La Revista Latinoamericana de Biotecnologa Ambiental y Algal (RELBAA), es la
primera revista en la regin, dedicada a la publicacin de trabajos inditos de
carcter cientfico y/o de desarrollo tecnolgico, revisiones crticas y notas cientficas
relacionados con la biotecnologa ambiental y algal, y tambin con bioprocesos ms
limpios para el desarrollo sustentable. Asimismo, ofrece un foro para que la
comunidad cientfica y tecnolgica latinoamericana, comunique sus investigaciones en
el mbito internacional. Los manuscritos enviados se sometern a un proceso riguroso
de revisin por pares.

Se considera a la Biotecnologa Ambiental como un campo multidisciplinario que
integra las ciencias y la ingeniera con el objeto de aprovechar el potencial bioqumico
de los microorganismos, plantas, animales y su material gentico, para desarrollar,
usar y regular sistemas biolgicos para la remediacin de ambientes contaminados
(suelo, aire, agua), as como para generar procesos ambientalmente pertinentes para
el uso sustentable de los recursos naturales y la conservacin del medio ambiente.

Por otra parte, se considera a la Biotecnologa Algal como un campo en donde se
integran las ciencias y la ingeniera para el aprovechamiento de las microalgas y de las
macroalgas con la finalidad de generar nuevos productos de inters alimentario,
farmacutico o energtico y/o para lograr el reciclaje de nutrientes de aguas
residuales y/o la captura de carbono y su transformacin en biomasa algal.

Finalmente, es importante sealar que en esta revista tambin se incluye la
temtica de los Bioprocesos ms Limpios, en consideracin a que contribuyen al
desarrollo industrial sustentable. Se adopta la definicin de Produccin ms Limpia de
Naciones Unidas: es la aplicacin continua de una estrategia ambiental integrada y
preventiva a procesos, productos y servicios para incrementar la eco-eficiencia y
reducir riesgos a los seres humanos y el medio ambiente.

La revista es una publicacin semestral a cargo de un grupo de investigadores del
rea de Biotecnologa Ambiental del Instituto de Ecologa, A.C. Ocasionalmente
aparecern nmeros especiales. Se aceptan trabajos en espaol, ingls y portugus.

Considerando que la tendencia actual es la publicacin en formato electrnico
logrando ahorro de papel, esta revista se publicar exclusivamente en este formato y
estar accesible al pblico en general sin costo, por lo menos el primer ao. Sin
embargo, es esencial que los usuarios citen los artculos dando crdito a los autores y
a la revista, citando la referencia completa como aparece en todas las pginas de
cada uno de ellos.


CONTENIDO
Vol. 3 No. 1
2012

Biodiversidad y potencial hidrocarbonoclstico de hongos aislados de crudo y sus
derivados: Un meta-anlisis.
Beatriz Perna, Jhonny Rafael Demey, Ysvic Inojosa y Leopoldo Naranjo-Briceo
(Venezuela) ..................................................................................................................................... 1

Evaluacin global de la produccin de biocombustibles con microalgas: Establecimiento
de capacidades, limitaciones y factores determinantes de la viabilidad del proceso.
F.G. Acin, J.M. Fernndez-Sevilla, J.J. Magn, A. Gonzlez-Cspedes,
y E.Molina (Espaa) ...................................................................................................................... 40

Development of a methodology for net energy analysis in biorefineries, regarding
microalgae cultivation to improve energy yields in industrial wastes.
Matheus Rufino Oliveira, Jos Osvaldo Beserra Carioca,
y Svio Macambira (Brasil) .......................................................................................................... 59

Remocin de nutrientes por tres cultivos de microalgas libres e inmovilizados.
B.M Hernndez-Reyes, M.C. Rodrguez-Palacio, C. Lozano-Ramrez,
y P. Castilla-Hernndez (Mxico) ................................................................................................. 80

Perna B., Demey J.R., Inojosa Y., Naranjo-Briceo L. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):1-39

Biodiversidad y potencial hidrocarbonoclstico de hongos
aislados de crudo y sus derivados: Un meta-anlisis

Beatriz Perna*, Jhonny Rafael Demey, Ysvic Inojosa, y Leopoldo Naranjo-Briceo

Direccin de rea de Energa y Ambiente, Fundacin Instituto de Estudios Avanzados (IDEA),
Sartenejas, Caracas 1080, Venezuela, http://www.idea.gob.ve/

*Autor de correspondencia: bpernia@idea.gob.ve

Resumen

La explotacin, produccin, refinacin y transporte de petrleo y sus derivados conlleva
ocasionalmente accidentes tcnicos y operacionales que causan severo deterioro al ambiente.
Existen hongos capaces de biotransformar o biodegradar hidrocarburos que pueden ser utilizados
como estrategia en la micorremediacin de aguas y suelos impactados por la actividad petrolera.
Con el objetivo de determinar la diversidad de hongos aislados de diferentes sustratos
contaminados con hidrocarburos y sus derivados, as como determinar su capacidad degradativa,
se realizaron meta-anlisis utilizando la informacin disponible en las bases de datos cientficas
Web of Science y SciFinder Scholar. Los resultados de los meta-anlisis mostraron que, del total
de hongos reportados como aislados de crudo, sus derivados, y sustratos impactados con
hidrocarburos, 83% pertenecen al Phylum Ascomycota, 10% al Phylum Zygomycota, 6% al
Phylum Glomeromycota y 1% al Phylum Basidiomycota. Los sustratos con mayor diversidad
fngica fueron los suelos impactados con crudo y asfalto natural, obtenindose la menor
diversidad en suelos contaminados con diesel y gasolina. Los gneros de mayor frecuencia fueron
Penicillium (18%), Aspergillus (17%) y Fusarium (6%). En funcin del porcentaje de
degradacin de hidrocarburos totales de petrleo (TPH), el grupo que present mayor
degradacin fue el formado por los gneros Phanerochaete, Coriolus, Trametes, Pleurotus,
Bjerkandera, Rhizopus, Emerciella y Aspergillus (TPH: 523.53) y, con respecto a las fracciones
de saturados y aromticos del crudo, los grupos formados por los gneros Phanerochaete,
Coriolopsis, Trametes, Pleurotus, Emerciella, Fusarium y Beauveria (74.433.40%) y Trametes,
Pleurotus, Fusarium y Coriolopsis (97.752.25%), respectivamente. As mismo, se encontraron
evidencias de degradacin de las fracciones de resinas y asfaltenos (10-28% y 10-40%,
respectivamente) por los gneros Aspergillus, Candida, Emericella, Eupenicillium, Fusarium,
Graphium, Neosartorya, Paecilomyces y Pichia. Este trabajo representa el primer meta-anlisis
sobre la diversidad fngica aislada de ambientes contaminados con crudo y sus derivados, as
como de su capacidad hidrocarbonoclstica, a travs de la revisin detallada de trabajos
cientficos publicados en los ltimos 50 aos y el anlisis de sus resultados.

Palabras clave: degradacin, hidrocarburos, hongos, micorremediacin, petrleo

1

Biodiversity and hydrocarbonoclastic potencial of fungi
isolated from crude and petroleum derivates: a meta-analysis

Abstract

Exploitation, production, refining and transportation of crude oil and its derivatives occasionally
involves technical and operational accidents causing damage to the environment. Some fungi
inhabiting oil-polluted environments are able to transform oil hydrocarbons so they have a high
potential to be use in mycoremediation strategies of oil-polluted soil and water by the oil
industries activities. In order to determine the fungal diversity isolated from crude oil, water and
oil-polluted soils, and hydrocarbon contaminated environments, as well to determine their
hydrocarbon degradative capabilities, meta-analysis using information reported in Web of
Science and SciFinder Scholar scientific databases were performed. The results showed that the
total of fungal diversity isolated is constituted by Phylum Ascomycota (83%), Zygomycota
(10%), Glomeromycota (6%), and Basidiomycota (1%). The substrates with major diversity were
oil-polluted soils and natural asphalt. Members of the genus Penicillium (18%), Aspergillus
(17%) and Fusarium (6%) were the most predominant. The genus with a major percentage of
total petroleum hydrocarbons (TPH) degradation were: Phanerochaete, Coriolus, Trametes,
Pleurotus, Bjerkandera, Rhizopus, Emerciella and Asperguillus (523.53), respect to degradation
of saturate and aromatic fractions of crude oil were obtained two groups formed by the genus:
Phanerochaete, Coriolopsis, Trametes, Pleurotus, Emerciella, Fusarium and Beauveria
(74.433.40%), and Trametes, Pleurotus, Fusarium and Coriolopsis (97.752.25%),
respectively. Likewise, evidence of degradation of resins and asphaltenes fractions of crude oil
(10-28% and 10-40%, respectively) were reported by the genus Aspergillus, Candida,
Emericella, Eupenicillium, Fusarium, Graphium, Neosartorya, Paecilomyces and Pichia. This
work represents the first meta-analysis of fungal diversity isolated from crude oil, its derivatives,
and hydrocarbon contaminated environments, including their hydrocarbonoclastic capabilities,
through a detailed review of scientific papers published in the last 50 years and analysis of
results.

Key works: degradation, hydrocarbons, mycorremediation, petroleum, SARA

1. Introduccin

La explotacin, produccin, refinacin y
transporte de petrleo y sus derivados
conlleva ocasionalmente accidentes tcnicos
y operacionales que causan severo deterioro
al ambiente y que pueden llegar a generar
daos irreversibles a los ecosistemas,
afectando a la flora, la fauna y la
composicin de las comunidades
microbianas autctonas (Bartha y Atlas,
1977; Amund et al. 1987; Odokuma y
Opokwasili, 1992; Obire, 1993). Debido al
enriquecimiento selectivo de ciertos
microorganismos ms tolerantes, resultan
favorecidas aquellas especies capaces de
adaptarse y crecer en presencia de estos
compuestos txicos y recalcitrantes (Benka-
Coker y Ekundayo, 1997). As mismo, la
distribucin de microorganismos capaces de
utilizar hidrocarburos depende de la presin
selectiva ejercida por los hidrocarburos en
un determinado ambiente (Atlas y Bartha,
1972; Calomiris et al. 1986). El aislamiento
de microorganismos (bacterias, hongos y
levaduras) a partir de ecosistemas
2

contaminados o de hbitats extremos ha
evidenciado la existencia de ciertos hongos
capaces de biotransformar hidrocarburos en
compuestos menos txicos o inocuos para el
ambiente. Esto ha permitido el desarrollo de
la micorremediacin como una estrategia
viable para el saneamiento de cuerpos de
agua y suelos contaminados con
hidrocarburos (Chaillan et al. 2004, Moreno
et al. 2004). El presente trabajo pretende
contribuir al conocimiento de la
biodiversidad de hongos que han sido
aislados de crudo, sus derivados y de
ambientes contaminados con hidrocarburos;
as como conocer su capacidad para degradar
hidrocarburos y las fracciones que lo
componen.

2. Materiales y mtodos

Para realizar los meta-anlisis que
constituyen la presente revisin, la
informacin sobre gneros y especies de
hongos aislados de hidrocarburos, sustratos
contaminados con crudo y sus derivados, as
como de su capacidad de degradacin de
crudo y sus fracciones de saturados,
aromticos, resinas, y asfaltenos (SARA),
fue extrada de las bases de datos Web of
Science (del ao 1900 al 2012) y SciFinder
Scholar (del ao 1940 al 2012). En este caso,
se define como sustrato a aquel tipo de
hidrocarburo o derivado del mismo que
impregna o no una determinada porcin
suelo o de agua. En esta revisin se
estudiaron los siguientes tipos de sustrato:
crudo (C); suelo contaminado con crudo
(SC); agua contaminada con crudo (AC);
suelo contaminado con gasolina (SG); suelo
contaminado con kerosene (SK); sedimento
de ro contaminado con crudo (SR); diesel
(D); gasolina (G) y; lago natural de asfalto
(LA). La bsqueda gener una matriz de
dimensin n x p, donde n es el nmero total
de hongos aislados en hidrocarburos y p el
nmero de variables referidas a gnero,
especie, Phylum, Orden, tipo de sustrato,
porcentaje de degradacin de crudo y sus
fracciones SARA (Saturados, Aromticos,
Resinas y Asfaltenos). Se realizaron anlisis
descriptivos para cada una de las variables,
se determin la biodiversidad por sustrato y
se aplicaron tcnicas de clasificacin
(anlisis de conglomerados) para configurar
grupos funcionales de hongos con capacidad
de degradacin de crudo y sus derivados. En
el caso de los meta-anlisis realizados para
determinar la capacidad degradativa de
hongos, se utiliz la mayor tasa porcentual
de degradacin reportada para todos los
casos. Todos los anlisis se realizaron
usando el paquete estadstico InfoStat,
Versin 2010 (Di Rienzo et al. 2010).

3. Resultados y discusin

3.1. Biodiversidad de hongos aislados de
crudo, sus derivados y suelos
contaminados
El primer reporte de crecimiento de hongos
en hidrocarburos lo realiz Miyoshi en el
ao 1895, donde observ crecimiento de
Botrytis cinerea sobre parafina (Zobell,
1946). Posteriormente, en 1906 Rahn
observ que Penicillium glaucum era capaz
de descomponer la parafina y utilizarla como
nica fuente de carbono y energa (Zobell,
1946). A partir de esta fecha, han sido
numerosos los trabajos donde se reporta el
crecimiento de hongos y levaduras en
diferentes medios con hidrocarburos.
La mayor cantidad de reportes de hongos
aislados de crudos han sido realizados en
suelos contaminados. Radwan et al. (1995)
aislaron los gneros Aspergillus y
Penicillium de muestras de suelos desrticos
contaminados en Kuwait. Estos
microorganismos tambin fueron aislados de
suelos contaminados en Arabia Saudita
(Snellman et al. 1988; Bokhary y Parvez,
1993; Hashem, 1995). Por otro lado,
Colombo et al. (1996) aislaron Aspergillus
terreus y Fusarium solani en un suelo
naturalmente contaminado con
3

hidrocarburos en Argentina. En un estudio
similar en Indonesia se aislaron los gneros
Aspergillus, Penicillium, Fusarium,
Amorphoteca, Neosartorya, Paecilomyces,
Talaromyces y Graphium (Chosson et al.
1991) y, en el Golfo de Mxico, a Alternaria
alternata, Aspergillus niger, Cordyceps
sinensis, Gibberella fujikoroi, Hypocrea
lixii, Pencillium decumbens, Pleospora
herbarum, Sphaerodes retispora y
Cochliobolus lunatus (Al-Nasrawi, 2012).
Nkwelang, et al. (2008), en Nigeria,
reportaron una sucesin de microorganismos
presente en un suelo contaminado con crudo
y crudo emulsionado, en un lapso de tiempo
de 3 meses, durante la poca de sequa y
lluviosa. Estos autores encontraron que no
todos los hongos aislados al inicio del
experimento fueron encontrados al final del
mismo. Sin embargo, los gneros
Penicillium y Aspergillus fueron aislados al
final de los cuatro tratamientos lo que indica
que estos dos gneros son capaces de
sobrevivir en el tiempo en suelos
contaminados con crudos. Estos hallazgos
apuntalan la explicacin de que las especies
ms comunes que se reportan en la mayora
de los trabajos son Aspergillus y Penicillium
(Nyns et al. 1968; Llanos y Kjoller, 1976;
Oudot et al. 1987; Snellman et al. 1988;
Bokhary y Parvez, 1993; Oudot et al. 1993;
April et al. 2000). Por otra parte, algunos de
los microorganismos aislados, aun no siendo
hidrocarbonoclsticos, pudieran ser capaces
de sobrevivir a dichas condiciones, lo que
sugiere que no todas las especies de hongos
presentes en el suelo contaminado son
capaces de tolerar y utilizar hidrocarburos
como fuente de carbono y energa.
Salmanov et al. (2008) realizaron un estudio
ecolgico a niveles cualitativos y
cuantitativos de la micoflora presente en
agua y suelo impactados con crudo en la
Pennsula de Absheron en el Mar Caspio. En
las muestras de agua se encontraron 7
especies de hongos donde el gnero ms
comn fue Penicillium detectado en un
58.3% de las muestras totales de agua. Los
gneros ms frecuentemente aislados fueron:
Aspergillus, Penicillium, Mucor,
Trichoderma, Cephalosporium y Fusarium.
Naranjo et al. (2007) aislaron cepas de
hongos del lago natural de asfalto de
Guanaco (Edo. Sucre, Venezuela) capaces
de crecer sobre crudo extrapesado y varios
hidrocarburos aromticos policclicos
(HAPs), tales como naftaleno,
dibenzotiofeno, fenantreno y pireno,
pertenecientes a los gneros: Fusarium,
Penicillium, Trichoderma, Aspergillus,
Neosartorya, Pseudollescheria,
Cladosporium, Pestalotiopsis, Phoma y
Paecilomyces.
Por otro lado, estudios realizados en
sistemas de distribucin de hidrocarburos se
ha reportado el aislamiento de diversas cepas
de hongos. En Nigeria, Ifeanyichukwu
(1996) aisl especies de los gneros
Penicillium y Cunninghamella en tanques de
almacenamiento de crudo. Bento y Gaylarde
(2001) aislaron de una refinera y de los
sistemas de distribucin de diesel las
especies: Hormoconis resinae, Aspergillus
niger, Aspergillus fumigatus, Paecilomyces
variotii, Penicillium sp., y las levaduras
Candida silvicola y Rhodotorula glutinis.
Por otra parte, en muestras de gasolina se
han aislado los hongos filamentosos:
Alternaria, Aspergillus, Chrysosporium,
Cladosporium, Fusarium, Penicillium y
Phialophora y las levaduras Candida y
Rhodotorula (Hettige y Sheridan, 1984;
Gaylarde et al. 1999).
Se han realizado diversas investigaciones en
las cuales se reporta el aislamiento de
microorganismos a partir de suelos
impactados por derivados del petrleo.
Wemedo et al. (2002), en Nigeria, aislaron
de suelo contaminado con kerosene los
gneros de hongos: Penicillium, Aspergillus,
Fusarium, Rhizopus. Otros estudios
realizados en Egipto encontraron en suelos
contaminados con kerosn y/o benceno, los
hongos: Amorphotheca resinae, Aspergillus
4

flavus, A. fumigatus, A. niger, A. terreus,
Emericella nidulans, Fusarium solani,
Penicillium funiculosum, Rhizopus stolonifer
y Trichoderma harzianum (Hemida et al.
1993). Tambin se han aislado hongos de un
suelo contaminado con aceite lubricante:
Aspergillus flavus, A. niger, A. terreus, A.
ochraceus, y Trichoderma sp. (Sebiomo et
al. 2010); aceite de motor: Candida
tropicalis (Farag y Soliman, 2011) y, en
bitumen: Aspergillus fumigatus, A. oryzae,
A. wentii, A. flavus, A, niger, Penicillium
notatum, Rhizopus stolonifer, Rhodotorula
sp. y Trichoderma sp. (Oboh et al. 2006).
Los resultados de la revisin bibliogrfica y
los meta-anlisis realizados permitieron
determinar que del total de hongos y
levaduras aisladas de hidrocarburos, el 83%
pertenecen al Phylum Ascomycota, 10% al
Phylum Zygomycota, el 6% al Phylum
Glomeromycota y 1 % al Phylum
Basidiomycota (Figura 1). Debido a que el
Phylum Ascomycota fue el que se encontr
reportado en mayor proporcin, se
determinaron los rdenes ms comunes
reportados para dicho Phylum, encon-
trndose que el orden Eurotiales se encuentra
en mayor proporcin (54%), seguido por el
orden Hypocreales (18%), Microascales
(6%) y Saccharomycetales (5%) (Figura 1).

Figura 1. Frecuencias relativas de los distintos Phyla y Ordenes del Reino Fungi aislados de crudo, sus derivados y
de suelos contaminados reportados en trabajos de investigacin publicados en revistas registradas en las
bases de datos Web of Science (1900-2010) y SciFinder Scholar (1940-2010).

5

As mismo, a partir del meta-anlisis se pudo
determinar que los gneros de hongos que
aparecieron con mayor frecuencia en crudo y
sus derivados (diesel y gasolina) fueron:
Penicillium (18%), Aspergillus (17%) y
Fusarium (6%), seguidos por Rhizopus (4%),
Trichoderma (4%) y Acremonium (3%), tal
como muestra la Figura 2. Las especies ms
representativas del gnero Aspergillus fueron
las especies A. niger (21%), A. fumigatus
(18%), A. flavus (10%) y A. terreus (10%).
De igual forma, para el gnero Fusarium, la
especie ms frecuente fue F. solani (23%) y,
para Penicillium, la mayor frecuencia est
representada por Penicillium sp. (especies sin
determinar, 23%), seguido de las especies, P.
funiculosum, P. janthinellum, P. oxalicum, P.
pinophilum, P. purpurogenum y P.
simplicissimun. Aunado a ello, Penicillium
result ser el gnero ms cosmopolita ya que
se aisl en todos los sustratos reportados
menos en suelo impactado con diesel, tal
como indica la Figura 3.
En la Figura 1, se observa que el Phylum que
aparece ms frecuente en hidrocarburos es el
Phylum Ascomycota. La posible explicacin
de la predominancia de hongos del Phylum
Ascomycota podra deberse a que la mayora
de ellos son habitantes comunes de suelo, lo
cual los expone a este tipo de contaminantes y
a que algunos son capaces de sintetizar
enzimas oxidativas extracelulares del sistema
de degradacin de lignina, tales como lacasa,
lignina peroxidasa y manganeso peroxidasa,
entre otras, asociadas tambin a la
degradacin de hidrocarburos (Naranjo et al.,
2007). Adems de ello, el Phylum
Ascomycota ha demostrado una plasticidad
gentica o habilidad para que un determinado
genotipo pueda cambiar y producir diferentes
fenotipos debido a su exposicin a factores
biticos y abiticos, lo que ha permitido
poder realizar asociaciones simbiticas y
colonizar una mayor cantidad de nichos. Se
ha reportado que el 98% de los hongos
terrestres pertenecen a los Phyla Ascomycota
y Basidiomycota, sin embargo, el Phylum
Ascomycota presenta ms del doble de
especies que el Phylum Basidiomycota y
existen evidencias moleculares de que el
Phylum Ascomycota presenta una mayor tasa
de evolucin (Wang et al. 2010).
En nuestro estudio, dentro del Phylum
Ascomycota el orden ms comn fue
Eurotiales, debido a que a l pertenecen los
gneros con mayor frecuencia de aparicin
Penicillium y Aspergillus; seguido por el
orden Hipocreales donde se encuentran los
gneros Fusarium, Trichoderma y
Acremonium (Figura 2). La incidencia en la
aparicin de estos gneros y sus especies ms
frecuentes, podra deberse a que han sido
reportados como hongos cosmopolitas de
distribucin mundial, tal es el caso de las
especies Acremonium sp., Aspergillus
fumigatus, A. niger y A. terreus, Penicillium
frequentans, P. oxalicum y P.
simplicissimum, Fusarium solani, y
Trichoderma viride (Domsch et al. 1980), por
lo que es probable que estas especies hayan
desarrollado mecanismos de tolerancia a los
hidrocarburos. De estas especies, Penicillium
ha demostrado una capacidad de adaptacin a
numerosos nichos y, como se observa en la
Figura 3, se han aislado de hidrocarburos
(crudo y diesel) y de todos los sustratos
impactados con hidrocarburos (suelo y agua).
Por tal razn, Leito (2009) propone el uso de
especies del gnero Penicillium para procesos
de biorremediacin de compuestos txicos,
tales como fenoles, HAPs y metales pesados.
Por otro lado, con la finalidad de conocer la
biodiversidad de hongos presentes en los
distintos hidrocarburos y suelos
contaminados, se determin el ndice de
biodiversidad de Shannon-Wiener (Figura 4),
encontrndose que la mayor diversidad se
encontr en suelos impactados
con crudo (3.02) seguido por el lago natural
de asfalto de Guanoco (2.15). Los sustratos
que presentaron una menor diversidad fueron
suelos contaminados con gasolina y diesel
(0.00).
6

Figura 2. Distribuin de los gneros y especies de hongos aislados ms representativos en sustratos contaminados
con crudo y sus derivados.

7

Figura 3. Patrn de distribucin de los gneros de hongos aislados por sustrato. AC: agua contaminada con crudo;
C: crudo; D: diesel, G: gasolina; LA: lago de asfalto; SC: suelo contaminado con crudo; SD: suelo
contaminado con diesel; SG: suelo contaminado con gasolina; SK: suelo contaminado con kerosn; SR:
sedimento de rio.

8

Como se observa en la Figura 4, tomando en
cuenta los sustratos estudiados (Ver apartado
de Materiales y Mtodos), la mayor
biodiversidad de hongos se ha registrado en
suelos impactados con crudo. Adems de la
existencia de una mayor cantidad de trabajos
cientficos sobre hongos aislados de suelos
contaminados, esta preponderancia de
hongos en suelo en comparacin a los
aislados en agua podra deberse a que, segn
Hyde et al. (2007), existen aproximadamente
1,5 millones de especies de hongos, de las
cuales solo alrededor de 3,000 especies estn
asociadas a hbitats acuticos (Shearer et al.
2007), por lo que el suelo presenta una
mayor diversidad de hongos per se.

Figura 4. Distribucin del ndice de biodiversidad de Shannon-Wiener para los hongos aislados segn el sustrato.
SC: suelo contaminado con crudo; LA: lago de asfalto; SK: suelo contaminado con kerosn; D: diesel;
SR: sedimento de rio; C: crudo; AC: agua contaminada con crudo; SG: suelo contaminado con gasolina;
SD: suelo contaminado con diesel; G: gasolina. Los box-plot para cada sustrato fueron generados por el
remuestreo (n=500) del vector de frecuencia de cada gnero por sustrato.

3.2. Capacidad de degradacin de crudo,
sus fracciones y derivados por hongos
3.2.1. Degradacin de crudo
Aunque son numerosas las especies de
hongos aisladas en suelos contaminados, no
todas tienen la capacidad de degradar los
hidrocarburos. Por ejemplo, April et al.
(2000) aislaron 64 especies de hongos
filamentosos en un suelo impactado con
crudo en Canad, de los cuales slo 6
gneros mostraron habilidad para degradar
hidrocarburos. Es por ello, que en la
siguiente seccin, se presentan los gneros y
especies de hongos descritas que poseen
capacidad hidrocarbonoclstica.
En cuanto a las evidencias de degradacin de
crudo por hongos en condiciones de
laboratorio, Chaineau et al. (1999), aislaron
cepas de suelos agrcolas en Francia y
evaluaron su capacidad de degradar crudo
9

(179 mg de crudo en 150 mL de medio de
cultivo) en 30 das mediante cromatografa
de gases (CG), encontrando que las especies
de los gneros Aspergillus, Penicillium,
Trichoderma, Acremonium, Beauveria,
Fusarium, Cladosporium y Gongronella
posean dicha habilidad. En especial,
encontraron una alta capacidad degradativa
en la especie Beauveria alba, la cual fue
capaz de degradar 49% del crudo, seguida de
Penicillium simplicissimum con 45%.
Por otro lado, Meysami y Baheri (2003)
estudiaron en condiciones de laboratorio la
degradacin de crudo determinada por la
reduccin de TPH por mtodo gravimtrico
en un suelo artificialmente contaminado con
10,000 ppm de crudo, observando que varias
cepas de los hongos Bjerkandera adusta,
Phanerochaete chrysosporium, Pleurotus
ostreatus, Pleurotus pilmanarius y Trametes
versicolor eran capaces de reducir hasta un
50% del TPH en 35 das.
De igual forma, Kristanti et al. (2011)
estudiaron en condiciones de laboratorio la
capacidad degradativa del hongo Polyporus
sp. S133 en medio lquido con 1,000 ppm de
crudo y en suelo con 3,000 ppm de crudo,
encontraron una tasa de degradacin de 93 y
43% en 60 das, respectivamente.
Obuekwe et al. (2005) aislaron en el desierto
de Kuwait las especies halotolerantes
Fusarium lateritium, Drechslera sp. y
Papulospora sp., observando que estas eran
capaces de degradar crudo (0,8 g de crudo en
100 mL de medio) en un 18, 26 y 9%,
respectivamente.
Por otro lado, en un experimento de
bioaugmentacin y bioestimulacin en
condiciones de laboratorio, Mancera-Lpez
et al. (2008), encontraron un porcentaje de
degradacin de TPH en suelo contaminado
con 60,600 ppm de crudo de 47, 40 y 45%
utilizando los hongos Rhizopus sp.,
Aspergillus sydowii y Penicillium
funiculosum, respectivamente. Por otro lado,
Adenipekun y Fasidi (2005) encontraron en
suelo contaminado con crudo en Nigeria, un
porcentaje de reduccin de TPH de 20% en 3
meses y 40% en 6 meses de exposicin al
hongo Lentinus subnudus.
Con la finalidad de establecer grupos de
hongos con la capacidad de reducir niveles
de TPH, se realiz un anlisis de
conglomerados (Figura 5), donde fueron
identificados tres grupos de gneros segn su
capacidad de degradar crudo. El grupo de
mayor capacidad fue conformado por los
gneros: Phanerochaete, Coriolus,
Trametes, Pleurotus, Bjerkandera, Rhizopus,
Emerciella y Aspergillus con 52.003.53%.
El grupo de capacidad intermedia integrado
por: Penicillium, Paecilomyces, Glomus,
Drechslera, Verticillium, Cladosporium,
Lentinus, Candida, Beauveria; Trichoderma,
Syncephalastrum, Eupenicillum, Graphium y
Acremonium con un 27.522.38%.
Finalmente, el grupo de hongos con menor
capacidad degradativa fue conformado por:
Papulaspora, Gongronella,
Scolecobasidium, Saccharomycopsis,
Fusarium, Tolypocladium, Cunninghamella
con un porcentaje de degradacin de
13.223.53% (Figura 5).
10

Figura 5. Representacin del patrn de distribucin de grupos homogneos de gneros de hongos segn su
capacidad para degradar crudo, generada a travs del anlisis por conglomerados utilizando como
algoritmo de encadenamiento el UPGMA y la distancia euclideana entre las frecuencias observadas por
gnero. En el lado inferior derecho se presenta la distribucin del porcentaje de TPH por grupo, donde se
muestra que existen diferencias significativas entre grupos de degradacin (p0.05). Cada grupo de
hongos est representado por un color (azul, rojo y verde).

A nivel de especies, en la Tabla 1, se sealan
aquellas que presentaron un mayor
porcentaje de degradacin de crudo donde se
destacan: Aspergillus versicolor (99%),
Aspergillus niger (80%), Coriolus versicolor
(78%), Phanerochaete chrysosporium
(69%), Pleurotus ostreatus (53%), Trametes
versicolor (50%) y Trichoderma sp. (50%).
A pesar de la capacidad de ciertos hongos de
degradar crudo, existen marcadas diferencias
en la degradacin de sus diferentes
fracciones SARA, tal como se detalla a
continuacin.

Tabla 1. Hongos aislados de crudo, sus derivados, suelos y aguas contaminadas con hidrocarburos. reportados en
trabajos de investigacin publicados en revistas registradas en las bases de datos Web of Science (1940-
2010) y SciFinder Scholar (1940-2010).

Especie Phylum Orden Origen
Lugar de
aislamiento
Referencia
Absidia sp.
Tiegh
Zygomycota Mucorales SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Acaulospora laevis
Gerd. & Trappe
(1974)
Glomeromycota Diversisporales SC
Tabasco,
Mxico
Franco-Ramrez
et al. 2007
Acaulospora
scrobiculata Trappe
(1977)
Tabasco,
Mxico
Franco-Ramrez
et al. 2007
11

Acremoniumsp.
Link
Ascomycota Hypocreales SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
SR
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
SC Canad
April et al.
2000
Acremonium butyri
(J.F.H. Beyma) W.
Gams (1971)
Ascomycota Hypocreales SC Canad
April et al.
2000
Acremonium
kiliense
Grtz (1925)
April et al.
2000
Acremonium
strictum
W. Gams (1971)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Alternaria alternata
(Fr.) Keissl. (1912)
Ascomycota Pleosporales SC
Golfo de
mxico
Al-Nasrawi,
2012
Ambispora
gerdemannii
(S.L. Rose, B.A.
Daniels & Trappe)
C. Walker, Vestberg
& A. Schssler
(2007)
Glomeromycota Archaeosporales SC
Tabasco,
Mxico
Franco-Ramrez
et al. 2007
Amorphotheca sp. SC Utah, USA
Chosson et al.
1991
Amorphotheca
resinaeParbery
(1969) =
Cladosporium
resinae

Ascomycota SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
SK Egipto
Hemida et al.
1993
Aspergillus sp. Ascomycota Eurotiales SC
Delta Niger,
Nigeria
Benka-Coker y
Ekundayo,
1997
SC Canad
April et al.
2000
SC
Desierto de
Kuwait
Radwan et al.
1995
SC
Tabasco,
Mxico
Rivera-Cruz et
al. 2002
AC
Rios
Omuihuechi y
New Calabar,
Nigeria
Okerentugba y
Ezeronye, 2003
SK Nigeria
Wemedo et al.
2002
Aspergillus
aureolus Fennell &
Raper 1955
Ascomycota Eurotiales LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Aspergillus clavatus
Desm. (1834)
Ascomycota Eurotiales SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
12

Aspergillus flavipes
(Bainier & R.
Sartory) Thom &
Church (1926)
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
Aspergillus flavus
Link (1809)
Ascomycota Eurotiales SC Arabia Saudita
Bokhary y
Parvez, 1993
SC
Delta del
Nger, Nigeria
Gesinde et al.
2008
SC
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
SK Egipto
Hemida et al.
1993
Aspergillus
fumigatus Fresen.
(1863)
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
SC
Willesden
Green, Canad
April et al.
2000
SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
SC
Delta del
Nger, Nigeria
Gesinde et al.
2008
D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001
SK Egipto
Hemida et al.
1993
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Aspergillus niger
Tiegh. (1867)
Ascomycota Eurotiales SC Arabia Saudita
Bokhary y
Parvez, 1993
SC Canad
April et al.
2000
SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
SC Delta, Nigeria
Gesinde et al.
2008
SC
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
SC
Golfo de
mxico
Al-Nasrawi,
2012
D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001
SK Egipto
Hemida et al.
1993
Aspergillus cf.
niveus Blochwitz
(1929)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
Aspergillus sydowii
(Bainier & Sartory)
Thom & Church
(1926)
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
SC Isla Borneo, Chaillan et al.
13

Indonesia 2004
SC
Veracruz,
Mxico
Mancera-Lpez
et al. 2008
Aspergillus cf.
tamarii
Kita (1913)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
Aspergillus terreus
Thom (1918)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
SG
Mar de Ajo,
Argentina
Colombo et al.
1996
SK Egipto
Hemida et al.
1993
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Aspergillus
versicolor (Vuill.)
Tirab. (1908)
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
SC Enugu, Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
Aureobasidium
pullulans
(de Bary) G. Arnaud
(1918)
Ascomycota Dothideales SC
Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
Beauveria sp. Ascomycota Hypocreales SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Beauveria bassiana
(Bals.-Criv.) Vuill.
(1912)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Byssochlamys nivea
Westling (1909)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Candida sp. Ascomycota Saccharomycetales SC
Delta Niger,
Nigeria
Benka-Coker y
Ekundayo,
1997
Candida lipolytica
(F.C. Harrison)
Diddens & Lodder
(1942)
Ascomycota Saccharomycetales D
Cerniglia y
Crow, 1981
C Venezuela
Naranjo et al.
2008
Candida silvicola
Shifrine & Phaff
(1956)
Ascomycota Saccharomycetales D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001
Candida viswanathii
Sandu & H.S.
Randhawa (1962)
Ascomycota Saccharomycetales C Venezuela
Naranjo et al.
2008
Chaetomium
bostrychodes
Zopf (1877)
Ascomycota Sordariales SC Arabia Saudita
Bokhary y
Parvez, 1993
Chaetomium
globosumKunze
(1817)
Ascomycota Sordariales SC Canad
April et al.
2000
14

Chalara sp. Ascomycota SC
Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
Cladosporiumsp. Ascomycota Capnodiales SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Cladosporium
cladosporioides
(Fresen.) G.A. de
Vries (1952)
Ascomycota Capnodiales SC Canad
April et al.
2000
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Cladosporium
resinae
(Lindau) G.A. de
Vries (1955)
Ascomycota Capnodiales G USA
Colwell et al.
1977
Cladosporium
sphaerospermum
Penz. (1882)
Ascomycota Capnodiales LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Cochliobolus
lunatus R.R. Nelson
& F.A. Haasis
(1964)
Golfo de
Mxico
Al-Nasrawi,
2012
Cordyceps sinensis
(Berk.) Sacc. (1878)
Golfo de
Mxico
Al-Nasrawi,
2012
Cunninghamella sp. Zygomycota Mucorales C
Ughelli,
Nigeria
Ifeanychukwu,
1996
C Delta, Nigeria Atagana, 1996
SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Cunninghamella
echinulata
(Thaxt.) Thaxt.
(1903)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Emericella nidulans
(Eidam) Vuill.
(1927)
Ascomycota Eurotiales SR
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
SK Egipto
Hemida et al.
1993
Eupenicillium
javanicum
(J.F.H. Beyma)
Stolk & D.B. Scott
(1967)
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
Eupenicillium
limosum S. Ueda
(1995)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
SR
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
Eupenicillium
ochrosalmoneum
D.B. Scott & Stolk
(1967)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
15

Exophiala
jeanselmei
(Langeron)
McGinnis & A.A.
Padhye (1977)
Ascomycota Chaetothyriales SC
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Fennellia nivea
(B.J. Wiley & E.G.
Simmons) Samson
(1979)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Fusariumsp. Ascomycota Hypocreales SC Utah, USA
Chosson et al.
1991
SC Canad
April et al.
2000
SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
SK Nigeria
Wemedo et al.
2002
Fusarium
avenaceum
(Fr.) Sacc. (1886)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Fusarium
decemcellulare
Brick (1908)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Fusarium
oxysporum
Schltdl. (1824)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Fusarium
proliferatum
(Matsush.)
Nirenberg ex
Gerlach & Nirenberg
(1976)
Ascomycota Hypocreales LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Fusarium solani
(Mart.) Sacc. (1881)
La Plata,
Argentina
Colombo et al.
1996
SK Egipto
Hemida et al.
1993
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Fusarium
subglutinans
(Wollenw. &
Reinking) P.E.
Nelson, Toussoun &
Marasas (1983)
April et al.
2000
Fusarium
venenatum
Nirenberg (1995)
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Geomyces
pannorum
(Link) Sigler & J.W.
Carmich. (1976)
Ascomycota Incertae sedis SC Canad
April et al.
2000
Gibberella fujikuroi Ascomycota Hypocreales SC Golfo de Al-Nasrawi,
16

(Sawada) Wollenw.
(1931)
mxico 2012
Gliocladium
catenulatum
J.C. Gilman & E.V.
Abbott (1927)
April et al.
2000
Gliocladium virens
J.H. Mill., Giddens
& A.A. Foster
(1958)
Ascomycota Hypocreales SR
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
Gliomastix sp. Ascomycota Hypocreales SC Canad
April et al.
2000
Glomus
ambisporum
G.S. Sm. & N.C.
Schenck (1985)
Glomeromycota Glomerales SC
Tabasco,
Mxico
Franco-Ramrez
et al. 2007
Glomus caledonium
(T.H. Nicolson &
Gerd.) Trappe &
Gerd. (1974)
Glomeromycota Glomerales SC Shaanxi, China Li et al. 2009
Glomus citrcola
D.Z. Tang & M.
Zang (1984)
Tabasco,
Mxico
Franco-Ramrez
et al. 2007
Glomus desertcola
Trappe, Bloss & J.A.
Menge (1984)
Glomeromycota Glomerales SG
Mar de Ajo,
Argentina
Cabello, 1999
Glomus geosporum
(T.H. Nicolson &
Gerd.) C. Walker
(1982)
Glomeromycota Glomerales SGa
Berisso,
Argentina
Cabello, 1999
Glomus intraradices
N.C. Schenck &
G.S. Sm. (1982)
Ensenada,
Argentina
Cabello, 1999
Glomus sinuosum
(Gerd. & B.K.
Bakshi) R.T.
Almeida & N.C.
Schenck (1990)
Tabasco,
Mxico
Franco-Ramrez
et al. 2007

Graphium sp. Ascomycota Microascales SC Utah, USA
Chosson et al.
1991
SC
British
Columbia
April et al.
1998
Graphium
putredinis
(Corda) S. Hughes
(1958)
Ascomycota Microascales SC
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Hormoconis resinae
(Lindau) Arx &
G.A. de Vries
(1973), (=
Amorphotheca
resinae),
Ascomycota Incertae sedis D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001
17

D Nueva Zelanda
Hettige y
Sheridan, 1984
Hypocrea lixii Pat.
(1891)
Golfo de
Mxico
Al-Nasrawi,
2012
Mortierella sp. Zygomycota Mortierellales SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Mucor sp. SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
Mucor circinelloide
Tiegh. (1875)
SC
Guanajuato,
Mxico
Silva-Jimnez
et al. 2009
SK Nigeria
Wemedo et al.
2002
Neosartorya sp. Ascomycota Eurotiales SC Utah, USA
Chosson et al.
1991
Neosartorya fischeri
(Wehmer) Malloch
& Cain (1973)
Ascomycota Eurotiales SC Canad
April et al.
2000
SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Neosartorya
pseudofischeri S.W.
Peterson (1992)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Neosartorya spinosa
(Raper & Fennell)
Kozak. (1989) NS-1
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Neurospora
sitophila
Shear & B.O. Dodge
(1927)
Ascomycota Sordariales SC
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
Oidiodendron
griseum
Robak (1934)
Ascomycota Incertae sedis SC
Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
Paecilomyces sp. SC Utah, USA
Chosson et al.
1991
SC
Tabasco,
Mxico
Rivera-Cruz et
al. 2002
SC
Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Paecilomyces
marquandii
(Massee) S. Hughes
(1951)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Paecilomyces
variotii
Bainier (1907)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
18

D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001
D Nueva Zelanda
Hettige y
Sheridan, 1984
Penicillium sp. Ascomycota Eurotiales C
Ughelli,
Nigeria
Ifeanychukwu,
1996
C Delta, Nigeria Atagana, 1996
SC Canad
April et al.
2000
SC
Desierto de
Kuwait
Radwan et al.
1995
SC
Tabasco,
Mxico
Rivera-Cruz et
al. 2002
AC
Rios
Omuihuechi y
New Calabar,
Nigeria
Okerentugba y
Ezeronye, 2003
D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001
SK Nigeria
Wemedo et al.
2002
SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Penicillium
aculeatumRaper &
Fennell (1948)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Penicillium
aurantiogriseum
Dierckx (1901)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
Penicillium
chrysogenum
Thom (1910)
Ascomycota Eurotiales C
Refineria La
Plata,
Argentina
Colombo et al.
1996
Penicillium
citrinum
Sopp (1910)
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
Penicillium
corylophilum
Dierckx (1901)
Ascomycota Eurotiales D Nueva Zelanda
Hettige y
Sheridan, 1984
Penicillium cf.
decumbens
Thom (1910)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
SC
Golfo de
Mxico
Al-Nasrawi,
2012
Penicillium
funiculosum
Thom (1910)
Veracruz,
Mxico
Mancera-Lpez
et al. 2008
SK Egipto
Hemida et al.
1993
Penicillium cf.
glabrum
Drayton
Valley,
April et al.
2000
19

(Wehmer) Westling
(1911)
Canad
Penicillium
indonesiae Pitt
(1980)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Penicillium cf.
isariiforme
Stolk & J.A. Mey.
(1957)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Penicillium
janthinellum
Biourge (1923), (=
Penicillium
simplicissimum)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Penicillium
marneffei Segretain
(1960)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Penicilliumcf.
miczynskii
K.M. Zalessky
(1927)

Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
Penicillium cf.
minioluteum
Dierckx (1901)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
Penicillium
montanense
M. Chr. & Backus
(1963)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Penicillium notatum
Westling (1911),
(=Penicillium
chrysogenum var.
chrysogenum)
Delta del
Nger, Nigeria
Gesinde et al.
2008
Penicillium
oxalicum
Currie & Thom
(1915)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Penicillium
pinophilum
Thom (1910)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Penicillium
purpurogenum
Fleroff (1906)
Ascomycota Eurotiales SR
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
SC Boundary April et al.
20

Lake, Canad 2000
Penicillium
restrictum
J.C. Gilman & E.V.
Abbott (1927)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Penicillium
simplicissimum
(Oudem.) Thom
(1930)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2008
Penicillium
spinulosum
Thom (1910)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Penicillium thomii
Maire (1917)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Penicillium cf.
variabile
Sopp (1912)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
Penicillium
verruculosum
Peyronel (1913)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Penicillium cf.
waksmanii
K.M. Zalessky
(1927)
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Pestalotiopsis
palmarum(Cooke)
Steyaert (1949)
Ascomycota Xylariales LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Petriella sordida
(Zukal) G.L. Barron
& J.C. Gilman
(1961)
British
Columbia
April et al.
1998
Phialophora sp.

Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
Phialophora
americana
(Nannf.) S. Hughes
(1958)
Norman Wells,
Canad
April et al.
2000
Phialophora
verrucosa
Medlar (1915)
Norman Wells,
Canad
April et al.
2000
Phoma sp. Ascomycota Pleosporales SC
Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Phoma glomerata
(Corda) Wollenw. &
Hochapfel (1936)
Ascomycota Pleosporales LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Pithomyces sp. Ascomycota Pleosporales SC Instalaciones Valenzuela et
21

ENAP, Chile al. 2006
Pleospora herbarum Ascomycota Pleosporales SC
Golfo de
Mxico
Al-Nasrawi,
2012
Pseudallescheria
boydii
British
Columbia
April et al.
1998
Pseudallescheria
angusta (Malloch &
Cain) McGinnis,
A.A. Padhye &
Ajello (1982)
Ascomycota Microascales LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
(Shear) McGinnis,
A.A. Padhye &
Ajello (1982)
SC Canad
April et al.
2000
Pycnoporus
sanguineus (L.)
Murrill (1904)
Basidiomycota Polyporales LA
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Rhinocladiella
atrovirens
Nannf. (1934)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
Rhizopus sp.
Desierto de
Kuwait
Radwan et al.
1995
SC Delta, Nigeria
Benka-Coker y
Ekundayo,
1997
SC Arabia Saudita
Bokhary y
Parvez, 1993
SC
Veracruz,
Mxico
Mancera-Lpez
et al. 2008
AC
Rios
Omuihuechi y
New Calabar,
Nigeria
Okerentugba y
Ezeronye, 2003
SK Nigeria
Wemedo et al.
2002
Rhizopus arrhizus
A. Fisch. (1892)
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
Rhizopus nigricans
Ehrenb. (1821), (=
Rhizopus stolonifer)
Delta del
Nger, Nigeria
Gesinde et al.
2008
Rhizopus stolonifer
(Ehrenb.) Vuill.
(1902)
Kindersley,
Canad
April et al.
2000
SK Egipto
Hemida et al.
1993

Scedosporium sp. Ascomycota Microascales SC
British
Columbia
April et al.
2000
Scolecobasidium
obovatum
Matsush. (1971)
Ascomycota Incertae sedis SC
Edmonton,
Canad
Davies y
Westlake, 1978
Scutellospora
hetergama
(T.H. Nicolson &
Gerd.) C. Walker &
Tabasco,
Mxico
Franco-Ramrez
et al. 2007
22

F.E. Sanders (1986)
Sphaerodes
retispora (Udagawa
& Cain) P.F. Cannon
& D. Hawksw.
(1982)
Melanosporales Hypocreales SC
Golfo de
Mxico
Al-Nasrawi,
2012
Sporothrix
schenckii
Hektoen & C.F.
Perkins (1900)
Ascomycota Ophiostomatales SC
Drayton
Valley,
Canad
April et al.
2000
Syncephalastrum
sp.
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
Talaromyces sp. Ascomycota Eurotiales SC Utah, USA
Chosson et al.
1991
Talaromyces
bacillisporus
(Swift) C.R. Benj.
(1955)
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
Talaromyces flavus
(Klcker) Stolk &
Samson (1972), (=
Penicillium
dangeardii)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Talaromyces helicus
(Raper & Fennell)
C.R. Benj. (1972),
(= Penicillium
spirillum)
Isla Borneo,
Indonesia
Oudot et al.
1993
Trichoderma sp. Ascomycota Hypocreales SC Canad
April et al.
2000
SC
Tabasco,
Mxico
Rivera-Cruz et
al. 2002
SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
SC
Emene,
Nigeria
Uzoamaka et al.
2009
SC Ehime, Japn
Hadibarata y
Tachibana,
2009
Trichoderma
harzianum
Rifai (1969)
La Plata,
Argentina
Colombo et al.
1996
SK Egipto
Hemida et al.
1993
SC Arabia Saudita
Bokhary y
Parvez, 1993
Trichoderma
inhamatum
Veerkamp & W.
Gams (1983)
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Trichoderma viride
Pers. (1794) TV-1
Lago de
Asfalto de
Guanoco,
Venezuela
Naranjo et al.
2007
Ulocladium sp. Ascomycota Pleosporales SC Instalaciones Valenzuela et
23

ENAP, Chile al. 2006
Ulocladium
consortiale
sensu Brook, (=
Alternaria alternata)
Boundary
Lake, Canad
April et al.
2000
Wallemia sebi
(Fr.) Arx (1970)
Basidiomycota Wallemiales SC
Instalaciones
ENAP, Chile
Valenzuela et
al. 2006
Levaduras
Candida lipolytica
(F.C. Harrison)
Diddens & Lodder
(1942)
Ascomycota Saccharomycetales D
Cerniglia y
Crow, 1981
Candida silvicola
Shifrine & Phaff
(1956)
Ascomycota Saccharomycetales D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001

Candida
palmioleophila
Nakase & Itoh
(1988)
Ascomycota Saccharomycetales SC
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Candida viswanathii
T.S. Viswan. & H.S.
Randhawa (1959)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Geotrichumsp. Ascomycota Saccharomycetales SC
Delta Niger,
Nigeria
Benka-Coker y
Ekundayo,
1997

Pichia
guilliermondii
Wick. (1966)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004
Rhodotorula
glutinis
(Fresen.) F.C.
Harrison (1928)
Basidiomycota Sporidiobolales D Brasil
Bento y
Gaylarde, 2001
Rhodotorula
mucilaginosa (A.
Jrg.) F.C. Harrison
(1928)
Basidiomycota Sporidiobolales C Venezuela
Naranjo et al.
2008
Williopsis saturnus
var. subsufficiens
(Wick.) Kurtzman
(1991)
Ascomycota Saccharomycetales C Venezuela
Naranjo et al.
2008
Yarrowia lipolytica
(Wick., Kurtzman &
Herman) Van der
Walt & Arx (1981)
Isla Borneo,
Indonesia
Chaillan et al.
2004

AC: agua contaminada con crudo; C: crudo; D= diesel; G: gasolina; SC: suelo contaminado con crudo; SG: suelo
contaminado con gasoil; SGa: suelo contaminado con gasolina; SK: suelo contaminado con kerosene; SR:
sedimento de ro; LA: Lago de asfalto

24

3.2.2. Degradacin de las fracciones SARA
del crudo
El crudo es una mezcla heterognea de
compuestos orgnicos, principalmente de
hidrocarburos insolubles en agua, y trazas de
compuestos metlicos como sodio, nquel,
hierro, vanadio o plomo (Karisen y Larter,
1991), que se puede separar en 4 grandes
fracciones denominadas SARA (Saturados,
Aromticos, Resinas y Asfaltenos).
La fraccin de saturados est constituida por
hidrocarburos que no contienen dobles
enlaces y se clasifican segn su estructura
qumica en alcanos, isoprenoides y
cicloalcanos. Los alcanos son cadenas de
carbono que pueden estar ramificadas o no y
que presentan la frmula CnH
2
n
+2
. Se
denominan isoprenoides alcanos de cadenas
ramificadas mientras que los cicloalcanos
son alcanos cclicos que pueden tener uno a
ms anillos de tomos de carbono e
hidrgeno y presentan la frmula CnH
2
n
(April et al. 1998).
La fraccin de aromticos corresponde a una
clase especial de hidrocarburos insaturados;
cuya estructura est basada en el anillo de
benceno, el cual puede tener uno o ms
tomos de hidrgeno sustituidos por
radicales alquilos, originando alquil
bencenos o puede haber dos o ms anillos
aromticos fusionados dando como resultado
los denominados HAPs (Wade, 1993).
La fraccin de resinas son molculas
complejas solubles en n-heptano, las cuales
contienen compuestos heterocclicos, cidos
y sulfxidos (Harayama et al. 1999). Por su
parte, la fraccin de asfaltenos son
compuestos de alto peso molecular no
solubles en n-heptano, que contienen en su
estructura compuestos aromticos y
alifticos, heterotomos (S, O, y N) y
metales pesados tales como Ni y V (Fish et
al. 1984; Waldo et al. 1991; Strauz et al.
1992).
Zobell (1946), seal que los hidrocarburos
alifticos, oleofinicos, aromticos y
naftalnicos son los ms susceptibles a sufrir
oxidacin por los microorganismos mientras
que las resinas y asfaltenos son las
fracciones ms recalcitrantes. De esta
manera, se ha reportado que la eficiencia en
el proceso de remediacin depende de la
naturaleza de los compuestos y de su peso
molecular en el siguiente orden de mayor
eficiencia a menor eficiencia: Saturados >
Aromticos > Resinas > Asfaltenos (Oudot
et al. 1993; Al-Gounaim et al. 1995; Li et al.
2002; Chaillan et al. 2004). En este sentido,
Oudot et al. (1993) aislaron cepas de hongos
degradadores de hidrocarburos de ambientes
tropicales en Indonesia, donde identificaron
miembros de los gneros Aspergillus,
Penicillium, Gliocadium, Emericella,
Graphium, Acremonium, Eupenicillium y
Talaromyces.
El potencial hidrocarbonoclstico de estas
cepas se determin monitoreando la
velocidad de degradacin de todas las
fracciones SARA del petrleo. Las cepas
ms activas sobre todo el petrleo y
especialmente sobre la asimilacin de
saturados y aromticos fueron: Emericella
nidulans, Graphium putredinis,
Eupenicillium javanicum y Aspergillus
flavipes con > 40% y >30%,
respectivamente. Posteriormente, Al-
Gounaim et al. (1995) aislaron de un suelo
contaminado con crudo en Kuwait una cepa
de Aspergillus terreus capaz de utilizar en 21
das 30% de crudo, 32% de los saturados y
14% de la fraccin de aromticos.
Colombo et al. (1996), analizaron la
capacidad degradativa de 7 especies de
hongos (Aspergillus terreus, Fusarium
solani, Trichoderma harzianum, Penicillium
chrysogenum, Coriolopsis rigida, Trametes
villosa y Pleurotus ostreatus para degradar
alifticos e hidrocarburos aromticos en un
perodo de 90 das. Los resultados lograron
determinar que el proceso de degradacin se
daba en el siguiente orden: n-alcanos de bajo
peso molecular > fenantreno > 3-2-
metilfenantreno > n-alcanos con cadenas de
longitud intermedia > n-alcanos de cadena
25

larga > isoprenoides. Este hecho coincidi
con los resultados obtenidos por Hostettler y
Kvenvolden (1994), en el derrame de
petrleo de Exxon Valdez, donde el proceso
de biodegradacin se dio en el siguiente
orden: n-alcanos de bajo peso molecular > n-
alcanos de alto peso molecular >
isoprenoides y, en el caso de los aromticos:
fenantreno > 3-2 metilfenantreno > 9-1
metilfenantreno.
Por otro lado, Chaillan et al. (2004),
analizaron un cultivo de microorganismos
aerbicos degradadores de hidrocarburos
aislados de suelos contaminados con
petrleo en Indonesia y encontraron 21
hongos y 4 levaduras pertenecientes a los
gneros Aspergillus, Penicillium, Fusarium,
Amorphoteca, Paecilomyces, Talaromyces y
Graphium para los hongos y a los gneros
Candida, Yarrowia y Pichia para las
levaduras. Estos autores encontraron una
tasa de degradacin del crudo total de entre 5
y 22%, obtenindose la mxima degradacin
con los hidrocarburos saturados (100%), una
degradacin intermedia con los
hidrocarburos aromticos (0-17%) y baja
con la fraccin ms polar de resinas y
asfaltenos (10 y 15 %, respectivamente). As
mismo, Valenzuela et al. (2006), utilizando
espectroscopia infrarroja, determinaron
fracciones del petrleo que fueron
degradadas por hongos de los gneros
Absidia, Mortierella y Penicillium, las
cuales correspondan a las frecuencias 2850-
1800 cm
-1
(aldehdos, alquinos y anhdridos)
y 1510-1000 cm
-1
(alcanos saturados e
insaturados, aromticos y alquilos).
En cuanto a la capacidad degradativa de los
consorcios microbianos, Li et al. (2002),
inocularon con un consorcio de hongos
(Cunninghamella sp., Fusarium sp. Mucor
sp. y Phanerochaete chrysosporium) un
suelo contaminado con crudo, encontrndose
una degradacin en el siguiente orden:
hidrocarburos saturados (43-68%) >
aromticos (32-44%) > resinas y asfaltenos
(10-37%).
En la Tabla 2, se presentan porcentajes de
degradacin reportados para las distintas
fracciones SARA del crudo mediado por
hongos. Cabe destacar que, tal y como ha
sido reportado, la mayor tasa de degradacin
la presentan las fracciones de saturados y
aromticos, y la mayor capacidad
degradativa la presentan las especies
Aspergillus terreus, Beauveria alba,
Coriolopsis rigida, Fusarium solani y
Pleurotus ostreatus.

3.2.3. Degradacin de la fraccin de
saturados
La fraccin de saturados en el crudo est
compuesta principalmente por alcanos de
cadena lineal de C
1
a C
40
, alcanos
ramificados C
6
-C
8
y ciclohexanos (Stafford
et al. 1982). En los hongos se ha
demostrado que la degradacin de la
fraccin de saturados ocurre principalmente
en los alcanos lineales (n-alcanos). El uso de
los n-alcanos por hongos y levaduras como
nica fuente de carbono y energa fue
recopilado en una revisin realizada por
Klug y Markovetz (1971), donde se destaca
el hecho de que los alcanos simples lineales
son ms fciles de degradar, seguido por los
alcanos ms grandes y los ramificados. Los
compuestos livianos, como alquilnaftalenos
y fluorenos, presentan una mayor tasa de
degradacin que los compuestos de mayor
peso molecular, como los alquilcrisenos, por
lo que se ha llegado a la conclusin de que la
biodegradabilidad disminuye en la medida
que se incrementa el nmero de sustituciones
de metilos (Chaillan et al. 2004).
Estudios realizados con el hongo
Cladosporium resinae, el cual fue aislado de
un sistema de gasolina de avin (Jet fuel),
demostraron que este hongo es capaz de
utilizar como nica fuente de carbono y
energa alcanos lineales de C
6
a C
19,
alcanos
ramificados (C
2
metil undecano) y alcanos
cclicos (ciclohexano y ciclohexeno)
(Parbery, 1971; Cofone et al. 1973). De
igual forma, los hongos Scedosporium y
26

Graphium fueron capaces de crecer en n-
alcanos en el rango de gasolina (C
5
-C
9
) y gas
natural (C
1
-C
4
) y los hongos Fusarium
oxysporum, Graphium rubrum, Graphium
fruticolum, Penicillium lilacinus y Petriella
sp. de crecer en alcanos ms grandes de C
10
-
C
16
(Lowery et al. 1968; Llanos y Kjoller,
1976).
Por otro lado, en un experimento donde se
expuso Aspergillus versicolor a un crudo
liviano (gravedad mayor a 31,1API), se
encontr una biodegradacin del 70% de los
n-alcanos presentes en la muestra (Snchez
et al. 2006). Igualmente, Beauveria alba fue
capaz de degradar 100% de los alcanos
lineales y 90% de los alcanos ramificados
(Chaineau et al. 1999). La degradacin de
alcanos se ha demostrado para Aspergillus
niger, Aspergillus ochraceus y Penicillium
chrysogenum capaces de degradar n-alcanos
(C
13
-C
18
) (Elshafie et al. 2007), Trichoderma
sp. eicosanos (C
19
) (Hadibaratata y
Tachibana, 2009), mientras, que el hongo
Pseudallescheria boydii fue capaz de
degradar alifticos lineales generando una
completa remocin de C
12
a C
21
y la
remocin parcial de los C
22
a C
27
,

adems de
degradar alcanos de cadenas ramificadas
(Zajic et al. 1969; April et al. 1998).
Chaillan et al. (2004), estudiaron la
capacidad de degradacin de 21 especies de
hongos aislados de suelo contaminado con
crudo en Indonesia, encontrando una alta
tasa de degradacin en la fraccin de los
saturados, especialmente de los n-alcanos
(100%) e isoalcanos para los hongos
filamentosos pertenecientes a los gneros
Amorphoteca, Aspergillus, Cunninghamella,
Eupenicillium, Fusarium, Neosartorya,
Paecilomyces, Penicillium, Talaromyces, y
las levaduras Yarrowia lipolytica, Candida
viswanathii, Candida palmioleophila y
Pichia guilliermondii. Por otro lado, los
isoprenoides pristano y fitano (19 y 20
tomos de carbono, respectivamente) fueron
ligeramente atacados por algunas cepas y
completamente metabolizados por otras y,
finalmente, los alcanos policclicos se
degradaron en poco menos de un 18%.
Recientemente, Hamzah et al. (2012)
aislaron la cepa Trichoderma virens UKMP-
1M de un suelo impactado en Malasia y
encontraron que esta era capaz de degradar
en 9 das n-alcanos tales como C
12
-C
20
en un
13%, C
21
-C
38
en 67% y los alcanos
isoprenoides fitano y pristano en 74% y
100%, respectivamente. Estos autores
sugieren que los n-alcanos de cadenas cortas
son ms txicos y por ende menos
biodegradables, en cambio, los alcanos de
cadenas de tamaos intermedios C
10
-C
20
son
los ms biodegradables y los de cadenas
largas C
20
-C
40
son los menos biodegradables
al ser compuestos ms hidrofbicos.
En la Tabla 2, se observa la existencia de
hongos con una alta tasa degradativa de
hidrocarburos saturados tales como:
Aspergillus terreus (84%), Coriolopsis
rigida (83%), Pleurotus ostreatus (82%),
Trichoderma harzianum (82%), Trametes
villosa (80%) y Phanerochaete
chrysosporium (79%). En este punto, aparte
de las cantidades de hidrocarburo utilizado,
es importante destacar la influencia del
tiempo en los resultados, ya que la mayor
tasa de degradacin se reporta en 90 das de
exposicin. Un ejemplo de ello, son los
resultados reportados para A. terreus, F.
solani y T. harzianum, donde los porcentajes
de reduccin de saturados a los 90 das son
aproximadamente el doble que los
encontrados para 30 das.

27

Tabla 2. Recopilacin de los porcentajes de degradacin de saturados, aromticos, resinas y asfaltenos por especies
de hongos y consorcios, reportados en trabajos de investigacin publicados en revistas registradas en las
bases de datos Web of Science (1940-2010) y SciFinder Scholar (1940-2010). NR: no reportado. Consorcio
Li: Cunninghamella sp., Fusarium sp. Mucor sp. y Phanerochaete chrysosporium.

Especie
Tiempo
(das)
% Degradacin
Referencia
Saturados Aromticos Resinas Asfaltenos
Acremonium
strictum
30 42% 10% - - Chaneau et al.,
1999
Aspergillus
flavipes
21 32% 45% 13% 13% Oudot et al.,
1993
Aspergillus
fumigatus
21 22% 18% 15% 10% Oudot et al.,
1993
30 47% 11% - - Chaneau et al.,
1999
Aspergillus niger 30 13% 15% - - Chaneau et al.,
1999
Aspergillus
terreus
21 31.8% 13.8% NR NR Algounaim et al.,
1995
90 84% 100% NR NR Colombo et al.,
1996
Beauveria alba 30 65% 45% - - Chaneau et al.,
1999
Cladosporium
herbarum
30 26% 27% - - Chaneau et al.,
1999
Coriolopsis rigida 90 83% 91% NR NR Colombo et al.,
1996
E. javanicum 21 46% 31% 6 27% Oudot et al.,
1993
E. nidulans 21 60% 36% 16% 40% Oudot et al.,
1993
Fusarium solani 90 72% 100% NR NR Colombo et al.,
1996
30 40% 10% - - Chaneau et al.,
1999
G. putredinis 21 36% 37% 2% 30% Oudot et al.,
1993
Gongronella
butleri
30 5% 1% - - Chaneau et al.,
1999
Penicillim
brevicompactum
30 55% 23% - - Chaneau et al.,
1999
Penicillium
pinophilum
30 50% 10% - - Chaneau et al.,
1999
Penicillium
restrictum
30 6% 8% - - Chaneau et al.,
1999
Penicillium
simplicissimum
30 46% 38% - - Chaneau et al.,
1999
Phanerochaete
chrysogenum
1996
Pleurotus
ostreatus
1996
Trichoderma
harzianum
1996
30 39% 12% - - Chaneau et al.,
1999
28

Trichoderma
koningii
30 34% 21% - - Chaneau et al.,
1999
Trichoderma
polysporum
30 54% 28% - - Chaneau et al.,
1999
Trichoderma
pseudokoningii
30 33% 24% - - Chaneau et al.,
1999
Trametes villosa 90 80% 100% NR NR Colombo et al.,
1996
Consorcio Li en
crudo Liviano
56 66% 44% 38% Li et al., 2002
Consorcio Li en
crudo
condensado
56 68% 43% 22% Li et al., 2002
Consorcio Li en
crudo pesado
56 43% 33% 10% Li et al., 2002
Consorcio Li en
crudo
extrapesado
56 59% 33% 17% Li et al., 2002

En base a este hecho, se realiz un anlisis de
conglomerados con todos los datos recopilados
para determinar la distribucin de gneros de
hongos segn su capacidad para degradar
saturados (Figura 6). El anlisis de
conglomerados permiti la formacin de dos
grupos homogneos, un grupo de alta y otro de
baja degradacin, el primero formado por los
gneros Trametes, Phanerochaete, Pleurotus,
Coriolopsis, Fusarium, Emerciella, y
Beauveria, con un porcentaje de degradacin
de 74.433.4 %, y el segundo, formado por los
gneros Cladosporium, Penicillum, Graphium,
Aspergillus, Trichoderma, Penicillium,
Eupenicillum, y Acremonium con un
porcentaje de degradacin de 40.093.56 %.
En cuanto al mecanismo por el cual los hongos
son capaces de degradar los hidrocarburos
saturados, se ha descrito que es mediada por
hidroxilacin de los grupos metilos terminales
de los alcanos, siendo principalmente
catalizada a nivel de los microsomas por el
complejo enzimtico Citocromo P-450
monooxigenasa NADPH reductasa y las
enzimas alcohol deshidrogenasa y aldehdo
deshidrogenasa (Prenafeta-Buldu et al. 2002).
Se ha sugerido que ocurre una oxidacin de
los alcanos a alcoholes primarios y la
generacin de cidos grasos va aldehdos
(Walker y Cooney, 1973). Posteriormente, se
han descrito dos vas posibles degradacin
primaria: a) una oxidacin diterminal con la
formacin de cidos dicarboxlicos y; b) la
oxidacin subterminal generando alcoholes
secundarios. Finalmente, los cidos grasos son
incorporados a la va catablica por -
oxidacin, produciendo CO
2
y H
2
O.

3.2.4. Degradacin de la fraccin de
aromticos
En cuanto a la degradacin de aromticos, los
ms estudiados han sido los HAPs, los cuales
son compuestos de origen natural o
antropognico que se encuentran en el suelo, el
aire y el agua. De estos compuestos, 16 han
sido considerados por la Environmental
Protection Agency (EPA) como txicos y
cancergenos (Menzie et al. 1992; Nadon et al.
1995). Es por ello, que en la actualidad se han
sumado esfuerzos en encontrar
microorganismos que sean capaces de tolerar y
degradar estos compuestos con fines de
saneamiento ambiental. Segn Cerniglia
(1992), la tasa de degradacin microbiana de
HAPs es inversamente proporcional al nmero
de anillos aromticos en la molcula, por lo
que los HAPs de bajo peso molecular son
degradados ms rpidamente que los de mayor
peso molecular.
29

capacidad para degradar saturados, generada a travs del anlisis por conglomerados utilizando como
gnero. En el lado inferior derecho se presenta la distribucin del porcentaje de degradacin de saturados
por grupo, donde se muestra que existen diferencias significativas entre grupos de degradacin (p0.05).
Cada grupo de hongos est representado por un color (azul y rojo).

En el caso de los hongos, se ha reportado
ampliamente la degradacin de acenafteno,
antraceno, benzo[a]antraceno, DBT,
fenantreno, fluoranteno, naftaleno, pireno y
benzopireno. De estos HAPs, el ms
comnmente degradado es el naftaleno
donde se ha reportado la mayor cantidad de
especies con potencial para biodegradarlo.
De hecho, Uzoamaka et al. (2009), describen
la alta capacidad de Aspergillus niger y
Aspergillus versicolor de degradar en 7 das
un 99% de los siguientes HAPs:
acenaftaleno, Benzo[a]antraceno,
Benzo[k]fluoranteno, Benzo[g,h,i]perileno,
Benzo[a]pireno, criseno, Di-
benzo[a,h]antraceno, fenantreno, fluoranteno
y pireno. Acevedo et al. (2011) estudiaron la
degradacin de HAPs de tres y cuatro anillos
por Anthracophyllum discolor, un hongo de
la podredumbre blanca aislado de la selva
del sur de Chile. Los resultados obtenidos
mostraron que A. discolor fue capaz de
degradar HAPs, removiendo 62% de
fenantreno, 73% de antraceno, 54% de
fluoranteno, 60% de pireno y 75%
benzo[a]pireno.
Los resultados obtenidos en el presente
trabajo, en la Tabla 2, muestran que existen
diversos hongos que son capaces de degradar
la fraccin de aromticos en un 100%, entre
los que resaltan las especies: Aspergillus
terreus, Fusarium solani, Pleurotus
ostreatus, Trametes villosa y Trichoderma
harzianum. Es de inters que el hongo
Coriolopsis rigida degrada un 91% de la
fraccin de aromticos, mientras que otros
hongos degradan alrededor de un 50%, tales
como Aspergillus flavipes y Beauveria alba.
El anlisis de conglomerados permiti la
diferenciacin de tres grupos homogneos de
hongos segn su capacidad de degradar la
fraccin de aromticos (Figura 7). El primer
30

grupo de mxima degradacin formado por
los gneros Trametes, Pleurotus, Fusarium y
Coriolopsis con un porcentaje de
degradacin de 97.752.25%, el segundo
grupo de degradacin intermedia formado
por los gneros Graphium, Phanerochaete,
Emericella, Trichoderma y Beauveria con
un porcentaje de degradacin de
39.451.94% y un tercer grupo de mnima
degradacin formado por Eupenicillum,
Cladosporium, Penicillium, Aspergillus y
Acremonium con un porcentaje de
degradacin de 22.112.96% (Figura 7).

capacidad para degradar aromticos, generada a travs del anlisis por conglomerados utilizando como
gnero. En el lado inferior se presenta la distribucin del porcentaje de degradacin de aromticos por
grupo, donde se muestra que existen diferencias significativas entre grupos de degradacin (p0.05). Cada
grupo de hongos est representado por un color (azul, rojo y amarillo).

Cabe destacar que en las Figuras 5, 6 y 7 los
grupos con mayor tasa de degradacin de
TPH, saturados y aromticos, estn
conformados por gneros del Phylum
Basidiomycota -no aislados de
hidrocarburos- (Phanerochaete, Coriolus,
Trametes, Pleurotus, Bjerkandera) y, de
todos los hongos aislados de crudo y sus
derivados, solo presentaron una alta
capacidad degradativa los gneros
Beauveria, Emerciella=Aspergillus y
Fusarium. El elemento comn de estos
hongos es la produccin de enzimas
ligninolticas, lo que corrobora la
importancia de estas enzimas oxidativas en
la capacidad degradativa de los hongos
(Naranjo et al., 2007).
En cuanto a los mecanismos de degradacin
de aromticos, se ha evidenciado que existen
enzimas fngicas capaces de modificar a los
aromticos por procesos de: i) oxidacin,
tales como citocromo P-450 y las enzimas
ligninolticas lacasa, lignina peroxidasa,
manganeso peroxidasa; ii) halogenacin
como la cloroperoxidasa o por; iii)
conjugacin como la Glutatin-S-transferasa
(Hammel et al. 1986; Datta et al. 1994;
Vzquez-Duhalt et al. 1994; Venkateswarlu
31

et al. 1996; Torres et al. 2003; Wang et al.
2003; Doddapaneni y Yadav, 2004;
Baborov et al. 2006; Paskova et al. 2006;
Ayala et al. 2008).

3.2.5. Degradacin de resinas y asfaltenos
A fin de determinar la capacidad de los
hongos para degradar resinas y asfaltenos, se
recopil la informacin disponible que haba
al respecto, encontrndose, en lneas
generales, que las resinas y los asfaltenos
son las fracciones ms polares y
recalcitrantes del crudo, menos solubles,
menos biodisponibles y por ende ms
difciles de ser degradadas por los
microorganismos (Oudot et al. 1984). Sin
embargo, Oudot et al. (1993) encontraron
que los hongos Emericella nidulans,
Graphium putredinis, Eupenicillium
javanicum y Aspergillus flavipes son capaces
de degradar dichas fracciones en un rango de
15-28 %, en el caso de las resinas, y entre
15-40% en el caso de los asfaltenos.
De igual forma, Chaillan et al. (2004),
encontraron que los hongos Paecilomyces
variotii y Fusarium decemcellulare y las
levaduras Candida palmioleophila y Pichia
guillermomdii eran capaces de degradar
resinas y asfaltenos en un rango de 10-15 %.
Adems, Li et al. (2002), en un experimento
de biodegradacin en biopilas, encontraron
un porcentaje de degradacin de asfaltenos y
resinas de 9.98% y 37.35%,
respectivamente, luego de 53 das de
tratamiento utilizando los hongos
Cunninghamella sp., Fusarium sp. y
Phanerochaete chrysosporium. Ms
recientemente, Uribe et al. (2011), en
condiciones de laboratorio, describieron la
capacidad de una cepa de Neosartorya
fischeri aislada del lago natural de asfalto de
Guanoco (Edo. Sucre, Venezuela), de crecer
en medio lquido utilizando asfaltenos como
nica fuente de carbono y energa y de
mineralizar los mismos en un 13,2%.
Adems de ello, detectaron mediante la
tcnica de cromatografa de gases, los
metabolitos generados en el proceso de
degradacin: cido hidroxifenilactico,
carbazol 9-nitroso, cido tianafteno 2
carboxilico y hidroxipirenodiona (Uribe et
al. 2011).
A nivel de modificaciones moleculares, en el
caso de Trichoderma (AB2), Bublitz et al.
(1994), demostraron que este hongo era
capaz de modificar asfaltenos hacindolos
ms solubles por la incorporacin de
oxgeno dentro de su estructura. Por otro
lado, Hofrichter et al. (1997) encontraron la
formacin de bifenilo-2-ol (2
hidroxibifenilo) al exponer asfaltenos al
hongo Coprinus sclerotigenis. Estos autores
tambin estudiaron la capacidad degradativa
de asfaltenos por el hongo Panus triguinus
mediante CG, encontrando una reduccin en
el porcentaje de asfaltenos de pesos
moleculares comprendidos entre 400 y 300
kDa concomitante aparicin de nuevos
compuestos de 100 kDa a los 28-42 das de
haber iniciado el experimento (Hofrichter et
al. 1997).
En cuanto al mecanismo utilizado por los
hongos para degradar estas fracciones
recalcitrantes, existen evidencias de que
algunas enzimas fngicas son capaces de
modificar los asfaltenos. Tal es el caso de la
enzima cloroperoxidasa del hongo
Caldariomyces fumago la cual es capaz de
transformar las petroporfirinas permitiendo
remover los metales pesados Ni y V de los
asfaltenos (Fedorak et al. 1993). Estos
autores encontraron una reduccin del 93%
de Ni en niquel octaetilporfina, 53% de V en
vanadil octaetilporfina y 20% del Ni y V de
la fraccin de asfaltenos luego de la
exposicin a la cloroperoxidasa (Fedorak et
al. 1993). Igualmente, Mogolln et al.
(1998), encontraron una reduccin de 53% y
27% del Ni y V totales de una fraccin rica
en porfirinas y asfaltenos expuesta a esta
enzima.

32

3.3 Evidencias de degradacin de derivados
del crudo (gasolina, diesel y kerosn) por
hongos
Existen diversas evidencias de que los
hongos son capaces de degradar gasolina,
diesel y kerosn. Adekunle y Oluyode
(2005), aislaron hongos de semillas de
meln y soya y probaron su capacidad para
degradar crudo y sus derivados, encontrando
que la especie Botryodiplodia theobromae
tena la mayor capacidad de degradar crudo,
Aspergillus flavus de degradar diesel y
Macrophomina phaseolina de degradar
kerosn. Igualmente, Salmanov et al. (2008),
demostraron que los hongos Aspergillus,
Penicillium, Mucor y Fusarium eran capaces
de utilizar activamente crudo, diesel y
kerosn como fuente de carbono y energa.
Por otro lado, Saratale et al. (2007),
reportaron que el hongo Aspergillus
ochraseus demostr ser capaz de reducir el
TPH del kerosn en un 84%. Adems de
ello, demostraron por espectroscopia FT-IR
que ste era capaz de generar cambios en tan
solo 4 das de exposicin, observndose la
aparicin de bandas a 2749 cm
-1
, 2729 cm
-1

y la aparicin de 7 bandas entre 7941402
cm
1
, que indican la formacin de aldehdos
alifticos y aromticos que son productos de
degradacin del kerosn.
En cuanto a la degradacin de diesel, Li et
al. (2008), estudiaron la degradacin de este
hidrocarburo mediado por la bacteria
Mycobacterium hyalinum, el hongo
Cladosporium y por un consorcio utilizando
los dos microorganismos anteriores. Para
ello, expusieron durante 5 das los
microorganismos al diesel y, mediante CG,
determinaron que hubo una degradacin de
21% para el caso de M. hyalinum, de 34%
para Cladosporium. Sin embargo,
observaron una degradacin de un 99% al
utilizar el consorcio microbiano
(Mycobacterium-Cladosporium). Estos
autores sugieren que el hongo Cladosporium
es capaz de degradar tanto los hidrocarburos
alifticos como los aromticos en el diesel,
facilitando, al reducir el contenido de
aromticos, el crecimiento de la bacteria, la
cual, a su vez, acelera el proceso de
degradacin de los saturados, promoviendo
finalmente la degradacin de aromticos por
el hongo.

4. Conclusiones

El meta-anlisis realizado con la
informacin reportada en los trabajos de
investigacin publicados en las bases de
datos Web of Science y SciFinder Scholar
muestra que del total de hongos aislados
de crudo, sus derivados y sustratos
impactados corresponden a los Phyla:
Ascomycota (83%), Zygomycota (10%),
Glomeromycota (6%) y Basidiomycota
(1%), siendo este ltimo el de mayor
capacidad degradativa.
Los gneros de mayor frecuencia de
aislamiento en hidrocarburos fueron
Penicillium (18%), Aspergillus (17%) y
Fusarium (6%), siendo Penicillium el
hongo ms cosmopolita ya que fue
aislado de todos los sustratos impactados
con hidrocarburos.
En funcin del porcentaje de degradacin
de TPH, el grupo reportado que present
mayor degradacin fue el formado por los
gneros Phanerochaete, Coriolus,
Trametes, Pleurotus, Bjerkandera,
Rhizopus, Emerciella y Aspergillus.
Con respecto a las fracciones de
saturados, los gneros con mayor
capacidad degradativa fueron:
Phanerochaete, Coriolopsis, Trametes,
Pleurotus, Emerciella, Fusarium y
Beauveria.
Con respecto a las fracciones de
aromticos, los gneros con mayor
capacidad degradativa fueron: Trametes,
Pleurotus, Fusarium y Coriolopsis.

33

En la literatura, solo existen evidencias de
degradacin de resinas y los asfaltenos
por los gneros Aspergillus, Candida,
Emericella, Eupenicillium, Fusarium,
Graphium, Neosartorya, Paecilomyces y
Pichia.

5. Reconocimientos

El presente trabajo de investigacin fue
financiado con fondos compartidos de los
Proyectos IDI: i) Desarrollo de una
tecnologa de biorremediacin para el
tratamiento de derrames de crudo extra
pesado y de fosas petrolferas asociadas a la
produccin de crudos extra pesados,
FONACIT No. G-2005000440 (IDEA); ii)
Desarrollo, evaluacin y validacin de
nuevos procesos verdes orientados al
saneamiento de pasivos ambientales
generados por la industria petrolera. Sub-
Proyecto 3: MISIN CIENCIA No.
2007001401 (IDEA) e; iii) Induccin de la
conversin enzimtica parcial de asfaltenos
mediante exoenzimas oxidativas, como
propuesta innovadora para el mejoramiento
de crudos extra-pesados de la Faja
Petrolfera del Orinoco. FONACIT No. G-
2011000330.

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Evaluacin global de la produccin de biocombustibles con
microalgas: Establecimiento de capacidades, limitaciones y
factores determinantes de la viabilidad del proceso

F.G. Acin
*1
, J.M. Fernndez-Sevilla
1
, J.J. Magn
2
, A. Gonzlez-Cspedes
2
, E.Molina
1

1
Departmento de Ingeniera Qumica, Universidad de Almera, 04120 Almera, Espaa
2
Estacin Experimental Las Palmerillas, Fundacin Cajamar, 04710 Almera, Espaa

*
Autor para correspondencia: facien@ual.es
Resumen

En este trabajo se presenta un anlisis global de la produccin de microalgas para la produccin de
biocombustibles. El punto de partida es el balance de energa al proceso que permite cuantificar la
capacidad de produccin mxima alcanzable en 200 ton/haao aunque los valores reales obtenidos a
pequea escala difcilmente superan las 100 ton/haao. Para lograr estas altas productividades es
necesario utilizar sistemas de cultivo y microalgas de elevado rendimiento, es decir que permitan
alcanzar altas productividades con bajos consumos energticos o utilizando muy eficazmente la
radiacin solar disponible. Las tecnologas de cultivo a emplear deben ser optimizadas pero no
necesariamente tienen que se reactores abiertos de gran volumen por unidad de superficie, siendo
posible utilizar reactores de poco volumen por unidad de rea. El mayor cuello de botella para la
produccin de biocombustibles a partir de microalgas es el elevado coste de produccin de la
biomasa. El anlisis econmico llevado a cabo permite identificar los factores que mas contribuyen a
dicho costo. De este estudio se concluye que los reactores de elevada productividad y baja relacin
V/S son los ms recomendables, aunque hoy da siguen siendo demasiado costosos frente a los
tradicionales reactores abiertos tipo raceway.

Palabras clave: Microalgas, biocombustibles, coste produccin, productividad, fotobiorreactores.

Abstract

This paper summarizes the major aspects in the production of biofuels from microalgae. Analysis
begin from the energy balance to the process that allows to determine a maximum production
capacity of 200 ton/hayear, although values higher than 100 ton/hayear are barely reported. To
achieve maximum productivity it is mandatory to use photobioreactors and microalgae highly
efficient, capable to produce biomass with lower power consumption and efficiently using the solar
radiation. Although open reactors are the most used photobioreactors to produce microalgae, it can be
produced including in closed photobioreactors with positive energy balance, the key parameter being
the areal productivity and the specific power consumption of the reactor. Anyway, the bottleneck for
the massive production of microalgae is their high cost. Cost analysis performed allows identifying
major factors determining this production cost. From this analysis it is concluded that
photobioreactors with high biomass productivity and low volume to surface ratio are recommended,
although today this type of photobioreactors remain to expensive versus the most traditional open
raceways.

Keywords: Microalgae, biofuels, production cost, productivity, photobioreactors.
40

1. Introduccin

La idea de producir biocombustibles a partir
de microalgas procede de los aos 60
(Oswald and Golueke 1960). De esta poca
son los primeros intentos relevantes de llevar
a cabo este proceso a gran escala, cuando
Japn y EEUU pusieron en marcha
proyectos de investigacin nacionales con
este objetivo (Benemann 1997; Hughes and
Benemann 1997). A pesar de estos
importantes esfuerzos no se alcanz un
desarrollo comercial viable debido a los
elevados costos de produccin de la biomasa
de microalgas y de los biocombustibles
obtenidos cuando se comparaban con el
precio del petrleo y sus combustibles
derivados. Por este motivo, hasta hace pocos
aos la produccin de microalgas ha
quedado restringida a la obtencin de
productos de alto valor o biomasa de alta
calidad de uso en alimentacin humana y
animal, especialmente en acuicultura (Pulz
and Gross 2004). Sin embargo, el alza en los
precios del petrleo y el problema de
calentamiento global derivado del uso del
petrleo como combustible han vuelto a
focalizar la atencin en las microalgas como
fuente de biocombustibles (Chisti 2007;
Chisti 2008). Las microalgas han sido
propuestas como sistema de captura de CO
2

y su transformacin en productos de uso
industrial como biocombustibles,
aminocidos, carotenoides, o incluso su
empleo en el tratamiento de aguas resiuales
(Benemann 1997 ; Muoz, et al. 2005 ;
Olgun 2003, 2012 ; Pulz and Gross 2004 ;
Rodolfi, et al. 2009 ; Romero Garca, et al.
2012) ya que aproximadamente el 40% del
peso de la biomasa es carbono, por lo que la
produccin de 100 toneladas de biomasa
requiere un consumo mnimo de 183
toneladas de dixido de carbono. Sin
embargo, hay que tener en cuenta que la
biomasa producida no puede ser almacenada
por largos periodos ya que se corrompe
fcilmente, por lo que el uso de microalgas
no puede ser considerada una estrategia de
almacenamiento de dixido de carbono.
Las microalgas tienen determinadas ventajas
frente a los cultivos energticos conven-
cionales como fuente de biocombustibles
entre las que destaca el hecho que las
microalgas compiten con dichos cultivos por
agua y suelos frtiles, no afectando as a la
produccin de cultivos destinados a
consumo humano. En este sentido, las
microalgas han sido propuestas como la
nica alternativa sostenible para la
produccin de biocombustibles (Chisti
2007). Sin embargo, para ser competitiva en
el mercado energtico la produccin de
microalgas debe aproximarse a la de los
cultivos energticos tanto en capacidad
como en coste. As, la produccin de aceite
de palma es mayor de 40 millones de
toneladas al ao a un precio de 0.5 /kg. En
este sentido, el coste de produccin de
biodiesel a partir de microalgas es aun
superior y lo que es mas importante no
existen instalaciones a gran escala que
permitan conocer con precisin dicho coste;
la mayora de los datos disponibles proceden
de extrapolaciones obtenidas de datos de
laboratorio o escala piloto. As, actualmente
el costo de produccin de microalgas para
una produccin de 100 toneladas/ao se
estima en 3000 $/tonelada, pero este precio
se reduce notable cuando la escala se
incrementa (Chisti 2007). Para una
produccin de 200 toneladas/ao y
utilizando gases de combustin como fuente
de dixido de carbn y agua residual como
fuente de nutrientes, el costo de produccin
se reduce a 1800 $/tonelada (Acin, et al.
2012). De estos datos se concluye que el
precio de produccin de biomasa de
microalgas se debe reducir an al menos en
un orden de magnitud para lo cual es
necesario mejorar las tecnologas
actualmente utilizadas, incluyendo las cepas
utilizadas y los tipos de fotobiorreactores, as
como los procedimientos de cosechado y
procesado de la biomasa para su trans-
41

formacin en biocombustibles. Los avances
recientes en estas reas permiten ser
optimistas en cuanto a la viabilidad
comercial de este tipo de procesos en los
prximos 10 a 15 aos (Wijffels and
Barbosa 2010).
En este trabajo se presenta un anlisis
global de la produccin de microalgas para
la produccin de biocombustibles con
microalgas, en el que se analiza la capacidad
mxima de produccin que cabe esperar en
funcin de la disponibilidad de energa solar
y capacidad de las microalgas de transformar
dicha energa en biomasa y cidos grasos.
Adems se analizan los fenmenos que tiene
lugar en los sistemas de produccin de
microalgas, identificando aquellos que
limitan actualmente dicha produccin.
Finalmente se hace un anlisis de costos del
proceso, identificando aquellos que en
mayor medida gravan dicha produccin
como susceptibles de ser reducidos con
vistas a una produccin industrial.

2. Capacidad mxima de
produccin de biomasa

La capacidad mxima de produccin de
biomasa con microalgas est determinada,
entre otros factores, por la disponibilidad de
radiacin solar. La radiacin solar disponible
a nivel del suelo en una superficie horizontal
es funcin de la localizacin geogrfica
considerada. La Figura 1 muestra el mapa de
distribucin de radiacin solar en la
superficie terrestre. Los valores ms
elevados corresponden a zonas templadas y
clidas del planeta con valores de radiacin
disponible, H
ao
, entre 2000 y 3000
kWh/m
2
ao.

Figura 1.- Mapa de distribucin de radiacin solar a nivel del suelo.

Como valor medio se puede considerar una
radiacin solar media diaria, H
da
, de 250
W/m
2
dia, que equivale a un valor medio de
radiacin disponible, H
ao
, de 2160
kWh/m
2
ao (Ec. 1). Sin embargo, existen
zonas con valores de radiacin solar media
diaria superiores a 300 W/m
2
dia, que
equivalen a un valor medio de radiacin
disponible, H
ao
, de 2600 kWh/m
2
ao.
( ( ( (
=
( ( ( (

2 2
365 24
ao da
Wh W da h
H H
m ao m ao da

Ec. 1

42

Sin embargo, toda la radiacin solar
disponible no puede ser totalmente asimilada
ya que solo la mitad es radiacin
fotosintticamente activa. De ella solo una
parte llega a los cloroplastos debido a
fenmenos de reflexin y absorcin no
tiles, por lo que solo un 25% de la energa
recibida es netamente asimilable (Figura 2).
De esta energa, la fotosntesis es capaz de
asimilar qumicamente un 70%
convirtindola en energa qumica, por lo
que de forma neta solo un 8% de la radiacin
solar disponible puede ser eficientemente
asimilada. Si adems se tiene en cuenta que
se trata de organismos fotosintticos con
periodos de respiracin durante la noche y
consumo de energa para mantenimiento, al
final se concluye que la cantidad mxima de
energa que puede ser fijada como biomasa
neta es de un 5% (Ec. 2) (Schenk, et al.
2008).
1 2 3 4 5 2 2

day day
W W
E H Ef Ef Ef Ef Ef
m m
( (
=
( (

Ec. 2

Figura 2. Prdidas de rendimiento en la utilizacin de energa solar por microorganismos fotosintticos.

Estos valores de radiacin disponible y
eficiencia de la fotosntesis determinan la
capacidad mxima de almacenamiento de
energa, y por ende, de produccin de
biomasa que se pueden alcanzar. As, 250
W/m
2
de radiacin solar disponible
equivalen a una disponibilidad de energa de
21.6 MJ/m
2
dia, que con una eficiencia
fotosinttica del 5% se traducen en una
fijacin neta de energa qumica de 1.1
MJ/m
2
/da. (Tabla 1).

Tabla 1. Estimacin de la productividad de biomasa
en funcin de la radiacin solar disponible
considerada.
Parmetros Valor Unidades
Radiacin solar media 250 W/m
2

2160 kWh/m
2
ao
Eficiencia fotosinttica 5.00 %
Radiacin solar diaria 21.60 MJ/m
2
da
Fijacin de energa 1.08 MJ/m
2
da
Calor de combustin
de la biomasa
20.00 MJ/kg
Productividad de
biomasa
54.00 g/m
2
da

194.4 Tm/ha ao
Fijacin de CO
2
1.08 TmCO
2
/ha da

388.8 TmCO
2
/ha ao

43

Considerando un calor de combustin de la
biomasa de 20 MJ/kg (20 kJ/g) esto supone
una productividad mxima de 54 g/m2da, o
extrapolando a una hectrea, un valor de 200
Tm/haao. Teniendo en cuenta que cada
tonelada de biomasa implica la fijacin real
de 2 toneladas de CO2, esta productividad
de biomasa se traduce en demandas o tasas
de fijacin de CO2 de 1.1 Tm/hada o 390
Tm/haao. As pues, la primera limitacin
en la capacidad de produccin de microalgas
es la disponibilidad de radiacin solar. La
seleccin de una ubicacin con altas tasas de
radiacin solar disponible resulta deter-
minante en la capacidad de produccin. A
esto se debe aadir el efecto de la
temperatura. Cada microorganismo posee
una temperatura ptima y la ubicacin
seleccionada debe poseer una temperatura
media anual lo ms parecida posible a la
temperatura ptima del microorganismo, y
con las mnimas variaciones tanto diarias
como estacionales.

3. Tecnologa de produccin de
biomasa

Una vez definidos los valores mximos
alcanzables es necesario tener en cuenta que
el lograrlos o no, as como a que coste,
depende de la tecnologa que se utilice. En
este sentido actualmente existen varias lneas
de investigacin relacionadas con el diseo y
operacin de reactores pero en todas ellas
hay que tener en cuenta las mismas variables
como son el consumo de energa, la
productividad y la concentracin de
biomasa. La primera variable a la hora de
seleccionar el reactor ms adecuado es el
consumo de energa. Hasta ahora los
estudios realizados han reflejado el elevado
consumo de energa en los sistemas de
cultivo desarrollados plantendose casi en
exclusiva el uso de reactores raceway como
opcin energticamente positiva
(Huesemann and Benemann 2009 ; Rodolfi,
et al. 2009). En este sentido, es evidente que
dicho consumo no puede ser superior a la
cantidad mxima de energa que es posible
fijar y que se ha cuantificado en 1.1
MJ/m
2
dia. Por tanto, si se establece un
autoconsumo de energa como mximo igual
al 20% de dicha fijacin neta de energa se
observa que en funcin del tipo de reactor, y
en concreto de su relacin volumen por
unidad de superficie, es posible operar con
varios diseos de reactores.
La Figura 3 muestra como en funcin del
diseo de reactor considerado, es decir la
relacin volumen por unidad de superficie,
al aumentar el consumo de energa por
unidad de volumen (W/m
3
) el consumo de
energa por unidad de superficie (W/m
2
) se
incrementa de forma lineal, aumentando de
forma ms pronunciada en aquellos diseos
de mayor volumen de cultivo por unidad de
superficie (Ec. 3).

44

Figura 3. Variacin del consumo de energa por unidad de superficie en el reactor en funcin de su consumo por
unidad de volumen y relacin V/S del mismo.

Estos resultados muestran como reactores de
gran volumen por unidad de superficie, tipo
raceway, deben operar con consumos de
potencia inferiores a 15 W/m
3
para
mantenerse por debajo del autoconsumo
permitido del 20% de la fijacin mxima de
energa alcanzable, mientras que en
reactores de pequeo volumen por unidad de
superficie este consumo de energa puede
aumentar hasta ms de 100 W/m
3
,
mantenindose a pesar de ello por debajo del
autoconsumo permitido.
3
2 3 2
W W m
P P V
S V S
m m m
(
( (
=
(
( (

Ec. 3
La relacin volumen por unidad de
superficie del reactor, determina adems la
productividad y concentracin de biomasa
mxima alcanzables en el cultivo. As, si se
tiene en cuenta que la productividad mxima
por unidad de superficie est fijada por la
radiacin solar disponible y la eficiencia de
la fotosntesis considerada, en un valor de 54
g/m
2
da, la relacin volumen por unidad de
superficie determina la productividad
volumtrica que es necesario obtener para
alcanzar dicha productividad mxima por
unidad de superficie. La Figura 4 refleja
como en los reactores de mayor volumen por
unidad de superficie (200 L/m
2
) la
productividad volumtrica debe ser igual o
superior a 0.27 g/L da mientras que en los
reactores de menor relacin volumen por
unidad de superficie (25 L/m
2
) la
productividad volumtrica debe ser igual o
superior a 1.7 g/L da (Ec. 4).
2
3 3
2
area
vol
g
Pb
m day g
Pb
m day m
V
S
m
(
(
(

=
(
(

(

Ec. 4

45

Entre estos dos valores extremos se observa
una variacin hiperblica de la
productividad volumtrica de biomasa con la
disminucin de la relacin volumen por
unidad de superficie del reactor. En los
reactores raceway la productividad mxima
considerada como alcanzable media anual se
estima en 20 g/m2 da (Borowitzka 1999),
mientras que en reactores cerrados se han
referenciado productividades de hasta 47
g/m
2
da (Chisti 2007), aunque se han
referenciado productividades de hasta 100
g/m
2
da, por encima de las tericamente
alcanzables (Pulz 2007).

Figura 4. Variacin de la productividad de biomasa por unidad de volumen alcanzable en el reactor, para obtener la
productividad mxima por unidad de superficie, en funcin de la relacin V/S del reactor.

La productividad de biomasa mxima se
obtiene operando en continuo de forma
estable durante todo el ao, a la velocidad de
dilucin ptima. Aunque la velocidad de
dilucin ptima puede variar en funcin del
microorganismo, condiciones de cultivo y
poca del ao, resulta evidente que para
maximizar la produccin de biomasa se
deben seleccionar cepas de rpido
crecimiento, con velocidades especficas
mximas no inferiores a 0.8 da
-1
. Teniendo
en cuenta que la velocidad de dilucin
ptima recomendada para la produccin en
continuo de cualquier microorganismo est
entre el 50-70% de dicha velocidad de
dilucin, y considerando el valor ms
conservativo del 50%, se obtiene que dicha
velocidad de dilucin ptima debe ser de
aproximadamente 0.4 da
-1
. A partir de este
valor se puede estimar tanto la concentracin
de biomasa en estado estacionario (Ec. 5)
como otros parmetros relevantes como son
el volumen total de cultivo (Ec. 6) y el
volumen de cosechado diario (Ec. 7), ambos
determinantes tanto del coste de la
instalacin como de su consumo energtico.
La Figura 5 muestra como al disminuir la
relacin volumen por unidad de superficie la
concentracin de biomasa de estado
estacionario aumenta, desde 0.7 g/L hasta
4.2 g/L para 200 L/m
2
y 25 L/m
2

respectivamente.

46

Figura 5. Variacin de la concentracin de biomasa, volumen de cultivo y volumen de cosechado, para alcanzar la
productividad mxima establecida por unidad de superficie, en funcin de la relacin V/S del reactor.

Por el contrario, el volumen de cultivo y de
cosechado a procesar por cada kilo de
biomasa producida aumentan con la relacin
volumen por unidad de superficie. Para el
menor valor analizado, de 25 L/m
2
, el
volumen de cultivo requerido para producir
1 kg/da es de590 L siendo necesario
procesar un total de 240 L de cosechado.
Para el mayor valor analizado, de 200 L/m
2
,
el volumen de cultivo requerido para
producir 1 kg/da es de 3700 L siendo
necesario procesar hasta 1500 L de
cosechado para producir un kilo de biomasa
al da. Este mayor volumen de cultivo incide
de forma directa en los costes del reactor as
como de su operacin, mientras que el
volumen de cosechado repercute en el
tamao y coste de operacin de los equipos
tanto de preparacin de medio de cultivo
como de cosechado y concentracin de la
biomasa. Por tanto, ambos inciden en el
coste de produccin de la biomasa.
3
3

1
vol
vol
g
Pb
m day g
Cb
m
D
day
(
(
(

=
(
(

(

Ec. 5
3
3
day
culture
vol
g
M
day
V m
g
Pb
m day
(
(

( =

(
(

Ec. 6
3
3
1
harvest culture
m
V V m D
day day
( (
( =
( (

Ec. 7

47

4. Caractersticas del
microorganismo

Para poder aprovechar al mximo la
radiacin solar disponible es preciso utilizar
microorganismos capaces de crecer
adecuadamente en las condiciones de cultivo
predominantes, y que muestren elevadas
productividades as como composiciones
bioqumicas adecuadas. El crecimiento y
productividad de cualquier microorganismo
se puede ajustar a un modelo hiperblico
(Molina Grima, et al. 1996). En dicho
modelo la velocidad de crecimiento,
max,
es
funcin de la velocidad especfica mxima
de crecimiento,
max
, la disponibilidad de
luz, I
av
, la constante de irradiancia, I
k
, y el
parmetro de forma, n (Ec. 8). Es evidente
que cuanto mayor sea la
max
del
microorganismo mayor ser su velocidad de
crecimiento as como que la disponibilidad
de luz favorece tambin el crecimiento. Ya
que el parmetro n es una constante de
forma la nica variable que se puede
modificar en el microorganismo es la
constante de irradiancia Ik. Para determinar
la influencia de esta variable se ha simulado
la productividad la productividad de biomasa
del microorganismo para distintos valores de
Ik, manteniendo constantes el resto de
parmetros. Los resultados muestran como
la reduccin de Ik permite alcanzar mayores
productividades de biomasa y hacerlo a
mayores velocidades de dilucin (Fig. 6).
Esto se debe a que microorganismos con
menor valor de Ik son mas eficientes en el
uso de la radiacin solar disponible,
alcanzando mayores concentraciones de
biomasa para la misma velocidad de dilucin
e irradiancia promedio disponible,
aumentando de esta forma la productividad
de biomasa.
=
+
max
n
av
n n
k av
I
I I

Ec. 8
= Pb Cb
Ec. 9

Figura 6. Influencia de la constante de irradiancia en la productividad de biomasa de
microorganismos fotosintticos.

En cuanto a la generacin de producto, por
ejemplo cidos grasos, sta viene
determinada por la produccin de biomasa y
el contenido en cidos grasos de la misma.
Dicha productividad se puede determinar
tambin como el producto de la velocidad
especifica de acumulacin de cidos grasos,
q
p
, por la concentracin de biomasa (Ec. 10).
La velocidad especfica de acumulacin de
cidos grasos se expresa como la suma de dos
48

trminos, uno correspondiente al metabo-
lismo primario y que es proporcional a la
velocidad de crecimiento, y el segundo
correspondiente al metabolismo secundario y
que es independiente de la velocidad de
crecimiento aunque se induce solo en
ausencia o limitacin del crecimiento (Ec. 11)
(el o, et al. 2008).
Para determinar la influencia de cada trmino
se ha simulado la productividad de cidos
grasos que se podran obtener en funcin del
valor de Yp/x y Beta. Los resultados
muestran como al aumentar el valor de Yp/x
se produce un aumento en la productividad de
cidos grasos, la cual en todos los casos
aumenta con la velocidad de dilucin hasta el
valor ptima de la misma, por encima del
cual dicha productividad disminuye (Figura
7).

= =
ag b ag p b
P P X q C

Ec. 10
| = +
/

p p x
q Y

Ec. 11

Figura 7. Influencia del coeficiente de rendimiento en producto ligado al crecimiento, Yp/x,
en la productividad de cidos grasos de microorganismos fotosintticos.

Figura 8. Influencia del coeficiente de rendimiento en producto no ligado al crecimiento, Beta,
en la productividad de cidos grasos de microorganismos fotosintticos.

49

En cuanto al valor de Beta, aunque ste ser
funcin de muchos factores, se puede
representar como debe variar para afectar
significativamente a la produccin de cidos
grasos. En todos los casos se ha considerado
una variacin inversamente proporcional a la
velocidad de crecimiento. Los resultados
obtenidos muestran como cuando no existe
metabolismo secundario la productividad de
cidos grasos es mxima a la velocidad de
dilucin que optimiza la productividad de
biomasa (Figura 8). Cuando existe
metabolismo secundario la productividad de
cidos grasos se incrementa con respecto a la
situacin en ausencia del mismo, slo a
bajas velocidades de dilucin, inferiores a
0,2 1/da. En estos casos el aumento
observado es proporcional a la relacin
existente entre Beta y 1/D, por lo que slo en
el caso de microorganismos que muestren un
muy marcado efecto de acumulacin de
cidos grasos en limitacin o ausencia de
crecimiento ste fenmeno puede contribuir
significativamente a incrementar la
productividad de cidos grasos.

5. Coste de produccin de biomasa

Para evaluar el coste de produccin de la
biomasa, utilizando las diferentes
tecnologas de cultivo consideradas, se ha
partido del caso de una planta de produccin
de microalgas en fotobiorreactores tubulares,
ubicada en Almera y perteneciente a la
Fundacin CAJAMAR (Figura 9).

Figura 9. Imagen del sistema de cultivo utilizado para la estimacin econmica de costes.
Planta semi-industrial de produccin de microalgas en fotobiorreactores tubulares ubicada en la
Estacin Experimental Las Palmerillas de la Fundacin Cajamar.

En esta planta se produce biomasa de
Scenedesmus almeriensis, una microalga
dulceacucola de elevado crecimiento y
tolerancia a factores ambientales (pH y
temperatura). Los parmetros de la
instalacin existente se muestran en la Tabla
2 donde se observa una elevada
productividad pero tambin alto consumo
energtico debido al uso de bombas
centrfugas para la impulsin del cultivo, y
al diseo modular de la instalacin.
Para estimar el coste de produccin en dicha
instalacin se ha utilizado la metodologa de
los factores de Lang partiendo del coste de
los equipos principales para establecer el
capital inmovilizado, as como el coste de
los reactivos, servicios y mano de obra
necesarios para la operacin de la planta.
50

Tabla 2. Condiciones de operacin en la instalacin de produccin de microalgas considerada.

Parmetro Valor Unidades
Relacin V/S 0.08 m
3
/m
2

Dilucin 0.40 1/da
Productividad de biomasa 0.66 g/l da
Concentracin de biomasa 1.65 g/l
Tiempo de operacin 280 Das/aos
10 h/da
Capacidad de produccin 5.50 Tn/ao
Razn de aireacin 0.10 v/v/min
Consumo de energa 500 W/m
3

Volumen de cultivo 30 m
3

Superficie de cultivo 397 m
2

Agua Nutrientes
Dixido de carbono
Biomasa seca

Figura 10. Diagrama de bloques del proceso de produccin de biomasa considerado.

El diagrama de bloques del proceso
instalado se muestra en la Figura 10. Los
equipos principales considerados suponen un
total de 327 k (Tabla 3), pero a ello hay que
sumar todos los costes de instalacin de los
mismos, as como tuberas, electricidad,
terrenos, ingeniera, contratistas e
imprevistos. Haciendo uso de los factores
referenciados para procesos basados en
microalgas (Molina Grima, et al. 2003 ) se
obtiene un total de capital inmovilizado de
962 k (Tabla 4).

Tabla 3. Listado de equipos principales y su coste para la instalacin de produccin considerada.
Equipo Capacidad

Coste, /Unidad Unidades Coste total,
Preparacin de medio 4.0 m
3
/h
6.000 1 6.000
Esterilizacin de medio 2.0 m
3
/h
15.000 1 15.000
Soplante de aire 200.0 m
3
/h
2.500 1 2.500
Fotobiorreactores 3.0 m
3

15.000 10 150.000
Sedimentador 2.5 m
3
/h
4.500 0 -
Tanque cosechado 1.0 m
3

127 1 127.31
Decantador 4.0 m
3
/h
45.000 1 45.000
Bomba cosechado 2.0 m
3
/h
1.000 1 1.000
Suministro de CO2 4.0 kg/h
459 1 458.93
Liofilizacin 70.0 kg/da
107.124 1 107.124
Total
327.210
51

Tabla 4.- Estimacin del coste de produccin de biomasa en la instalacin de produccin considerada.
Concepto Coste,
Equipos principales 327.210
Costes instalacin 65.442
Instrumentacin y control 49.081
Tuberas 65.442
Electricidad 32.721
Edificios 73.622
Acondicionamiento terreno 39.265
Servicios 65.442
Terreno 19.632
Ingeniera y supervisin 98.163
Gastos construccin 36.892
Contratista 18.446
Imprevistos 71.309
Total 962.671

A partir de este valor, y considerando un
periodo de amortizacin de 10 aos se
estima de forma lineal una amortizacin de
109 k al ao, a los que hay que sumar los
costes de consumibles, servicios y mano de
obra. Estos costes suman un total de 147 k,
por lo que en total los costes de produccin
ascienden a 256 k al ao (Tabla 5).
Dividiendo estos costes entre la capacidad
de produccin se obtiene el coste unitario
por kilogramo de biomasa, siendo este de
aproximadamente 47/kg (Tabla 5). Estos
valores estimados corresponden con los
valores reales determinados durante la
operacin de dicha planta, lo que verifica la
bondad de la metodologa de estimacin de
costes utilizada.

Tabla 5.- Estimacin del coste de produccin de biomasa en la instalacin de produccin considerada.
Amortizacin Unidades Coste, /unidad Coste,
Tiempo de vida 10
Amortizacin 92,340
Impuestos propiedad 923
Seguros 554
Impuesto compras 15,402
Total 109,220
Costes de produccin Unidades Coste, /unidad Coste,
Medio de cultivo 3,333 0.40 1,333
Dixido de carbono 13,750 0.40 5,500
Agua 333 0.10 33
Energa elctrica 100,667 0.08 8,053
Mano de obra 3 30,000 90,000
Supervisin 18,000 3.600
Impuestos de trabajo 23,400 5,850
Mantenimiento 13,088 523
Suministros 2,159 8
52

Gastos generales 51,767 28,472
Impuestos 85 13
Imprevistos 26,994 1,349
Marketing 48,133 2,407
Total materias primas 6,833
Total servicios 8,086
Total mano de obra 132,224
Coste unitario, /kg 46.61

Figura 11. Distribucin de costes estimada considerando 3 hombres-mes de personal.

Figura 12.- Distribucin de costes estimada considerando 1 hombre-mes de personal.

53

Sin embargo, lo ms interesante de este
clculo no es el valor final obtenido en s,
sino la propia metodologa de determinacin
usada, que permite identificar cules son los
factores que ms contribuyen al coste y por
tanto los que primero deben ser reducidos,
as como que se trata de una metodologa
aplicable a cualquier otro escenario por lo
que puede ser utilizada para estimar el coste
de produccin en diferentes sistemas de
cultivo o condiciones. En cuanto a la
identificacin de los factores de coste ms
importantes la Figura 11 muestra como la
mano de obra y la amortizacin del capital
inmovilizado son las partidas de gasto ms
importantes, y por tanto las primeras que
deben ser reducidas.
La reduccin de la mano de obra no puede
hacerse si no es a travs de una
automatizacin y simplificacin de la
instalacin. En condiciones de produccin la
mano de obra suficiente para operar dicha
planta es de 1 persona, por lo que el coste de
produccin se reduce a 31.3 /kg pasando a
ser la partida mayoritaria la correspondiente
a la amortizacin del capital inmovilizado
(Figura 12).
Para reducir la partida de capital
inmovilizado se analiza el coste de los
diferentes equipos observndose como los
fotobiorreactores, el liofilizador y la
centrifugacin son los que mayoritariamente
afectan a este coste (Figura 13).

Figura 13. Contribucin de los diferentes equipos al coste de capital inmovilizado.

La etapa de liofilizacin se puede eliminar
considerando como producto final obtener
un lodo con un 20% en peso de biomasa, que
es el valor mximo alcanzable con
centrifugas continuas comerciales. La etapa
de centrifugacin se debe minimizar
incorporando una etapa previa de floculacin
decantacin que permita pasar de la
concentracin de cultivo a un valor de
alrededor del 1% en peso de biomasa, que es
el valor de referencia para los
sedimentadores comerciales. De esta forma,
el diagrama de bloques representativo del
sistema se muestra en la Figura 14. Para
reducir el coste de los fotobiorreactores y
resto de equipos se puede considerar el
aumento de escala que repercute en una
reduccin general. Para determinar el coste
de los equipos principales al aumentar de
escala se ha considerado un factor exponente
de 0.85, considerndose un aumento mximo
de escala igual a 10 veces el considerado
inicialmente, aumentndose a partir de aqu
el nmero de unidades necesarias (Ec. 12).
54

Considerando una produccin de 200 Tn/ao
y aplicando estas modificaciones se obtiene
un coste de produccin de 10.1 /kg, el 75%
del cual corresponde a la amortizacin
necesaria por el elevado coste de los
fotobiorreactores que representan el 80% del
coste de los equipos principales (Figura 15).
Evidentemente la mejor forma de reducir el
coste de produccin es por tanto minimizar
el coste de reactor, pero para hacerlo es
preciso conocer en primer lugar que variable
afecta ms al coste total de produccin: (i) la
productividad volumtrica o (ii) la cantidad
de cultivo por unidad de volumen. As, la
Figura 16 muestra como el aumento de la
productividad volumtrica disminuye
notablemente el coste unitario de produccin
as como la superficie necesaria. El aumento
de la productividad en un 50%, de 0.6 a 0.9
g/Lda reduce la superficie necesaria en un
33% y el coste de produccin en un 30%.

0.85
arg
arg
l e
l e small
small
Capacity
Cost Cost
Capacity
| |
=
|
\ .

Ec. 12

Figura 14. Diagrama de bloques del proceso propuesto de obtencin de biomasa hmeda.

Figura 15. Distribucin de costes estimada para un aumento de escala a 200 Tn/ao.

55

Por el contrario, el aumento de la razn V/S
influye muy poco en el coste unitario de
produccin a pesar de que tambin reduce la
superficie de cultivo necesaria y que para
este clculo se ha mantenido contante el
coste total de los fotobiorreactores para que
el clculo no se viera afectado por el mayor
volumen de cultivo necesario (Figura 17).

As, un aumento del 70% en la relacin V/S
si reduce la superficie de cultivo necesaria
en un 42% pero el coste de produccin en
slo el 4%. Por tanto el rediseo de reactor
debe hacerse principalmente incrementando
su productividad volumtrica ms que el
volumen de cultivo por unidad de superficie,
y por supuesto reduciendo su coste.

Figura 16.- Influencia de la productividad de biomasa en el coste de produccin de la misma y superficie requerida.

Figura 17.- Influencia de la relacin V/S en el coste de produccin de la biomasa y superficie requerida.

56

6. Conclusiones

Del balance de energa a la produccin de
microalgas y radiacin solar disponible se
puede concluir que la productividad mxima
alcanzable por este tipo de cultivos es de 194
Ton/ha ao en climas templados aunque los
valores ms altos referenciados han sido de
130 Ton/ha ao y slo han sido demostrados
a pequea escala. Por tanto existe margen de
mejora en la tecnologa de produccin para
poder aproximarse a los valores mximos
alcanzables. Sin embargo, el mayor
problema para conseguir una produccin
rentable de biocombustibles a partir de
microalgas es el elevado coste de produccin
de la biomasa. El anlisis econmico
realizado permite determinar los costes de
produccin pero sobre todo los factores que
mas afectan al mismo y por tanto los que
deben ser optimizados en primer lugar. De
este anlisis se concluye que los costos son
funcin de la productividad volumtrica y
por tanto sta debe ser maximizada en
cualquier mejora del proceso. Para ello, el
uso de reactores con relacin V/S puede ser
una alternativa vlida al empleo de reactores
raceway de elevada relacin V/S que son
actualmente los ms empleados para el
objetivo de producir biocombustibles a partir
de microalgas.

7. Agradecimientos

Este trabajo ha sido realizado con el apoyo
del proyecto EnerBioAlgae (SOE2/P2/E374)
SUDOE INTERREG IVB, asi como la
financiacin del PlanE financiado por el
CDTI en colaboracin con ACCIONA S.A.,
y Junta de Andaluca (Plan Andaluz de
Investigacin, BIO 173). Especial
agradecimiento a la Fundacin Cajamar.
8. Referencias

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Development of a methodology for net energy analysis in
biorefineries, regarding microalgae cultivation
to improve energy yields in industrial wastes

Matheus Rufino Oliveira
1
, Jos Osvaldo Beserra Carioca*
2
, Svio Macambira
3

1
Petrleo Brasileiro S.A.
2
Universidade Federal do Cear e Centro de Energias Alternativas e Meio Ambiente
Universidade Federal do Cear (UFC) Av. do Contorno, S/N Bloco 310 Campus do Pici
CEP: 60440-593 Fortaleza, Cear, Brazil
3
Instituto Federal de Educao do Cear

*Corresponding author: carioca@ufc.br

Abstract

In general, biomass processing plants are considering the use of biorefinery concept to evaluate
the net energy balance, as well as, the life cycle analysis of agroindustrial plants to meet
sustainability requirements. Among the several types of biomass processing plants, biofuels
production plants are becoming of great importance due to the increasing demand of biofuels to
attend the desirable energetic sustainable global scenario. From the other side, energy recovering
from wastes is an essential theme to achieve both, energy and environmental requirements. Inside
this context, this paper considered the evaluation of energy recovering from vinasse of ethanol
plants in Brazil to produce biogas or biodiesel through microalgae cultivation, once this kind of
industrial plant produces a large amount of wastes. For such purpose, it was developed initially, a
methodology to evaluate the net energy ratio in ethanol or biodiesel agroindustrial plants. Having
this methodology in mind, it was considered the complementary energetic contribution of the
biogas or biodiesel obtained from microalgae cultivation in vinasse and its processing. Based on
this approach it was possible to evaluate the best options in terms of resources utilization,
considering the analysis of the net energy ratio of ethanol agroindustrial plants. In conclusion,
this type of analysis contributes to a better use of biomass resources, as well as, to the best design
of the agroindustrial plant. Certainly, the energy recovered from the cultivation systems
contributes to diminish the pressure on land use and consequently the competitiveness between
food and energy.

Keywords: Biofuels, biodiesel, ethanol, microalgae, net energy analysis.

Resumen

En general, las plantas de procesamiento de la biomasa est considerando el uso del concepto de
biorrefinera para evaluar el balance energtico neto, as como, el anlisis del ciclo de vida de las
plantas agroindustriales para satisfacer los requisitos de sostenibilidad. Entre los varios tipos de
plantas de procesamiento de biomasa, plantas de produccin de biocombustibles se estn
convirtiendo en una gran importancia debido a la creciente demanda de biocombustibles para
asistir al deseable escenario energtico mundial sostenible. Desde el otro lado, la energa se
recupera de residuos es un tema esencial para lograr tanto la energa como los requisitos
59

medioambientales. Dentro de este contexto, este trabajo considera la evaluacin de la energa se
recupera de la vinaza de plantas de etanol en Brasil para la produccin de biogs o biodiesel a
travs del cultivo de microalgas, una vez que este tipo de planta industrial produce una gran
cantidad de desechos. Para tal efecto, se desarroll inicialmente, una metodologa para evaluar la
relacin de energa neta de las plantas de etanol o biodiesel agroindustriales. Despus de esta
metodologa en la mente, se consider la contribucin complementaria energtica del biogs y el
biodiesel obtenido a partir de cultivo de microalgas en la vinaza y su tratamiento. Sobre la base
de este enfoque fue posible evaluar las mejores opciones en trminos de utilizacin de los
recursos, teniendo en cuenta el anlisis de la relacin de energa neta de las plantas de etanol
agroindustriales. En conclusin, este tipo de anlisis contribuye a un mejor aprovechamiento de
los recursos de biomasa, as como, para el mejor diseo de la planta agroindustrial. Ciertamente,
la energa recuperada de los sistemas de cultivo contribuye a disminuir la presin sobre el uso del
suelo y por lo tanto la competitividad entre los alimentos y la energa.

Palabras clave: biocombustibles, biodiesel, etanol, microalgas, anlisis de energa neta.

1. Introduction
Biorefinery concept has emerged in the
seventies inside the wood American
technological community (Sarkanen, 1976);
(Hayes, 1977). Since that time, two big
problems were raised related to the biomass
conversion into chemicals: the economic
competition of synthetically produced
chemicals from oil, versus the necessity to
depolymerize cellulose-lignin complex to
provide society with the same products
derived from oil. As the oil prices have
increased continuously since the first oil
shock in 1973, great efforts have been made
to produce and efficiently convert biomass
into chemicals and biofuels, which can be
based on two different technological routes:
bioconversion and thermal-conversion (Leal,
2008).
In Brazil, bioconversion process is being
used economically to convert sugar cane into
ethanol. Alternatively, vegetable oils have
been extracted from oleaginous species, to
the production of biodiesel, food, feed, and
chemicals. For its time, the organic matter
present in solid residues and/or in domestic
or industrial effluents has been anaerobically
fermented to obtain biogas (Leal, 2008).
Emerging areas like alcohol-chemistry
(Pereira, 2008); (Conde, 2008) and oil
chemistry (Cardoso, 2008) are now under
consideration and development for the
production of added value bioproducts,
inside the Green Chemistry approach.
By its turn, biomass conversion through
thermal processes is still on pilot scale,
probably, achieving the stage of
technological demonstration scale around
2015. Inside this context, Brazilian sugar
cane straw and bagasse are designed to
convert cellulose and hemi-cellulose
components into ethanol via enzymatic
and/or acid routes (Leal, 2008).
Alternatively, the sugar cane residues are
being gasified to produce synthetic gas,
which can be converted by catalytic process
into hydrocarbons via Fischer-Tropisch
synthesis (Falabella, 2008).
Throughout this long developing period,
microalgae cultivation and processing is
achieving an advanced stage of utilization,
and certainly can be used in Brazil or other
tropical countries in a much more interesting
way, due to its favorable net energy
conversion factor (Carioca et al, 2007). This
fact can place microalgae in a new frontier,
as a new biomaterial for energetic and
chemical purposes.
Several countries and multilateral
institutions like UNIDO are proposing the
development of a green economy to attend
60

future sustainable scenarios, in which,
biofuels play an important role to diminish
environmental global impacts. The
construction of a sustainable society will
require primordially two main urgent
political actions: from one side, to reduce
dependence on fossil fuels and from the
other to eliminate the big amount of
pollution generated by the industrial society,
where wastes tend to become a valuable
source of materials, for biofuels and/or
biochemicals production, using a
fundamental strategy, to recycle water. In
this context, sustainable waste management
is facing a fundamental role and challenge,
related to the climatic change phenomena
and the management of finite resources. So,
one of the main directions will be the change
of waste treatment processes, which
consume a lot of energy, into a waste
biorefining platform to give support to the
development of a green economy.
In Brazil, the transportation sector accounts
for approximately one third of the total
energy consumption, in which the heavy
transportation fleets, absorb the major
parcel. The country has achieved self-
sufficiency in oil around 2005, but it is still
necessary to import diesel to meet oil
domestic demand. Besides this, Brazilian oil
production is considered heavy, requiring
investments in the oil refining system to
maximize diesel refining production. So
considering these facts, as well as, the
environmental restrictions, biodiesel was
considered as a desirable option to reduce
diesel imports.
In 1976, the country implemented a National
Alcohol Program to replace gasoline as the
initial stage of biofuels production (Governo
Brasileiro, 2006). In 2005, the country set up
the Biodiesel National Production
Programme (PNPB) as an effort to replace
diesel oil according to the Law N. 11,097 of
January 13th, 2005. Among the main
guidelines considered in this regulatory
mark, the Biodiesel program intends to
promote the social inclusion, ensuring
competitive pricing, quality and supply of
products, as well as, the use of different
sources of oleaginous plants, according to
the regional availability (Miki, 2009). It was
established that, from January 2008, it would
be required the addition of a minimum
percentage of 2% biodiesel to all diesel oil
consumed in Brazil, a value that should
gradually increase to achieve 5% around
January, 2013 (Brieu, 2009). The use of
traditional oilseeds such as soybeans, cotton,
coconut, canola and castor for biodiesel
production, demand the use of large tracts of
land, due to low productivity and
competitiveness of vegetable oil with food
and export sector (Carioca et al, 2009).
Therefore, it is important to investigate other
raw materials that can really meet the
demand for biodiesel in the country, and the
possibility of their production in different
regions of the country, without affecting the
food market. Unfortunately Brazil still
imports a large quantity of diesel oil to
attend its intern demand (Governo
Brasileiro, 2009).
The oil reserves located in the pre-salt layers
will be sufficient to supply not only the
domestic market, but to export oil
derivatives. Unfortunately, this will take
time, probably decades, to most of the oil
fields become productive on a large scale.
So, biofuels are one of the most viable
alternatives for oil replacement because the
country has a large tradition in Ethanol
production from sugar cane, and now the
production from biodiesel from oleaginous
plants. In fact, Brazil has a quite successful
experience in the use of ethanol from sugar
cane as a substitute for gasoline.

1.1. Energy balance fundamentals
There are studies in the literature based on
the computational analysis of production
systems in order to evaluate mass and energy
balances to generate data for economic
studies and environmental impact, as well as,
61

to the development of biorefineries to
biofuels production (Carioca et al, 2008).
According to this methodology, it is possible
to evaluate the energy consumption during
the production of biofuel, including the
indirect consumption of energy used in
manufacturing and transportation of all
inputs. It is also necessary to compute the
energy extracted from biomass from the
plant material in order to calculate the ratio
between the energy produced and energy
consumed during the whole process.
Through this relationship, it is possible to
have an assessment of energy efficiency of
processes. In the Brazilian case, these studies
are important to know a priori the possibility
of regional production based on various raw
materials. Literature data show that
microalgae can be one of the alternative raw
materials for production of biodiesel and
biogas because its photosynthetic efficiency
is greater than the traditional oilseeds. In
addition, microalgae can grow in any type of
water resources, including waste like the
vinasse of the ethanol plants. So, the main
objective of this paper is to develop a
methodology to calculate the mass and
energy balance involved in the production of
biodiesel and biogas from microalgae, in
order to establish process data base adequate
to meet regional needs in Brazil. This kind
of theoretical analysis indicates the real
possibilities to use natural resources,
including wastes to produce biofuels. This
kind of study could be done a priori to the
industrial plant installation. The results of
these studies could save time and financial
resources. Scenarios could be established in
order to foresee the best conditions for
specific regional circumstances. In the
Brazilian case, the main regions greatly
differ one from the others. Technical
parameters as well as social inclusions, land
availability, employments, biofuels
transports costs and process economy could
be considered in each regional scenario,
depending of its main characteristics.
Concerning to the environmental point of
view, the use of biodiesel significantly
reduces emissions of pollutants as compared
to diesel. Normally it can reduce 98% of
sulfur, 30% of aromatics and 50% of
particulate material, and at least 78% of
Greenhouse Gas (Castellanelli, 2008). At
regional basis, there is a wide variety of
plants suitable for biodiesel production in the
country. The most significant area to the
production of vegetable oil is the central-
southern region. In this region there are large
tracts of land suitable for agriculture where
mechanization is widely used (Carioca et al,
2009). According to (Gazzoni et al, 2006)
soy is currently responsible for 88.9% of
vegetable oil production in Brazil, which
does not comply with the objectives of
PNPB.

2. Oleaginous plant in Brazil

2.1 Oil seeds
Vegetable oils can be produced from crops
such as soybeans, rapeseed, sunflower, palm,
physic nut (Jatropha curcas L.), cotton,
among others. Depending on the yield of the
photosynthetic process, each oleaginous
species has a certain content of oil in its
seeds. In general, the maximum theoretical
yield of the photosynthetic process is about
6.5% (Sasson, 1993) but the observed yield
is no more than 2.5% for some species, like
sugar cane and corn, depending on the place
where the plant is cultivated. According to
Melvin Calvin photosynthetic yields are
classified according to their production
cycles (Curtis, 1977). So, in C4 plants, like
sugar cane and corn, the photosynthetic
mechanism is very much favourable to
higher biomass production, while in C3
plants, like oleaginous, the photosynthetic
yield is less favourable (Carioca et al, 2009).
In Table 1, it is shown the main
characteristics of some sources of vegetable
oils.
62

Table 1. Oil productivity from some vegetable oleaginous species

Species
Oil
Content
(%)
Cycle for
Maximum
Efficiency
Harvesting
Period
(Months)
Oil
Productivity
(T/Ha)
African oil palm
(Elacis guineensis)
20 (almond) 8 years 12 3.06.0
Physic Nut
(Jatropha curcas L.)
36-45 (seeds) Perennial specie 12 4.0-6.0
Coconut
(Cocus nucifera)
55-60 (fruit) 7 years 12
1.3-1.9

Babassu palm
(Orbinya martiana)
66 (almond) 7 years 12 0.1-0.3
Sunflower (Helianthus
annus)
38-48 (grain) Annual 3 0.5-1.9
Rapeseed
(Brassica campestris)
40-48 (grain) Annual 3 0.5-0.9
Castor beans
(Ricinus comunis)
43-45 (grain) Annual 3 0.5-0.9
Peanuts
(Orachis hypogeae)
40-43 (grain) Annual 3 0.6-0.8
Soya
(Glyne max)
17 (grain) Annual 2 0.2-0.4
Cotton
(Gossypium hirsut)
15 (grain) Annual 3 0.1-0.2

2.2 Microalgae
Microalgae are currently used commercially
for the production of high nutritional value
products for human and animal use;
wastewater treatment; the production of
added value products like carotenes, as well
as, aquiculture. However, the industrial
production of microalgae is still relatively
small, once the total world production is
only a few thousand tons of algae biomass
per year (Becker, 1994). Meanwhile, the
technologies of microalgae cultivation have
been under intensive research development
over the last decades, both in the context of
mitigation of greenhouse gases and the
production of biofuels (Amotz, 2007). The
production of biodiesel from microalgae is
an alternative process to the current biofuels
production from higher plants. The
microalgae cultivation can use CO
2
as a
carbon source for lipids biosynthesis which
can be converted later into biodiesel. The
microalgae may be an ideal solution, for two
main aspects: they have a higher rate of CO
2

absorption when compared to traditional
plants and they do not compete with arable
land. In addition, microalgae have a higher
oil yield compared to oil seeds traditionally
used to produce biodiesel. Another
advantage of microalgae cultivation is that; it
can be done all year-round in tropical areas,
continuously (Carvalho, 2010). The
microalgae can grow in open ponds,
raceways or photobioreactors. The
cultivation method adopted affects the
energy consumed and the estimated yield of
the process and directly influences the
energy balance. The culture medium must
provide the inorganic elements that
constitute the cell nutrients. Essential
elements include nitrogen, phosphorus, iron
and silicon in some cases. The minimum
required nutrients can be estimated using the
approximate molecular form of the biomass
of microalgae, which is CO
0,48
H
1,83
N
0,11

P
0,01
(Chisti, 2007).
Unlike oil crops, microalgae grow very
rapidly and can be extremely rich in oil. The
63

microalgae can usually double their biomass
in 24hs. Oil content in microalgae can
exceed 80% of dry biomass. Microalgae oil
levels of 20-50% are quite common, so they
appear to be a very competitive source of
vegetable oil for biodiesel production with
potential to replace fossil diesel. As it can be
seen in Table 2, microalgae have an oil yield
per hectare superior to other sources,
according to Chisti (Chisti, 2007).

Table 2. Comparison of some sources of biodiesel
production plants
Crop
Oil Yield
(L/ha)
Corn 172
Soybean 446
Canola 1190
Coconut 2689
Oil palm 5950
Microalgae 136.900
Microalgae 58.700

In Brazil, nowadays several groups,
including our group from Fortaleza, (Carioca
et al, 2009) are involved in the research of
microalgae development aiming at to turn
microalgae into a profitable source of
vegetal lipids.

2.3 Processes to produce alternative fuels to
diesel
Actually, there are several technological
processes to produce alternative fuels to
biodiesel, among them the transesterification
process, the thermocatalytic cracking of
vegetable oils, water-diesel emulsions,
ethanol diesel blends, co-solvency using
vegetable oils, GTL (Gas To Liquids)
mentioned in the publication (Carioca et al,
2011). In particular, it will be considered in
this net energy analysis the
transesterification processes of vegetable oils
and microalgae, as well as the anaerobic
fermentation of microalgae to produce
biogas.
2.4 Transesterification process for biodiesel
production
The transesterification reaction between
triglycerides molecules found in vegetable or
animal oils with an alcohol (methanol or
ethanol) to produce methyl esters (biodiesel)
may be catalyzed by acids, alkali or
enzymes. In this study it will be considered
the use of alkali catalysis reactions because
they present the best yields. The
transesterification reaction as described is
characterized by the equilibrium between the
reactants and products (Carioca, 2011), and
its stoichiometry requires 1 mol of a
triglyceride and 3 mol of the alcohol.
However, in practice it has been utilized a
larger proportion of the alcohol aiming at to
displace the equilibrium reaction to form
products. In Brazil, it has been utilized
ethanol as alcohol due to its availability and
less toxic character. Among the alkalis it is
possible to include NaOH, KOH, carbonates
and corresponding sodium and potassium
alkoxides such as sodium methoxide, sodium
ethoxide, sodium propoxide and sodium
butoxide. Sulfuric acid, sulfonic acids and
hydrochloric acid are usually used as acid
catalysts. Alkali-catalyzed transesterification
is much faster than acid-catalyzed
transesterification, with yields about 99%
and it is often used commercially
(www.transesterification.net ).
After the transesterification reaction the
products consist of a mixture of esters,
glycerol, alcohol, catalyst, mono, di and
triglycerides. According to the specifications
of Agncia Nacional do Petrleo, Gas
Natural e BiocombustiveisANP
(www.anp.gov.br), biodiesel purity should
be higher than 96.5%. In Figure 1, it is
shown the process flowchart to produce
biodiesel from vegetable oils or recycled
greases according to the source.
64

Figure 1. Process flowchart transesterification of vegetable oils.

A stream of biodiesel produced in the
transesterification plant is neutralized at a
convenient pH, and the soap formed is
converted in free fatty acids, reducing the
tendency of forming emulsions. A centrifuge
is then used to separate the biodiesel
aqueous phase, which is then taken to the
glycerin recovery section aiming at to
achieve the required market specifications.
The glycerin-rich aqueous stream which is
discharged from the reactors of
transesterification and from the washing
process is treated with hydrochloric acid in a
reactor of continuous washing. The aim of
this operation is to convert the soaps
contaminants in the mixture in the free fatty
acids, allowing their subsequent removal by
centrifugation. The glycerin-rich aqueous
stream is then neutralized with sodium
hydroxide in a continuous neutralization
reactor. The alcohol is then recovered from
this stream by distillation and it is recycled
to the operation of transesterification.
Finally, the stream resulting from the
operation of glycerin neutralization is
subjected to distillation process to reduce its
water content by a percentage equal to or
greater than 80% (w/w) which has a
considerable commercial value.
Glycerin is currently one of the ingredients
used in the pharmaceutical composition of
capsules, suppositories, anaesthetics, syrups
and emollient for creams and ointments,
antibiotics and antiseptics. In the food
industry it is used in the preparation of
sauces and frozen desserts and as humectants
for food (Barbosa, 2009). The production of
glycerin is already far than what the
traditional market can absorb (Henn, 2009).
Then, alternative studies are required to
achieve the maximum yield of glycerin
produced.

2.5. Biogas from the anaerobic
fermentation
Anaerobic fermentation is the decomposition
of organic matter such as dung, wastes, crop
residues or microalgae, using anaerobic
mixed bacteria population, which could be
mesophilic or thermophilic. Normally, they
work at ambient temperature with the pH
varying between 6.8 and 7.2. Traditional
biodigesters have a large retention time, but
it can be less, once a pre-treatment step is
employed, as well as the establishment of
adequate parameters like the rate of organic
load and the C/N and C/P ratios. During this
decomposition, methane, carbon dioxide and
65

ammonia are produced, and normally this
reaction takes place around 37C, but it
could be performed at thermophilic
conditions (55
0
C). The carbon dioxide
produced can be reused for the own
cultivation of microalgae, as shown in
Figure 2. This figure summarizes the process
inputs required to biogas production, as well
as, the energy consumption during the
process. The methane can be either burned in
a turbine to produce electricity or used
through a catalytic process to be converted
into hydrocarbon fuels (Golueke, 1959).
This process can solve the waste problem
through the microalgae biodiesel production,
as well as the economic-energy equilibrium
(Chisti, 2008). As soon as methane, carbon
dioxide, and other minority gases are
produced, they are removed from the
digester through a disposal unit where the
carbon dioxide and ammonia are again
available for photosynthesis, the supernatant
and the retained solids recycled as nutrients
to the culture of bacteria (Golueke, 1959).

Figure 2. Process flowchart of biogas production.

3. Energy balance analysis
methodology

The methodology developed in this paper is
based on several publications related to the
energy balance for biodiesel, biogas and
ethanol processes found in the literature,
which utilized the concept of Net Energy
Ratio - NER, defined as the ratio between
the total energy produced from the biomass
and the total energy consumed in the process
according to (Pradhan, 2008), described in
equation (1). As it was stressed, soybean was
chosen as oilseed because it is the culture
responsible for most of the biodiesel
produced in Brazil. In this work it was
observed from the literature that exist some
differences in the NER values obtained by
different authors, as well as some
opportunities to improve energy efficiency.
In principle, the evaluation of the biofuels
energy balance in industrial production
requires that the energy extracted from raw
materials must be greater than the energy
obtained from the production system.
According to Figure 3, the methodology
used to evaluate the energy balance should
consider the integration of two sub-systems:
the cultivation and biofuels production.

NER = E
prod.
/ E
cons.
(Eq. 1)

66

Figure 3. Structure of the system used to evaluate energy balance.

To evaluate the energy balance of the
integrated system, it is necessary to analyze
the energy input throughout the process,
considering both for the cultivation and
industrial phases. To calculate the power
consumption of each variable, it is necessary
to have the mass balance to know the
quantities used in the process as well as,
their energy coefficients. Each energy
coefficient is defined as the amount of
energy per mass unit, or volume or even
other adequate measure unit. In general, they
have the units expressed in J/kg, or J/m3.
Once known the energy coefficient (u) of
each item (variable) and the amount of items
used (q), it is possible to know the amount of
energy, expressed for each item (variable)
according to the equation (2):

E
1
= u
1
x q
1
(Eq.2)

E
1
= energy consumed by the item (variable) 1
u
1
= energy coefficient of the item (variable) 1
q
1
= amount of item (variable) 1

To calculate the total energy consumed in
the system, simply add the energy consumed
by all variables of the process.

E
cons.
= (E
1
+E
2
+E
3
+...+E
N
) (Eq. 3)

During the cultivation, the major energy
consuming items are from the nutrients,
fertilizers, electricity or fuel (diesel) and
machinery. For each of these items, it is
necessary to evaluate the energy coefficient
and the amount of the item used. During the
cultivation phase it is necessary to know the
needs of CO
2
and solar energy, but as they
are considered free, it makes no sense to
consider it in the energy balance. During the
biodiesel production, the main energy items
consumed are: electric energy, chemicals
and machinery. According to this
methodology, it is necessary to consider also
the total energy consumed in the productive
process, including the indirect energy, which
is the energy used in the production,
transport system of each product or
equipment. To calculate the total energy
produced from the system, it is necessary to
know the volume of biofuel produced, in m
3
,
and multiply by its coefficient energy in
J/m
3
. Therefore it is necessary to calculate
the energy produced in Joules available in
the biofuel. Some authors also consider
byproducts like glycerin and the cake in the
calculation of extracted energy.

67

E
prod
. = U x V (Eq. 4)

E
prod.
= produced energy from the system
U = biofuel energy coefficient
V = biofuel produced volume

Taking these data into consideration, it is
possible to calculate the value for the
parameter NER, according to equation (1).
This coefficient is an important coefficient to
know the energetic yield and the
environmental impact, as well as the process
feasibility. According to (Braga et al, 2008),
studies on energy balance show that specific
emissions of CO
2
(gCO
2
/MJ) are inversely
proportional to the value obtained from the
balance (energy output / input) for biofuels.
Moreover, the energy balance has a close
relationship with the economic balance
(Braga et al, 2008).
It is possible to observe different approaches
for energy balance calculating in the
literature (Chisti, 2008); (Gazzoni et al,
2009). Some authors consider only the
energy from fossil fuels, while others
consider the total energy consumed in the
process. Concerning the produced energy,
some authors consider important to involve
the energy of byproducts like glycerin.
These considerations may result in different
data for the final energy balance and
therefore for one specific methodology. For
example, according to (Gazzoni et al, 2009),
for every unit of energy entering the system
for production of canola, the energy
produced is 2.9 units, and considering only
the production of oil, this ratio falls to 1:1.4.
Following, it will be presented first the
energy balance for the biodiesel production
from soya, since this seed is very important
to biodiesel production in Brazil. This value
could be used as a reference for comparison
with that one obtained from the microalgae
energy balance. The results presented in the
literature show some differences according
to the value of the energy coefficients
utilized.
3.1 Biodiesel energy balance from soybean
Several authors performed the energy
balance for the production of biodiesel from
soybean as it will be detailed in sequence.
As a first example, in Table 3 are listed the
main energy consumptions coefficients per
hectare used in the agricultural production of
soybean in Brazil, according to (Soares et al,
2008). It may vary from place to place.
The values of Net Energy Ratio NER for
the biodiesel production process presented in
Table 4, were calculated using the data
shown in Table 3, and evaluated according
to data presented by Soares from Embrapa
(Soares et al, 2008). These authors found a
value of 1.12 for the NER to biodiesel
production process. Once considering the
energy of the soymeal (cake) the NER
increased to 1.87.
In another study made by (Pimentel, 2005),
the energy coefficients for the soybean
production were evaluated, according to the
data indicated in Table 5. Based on these
data, it was constructed the Table 6.
Pimentel found a NER of about 0.79,
demonstrating that the biodiesel production
process from soybeans is unfeasible
energetically. It means that for each unit of
energy used in the process, it is produced
only 0.79 units of energy in the form of
biodiesel.
The largest discrepancy presented in the
Pimentel and Patzek's results (Pimentel,
2005) comes from the fact that, such study
assigned only 19.3% of the total energy
input to the soymeal. In reality, 82% of the
soybean mass goes into the soymeal. For its
time, it pointed out an arithmetic error in this
report and an error in the proper accounting
of lime application, which contributed to a
discrepancy in the results (Pradhan, 2008).

68

Table 3. Data on energy consumption coefficients for soybean production.

Item Unit Quantity Energy (GJ)
Limestone kg/ha 1000 1.18
Herbicide L/ha 3.8 1.80
Fertilizer (0-20-20) Kg/ha 400 0.62
Seed Kg/ha 50 1.02
Fungicide L/ha 1.8 0.57
Insecticide L/ha 1.65 0.6
Bait Kg/ha 1 0.36
Manual operation h/ha 8 1.34
Equipments Kg/ha 14.8 1.12
Fuel L/ha 58 2.76
Transport Ton 1.3 0.20
Total 11.57

Table 4. NER for biodiesel production from soybean according to Soares.

Item Unit Quantity Energy (GJ)
Agricultural production Kg/ha 1300 33.74
Energy in agricultural production 12.08
Industrial process 5.39
Total energy invested 17.47
Produced oil Kg/ha 520 19.60
Soybean cake Kg/ha 780 13.07
Energy balance
Biofuel NER = 1.12
Total NER = 1.87

Table 5. Biodiesel energy balance from soybean per hectare.

Item Unit Quality
Energy
Coefficient
Unit
Energy
(Mcal)
Labor h 7.1 40.0 Mcal/h 284
Machinery Kg 20 18.0 Mcal/Kg 360
Fuel L 77.8 9.5 Mcal/L 737
Nitrogen Kg 3.7 15.9 Mcal/Kg 59
Phosphorus Kg 37.8 4.1 Mcal/Kg 156
Potassium Kg 14.8 3.2 Mcal/Kg 48
Limestone Kg 4,800 0.3 Mcal/Kg 1,349
Seed Kg 69.3 8.0 Mcal/Kg 554
Herbicide Kg 1.3 100.0 Mcal/Kg 130
Electricity Kw.h 10 29
Transport Km 174 0.3 Mcal/Km 44
Total (input) 3,700
Soybean(output) Kg 2,668 3.6 Mcal/Kg 9,605

69

Table 6. NER for biodiesel production from soybean according to Pimentel.

Item Unit Quality
Energy
Coefficient
Unit
Energy
(Mcal)
Soybean
production
Kg 5,556

7,809
Electricity Kw.h 270 697
Steam 1,350
Water 160
Heat 592
Losses 300
Stainless steel Kg 11 14.4 Mcal/Kg 158
Steel Kg 21 11.7 Mcal/Kg 246
Cement Kg 56 1.9 Mcal/Kg 106
Total (input) 11,418
Biodiesel(output) Kg 1,000 9.0 Mcal/Kg 9,000
NER 0.79

Table 7. NER for biodiesel production from soybean according to Gazzoni.

Item Unit Quant
Energy
Coefficient
Unit
Energy
(Mcal)
Cultivation
Labor h 6.3 40 Mcal/h 252
Machinery Kg 20 18 Mcal/Kg 360
Fuel L 66 10 Mcal/L 660
Phosphorus Kg 20 4.2 Mcal/Kg 83
Potassium Kg 20 3.2 Mcal/Kg 63
Limestone Kg 2,000 0.3 Mcal/Kg 562
Boron Kg 1 4 Mcal/Kg 4
Seed Kg 50 8 Mcal/Kg 400
Herbicide L 0.47 100 Mcal/L 47
Insecticide L 2.03 100 Mcal/L 203
Transport Km 174 0.3 Mcal/Km 44
Biodiesel Production
Production of
720 Kg of
biodiesel
1,149
Total (input) 4,127
Biodiesel (output) Kg 720 9.0 Mcal/Kg 6,480
NER 1.57

70

Studies performed by Gazzoni (Gazzoni et
al, 2006) adopted the value of Pimentel and
Patzek (Pimentel, 2005) to evaluate the
energy needed to manufacture machinery
and implements, fertilizers and pesticides, as
well as, the energy value of diesel oil and
energy contained in the seeds. For the diesel
oil consumption, it was used data from
spreadsheets (Roessing et al, 1981). For
limestone consumption, it was adopted 2 t /
ha. The evaluation of the amount of seeds
for soybeans was based on the formula Q =
(1000xPxD) x 1.1 (GxE) -1; where, P = 10.4
g (means the weight of a hundred seeds); D
= 14 (number of plants per meter); G = 80%
(% field emergence); and E = 0.4 m (space
used). So, based in these values Gazzoni
evaluated the NER for the biodiesel
production process, which is summarized in
the Table 7. It was found a value of 1.57 for
the NER.
In Table 8, it is summarized the energy
balance carried out by Ahmed (Ahmed et al,
1994), which adopted the industry's average
energy consumption of soybeans in the
United States. These authors obtained a
value of 2.51 for NER for the overall
biodiesel process.
According to Hill (Hill et al, 1994), the
process of biodiesel production from
soybean has a NER of 1.93, as indicated in
Table 9. The author used data from the
Department of Agriculture of the United
States to estimate the energy consumed
during the soybean cultivation.

Table 8. Biodiesel energy balance from soybean according to Ahmed.

Item Quantity Unit
Energy
Coefficient
Unit Energy (Btu)
Cultivation
Diesel 0.11 gal 138,000 Btu/gal 14,552
Pesticide 0.02 lb 179,000 Btu/lb 3,739
Potassium 0.35 lb 4,280 Btu/lb 1,482
Phosphorus 0.19 lb 5,560 Btu/lb 1,079
Nitrogen 0.06 lb 31,100 Btu/lb 1,893
Others 6,691
Solvent Extraction
Electricity Electricity 6,858
Steam Steam 23,620
Solvent (n-hexane) 0.015 gal 106,522 1,575
Refine
Electricity 450
Steam 642
Estherification
Electricity 2,666
Steam 18,225
Methanol 0.11 gal 66,542 Btu/gal 7,320
Catalyst (NaOH) 0.08 gal 11,275 Btu/gal 902
Transport 228
Total 91,922
Biodiesel 1 gal 132,902 Btu/gal 132,902
Glycerin 17,010
Soy (food) 81,229
Total (output) 231,141
NER 2.51

71

Table 9. Biodiesel energy balance from soybean
according to Hill.

Cultivation
Item Energy (MJ)
Fossil fuel 0.19
Fertilizers and pesticides 0.09
Electricity 0.21
Seed 0.03
Machinery 0.04
Transport 0.025
Construction 0.01
Labor 0.02
Electricity 0.25
Total (input) 0.865
Biodiesel 1
Soy (food) 0.56
Glycerin 0.11
Total (output) 1.67
NER 1.93

4. Integrated biofuels plants using
microalgae cultivation from wastes

Several types of plants design could be
performed aiming at biofuels production
integrated with microalgae cultivation. This
study considered two processes: one for
biodiesel and another for ethanol. It is
important to observe that, the effluents or
residues from these plants were utilized
aiming at to generate additional energy
which improves the NER of agroindustrial
biorefineries.

4.1 Results of NER for biodiesel and biogas
production plants using microalgae
Large scale microalgae cultivation plant is a
growing subject all over the world, and so,
there is an increasing consensus about the
importance of having precise data
concerning mass and energy balance for
different processes. Many studies on pilot
plants are still in development. It has been
observed some difficulties in obtaining the
value of the energy coefficients used in the
microalgae cultivation system, as well as, the
environmental impacts considered in certain
types of processes. In this section it was
evaluated the NER for biodiesel and biogas
production plants using microalgae
cultivation, to provide basic information
concerning biofuels production related to the
energetic yields of agroindustrial plants. In
the first case (Hill et al, 1994), it was
considered a biorefinery related to a
biodiesel production plant based in algal oil,
according to the design presented in Figure
4.

Figure 4. Biodiesel biorefinery integrated with microalgae cultivation.
72

For this process, there were considered the
following energy coefficients shown in Table
10. Aiming at the evaluation of the NER for
this plant, Chisti (Chisti, 2008) suggested
initially the evaluation of an energy rate
coefficient, which means the relation among
the sum of the total renewable energy
components produced (output) per unit of
fossil energy used as energy (input), which
was calculated according to the data
presented in Table 10. The energy rate
coefficient obtained was 2.8, which
demonstrates that this plant is energetically
feasible. According to Chisti (Chisti, 2008),
depending on the microalgae productivity and
their oil content, the NER could exceed 7,
once microalgae separation uses especial
flocculants agents before the vacuum
filtration to obtain the final microalgae paste
(Becker, 1994). This value could still be
improved if the final effluent from the
anaerobic fermentation could be recycled, as
nutrients. Chisti analysis was based on the use
of raceway ponds to microalgae cultivation
having 20.5% (w/w) oil yield, and assuming
the biomass productivity of about 15 ton per
ha per year. However, it was considered for
the microalgae cultivation calculus, the
biomass productivity of 25g per m
2
day, and
the final concentration in the broth was
assumed as been 0.5 kg per m
3.
These data are
considered normal for tropic conditions
according to Chisti. To obtain the NER for a
biodiesel and biogas production plant it is
necessary to convert the algal oil into
biodiesel and the biogas into electricity. For
that, it will be considered one NER
coefficient for the biodiesel unit as being
2.51, according to Ahmed, for an analogous
biodiesel unit (biodiesel and glycerin); and a
NER coefficient of 1.56 for the conversion of
biogas into electricity, as suggested by Chisti.
Taking these new outputs coefficients into
consideration the value for the NER was
calculated as been 5.563, as it is shown in
Table 11.
Table 10. Energy rate coefficient for biodiesel and
biogas production plant integrated with
microalgae cultivation according to Chisti.

Energy Coefficients
Energy
(MJ Kg
-1
Oil)
Inputs 31.24
Energy in nutrients 14.12
Electric energy for
cultivation
8.77
Energy for harvesting
(chemicals)
0.30
Energy for oil recovery 3.17
Energy for biogas
production
0.88
Energy for construction
(entire facility including
maintenance)
4.00
Energy embodied in
equipment (including
maintenance)
62.8 x 10
-6

Outputs 87.90
Energy in the algal oil 37.90
Energy in biogas from
residues
50.00
Energy Rate Coefficient
(algal oil + biogas)
2.8

Table 11. Energy rate for the algal oil and biogas
production plant.

Energy Coefficients
Energy
(MJ Kg
-1
Oil)
Inputs 31.24
Energy in nutrients 14.12
Eletric energy for
cultivation
8.77
Energy for harvesting
(chemicals)
0.30
Energy for oil recovery 3.17
Energy for biogas
production
0.88
Energy for construction
(entire facility including
maintenance)
4.00
Energy embodied in
equipment (including
maintenance)
62.8 x 10
-6

Outputs 173.150
Energy in the Biodiesel 95.281
Electric energy from biogas 78.150
Net Energy Rate 5.563
73

4.2 Other NER data for a methane plant,
algal oil and biodiesel from microalgae
In this section it will be regarded initially the
work developed by Wagener (Wagener,
1978), in which it is presented a classical
study related with the NER evaluation for a
methane producing plant. They used one
conversion coefficient in which, 1kg of dry
algae mass can produce 427 L of CH
4
, with
an energy content of 3656 kcal, not taking
into account the new bacteria formed after
the biodigester discharge. Considering that
the formation of new bacteria is repressed, it
could produce 476 L of CH
4
with an energy
value of 4078 kcal. According to these data,
it was achieved a NER of 2.66. If the energy
required to pump the tanks' culture is
generated by waves, then it reaches a value
of 12.9. Once the plant is heated with biogas
and not with the heat lost from the gas
engine, the new NER evaluation is about 8.5
according to (Wagener, 1978).
Ehimen (2010) found in his analysis a value
of 0.31 for the NER for a biodiesel and
biogas production plant integrated with
microalgae cultivation, according to data
indicated in Table 12, which characterizes
the process energetically as non-feasible. In
Ehimens analysis, it was considered the use
of a centrifugation process to separate
microalgae, which spends a considerable
amount of energy. Practically 85% of the
total energy inputs shown in Table 13 are
due to the electrical energy consumption.

4.3 Results related to NER for an ethanol
biorefinery integrated with algal cultivation
in vinasse
It is well known that agribusiness produce a
large quantity of wastes, mainly those
generated in the food sector, where there is
plenty of sugar available in wastes and
effluents, adequate to produce biofuels or
biochemical. Among these, effluents from
ethanol are worldwide produced generating
huge environmental impacts. After the
seventies, world agricultural land use is
suffering a challenging pressure to produce
biofuels to replace fossil fuels, besides
increasing food production to support the
development of a green economy. The use of
wastes to produce chemicals and/or biofuels
has gained a considerable attention in the
last decades, due to its sustainable
conditions. In this context, sustainable waste
management is a fundamental role to face
the challenges related to climatic change
phenomena and the management of finite
resources. So, one of the main directions is
to change from waste treatment processes,
which consume a lot of energy, into a waste
biorefining platform to support the
development of a green economy (Carioca et
al,2012). Ethanol plants produce a large
quantity of wastes, which contain valuable
nutrients that could be used to cultivate
microalgae, improving energy balances and
diminishing environmental impacts. It is
estimated that in the next fifth years more
than 40% of the world population will live in
countries facing water stress or water
scarcity according to the data presented by
the United Nations Population Division,
published in 2002, prepared by (Hinrichsen,
1998). If well managed, wastewater could
help to recycle water and nutrients, like
Nitrogen, Phosphorous, and other important
minerals besides diminishing the cost of
fertilizers with no environmental impacts.
In general, the expected algal yield, depend
on several factors. Taking into consideration
the solar radiation in the tropics, the
expected value is around 25g/m
2
/day as it
was utilized in the evaluation presented in
this paper. However, data presented by Ben-
Amotz et al (2007) indicate that the value of
20g/m
2
/day was achieved for normal
Dunaliella cultivation in the Middle East
conditions.

74

Table 12. Biodiesel NER from microalgae according to Ehimen.

Energy Consumption Per Hectare
Item Quantity Unit
Energy
Coefficient
Unit Energy (MJ)
Ammonia (NH
3
) 5.76 t 37.8 GJ/t 217.73
Triple super-Phosphate 1.44 t 4.1 GJ/t 5.90
Electricity 6.05
Extraction 15.36
Transesterification and
purification
8.64
Total energy (input) 1,693.7
Biodiesel (output) 531.4
Energetic yield 0.31

Table 13. Results from biodiesel NER from microalgae, considering the use of free renewable energy.

Item Quantity Unit
Energy
Coefficient
Unit
Energy (MJ)
Ammonia (NH
3
) 5.76 t 37.8 GJ/t 217.73
Triple super-phosphate 1.44 t 4.1 GJ/t 5.90
Machinery and
infrastructure
6.05
Electricity 0.00
Extraction 15.36
Transesterification and
purification
8.64
Total (input) 253.7
Biodiesel (output) 531.4
Energetic yield 2.09

Data on Chlorella vulgaris cultivation
presented by Bonini (Bonini, 2012), pointed
out the need to hydrolyze these components
in order to improve the microalgae yields.
This information stresses the importance of
the kinetic evaluation data prior to the
cultivation under open system, in raceway
pounds or photobioreactors in order to obtain
high specific rates. Bonini (2012) has
mentioned the optimum value for the
glucose concentration of 5.6 g/L. Glucose
concentrations higher than this value clearly
inhibit the growing. Finally, in our studies,
the water evaporation looses seems to be
another important factor to be considered in
the microalgae cultivation in vinasse under
tropical conditions, due to the high value of
insulation rates (around 250 W/m2)
(Carioca et al, 2010).
Inside the biorefinery concept, the plant
presented in Figure 5 considered the
microalgae cultivation in vinasse, integrated
to an ethanol producing plant, in order to
improve the energetic yields of current
ethanol industrial plants, in Brazil.
Vinasse is a type of effluent from alcohol
distilleries which has a desirable mineral
composition as shown in the Table 14 (Elia
Neto, 1995); (Leal, 2008). In spite of that,
vinasse also contains a little amount of
glycerin, ethanol, lactic and acetic acids.
This is a rich effluent, which has been used
to grow microalgae, utilizing CO
2
from the
anaerobic fermentation unit, using residues
75

from the oil extraction unit, as proposed by
Chisti (2008). It is important to know that in
Brazilian ethanol plants there is a ratio of 12
liters of vinasse per liter of ethanol
produced. Some species of microalgae could
be utilized for this purpose, such as;
Chorella and Nannochloropsis (Carioca et
al, 2009). It has been observed excellent
results from growing Scenedesmus sp e
Chlorella sp in the vinasse, utilizing CO
2

from the ethanol fermentation process
Bonini (Bonini, 2012).

Figure 5. Ethanol biorefinery integrated to microalgae cultivation in vinasse.

Vinasse has a high content of nitrogen and
phosphorous, which are basic nutrients for
microalgae cultivation (Amotz, 2007). After
the cultivation, microalgae are separated
from the broth using sedimentation and a
vacuum filter as proposed by (Chisti, 2008).
The final effluent is directed to the sugar
cane plantation, for irrigation purposes.
Using this approach, water and the residual
nutrients are recycled. So, as it can be seen
from the data presented in Table 15, it is
possible to increase the NER for about 11.1.
It means to increase the actual distilleries
energetic yield for about 33.7% through the
use of microalgae cultivation system in the
vinasse from an ethanol plant.

Table 14. Typical composition of sugar cane vinasse in Brazil.

Components / units
(Vinasse)
Types of substrates used
Molasses Mixed Juice
N (kg/m
3
) 0.75 0.79 0.33 0.48 0.26 0.35
P
2
O
5
(kg/m
3
) 0.10 0.35 0.09 0.61 0.09 0.50
K
2
O (kg/m
3
) 3.50 7.60 2.10 3.40 1.01 2.00
CaO (kg/m
3
) 1.80 2.40 0.57 1.46 0.13 -0.76
MgO (kg/m
3
) 0.84 1.40 0.33 0.58 0.21 0.41
SO
4
(kg/m
3
) 1.50 1.60 2.03
Organic Matter (kg/m
3
) 37 57 19 45 15 35
Mn (mg/dm
3
) 6 11 5 6 5 10
Fe (mg/dm
3
) 52 120 47- 130 45- 110
Cu (mg/dm
3
) 3 9 2 57 1 18
Zn (mg/dm
3
) 3 4 3 50 2- 3
pH 4.0 4.5 3.5 - 4.5 3.5 - 4.0

76

Table 15. Summary of NER in biofuels production
plants.

Energy

Algal Oil +
Biogas
(MJ kg
-1
oil)
Ethanol
(kcal/Ton)
Agricultural Phase 31.24 48.208
Processing 11.800
Sub -Total 31.24 60.008
Energy from Products 87.9 499.400
Net Balance 56.6 439.392
Energetic Yield 2.8 8.3

5. Conclusions

This study demonstrates the importance of
the applicability of net energy ratio analysis
methodology to biofuels production aiming
at to supply the entrepreneurs with realistic
data and design for different processes. The
methodology developed in this study
employed energy coefficients available in
the literature in order to evaluate net energy
balance for agroindustrial plants,
representing a valuable tool for
entrepreneurship decision related with the
best design for industrial plants. This kind of
data are moving researchers and companies
from all over the world to study and evaluate
the best way of producing efficiently
agricultural resources to guarantee the
production of biofuels in a sustainable and
economic way. In general, biomass
processing plants consider the use of
biorefinery concepts to evaluate the net
energy balance, as well as, the life cycle
analysis of agroindustrial plants to meet
sustainability requirements, as shown in this
paper. The basic idea is to find the highest
net energy ratio (NER) for biofuels
production processes according to a specific
plant conception. So, the recovery of energy
from agroindustrial plant wastes could be
obtained through the use of microalgae
cultivation to produce biodiesel, algal oil
and/or biogas. This kind of approach results
in a considerable increasing of the net
energy balance of the agroindustrial plants.
So, it can be concluded that it is possible to
increase the energetic yield of biodiesel
plants through the use of microalgae
cultivation based on its residues, as well as,
the net energy ratio (NER) for the ethanol
plants using its vinasse to grow microalgae.

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79
Hernndez B.M., Rodrguez M.C., Lozano C., Castilla P. 2012. Rev Latinoam Biotecnol Amb Algal 3(1):80-94

Remocin de nutrientes por tres cultivos de microalgas libres e
inmovilizados

Hernndez-Reyes, B.M.,
1
Rodrguez-Palacio, M.C.,
2*
Lozano-Ramrez, C.
2
y
Castilla-Hernndez, P.
1

1
Laboratorio de Biotecnologa Ambiental, Departamento El Hombre y su Ambiente, Universidad
Autnoma Metropolitana-Xochimilco C.P. 04960, Mxico, D.F.
2
Laboratorio de Ficologa Aplicada, Departamento de Hidrobiologa, Universidad Autnoma
Metropolitana-Iztapalapa C.P. 09340, Mxico, D.F.

*Autor de correspondencia: mony@xanum.uam.mx

Resumen

Las microalgas son el primer eslabn de la cadena trfica, aunque generalmente microscpicas
algunas alcanzan tamaos que las pueden hacer visibles a simple vista, la mayora de las veces de
forma agregada, otras incluso, generan una turbiedad evidente en los cuerpos de agua. Las
microalgas se han utilizado para la eliminacin de nutrientes de aguas residuales de tipo
municipal o industrial. Son una opcin viable ya que los sistemas de tratamiento de aguas
residuales que emplean microalgas requieren poca energa ya que utilizan la luz solar, producen
biomasa que puede ser usada para diferentes fines, retiran CO
2
de la atmsfera y pueden producir
substancias con alto valor agregado como pigmentos, frmacos y biocombustibles entre otros. En
este estudio se evalu la capacidad para remover amonio (NH
4
+
) y ortofosfato (PO
4
-3
)

por cultivos
libres e inmovilizados de microalgas, utilizando para ello un cultivo Mixto obtenido a partir de
agua residual municipal proveniente del reactor UASB de la UAM-I; y dos cultivos clonales de
Chlorella vulgaris y Spirulina subsalsa que pertenecen a la coleccin de cultivos UAM-I. Las
microalgas se inocularon en agua residual artificial a dos concentraciones de nutrientes, una baja
10 mgNH
4
+
/L y 5 mgPO
4
-3
/L y una alta 25 mgNH
4
+
/L y 10 mgPO
4
-3
/L, se monitoreo su
crecimiento y se determin la capacidad de remocin de los nutrientes, en los cultivos libres e
inmovilizados en dos soportes lufa y polietileno, siendo la lufa el ms eficiente en produccin de
biomasa algal y en fijacin de las microalgas. En consumo de nutrientes, en cultivos libres a baja
concentracin, C. vulgaris present la mayor capacidad de remocin con un 50% para NH
4
+
y un
74% para PO
4
-3
; mientras que en alta concentracin la mejor remocin la alcanz el cultivo Mixto
con 68% para NH
4
+
y 76% de PO
4
-3
. En los cultivos inmovilizados sobre lufa C. vulgaris y el
cultivo Mixto presentaron el mayor consumo de nutrientes, siendo para NH
4
+
del 70 al 99.9% y
de PO
4
-3
del 72.1 al 89.9%, respectivamente. Algunas de las especies de microalgas utilizadas en
este estudio, demostraron ser eficientes en el consumo de nutrientes y en su capacidad de
adherencia y crecimiento en los soportes utilizados. El empleo de soportes facilita la cosecha de
la biomasa algal y hace posible su uso en sistemas de tratamiento continuos, lo cual hace ms
econmico y eficiente el proceso al utilizarlas a gran escala para biorremediacin de aguas
residuales.

Palabras clave: Remocin de nutrientes, microalgas, cultivo mixto, aguas residuales
municipales.

80

Abstract

Microalgae are primary producers. They normally are microscopic beings, however they can
form aggregates big enough to make possible to see them with naked eye. Microalgae systems
spend a low energy budget so the light of the sun is used and this is free, the biomass produced
can be used for different purposes as food, pigments, medicines, even picking up CO
2
from
atmosphere. Recently, microalgae have attracted our interest because they are a possible solution
for the treatment of waste waters. It was evaluated microalgae cultures for ammonium (NH
4
+
)
and orthophosphate (PO
4
-3
) removal using a free and immobilized mixed microalgae cultures
obtained from an anaerobic UASB reactor located in UAM-I waste water plant. Chlorella
vulgaris y Spirulina subsalsa clonal cultures from UAM-I microalgae collection were used too.
All cultures were maintained under light and temperature controlled conditions. Microalgae were
inoculated in artificial waste water using two different nutrient concentrations, a low
concentration, 10 mg NH
4
+
/L and 5 mg PO
4
-3
/L; and a high concentration, 25 mg NH
4
+
/L and 10
mg PO
4
-3
/L, respectively. Microalgae growth and nutrient removal capacity were measured.
Bioassays were carried out using two different substrata, luffa and polyethylene. Luffa was the
more efficient substratum in relation to biomass production and microalgae adhesion.
C. vulgaris in free microalgae cultures at low concentration was the most efficient in relation to
nutrients removal, with 50 % removal efficiency for NH
4
+
and 74% for PO
4
-3
, as long as the best
removal results were showed by the mixed culture with 68% for NH
4
+
and 76% for PO
4
-3
. The
highest efficiency related to nutrient removal was found in immobilized C. vulgaris growth on
luffa, 70-99.9% for NH
4
+
and 72.1-89.9% for PO
4
-3
.
Some microalgae used during this experiment showed a good efficiency for nutrient removal.
Luffa and polyethylene present good characteristics related to microalgae adhesion and biomass
harvest, these conditions are promising for use them in waste water treatment systems.

Key words: Microalgae cultures, nutrient removal, waste waters.

1. Introduccin

El deterioro de la calidad del agua, supone
un grave problema medioambiental y
socioeconmico, que se acenta en zonas de
escasos recursos. El uso del agua potable
para abastecimiento urbano e industrial, debe
ir acompaado de una correcta depuracin
que permita su reutilizacin para riego
agrcola, de reas verdes, aguas recreativas,
reutilizacin industrial, piscicultura, o bien
como elemento que no perturbe el equilibrio
biolgico de la zona de vertido y que evite la
contaminacin de acuferos subterrneos y
masas superficiales de aguas continentales o
marinas (Aranda-Cirerol et al., 2006; Asano
et al., 2007; EPA, 1997; Morat y Peuela,
2009).
Algunos nutrientes como el amonio y el
ortofosfato pueden ser incorporados a los
sistemas acuticos por arrastre de suelos
fertilizados con abonos nitrogenados y
fosfatados, pero tambin por descargas de
aguas residuales industriales sin tratamiento,
o por aguas tratadas insuficientemente que
adems de nutrientes contienen metales
pesados y substancias orgnicas refractarias
(de la Noe et al., 1992; Vargas et al., 2004).
Las concentraciones de amonio en aguas
residuales municipales se encuentran de 12 a
64 mgNH
4
+
/L, mientras que las
concentraciones de PO
4
-3
pueden estar entre
3 y 17 mg/L (Cervantes-Zepeda et al., 2011;
Chacn et al., 2006; Punmia y Kumar 1998;
Wang et al., 2010), siendo el fsforo total
81

entre 4 y 15 mg/L (Punmia y Kumar 1998;
Wang et al., 2010).
Las microalgas, organismos auttrofos que
ocupan el primer eslabn en la cadena
trfica, han recibido mucha atencin en los
ltimos aos, especialmente en las regiones
tropicales y subtropicales, en donde se
emplean como un biosistema alternativo
para la remocin de nutrientes de este tipo de
aguas. Estos microorganismos incorporan
nitrgeno en forma de amonio que es
utilizado para formar aminocidos; aunque
tienen la capacidad de incorporarlo en forma
de nitrato (Contreras, 1994; de la Noe et
al., 1992; Jeanfils et al., 1993).
La utilizacin de microalgas para remocin
de nutrientes ha sido estudiada por ms de
50 aos (Abalde et al., 1995; Andrade et al.,
2009; Becker, 1994; EPA, 1999;
Hanumatha-Rao et al., 2011; Hoffmann,
1998; Larsdotter, 2006; Lavole y de la Noe,
1985; Mendez-Suaza et al., 2011; Olguin,
2003; Sandbank y Hepher 1978; Shi et al.,
2007), comprobando que la biomasa algal
obtenida tiene un alto contenido de
protenas, lpidos, carbohidratos, y otros
productos de valor agregado. Por lo tanto,
los esfuerzos para cultivar este tipo de
microorganismos en aguas residuales han
buscado conseguir un doble beneficio, la
produccin de biomasa para diferentes usos
y un efluente limpio con una tecnologa
relativamente simple (Pulz y Gross, 2004;
Rawat et al., 2011).
Los gneros Chlorella y Scenedesmus, as
como algunas especies del grupo de las
cianobacterias, se han reportado para el
tratamiento de diferentes tipos de aguas
residuales, destacando las provenientes de
plantas de tratamiento convencionales de
origen industrial y urbano (Andrade et al.,
2009; Escorihuela, 2007; Lavole y de la
Noe, 1985). Por otra parte, se ha evaluado
el uso de excretas de cerdo, de aves y de
otros compuestos orgnicos como el acetato
sobre el crecimiento de microalgas
(Baumgarten et al., 1999; Bermdez et al.,
2003).
No obstante a la gran cantidad de estudios
realizados, uno de los problemas es que la
mayora utiliza algas en suspensin,
conocidos tambin como cultivos libres,
donde los procesos de cosecha requieren de
mtodos complicados (Ruiz-Marin et al.,
2010) o costosos. Como una medida
alternativa para revertir estos inconvenientes
Chevelier y de la Noe (1985), propusieron
el uso de carragenina como soporte para
Scenedesmus, aplicada en la remocin de
nutrientes de efluentes secundarios. En este
mismo soporte, la cianobacteria Spirulina
maxima ha sido utilizada en el tratamiento
terciario de desechos de cerdo (Caizares et
al., 1994).
Por otra parte, la inmovilizacin en alginato
tambin ha sido explorada por Jeanfils et al.
(1993), reportando velocidades de
incorporacin de nitrato para cultivos de
Chlorella vulgaris libre e inmovilizada, no
encontrando diferencias significativas entre
ambos cuando se alimentaron a
concentraciones 2 M (0.37 y 0.36 d
-1
) y 4
M (0.39 y 0.36 d
-1
). Travieso et al. (1996),
con Chlorella vulgaris y Chlorella kessleri
lograron resultados exitosos con agua
residual cruda. Al respecto, Tam y Wong
(2000), con Chlorella vulgaris en alginato de
calcio, en biorreactores, reportan buena
remocin para amonio y ortofosfato. Con
otro mtodo de inmovilizacin (doble capa),
Shi et al. (2007) mencionan que Chlorella
vulgaris removi el 94 y 89% de estos
nutrientes, respectivamente. Asimismo,
diversos materiales para la inmovilizacin
han sido reportados, entre estos lufa,
quitosano, resinas, silica, etc. (de-Bashan y
Bashan, 2010).

82

En el presente trabajo se determin la
capacidad de remocin de ortofosfato y
amonio por cultivos de microalgas libres e
inmovilizados en dos soportes, lufa y
polietileno, ya que la inmovilizacin resulta
una alternativa promisoria en este campo, con
vas a mejorar las eficiencias de eliminacin
de nutrientes a travs de la aplicacin en
sistemas de tratamiento continuo y para
facilitar los sistemas de cosecha. La biomasa
algal generada, por su origen, puede utilizarse
para la produccin de bioenergticos como
biodiesel, biohidrgeno o metano (Chisti,
2007; Wijffels et al., 2010).

2. Materiales y Mtodos

2.1. Establecimiento de un cultivo Mixto
Se colectaron muestras de agua provenientes
del efluente de un reactor anaerobio tipo
UASB ubicado en la UAM-I. Las muestras se
colocaron en 3 bidones de 4 litros de volumen
y se incubaron por 23 das a condiciones
ambiente de luz y temperatura. Cada tercer
da, y por un lapso de 20 das, se tom un
mililitro de muestra y fue fijada con acetato
de lugol para la identificacin de las
microalgas que se establecieron en este
periodo de tiempo (Rodrguez-Palacio et al.,
2011; Valencia-Soto, 2012).

2.2. Cultivos libres
Se utilizaron las cepas de microalgas
Chlorella vulgaris y Spirulina subsalsa que
fueron aisladas del lago de origen volcnico
Chalchoapan en la zona de los Tuxtlas en
Veracruz, Ver., y en el estero del Ro
Barberena en Tampico, Tamaulipas, y un
cultivo Mixto desarrollado a partir del
efluente del reactor UASB que trata las aguas
residuales de la UAM-I.
Los cultivos se resembraron en agua residual
artificial (medio de cultivo F/2 modificado)
en dos concentraciones de amonio y
ortofosfato, la primera denominada baja
que consisti de 15 y 5 mg/L de NH
4
+
y PO
4
-
3
, respectivamente, y alta de 25 y 10 mg/L
de NH
4
+
y PO
4
-
, respectivamente. Los
inculos fueron Chlorella vulgaris 1.23 x
10
10
clulas/L, de Spirulina subsalsa 8
filamentos de entre 23-30 m y el cultivo
Mixto de 12.3 x 10
9
clulas/L, integrado por
40.5% de Chlorella sp., 35.8% de
Scenedesmus sp. y 23.6% Chlamydomonas
sp. Los cultivos se incubaron a una
temperatura de 201C, una irradianza de
90.5 mol m
-2
s
-1
y un ciclo luz-oscuridad de
12:12 horas. Para evaluar la remocin de los
nutrientes y el crecimiento se tom una
muestra de 30 mL cada tercer da, tiempos
similares a los reportados por otros autores
(Shi et al., 2007; Ruiz-Marin et al., 2010).

2.3. Inmovilizacin de cultivos en polietileno
y lufa
En matraces de 0.5 y 1L se adicion agua
residual artificial (con baja y alta
concentracin) y se les agregaron los
soportes: 30 g polietileno de baja densidad
con un tamao de partcula entre 0.7 y 0.9
mm y lufa (L. aegyptiaca o estropajo) cortada
en cuadros aproximadamente de 2.25 cm,
11.2 g. Ambos soportes fueron previamente
esterilizados por luz ultravioleta.
Posteriormente los matraces se inocularon
con: C. vulgaris, S. subsalsa y el cultivo
Mixto; se incubaron durante 20 das en las
mismas condiciones que los cultivos libres.
La remocin de nutrientes y la biomasa
inmovilizada durante este periodo se
estimaron a partir de muestras colectadas al
inicio y al final del experimento.

2.4. Cultivos inmovilizados
La biomasa inmovilizada de los cultivos de
C. vulgaris y Mixto alcanzada en ambos
soportes en el experimento anterior, fue
realimentada nicamente con amonio y
ortofosfato a alta concentracin; se colectaron
muestras cada tercer da para evaluar su
capacidad de remocin y para cuantificar la
produccin de nueva biomasa. El cultivo de
S. subsalsa no fue evaluado en esta etapa
83

debido a la escasa biomasa inmovilizada en
los soportes.

2.5. Medio de cultivo
Se prepar el medio denominado agua
residual artificial tomando como base el
medio de cultivo F/2 (Guillard y Ryther,
1962, Guillard, 1975), del cual se retir la
fuente de nitrgeno y fsforo,
substituyndose por las concentraciones de
amonio y ortofosfato necesarias para obtener
las concentraciones experimentales (baja y
alta).

2.6. Tcnicas analticas
La determinacin de la concentracin de
amonio y ortofosfato se realiz por
colorimetra utilizando el mtodo de azul de
indofenol para el primero y por el mtodo
del cido ascrbico para el segundo,
siguiendo los procedimientos reportados en
Contreras (1994) y APHA (1995).
Inicialmente se realizaron curvas de
calibrado para la estimacin de la
concentracin de ambos nutrimentos.
La determinacin de la tasa de crecimiento
en los cultivos libres se llev a cabo por la
cuantificacin de microalgas encontradas en
un microlitro de cada muestra y se hizo por
triplicado; en los cultivos inmovilizados la
biomasa algal se determin por el mtodo de
peso seco (Arredondo-Vega y Voltolina,
2007), antecedido por el desprendimiento de
las microalgas por intervalos cortos de
sonicacin de las muestras (1 minuto),
procedimiento que se repiti hasta que los
soportes quedaron libres de biomasa algal.
Para la interpretacin de los resultados se
utiliz el anlisis de varianza de un factor
(ANOVA) y la t de Student, ambos con un
nivel de significancia de 0.05.
3. Resultados

3.1 Cultivo Mixto
En el cultivo Mixto se desarrollaron
microalgas de los grupos Clorofitas,
Euglenofitas y Bacilariofitas. Dentro de las
Clorofitas se encontraron microalgas del
gnero Chlorella, Chlamydomonas,
Scenedesmus y Pediastrum; del grupo de las
Bacilariofitas fueron observadas Fragilaria
sp1. y Fragilaria sp2., mientras que en el
grupo de las Euglenofitas, predomin
Euglena sp.

3.2 Cultivos libres
3.2.1. Baja concentracin
La remocin de amonio para los cultivos de
C. vulgaris, S. subsalsa y Mixto fue de 50,
16 y 23% (Figura 1a); para el ortofosfato la
remocin fue de 74, 96 y 23%,
respectivamente (Figura 1b), mostrando
diferencias significativas (p = 0.0124). En
cuanto a la densidad celular los tres cultivos
presentaron un crecimiento distinto (p =
0.0266) siendo el cultivo de la especie C.
vulgaris el ms exitoso.

3.2.2Alta concentracin
La remocin de amonio (Figura 2a) a
concentracin alta para los cultivos Mixto,
C. vulgaris y S. subsalsa fue de 68, 37, 26%;
para ortofosfato fue del 76, 45 y 24%
(Figura 2b), existiendo diferencia entre estas
(p = 0.001). Respecto al crecimiento, C.
vulgaris exhibi el nivel ms alto (Figura
2c), pero estadsticamente los tres cultivos
mostraron ser iguales.

84

Figura 1. (a) Perfil de remocin de amonio; (b) ortofosfato y (c) crecimiento celular, a baja concentracin, con
cultivos de Chlorella vulgaris, Spirulina subsalsa y Mixto.

85

Figura 2. (a) Perfil de remocin de amonio, (b) ortofosfato y (c) densidad celular, a alta concentracin, con los
cultivos de Chlorella vulgaris, Spirulina subsalsa y Mixto.

3.3 I nmovilizacin de cultivos en polietileno
y lufa
La biomasa inmovilizada en cada uno de los
soportes y para cada uno de los tres cultivos
ensayados se muestra en la Tabla 1. En esta
se observa que el cultivo Mixto en
polietileno alcanz la concentracin ms alta
de biomasa, pero no fue significativamente
diferente a la de los otros dos cultivos. En
lufa, la mayor biomasa la obtuvo el cultivo
Mixto, a continuacin C. vulgaris y por
ltimo S. subsalsa, siendo significativamente
diferentes (p = 0.013).

Asimismo, comparando cada cultivo en
ambos soportes, los resultados exhibieron
que no hubo diferencias entre estos. En las
Figuras 3 y 4 se muestran imgenes de los
soportes antes y despus de la
inmovilizacin. Adicionalmente, la mejor
remocin de nutrientes fue obtenida por el
cultivo Mixto; mientras que C. vulgaris y S.
subsalsa presentaron las ms bajas
eficiencias de remocin de NH
4
+
.

86

Tabla 1. Biomasa inicial y final de los cultivos de Chlorella, Spirulina y Mixto, y porcentaje de remocin de
nutrientes, durante la inmovilizacin en los soportes.

Soporte Polietileno Lufa
Cultivo Inicial Final Rem. (%) Inicial Final Rem. (%)
C. vulgaris
a,b
Biomasa
a
1.3 x 10
9

b
0.0037 -
a
1.3 x 10
9

b
0.0061 -
NH
4
+
(mg/L) 40.5 27.2 32.8 40.5 11.1 72.6
PO
4
-3
(mg/L) 4.9 0 100 3.6 1.1 69.4
S. subsalsa
a,b
Biomasa
a
1.3x10
10

b
0.0004 -
a
1.3x10
10

b
0.0033 -
NH
4
+
(mg/L) 81.4 63.3 22.2 84.3 77.8 7.71
PO
4
-3
(mg/L) 5.9 1.2 79.6 6.4 3.4 46.8
Mixto
a,b
Biomasa
a
1.2x10
7

b
0.0058 -
a
1.2x10
7

b
0.0173 -
NH
4
+
(mg/L) 63.2 19.8 68.6 64.4 15.7 75.6
PO
4
-3
(mg/L) 6.8 1.2 82.4 6.5 1.2 81.5
a
clulas/L;
b
g biomasa algal/g soporte seco.

Figura 3. Muestra los soportes, (a) lufa y (b) polietileno en el tiempo cero. Los cultivos inmovilizados despus de 20
das: en lufa, (c) Mixto y (d) Chlorella vulgaris; en polietileno, (e) Mixto y (f) Chlorella vulgaris.
87

Figura 4. Fotografas de microscopio de luz, polietileno con cultivo Mixto (a) y con Chlorella vulgaris (b).

3.4 Cultivos inmovilizados
Los cultivos en lufa (Figura 5 y Tabla 2)
presentaron una mejor remocin de ambos
nutrientes, entre el 70 y 99.9%.
El crecimiento de C. vulgaris fue similar en
ambos soportes, mientras que el del cultivo
Mixto fue mayor en lufa (p = 0.0215).

Figura 5. Consumo de (a) amonio y (b) ortofosfato por los cultivos de Chlorella vulgaris y Mixto inmovilizados en
polietileno y lufa. Ch: Chlorella vulgaris y Mx: Mixto.

88

Tabla 2. Produccin de biomasa y remocin de nutrientes por los cultivos de C. vulgaris y Mixto inmovilizados en
los soportes.

Soporte Polietileno Lufa
Cultivo Inicial Final Rem. (%) Inicial Final Rem. (%)
C. vulgaris
a
Biomasa 0.0037 0.0057 - 0.0061 0.1539 -
NH
4
+
(mg/L) 20.8 0.06 99.0 19.9 0.006 99.9
PO
4
-3
(mg/L) 16.5 8.4 49.2 17.2 4.8 72.1
Mixto
a
Biomasa 0.0058 0.0098 - 0.0173 0.1073 -
NH
4
+
(mg/L) 22.0 6.5 70.0 21 0.008 99.9
PO
4
-3
(mg/L) 17.5 5.1 70.8 16.9 1.7 89.9
a
g biomasa algal/g soporte seco.

4. Discusin

De los cultivos libres con agua residual
artificial a baja concentracin de nutrientes,
el Mixto fue el que present los niveles
menores de consumo, esto podra ser debido
a que por su origen, el agua residual, las
microalgas estn adaptadas a
concentraciones ms elevadas de nutrientes
en comparacin con las probadas en este
experimento. Por otra parte, se considera que
C. vulgaris mostr una mejor respuesta ya
que removi ambos nutrientes
eficientemente. En el caso de S. subsalsa, la
elevada remocin de PO
4
-3
(96%), no
coincidente con la escasa remocin de NH
4
+
(16%), podra deberse a una precipitacin
del ortofosfato con la subsecuente formacin
de minerales como la estruvita
(MgNH
4
PO
4
), tal como lo reportan de-
Bashan y Bashan (2010).
Algunos estudios como el de Vargas et al.
(2004), reportan que en una laguna
facultativa se establecieron cultivos de
cianofitas y clorofitas que alcanzaron una
remocin de amonio del 36.4% a partir de
una concentracin de 16.9 mg/L, nivel
menor al alcanzado por C. vulgaris (50%) en
este estudio y mayor a los cultivos de S.
subsalsa y Mixto (16 y 23%). Por su parte
Ruiz-Marin et al. (2010) mencionan que C.
vulgaris removi 74.3 y 70.2% de NH
4
+
y
PO
4
-3
.
Las altas eficiencias de remocin alcanzadas
por el cultivo Mixto a alta concentracin de
nutrientes, en comparacin de los otros dos,
podra ser debido a la diversidad de
microalgas establecidas a partir del agua
residual, adems por este origen,
probablemente tienen la capacidad para
incorporar concentraciones ms elevadas de
nutrientes.
En el cultivo Mixto a baja concentracin de
nutrientes, al final del ensayo se encontraron
Chlorella, Scenedesmus y Chlamydomonas
en proporcin de 83.7, 14.3 y 1.9% y en alta
concentracin en 16.8, 3.9 y 79.3%,
respectivamente. Escorihuela et al. (2007),
mencionan que en la entrada y salida de una
89

laguna de pulimiento predomin una
poblacin perteneciente a cianofitas, con
99.5 y 97.4%, respectivamente, siendo el
gnero ms frecuente Synechocystis con un
96.2%. La diferencia de las microalgas
encontradas en ambos trabajos, podra
explicarse a que crecieron en efluentes
distintos, ya que un tratamiento es aerobio
(laguna de pulimiento) y el otro anaerobio
(reactor UASB).
De los cultivos clonales que fueron
probados, el de C. vulgaris en cultivo libre
present buenos niveles de produccin de
biomasa, y comparando con Chacn et al.
(2006), que alcanzaron 6.2x10
10
cel/L en 27
das, en este estudio se obtuvo un mayor
nmero de clulas en 20 das. Sin embargo,
se observ una cada repentina en la curva de
crecimiento a los 12 das del cultivo (Figura
2), aunque an se encontraban nutrientes,
esto puede deberse a que los
microorganismos fotosintticos utilizan la
energa luminosa y CO
2
(Bermdez et al.,
2003), pero cuando los cultivos se someten a
una alta carga de nutrientes y no se les
suministra una fuente externa de CO
2
o de
carbonato, se limita la fotosntesis y ya no
pueden asimilar dichos nutrientes. Un
suministro de CO
2
ya sea como gas puro o
adicionado por una corriente de aire,
aumenta significativamente la productividad
de los cultivos masivos de microalgas y
acta como fuente de carbono para la
fotosntesis (Abalde et al., 1995).
Tambin es de considerar que los gradientes
gaseosos imponen restricciones a las tasas de
crecimiento de los cultivos, ya que una alta
densidad de clulas fotosintticamente
activas provocan concentraciones
extremadamente altas de oxgeno disuelto,
que llevan a una sobre saturacin de
oxgeno, inclusive por encima de 400%; ante
esto se produce inhibicin de la fotosntesis
y los cultivos tienden a caer (Abalde et al.,
1995). En este estudio ambos factores
podran haber afectado el consumo total de
nutrientes, debido a las condiciones en las
que se realizaron las pruebas (matraces
cerrados y sin suministro de gases).
Caizares et al. (1994), reportan una buena
capacidad de inmovilizacin en carragenina
por Spirulina sp., que fue contrario a los
resultados obtenidos en este estudio, donde
el cultivo de S. subsalsa no tuvo una buena
adherencia al polietileno, ni a la lufa.
Mientras que los cultivos de C. vulgaris y
Mixto se inmovilizaron positivamente en
ambos soportes.
Respecto a los nutrientes durante el periodo
de inmovilizacin, el cultivo Mixto tanto
para polietileno como para lufa fue el que
obtuvo una mejor capacidad de remocin.
Comparando con lo reportado por Shi et al.
(2007), con cultivos inmovilizados de C.
vulgaris y Scenedesmus sp. alimentados
alrededor de 20 mg/L de NH
4
+
y 3.0 mg/L de
PO
4
-3
, obtuvieron en 9 das eficiencias de
remocin del 94 y 89%, mientras que en este
estudio en 20 das, el cultivo de C. vulgaris
alcanz un remocin del 99.0 y 49.2% en
polietileno y del 99.9 y 72.1% en lufa,
respectivamente, esto podra ser debido al
tipo de inmovilizacin que utilizaron (doble
capa). Adems, para el cultivo de C.
vulgaris (polietileno) y S. subsalsa
(polietileno y lufa) el consumo de NH
4
+
no
equivalente al PO
4
-3
removido, puede
suponer perdida por precipitacin.
En relacin a la concentracin de biomasa,
Akhtar et al. (2003) en un estudio sobre
remocin de metales pesados por Chlorella
sorokiniana inmovilizada en lufa, alcanzan
una biomasa de 0.263 g biomasa/g soporte
seco en 24 das, con una remocin de nquel
del 97%, en este estudio se alcanzaron
valores entre 0.0057 y 0.1539 g biomasa/g
soporte seco, lo que indicara que el tipo de
compuesto a remover tienen un efecto sobre
el crecimiento de la biomasa. Con
Synechococcus sp. inmovilizada alcanzaron
una biomasa de 0.0094 g biomasa/g soporte
seco cuando fue empleada para la
depuracin de cadmio (Saeed y Iqbal, 2006),
que fue igual a la encontrada en el cultivo
90

Mixto con polietileno y 16 veces menor a la
mxima obtenida para Chlorella vulgaris en
lufa. Los dos autores coindicen en que la
utilizacin de microalgas inmovilizadas en
este soporte, es un mtodo viable para la
remocin de metales pesados de aguas
residuales, y al igual que en el presente
estudio la lufa result mejor para la
inmovilizacin y remocin de nutrientes.
Saeed y Iqbal (2006), mencionan que esto
puede ser debido a que las microalgas tienen
ms superficie para la inmovilizacin por lo
largo de los hilos de la fibra de este soporte.
En este estudio se proponen ambos soportes
como alternativas de inmovilizacin de la
biomasa algal, debido a que en la mayora de
los experimentos, no se encontraron
diferencias estadsticamente significativas en
la fijacin de la biomasa. Sin embargo en el
polietileno las eficiencias de remocin
fueron menores que con la lufa, por lo que,
probablemente slo se requiere tener los
cultivos en agitacin para que exista un
mayor contacto entre los nutrientes y las
microalgas adheridas al polietileno.

5. Conclusiones

En los cultivos libres a baja concentracin, la
mayor capacidad de remocin la tuvo C.
vulgaris por disminuir ambos nutrientes
(NH
4
+
y PO
4
-3
) en un 50 y 74%. A alta
concentracin, la mejor remocin se alcanz
con el cultivo Mixto (68% de NH
4
+
y 76%
de PO
4
-3
).
A baja concentracin la mayor biomasa algal
fue alcanzada por C. vulgaris, mientras que
en la segunda condicin los tres cultivos
exhibieron un crecimiento similar.
La inmovilizacin de cultivos fue baja para
S. subsalsa en lufa y en polietileno (0.0004
g biomasa algal/g soporte seco), pero los
cultivos de C. vulgaris y Mixto fueron
inmovilizados favorablemente en ambos
soportes, obteniendo una biomasa algal de
hasta 0.0061 y 0.0173 g/g de soporte seco; la
remocin de nutrientes fluctu entre 32.8 y
75.6% para el NH
4
+
y de 69.4 al 100% de
PO
4
-3
, aunque para el ortofosfato pudo haber
perdida por precipitacin.
Los cultivos de C. vulgaris y Mixto
inmovilizados alcanzaron los mayores
porcentajes de remocin de los nutrientes, 70
al 99.9% (NH
4
+
) y 72.1 al 89.9% (PO
4
-3
),
mientras que el incremento de biomasa algal
fue similar en ambos cultivos.
El utilizar especies de microalgas, que
provienen del agua residual tratada, como
alternativa para biorremediacin de las
mismas es una opcin viable debido a que de
manera natural, estn adaptadas a altas
concentraciones de nutrientes y a otras
substancias presente en las mismas. Por otro
lado, las especies de microalgas que se
desarrollaron a partir de este tipo de aguas,
Chlorella, Chlamydomonas, Scenedesmus y
Pediastrum resultaron ser interesantes para
un segundo uso biotecnolgico.

6. Reconocimientos

Al Programa de Mejoramiento del
Profesorado (PROMEP), por el finan-
ciamiento para la realizacin de este estudio,
a travs del proyecto Calidad del agua del
Ro Zahuapan y Biotratamientos. Folio
UAM-PTC-117.

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